一种细胞保存液及其制备方法、应用_2

文档序号:8228818阅读:来源:国知局
7NO2)I.OOg;L-异亮氨酸(C6H13NO2)I. 76g;L-亮 氨酸(C6H13NO2) 2. 45g;L-门冬氨酸(C4H7NO4)I. 25g;L-酪氨酸(C9H11NO3)O. 13g;L-谷氨酸 (C5H9NO4)O. 38g;L-苯丙氨酸(C9H11NO2) 2. 67g;L-精氨酸盐酸盐(C6H14N4O2,HC1) 2. 50g;L-赖 氨酸盐酸盐(C6H14N2O2 ?HC1) 2. 15g;L-缬氨酸(C5H11NO2)L80g;L-苏氨酸(C4H9NO3)L25g; L-组氨酸盐酸盐(C6H9N3O2 ?HCl?H2O)I. 25g;L-色氨酸(C11H12N2O2)O. 45g;L-蛋氨 酸(C15H11NO2S)I. 13g;L-胱氨酸(C6H12N2O4S2)O. 05g;甘氨酸(C2H5NO2) 3. 80g;山梨醇 (C6H14O6) 25.OOg;亚硫酸氢钠(NaHSO3) 0.25g。辅料为注射用水。
[0029] 在本发明提供的一些实施例中,复方电解质注射液包括氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸 钠、氯化钾和氯化镁。
[0030] 在本发明提供的一些实施例中,复方电解质注射液的组分为:每IOOOmL含氯化钠 5. 26g、葡萄糖酸钠5. 02g、醋酸钠3. 68g、氯化钾0. 37g、氯化镁0. 30g。
[0031] 本发明还提供了一种细胞保存方法,采用本发明的细胞保存液保存细胞;该细胞 保存液包括白蛋白、葡萄糖、维生素C和保存基础液;保存基础液为复方电解质注射液和 复方氨基酸注射液的混合物;作为优选,在细胞保存液中,白蛋白的体积百分浓度为1%? 5%,葡萄糖的体积百分浓度为3%?8%,维生素C的体积百分浓度为0. 1%?0.5%;优选 地,在细胞保存液中,白蛋白的体积百分浓度为1 %,葡萄糖的体积百分浓度为5%,维生素 C的体积百分浓度为0. 5% ;作为优选,复方电解质注射液与复方氨基酸注射液的体积比为 (1:1)?(1:2);优选地,复方电解质注射液与复方氨基酸注射液的体积比为1:1 ;在本发 明提供的一些实施例中,复方氨基酸注射液包括L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-异亮 氨酸、L-亮氨酸、L-门冬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-苯丙氨酸、L-精氨酸、L-赖氨酸、 L-缬氨酸、L-苏氨酸、L-组氨酸、L-色氨酸、L-蛋氨酸、L-胱氨酸和甘氨酸。
[0032] 在本发明提供的一些实施例中,复方氨基酸注射液是由18种氨基酸与山梨醇配 制而成的灭菌水溶液,复方氨基酸注射液的组分为:每500mL含:L-脯氨酸(C5H9NO2)O. 50g; L-丝氨酸(C3H7NO3)O. 50g;L-丙氨酸(C3H7NO2)I.OOg;L-异亮氨酸(C6H13NO2)I. 76g;L-亮 氨酸(C6H13NO2) 2. 45g;L-门冬氨酸(C4H7NO4)I. 25g;L-酪氨酸(C9H11NO3)O. 13g;L-谷氨酸 (C5H9NO4)O. 38g;L-苯丙氨酸(C9H11NO2) 2. 67g;L-精氨酸盐酸盐(C6H14N4O2,HC1) 2. 50g;L-赖 氨酸盐酸盐(C6H14N2O2 ?HC1) 2. 15g;L-缬氨酸(C5H11NO2)L80g;L-苏氨酸(C4H9NO3)L25g; L-组氨酸盐酸盐(C6H9N3O2 ?HCl?H2O)I. 25g;L-色氨酸(C11H12N2O2)O. 45g;L-蛋氨 酸(C15H11NO2S)I. 13g;L-胱氨酸(C6H12N2O4S2)O. 05g;甘氨酸(C2H5NO2) 3. 80g;山梨醇 (C6H14O6) 25.OOg;亚硫酸氢钠(NaHSO3)O. 25g,辅料为注射用水;在本发明提供的一些实施 例中,复方电解质注射液包括氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁;在本发明提 供的一些实施例中,复方电解质注射液的组分为:每IOOOmL含氯化钠5. 26g、葡萄糖酸钠 5. 02g、醋酸钠3. 68g、氯化钾0? 37g、氯化镁0? 30g。
[0033] 在本发明提供的一些实施例中,细胞为间充质干细胞或免疫细胞。
[0034] 在本发明提供的一些实施例中,间充质干细胞为脂肪间充质干细胞或脐带间充质 干细胞。
[0035] 在本发明提供的一些实施例中,免疫细胞为CIK细胞。
[0036] 作为优选,在细胞保存方法中,细胞的密度为5XIO5?5X106个/mL。
[0037] 本发明还提供了本发明细胞保存液的保存运输方法,其为在无菌、0?4°C条件下 保存运输。低温保存制剂,一方面可避免营养成分变性,另一方面则很好的保持了种子细胞 的生物活性,显著地提高治疗效果。
[0038] 本发明提供了一种细胞保存液及其制备方法、应用。该细胞保存液包括白蛋白、葡 萄糖、维生素C和保存基础液;保存基础液为复方电解质注射液和复方氨基酸注射液的混 合物。本发明至少具有如下优势之一:
