选培养基可以选择如下：
[0022] (1)对照培养基
[0023] MS 培养基 +2, 4-D lmg/L+6-BA 0· 5mg/L+NAA lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 植物凝胶 2. 2g/ L，pH = 5· 8 ;
[0024] MS 培养基 +2, 4-D 2mg/L+6-BA lmg/L+NAA 0· 5mg/L+ 蔗糖 40g/L+ 植物凝胶 2. 5g/ L，pH = 6· 0 ;
[0025] MS 培养基 +2, 4-D 5mg/L+6-BA 2mg/L+NAA 3mg/L+ 蔗糖 50g/L+ 植物凝胶 2. 3g/L， pH = 6. 2 ;
[0026] MS 培养基 +2, 4-D 3mg/L+6-BA I. 5mg/L+NAA 4mg/L+ 蔗糖 50g/L+ 植物凝胶 2. 4g/ L，pH = 6. I ;
[0027] (2)筛选培养基
[0028] (I)中任意一项对照培养基+0. 5-20mg/L待测化学试剂；
[0029] (1)中任意一项对照培养基+0. 5-2mg/L待测化学试剂；
[0030] 为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种筛选橡胶树增产刺 激剂的方法进行详细说明。
[0031] 实施例1 :本发明所述筛选橡胶树增产刺激剂的方法
[0032] 对照培养基：MS 培养基 +2, 4-D lmg/L+6-BA 0· 5mg/L+NAA lmg/L+ 蔗糖 30g/L+ 植 物凝胶 2. 2g/L，pH = 5. 8 ;
[0033] 筛选培养基：对照培养基+0. 5mg/L茉莉酸；
[0034] 橡胶树外植体：橡胶树品种热研7-33-97(从中国热带农业科学院橡胶种质圃购 得）古铜期芽条的茎段；
[0035] 采集橡胶树品种热研7-33-97古铜期芽条的茎段，70%酒精消毒60秒，0. 15%升 汞消毒13分钟，无菌滤低吸干，切成长Icm小段。分别接种于对照培养基（以下简称对照 组）和筛选培养基（以下简称处理组），24°C暗培养70d。
[0036] 在对照组和处理组中分别随机选取10块愈伤组织，室温下于FAA中固定48h，将固 定好的愈伤块依次于50%、60%、70%、80%、90%、95%、100%、100%酒精中脱水111，60°〇 条件下溴-碘染色液（IOOmL醋酸中含0. 4g固体溴和4. 5g碘）中染色36h，石蜡包埋愈伤 块，切片机切成8um薄片，将薄片粘贴于干净的载玻片上，二甲苯去蜡，固绿复染，二甲苯透 明，中性树胶封片。
[0037] 光学显微镜下统计处理组与对照组愈伤组织中乳管细胞分化频率，采用SAS统计 软件进行方差分析。愈伤组织中乳管细胞分化频率（％)=愈伤组织中乳管细胞数量/愈 伤组织中总细胞数量X 100。由表1结果可知，处理组中乳管细胞分化频率极显著高于对照 组。这些结果表明茉莉酸能促进乳管细胞分化，可作为橡胶树增产刺激剂。
[0038] 表 1
【主权项】
1. 一种筛选橡胶树增产刺激剂的方法，其特征在于，包括： 以橡胶树古铜期芽条的茎段或叶柄为外植体，消毒后将外植体切段分别接种于对照培 养基和添加有待检测化学试剂的筛选培养基，24-28°C暗条件下培养60-100d，然后统计对 照培养基和筛选培养基愈伤组织中乳管细胞分化频率，以筛选培养基愈伤组织中乳管细胞 分化频率显著高于对照培养基愈伤组织中乳管细胞分化频率为判断标准，筛选出可以作为 橡胶树增产刺激剂的待检测化学试剂； 其中，所述对照培养基为MS培养基附加2,4-D、6-BA、NAA、蔗糖、植物凝胶，pH值为 5. 8-6. 2 ;所述筛选培养基为对照培养基附加待检测化学试剂。
2. 根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述对照培养基中2, 4-D、6-BA、NAA、蔗糖、 植物凝胶浓度为：2, 4-Dl-5mg/L，6-BA0? 5-2mg/L，NAA0? 5-4mg/L，蔗糖 30-50g/L，植物 凝胶 2. 2-2. 5g/L。
3. 根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述筛选培养基中待测化学试剂的浓度为 0. 5-20mg/L〇
4. 根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述筛选培养基中待测化学试剂的浓度为 0. 5-2mg/L〇
5. 根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述统计乳管细胞分化频率通过石蜡制片 镜检统计。
6. 根据权利要求5所述方法，其特征在于，所述石蜡制片具体步骤为： 愈伤组织固定于FAA溶液，酒精系列脱水，溴-碘染色液染色，石蜡包埋制片。
7. 根据权利要求6所述方法，其特征在于，所述石蜡制片具体步骤为： 愈伤组织固定于FAA溶液，室温下固定48-72h，然后依次于50%、60%、70%、80%、 90 %、95 %、100 %、100 %酒精中脱水lh，60°C条件下溴-碘染色液染色36-42h，染色后愈伤 组织用石蜡包埋，切片机切成8-12um薄片，将薄片粘贴于干净的载玻片上，二甲苯去蜡，固 绿复染，二甲苯透明，中性树胶封片。
8. 根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述橡胶树品种为热研7-33-97或 RRM600。
【专利摘要】本发明涉及生物技术领域，公开了一种筛选橡胶树增产刺激剂的方法。本发明所述方法，以橡胶树古铜期芽条的茎段或叶柄为外植体，消毒后将外植体切段分别接种于对照培养基和添加有待检测化学试剂的筛选培养基，24-28℃暗条件下培养60-100d，然后统计对照培养基和筛选培养基愈伤组织中乳管细胞分化频率，以筛选培养基愈伤组织中乳管细胞分化频率显著高于对照培养基愈伤组织中乳管细胞分化频率为判断标准，筛选出可以作为橡胶树增产刺激剂的待检测化学试剂。与现有方法相比，本发明方法重复性好、时间短，不易受环境影响，能大大提高橡胶树增产刺激剂的筛选效率，可用于橡胶树增产刺激剂的规模化筛选。
【IPC分类】A01H4-00
【公开号】CN104839030
【申请号】CN201510305256
【发明人】张家明, 谭德冠, 彭晶, 韩冰莹, 付莉莉, 孙雪飘
【申请人】中国热带农业科学院热带生物技术研究所
【公开日】2015年8月19日
【申请日】2015年6月5日