专利名称：冻干人凝血酶原复合物的生产方法
技术领域：
本发明属于医用材料的生产方法，特别是冻干人凝血酶原复合物的生产方法。
背景技术：
现有的冻干人凝血酶原复合物的生产方法，均用去冷沉淀上清血浆或FIII沉淀为原料，经聚乙二醇分离去除杂蛋白并经阴离子交换凝胶DEAE-SephadexA-50吸附及S/D或干热等灭活工序制取的人凝血酶原复合物(PCC)，由于在灭活方法上均为单一灭活工序，因而其灭活不彻底，仍有病毒传播的可能性，且单位体积制品中的IX因子含量较少，其比活性也较低，因而临床使用效果较差。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有病毒灭活更彻底及IX因子的含量和比活性较高的冻干人凝血酶原复合物的生产方法。本发明的技术解决方案是这样的，它包括有以下工序以FIII沉淀为原料经溶解、PEG沉淀和低温离心分离、过滤、凝胶吸附、洗涤凝胶、洗脱液超滤透析和浓缩、S/D灭活病毒、二次凝胶吸附、洗涤和洗脱凝胶、超滤透析、微孔膜除菌过滤和分装、冷冻干燥，其特征在于洗涤凝胶的洗涤液中的NaCl浓度为0.23-0.28mmol/L及对上述已冷冻干燥的人凝血酶原复合物置于98-100℃的沸水浴中进行干热灭活30分钟。本发明由于调整了洗涤液中的NaCl浓度以及采用了S/D及干热双重灭活工序，因而制品具有IX因子含量大于20IU/ml，IX因子比活性大于0.6IU/mg蛋白的欧洲药典标准，且病毒灭活更彻底，使用更安全的优点。
具体实施例方式冻干人凝血酶原复合物的生产方法，包含有以下工序(1)取FIII2公斤，用10升溶解液溶解后体积为12升，在温度为25℃下，加1公斤40％的PEG溶解液，用NaHCO3、约450毫升调PH值至6.8，(2)将上述溶液降至5℃在离心机分离，其上清液用滤板过滤，得体积14升，(3)加入DEAE-SephadexA-50湿凝胶200克吸附60分钟，(4)用洗涤液洗涤凝胶3个体积，然后用洗脱液洗凝胶2次，收集洗脱液600毫升，(5)上述洗脱液经过滤、超滤透析，浓缩后体积为0.4升，(6)S/D灭活病毒，加入S/D母液40毫升，在24-26℃条件下缓慢搅拌灭活6小时，得体积为450毫升，(7)加入DEAE-Sephadex A-50湿凝胶120克进行吸附30-45分钟后装柱，(8)用洗涤液连续洗涤凝胶6-10个柱体积，洗涤时其线性速度45厘米/小时，然后用洗脱液脱3-5个体积，其线性速度为30厘米/小时，收集洗脱液1500毫升，(9)进行超滤透析，得体积500毫升，其IX因子效价26IU/毫升，IX比活性大于0.65IU/mg蛋白，加入肝素5000IU作为保护剂，(10)用孔径为0.2微米的膜除菌过滤，然后进行分装，(11)冷冻干燥，(12)进行干热灭活(沸水浴30分钟)病毒。
权利要求
1.冻干人凝血酶原复合物的生产方法，它包括有以下工序以FIII沉淀为原料经溶解、PEG沉淀和低温离心分离、过滤、凝胶吸附、洗涤凝胶、洗脱液超滤透析和浓缩、S/D灭活病毒、二次凝胶吸附、洗涤和洗脱凝胶、超滤透析、微孔膜除菌过滤和分装、冷冻干燥，其特征在于；对上述洗涤凝胶时洗涤液中的NaCl浓度调整为0.23-0.28mmol/L及对已冷冻干燥的人凝血酶原复合物置于98-100℃的沸水浴中进行干热灭活30分钟。
全文摘要
本发明的冻干凝血酶原复合物的生产方法，它包括有以下工序以FIII沉淀为原料经溶解→低温离心分离、过滤→凝胶吸附→洗涤、洗脱凝胶→超滤浓缩→S/D灭活病毒→二次凝胶吸附→洗涤和洗脱凝胶→超滤透析→微孔膜除菌过滤分装→冷冻干燥，其特征在于；将冻干人凝血酶原复合物置于98－100℃的沸水浴中进行干热灭活30分钟。本发明的冻干人凝血酶原复合物具有IX因子含量大于2010/ml，IC因子比活性大于0.610/ag蛋白的欧洲药典标准及病毒灭活更彻底，使用更安全的优点。
文档编号C12N9/48GK1475569SQ0213894
公开日2004年2月18日 申请日期2002年8月15日 优先权日2002年8月15日
发明者安康, 潘若文, 马小伟, 张宝献, 范蓓, 郭建伟, 杨保平, 安 康 申请人:华兰生物工程股份有限公司