[0039] 在本发明中,间充质干细胞和免疫细胞在本发明提供的细胞保存液中保存48h 后,其活力仍然能够保持在90%以上,形态也没有出现变化。可见,本发明的细胞保存液对 两种以上的种子细胞的活力和形态起到优良维持作用,可长时间保存,维持其生物特性,从 而显著提高种子细胞的治疗效果;
[0040] 本发明提供的细胞保存液与人体血液的渗透压一致,将种子细胞重悬回输至机体 后,不会引起机体离子体系的失衡,无需对机体进行抽血等手术,降低了对机体的创伤;[0041] 本发明提供的细胞保存液的质量合格,在细菌、真菌、内毒素及病毒的检测中,均 呈阴性,可用于机体内的回注,进行疾病的治疗或机体保健;
[0042] 本发明提供的细胞保存液保存细胞时结团率低,有利于细胞的保存;
[0043] 本发明提供的细胞保存液成本低廉,成分稳定、安全、无任何毒副作用;
[0044] 本发明提供的细胞保存液制备步骤简便,能在短时间内大量配制,可规模化生产。
【附图说明】
[0045] 图1示种子细胞的形态;其中,A示脐带间充质干细胞的形态(P3,40倍),B示脐 带间充质干细胞的形态(P3,40倍),C示脐带间充质干细胞的形态(200倍);
[0046] 图2示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存12h后的活力检测图;
[0047] 图3示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存12h后的形态分布图;
[0048] 图4示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存12h后的活力检测图;
[0049] 图5示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存12h后的形态分布图;
[0050] 图6示CIK细胞在细胞保存液中保存12h后的活力检测图;
[0051] 图7示CIK细胞在细胞保存液中保存12h后的形态分布图;
[0052] 图8示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存24h后的活力检测图;
[0053] 图9示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存24h后的形态分布图;
[0054] 图10示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存24h后的活力检测图;
[0055] 图11示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存24h后的形态分布图;
[0056] 图12示CIK细胞在细胞保存液中保存24h后的活力检测图;
[0057] 图13示CIK细胞在细胞保存液中保存24h后的形态分布图;
[0058] 图14示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存48h后的活力检测图;
[0059] 图15示脐带间充质干细胞在细胞保存液中保存48h后的形态分布图;
[0060] 图16示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存48h后的活力检测图;
[0061] 图17示脂肪间充质干细胞在细胞保存液中保存48h后的形态分布图;
[0062] 图18示CIK细胞在细胞保存液中保存48h后的活力检测图;
[0063] 图19示CIK细胞在细胞保存液中保存48h后的形态分布图;
[0064] 图20示脐带间充质干细胞在保存液中保存48h后的流式检测图;其中,A-I示阴 性对照组检测细胞数量,A-2示阴性对照组里⑶59HLA-DR双阴性细胞,A-3示阴性对照组里 ⑶90⑶45双阴性细胞;B-I示样品组检测细胞数量,B-2示⑶59阳性HLA-DR阴性的细胞含 量,B-3示⑶90阳性⑶45阴性的细胞含量;
[0065] 图21示脂肪间充质干细胞在保存液中保存48h后的流式检测图其中,A-I示阴性 对照组检测细胞数量,A-2示阴性对照组里⑶59HLA-DR双阴性细胞,A-3示阴性对照组里 ⑶90⑶45双阴性细胞;B-I示样品组检测细胞数量,B-2示⑶59阳性HLA-DR阴性的细胞含 量,B-3示⑶90阳性⑶45阴性的细胞含量;
[0066] 图22示CIK细胞在保存液中保存48h后的流式检测图;其中,A-I示阴性对照组检 测细胞数量,A-2示⑶3⑶56双阴性的细胞含量;B-I示样品组中检测细胞数量,B-2示⑶3 阳性⑶56阴性的细胞含量。
【具体实施方式】
[0067] 本发明公开了一种细胞保存液及其制备方法、应用,本领域技术人员可以借鉴本 文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳 实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本
【发明内容】
、精神和范围内对本文所述的方 法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
[0068] 本发明提供的细胞保存液及其制备方法、应用中所用试剂或仪器均可由市场购 得。复方
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