用于制造癌症组合物的方法
【专利说明】用于制造癌症组合物的方法
[00011 优先权
[0002] 本申请要求2013年3月15日提交的美国临时申请第61/791,909号的优先权，该临 时申请在此通过引用以其整体并入。 发明领域
[0003] 本发明涉及制造对癌症有用的前药化合物的方法。在一个实例中，本发明涉及制 造前药的方法以及制造其某些中间体的方法，所述前药包括连接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的键中的至少一个是γ羧基键合)的肽的天冬氨酸的毒胡萝卜素衍生 物8-0-( 12-氨基十二烷酰基)-8-0-去丁酰基毒胡萝卜素（12ADT)，并且具有式1的式：
[0004]
[0005] 本发明还涉及通过本文阐明的工艺获得的化合物和中间体。
[0006] 发明背景
[0007] 一种肽前药化合物，其被鉴定为G-202并且包括被连接至具有序列Asp-Glu*Glu* Glu*Glu(其中用*指示的键中的至少一个是γ羧基键合)的肽的天冬氨酸的毒胡萝卜素衍生 物8-0-(12-氨基十二烷酰基)-8-0-去丁酰基毒胡萝卜素(12ADT)，并且具有以下结构式：
[0008]
[0009](式1)已经在美国专利第7，767，648号和第7，468，354号中阐明并描述，该美国专 利以其整体并入本文。包含G-202的可注射的癌症组合物和用于使用G-202治疗肝细胞癌的 方法和组合物也在美国临时申请第61/714,662号和第61/693,273号中公开，该临时申请以 其整体并入本文。
[0010]对于产生G-202的工艺的主要挑战是由于缺乏任何中间体或最终的活性药物成分 (API)的结晶性。这阻止了在合成中的任何位置使用结晶来除去杂质。此限制使反应应当是 高效的且产生很少至没有杂质成为必要。此外，结晶性的缺乏增加了诸如以下的交替的纯 化工艺的价值:水溶液萃取、极性/非极性有机分配、沉淀、研碎和有效的色谱纯化。本文公 开的此工艺成功地并入了有效的合成策略和所有的这些纯化技术以生成纯的G-202。
[0011] 发明概述
[0012] 在一个方面中，本发明提供用于制造具有化学名称8-0-(12-氨基十二烷酰基)-8_ 〇-去丁酰基-毒胡萝卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H的式I的化 合物的方法：
[0013]
[0014] 所述方法包括：
[0015] (a)对毒胡萝卜素(Tg)(式2)进行改性
[0016]
[0017]以得到化合物8-0-去丁酰基-毒胡萝卜素(DBTg)(式3):
[0018]
[0019] 和(b)在二甲基氨基吡啶(DMAP)、二异丙基碳二亚胺(DIC)和CH2CI2的存在下添加 化合物 Boc-12-AD (式4):
[0020]
[0021] 以得到 Boc-12ADT(式 5):
[0022]
[0023] 和（c)使Boc-12ADT脱保护以得到12ADT(式6):
[0024]
I 1 ? IVI W = JSVZ.UU;
[0025] 和(d)在乙基-(二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、二异丙基乙胺（iPr2NEt)、羟基 苯并三唑（HOBt)和二甲基甲酰胺（DMF)的存在下将12-ADT与Boc-Asp-Glu(OtBu)-Glu (0tBu)-Glu(0tBu)_0tBu(式7):
[0026]
[0027] 组合以得到PG_202(式8):
[0028]
[0029] 和(e)使PG-202发生反应以得到化合物，粗制的G-202(式9):
[0030]
[0031]和(f)然后将粗制的G-202转化为式1的化合物。
[0032]
[0033]在本发明的另一个实施方案中，提供了制造化合物B0C-12-AD(式4)的方法：
[0034]
[0035] 所述方法包括：
[0036] (i)在乙酰氯(AcCl)的存在下使化合物12-AD(式10):
[0037]
[0038] 与甲醇(MeOH)发生反应以得到式11的化合物：
[0039]
