细胞质雄性不育洋桔梗及其制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及具有细胞质雄性不育性的新型洋桔梗及其育种方法。更详细地，本发 明涉及具有细胞质雄性不育性的新型洋桔梗及其育种方法，其特征在于因雄蕊或花粉形成 不充分、从而实质上欠缺授粉功能。
【背景技术】
[0002] 洋桔梗（Eustoma)是北美洲南部到中美洲北部天然生长的龙胆科洋桔 梗（Eustoma)属的自花授粉型种子繁殖植物，其存在有以下两种：（I)Eustoma grandiflorum(英文名 Prairie gentian，旧学名 Ε· russellianum(Hook)G. Don ex Sweet, Lisianth(i)us russellianus Hook·)、和（2)Eustoma exaltatum(英文名 Seaside gentian，Catchfly gentian，旧学名 E.selenifolium Salisb·)。作为其别名，土耳其桔梗 或丽钵花（Lisianthus)为人们所熟知。1835年天然生长的品种被引入苏格兰，并被命名为 Lisianthus russellianus Hook·。日本则是在1930年代引入的，这之后主要作为切花用、 盆栽用而进行了很多品种改良。品种改良中，主要使用Eustoma grandiflorum。
[0003] 洋桔梗已作为观赏价值及市场价值高的花丼植物而为人们所知，尤其是在切花用 品种中，制造出了具有多种多样的性质的品种，被认为是切花的主要品类之一（参见非专 利文献1)。
[0004] 一般而言，在主要园艺作物中，利用杂种第一代交配（Fl)植物，其利用了杂种优 势，具有比双方亲本更优秀的性质。
[0005] 在切花需求高的洋桔梗的栽培品种中，杂种第一代交配品种也是主流，因为其具 有抗病性和尚品质性。
[0006] 此外，为了使得生产中的播种操作更为高效，需要育种者供给高纯度的种子。
[0007] 杂种第一代交配品种的种子采集通过下述方式来进行：首先以手工方式对亲本种 子去雄，之后将亲本花粉的花粉向经去雄的亲本种子的柱头授粉。
[0008] 通常，能对亲本种子去雄的时期局限为临开花前期，并且易受天气影响，因此去雄 中存在难以预测可进行去雄的时期这样的操作性问题。此外，该操作是通过手工进行的，因 此，有时因未彻底去雄而残存的花粉而导致违人所愿地产生自花授粉种子，因自花授粉种 子的混入导致的种子品质的低下成为问题。
[0009] 鉴于上述理由，期望开发在洋桔梗中不需要通过人工进行的亲本种子去雄的、利 用雄性不育性的种子采集方法。
[0010] 通过发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes)导入rolC基因进行转化获得的矮 型土耳其桔梗是已知的（非专利文献2)，但是有报道称其出现了花的小型化，花粉生育性 丧失，顶芽优势也同时消失（rol综合征）。
[0011] 公开了应用非专利文献2的技术、从通过不定芽再生而被维持的雄性不育土耳其 桔梗制造 Fl品种的方法（专利文献1)。但是，遵循该方法制造的Fl品种伴有不期望的性 质，因此，该方法存在无法在对切花品种（要求具有商品性的植株形态、植株高度）的育种 中利用的问题。
[0012] 作为雄性不育性之一的细胞质雄性不育性是细胞质遗传性的，在细胞质雄性不育 品系与雄性可育品系交配的情况下，后代植物具有雄性不育性，因此能够供给纯度高的种 子。并且，对细胞质雄性不育品系而言，通过将其与细胞核基因组相同、细胞质正常的保持 品系交配，能够容易地实现品系的保持和增殖。因此，利用细胞质雄性不育性的杂种第一代 交配品种的种子采集方法实用性极高，被利用于多种主要的园艺作物中。但是，对洋桔梗而 言，虽然期望开发利用雄性不育性的种子采集方法，但尚未有成功制造出细胞质雄性不育 桔梗的报道。因此，在洋桔梗Fl品种的种子生产中，因为不存在使用了实用的雄性不育品 系的种子采集体系，故而只能进行必须要进行去雄操作的种子采集。
[0013] 另一方面，人们希望花的保持性好（通过使花瓣的老化延迟而延长花的观赏期）。 作为花瓣老化的原因，可举出授粉、或雌蕊的柱头或花柱受到损伤导致乙烯生成等原因 (非专利文献3)。
