一种制备耐盐解磷种子包衣的方法
【专利摘要】一种制备耐盐解磷种子包衣的方法。该方法属于生物【技术领域】。可以应用于农林、园艺等领域。这种种衣含耐盐解磷菌，可以溶解土壤中不溶磷，为植物提供可利用的磷。从盐碱地中筛选耐盐菌株，经解磷能力、耐盐能力和生理生化鉴定后确定耐盐解磷菌；用紫外线等对耐盐解磷菌进行诱变、筛选、并经过鉴定后获得脯氨酸的缺失突变体；优化耐盐解磷菌脯氨酸突变体的发酵工艺条件；脯氨酸缺失突变体的发酵，在进入对数生长期后期和稳定期前，停止发酵并浓缩发酵液或制冻干粉以分离耐盐解磷菌；采用质量百分比我3-7％聚乙烯醇+淀粉(2∶1)、0.001-3.0％山梨醇、0.001-3.0％甘露醇、0.001-3.0％脯氨酸制成溶液，同10-20％的含1×105-1×109CFU的解磷菌浓缩发酵液或发酵液冻干粉等制备种子包衣。
【专利说明】一种制备耐盐解磷种子包衣的方法
【技术领域】
[0001]一种耐盐解磷包衣的制备方法。该方法属于生物技术和农业领域。可以广泛应用于农业、林业、园艺等领域。
【背景技术】
[0002]磷是除氮外限制作物产量的主要的大量营养元素。土壤中的磷主要以不溶性磷的形式存在，然而这种形式的磷是不易于植物的吸收。特别在高盐、低营养、强缓冲能力的盐碱土中，土壤中的有效磷磷含量更低。解磷菌是一类可以溶解土壤中的不溶磷为植物提供可利用磷的微生物，其在土壤中广泛存在并被认为在土壤磷的循环中起着主要作用。
【发明内容】
[0003]耐盐解磷菌的筛选；耐盐解磷菌的鉴定；耐盐解磷菌诱变获得脯氨酸缺失突变体；耐盐解磷菌的发酵工艺优化；发酵液分离耐盐解磷菌；采用成膜剂、植物抗盐剂(多元醇、脯氨酸)、耐盐解磷菌发酵浓缩液或耐盐解磷菌冻干粉等制备种子的种衣。
【具体实施方式】
[0004]I耐盐解磷菌的筛选:盐碱地中取样，经过富集培养、初筛耐盐菌株；经过复筛筛选高产解磷菌株。
[0005]2耐盐解磷菌的鉴定:菌株的生理生化、16s或18s rRNA基因的核苷酸序列测定比对等手段鉴定解磷菌。
[0006]3耐盐解磷菌诱变获得脯氨酸缺失突变体:解磷菌经过紫外线等因素诱变，在完全培养基和脯氨酸缺失培养基中通过印迹比对，筛选脯氨酸合成缺失突变体；进一步对该类突变体进行耐盐、解磷等特性的测定；优化盐碱土壤中解磷、生长的种衣组成成分。
[0007]4耐盐解磷菌的发酵工艺优化:对入选的突变体进行解磷和生长发酵培养基和条件的优化；
[0008]5发酵液分离耐盐解磷菌:在发酵进入对数期后期、稳定期前期将发酵液沉淀，或过滤获得菌体以及发酵滤液。
[0009]6采用成膜剂、植物抗盐剂(多元醇)、浓缩发酵液制备种衣。
[0010]6.1成膜剂的选择
[0011]种衣剂是一种用于作物种子包衣的，具有成膜特性的物质，可直接或经稀释后包覆于种子表面，形成具有一定强度和通透性的保护膜的制剂，成膜性是种衣剂的关键特性。良好的成膜性能使种衣剂均匀地包在种子表面迅速固化成膜，不脱落、不粘结。我国目前研究应用较好的成膜物有羧甲基纤维素钠、聚苯乙烯和海藻酸钠。在本试验中测试了 4种成膜剂的成膜性，其中聚乙烯醇和聚乙烯醇+淀粉制成的成膜剂成膜性最好(表1)。淀粉作为一种天然原料具有来源广泛，成本低等特点。而且，基于微生物的生物型肥料，淀粉更加适合作为载体。因为淀粉不仅可以作为活性成分的支撑物质，还可以为微生物提供必要的碳源。再综合成膜剂的成膜性等其他特性，耐盐解磷菌种衣的成膜剂选择了聚乙烯醇+淀粉成分。
[0012]表1成膜剂的选择
[0013]
【权利要求】
1.从盐碱地中筛选耐盐菌株，经解磷能力、耐盐能力和生理生化鉴定后确定为耐盐解磷菌，用紫外线等对耐盐解磷菌进行诱变、筛选、并经过鉴定后获得脯氨酸的缺失突变体。
2.优化耐盐解磷菌脯氨酸突变体的发酵工艺条件，进行脯氨酸缺失突变体的发酵，在进入对数生长期后期和稳定期前，停止发酵并浓缩发酵液或制冻干粉以分离耐盐解磷菌。
3.采用质量百分比为3-7%聚乙烯醇+淀粉(2:1)、0.001-3.0%山梨醇、0.001-3.0%甘露醇、0.001-3.0 %脯氨酸制成溶液，同10-20 %的含I X IO5-1 X IO9CFU解磷菌浓缩发酵液或发酵液冻干粉等制备种 子包衣。
【文档编号】C05G3/00GK103497050SQ201310444658
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年9月26日 优先权日:2013年9月26日
【发明者】李兴林, 曹雪飞, 韩杨, 赵娜, 曹爱佳, 韩广建, 张国运, 王春梅, 贾士儒 申请人:天津科技大学