[0040] 和（ii)在4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和叔胺碱R3N的存在下使式11的化合物与二-(叔丁基)二碳酸酯(B 〇C20)发生反应以得到式12的化合物：
[0041]
[0042] 其中所述叔胺可以是但不限于三乙胺(Et3N)、二异丙基乙胺（iPnNEt)或N-甲基吡 啶，和(iii)使式12的化合物发生反应以产生式4的化合物(Boc-12-AD)。
[0043]本发明还涉及新颖的式1至式12的化合物(包括其变型和衍生物）、通过本文公开 的方法产生的式1至式12的化合物(包括其变型和衍生物）、以及可以使用本文提供的方法 产生或生成的其他化合物。
[0044] 本发明涉及这些以及下文描述的其他重要的目标。
[0045] 附图简述
[0046]图1示出产生G-202的总反应的示意图。
【具体实施方式】
[0047] 按照长期存在的专利法公约，术语"一个(a)"、"一个(an)"和"所述(the)"当在本 申请(包括权利要求书）中使用时是指"一个或更多个"。因此，例如，提及"一个受试者"包括 多个受试者，除非上下文清楚地是相反的(例如，多个受试者），等等。
[0048] 为了此说明书和所附权利要求书的目的，除非另外说明，否则表达量、大小、尺寸、 比例、形状、制剂、参数、百分比、参数、数量、特性的所有的数和在说明书和权利要求书中使 用的其他数值，应当被理解为在所有情况下都被术语"约"修饰，即便术语"约"可能没有清 楚地与这些值、量或范围一起出现。
[0049] 除非另外定义，否则本文中使用的所有的技术和科学术语都具有与本发明所属领 域的普通技术人员所一般理解的一样的含义。虽然与本文描述的那些相似的或等同的任何 机械、材料和方法可以被用于实践或测试本发明，但现在描述优选的机械、材料和方法。本 文提及的所有出版物被引用的目的是用于描述和公开在出版物中报道的并且可能关于本 发明的各种实施方案被使用的细胞系、方案、试剂和媒介物。本文决不应当被解释为承认本 发明没有根据现有的发明先于这样的公开内容的权利。
[0050] 如本文使用的术语"G-202"是指具有式1的化学结构的8-0-(12-氨基十二烷酰 基)-8-0-去丁酰基-毒胡萝卜素)天冬氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸0H。
[0051] G-202是毒胡萝卜素前药，其含有偶联于抑制其生物活性直至在肿瘤位点处的蛋白 水解性裂解的掩蔽肽(masking peptide)的毒胡萝卜素的细胞毒性类似物。毒胡萝卜素自身 是天然产物，其被化学改性为8-0-( 12-氨基十二烷酰基）-8-0-去丁酰基-毒胡萝卜素） (12ADT)。此毒胡萝卜素类似物在掩蔽肽Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu的N末端处被偶联于 Asp的辟爱基，以产生前药（12ADT)-Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -GluGlu0H(G-202)。
[0052] G-202的化学名称是(8-〇-( 12-氛基十二烧醜基)-8-〇-去丁醜基-毒胡萝卜素)天冬 氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-γ -谷氨酸-谷氨酸oh。其有时以如下缩写形式被提及： (12ADT)Asp- γ -Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH，其中12ADT代表毒胡萝卜素衍生物并且厶8?-丫-Glu- γ -Glu- γ -Glu-GluOH代表PSMA可裂解的掩蔽肽。G-202是具有1409.52的分子量的棕 褐色至白色的固体。
[0053] G-202由偶联于天然产物毒胡萝卜素的高细胞毒性类似物的PSMA选择性的5氨基酸 肽底物组成。参见，例如，Denmeade，S · R·，等人，J ·Nat 1 · Cancer Inst · 2003; 9:990-1000;和 美国专利第7，767，648号和第7，468，354号。毒胡萝卜素从作为遍及地中海盆地的野草生长 的植物毒胡萝KThapsia garganica