[0014] 洋桔梗中，作为花的保持性良好的品种，具有变形雌蕊（通过使柱头部分闭合、阻 碍授粉从而延迟花的老化）的洋桔梗是已知的（专利文献2)。
[0015] 为了使得花的保持性好，过去必须要育成雄蕊花丝较短的品系、或利用改变了植 物器官的构造从而得以以物理方式实现柱头上不授粉（如前文所述的变形雌蕊那样）的品 系。
[0016] 进一步地，作为市场价值高的花丼植物的条件之一，需要防止花粉的飞散。但是， 现在的洋桔梗品种中，所有品种均为雄蕊具有花粉的品种，因此都存在花粉飞散导致花瓣 或衣服污损等问题。
[0017] 虽然有可能能通过利用雄性不育性从而在不改变有用性质的情况下解决花的保 持性等问题，但是迄今尚未制造出具有这样的实用的雄性不育性的洋桔梗。
[0018] 现有技术文献
[0019] 专利文献
[0020] 专利文献1 :日本特开平9-107829号公报
[0021] 专利文献2 :日本专利4133011号公报
[0022] 非专利文献
[0023] 非专利文献1 :農業技術体系花丼編（农业技术体系花丼编）第8卷追录第6号 387-3952004年社团法人农山渔村文化协会发行
[0024] 非专利文献2 :組織培養（组织培养）Vol. 19 No. 2 p50-55 1993年New Science Co. , Ltd.
[0025] 非专利文献3 :実践花§園芸技術卜；I/ 33々栽培管理t開花調節（实践花 丼园艺技术土耳其桔梗栽培管理与开花调节）2003年株式会社诚文堂新光社发行
[0026] 非专利文献 4 :E. S. Mousavi, M. Behbahani, E. Hadavi, S. M. Miri (2012) CALLUS INDUCTION AND PLANT REGENERATION IN LISIANTHUS(EUSTOMAGRANDIFLORIUM), ANNIVERSA RY EDITION TRAKIA JOURNAL OF SCIENCES Vol. 10, No I, pp 22-25
[0027] 非专利文献 5 :J. DuminiI, M.-H. PEM0NGE and R. J. PETIT (2002)Molecular Ecology Notes vol. 2p428_430"A set of 35consensus primer pairs amplifying genes and introns of plant mitochondrial DNA"
【发明内容】
[0028] 鉴于上文所述的以往的洋桔梗品种中Fl种子生产时烦杂的去雄操作等问题点、 种子品质低下的问题点、以及进一步的花的保持性和花粉飞散的问题，本发明提供具有细 胞质雄性不育性的新型洋桔梗及其制造方法。
[0029] 本申请的发明人为了解决上述问题进行了深入研宄，制造出了具有细胞质雄性不 育性的新型洋桔梗个体、育成了具有该细胞质雄性不育性的洋桔梗品种，完成了使用该细 胞质雄性不育性洋桔梗获得杂种第一代交配品种的育种方法。
[0030] 即，本发明涉及具有细胞质雄性不育性的新型洋桔梗及其育种方法，进一步优选 涉及下述具有细胞质雄性不育性的新型洋桔梗及其育种方法，所述新型洋桔梗特征在于因 雄蕊或花粉形成不充分、从而实质上欠缺授粉功能。
[0031] BP，本发明提供以下的（1)~（34)。
[0032] (1)具有细胞质雄性不育性的洋桔梗属植物或其后代。
[0033] (2) (1)所述的洋桔梗属植物或其后代，其特征在于，具有序列号1或序列号2记载 的碱基序列。
[0034] (3) (1)或（2)所述的洋桔梗属植物或其后代，其特征在于，所述洋桔梗属植物或 其后代是从下述杂交后代产生的细胞质雄性不育植物，所述杂交后代是以具有序列号1或 序列号2记载的碱基序列的洋桔梗属植物作为亲本种子、以任意的洋桔梗属植物作为亲本 花粉而得的杂交后代。
[0035] (4)⑴~⑶中任一项所述的洋桔梗属植物或其后代，其特征在于，所述洋桔梗 属植物或其后代是从下述杂交后代产生的细胞质雄性不育植物，所述杂交后代是以具有序 列号1或序列号2记载的碱基序列的洋桔梗属植物作为亲本种子、以E. grandifIorum作为 亲本花粉而得的杂交后代。
[0036] (5) (1)~（4)中任一项所述的洋桔梗属植物或其后代的植物体的一部分。
[0037] (6)⑴~（4)中任一项所述的洋桔梗属植物或其后代的种子。
[0038] (7) -