专利名称：利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦胶原肽的方法
技术领域：
本发明属于生物技术酶工程领域，涉及利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦鱼鳞胶原肽的生产工艺。
背景技术：
鱼鳞是鱼真皮层的变形物，鱼鳞中的主要成分是胶原蛋白。现代研究表明胶原蛋白酶解生产的胶原肽具有广泛的生理活性，如保护胃粘膜及抗溃疡作用、抗过敏、降血压、降胆固醇、抗衰老、促进伤口愈合、增强骨强度和预防骨质疏松、预防关节炎、促进角膜上皮损伤的修复和促进角膜上皮细胞的生长等多种生理活性功能。
但是肽类物质特有的苦味在很大程度上限制胶原肽在食品、保健品等行业的应用。蛋白质水解物的苦味主要来自水解物中肽类物质的末端的疏水性氨基酸，天然蛋白质本身没有苦味。大部分疏水性的氨基酸被包裹在蛋白质分子内部，无法与味觉细胞接触；另一方面，完整的蛋白质有较大的分子量和复杂的分子构型，疏水性氨基酸基与味蕾上的味觉接受器在空间上存在距离，因而不会产生苦味。酶水解蛋白质生成分子量较低的多肽后，疏水性的氨基酸、多肽与味觉细胞接触而产生苦味。
目前国内外利用鱼鳞生产出的胶原肽具有一定的苦味，利用内肽酶和端肽酶生产无苦胶原肽的尚未见报道。
发明内容本发明的目的是提供一种利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦胶原肽，对鱼鳞进行深加工的工艺。
本发明的目的可以通过如下措施来实施。
一种利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦胶原肽的方法1.将洗净晾干的鱼鳞通过粉碎机粉碎，过80～200目标准筛，得到鱼鳞粉；2.将鱼鳞粉按其重量的6～20倍加水搅拌均匀，得到混悬液；3.将上述混悬物送进反应罐，升温至35℃～70℃，用10％的碱液调节pH为6～10，按鱼鳞粉重量的0.5％～5％加入内肽酶进行第一次酶解，酶解时间为3～12小时，酶解完毕，将得到的酶解液升温至90℃，保持10分钟，使内肽酶失活。
4.将酶解液降温到35℃～70℃，在自然pH下，按鱼鳞粉重量的0.1％～3％加入端肽酶进行第二次酶解，利用端肽酶对酶解液中多肽末端的疏水性氨基酸进行修饰脱苦，酶解时间为6～16小时。酶解完毕，将得到的酶解液升温至90℃，保持10分钟，使端肽酶失活。
5.将酶解液过滤得到上清夜和滤渣。
6.将上清液浓缩、干燥得到无苦鱼鳞胶原肽。
本发明的附图
是利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦胶原肽的工艺流程图。
从附图中可以清楚的了解到利用本发明工艺提取无苦鱼鳞胶原肽的全过程。
所述内肽酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶中的一种或几种。
所述端肽酶为羧肽酶和端肽酶中的一种或两种。
本发明具有如下优点1.采用本发明所述工艺生产的鱼鳞胶原肽由于利用了端肽酶对产生苦味的疏水性氨基酸进行修饰，生产出的胶原肽无任何苦味，提高了鱼鳞胶原的口感和品质，拓宽了鱼鳞胶原在食品和保健品领域的应用范围。
2.采用本发明所述工艺生产的鱼鳞胶原肽中含有很多具有各种生理功能的活性肽，分子量小，不但利于人体吸收利用，还可以调节人体生理功能。
3.本发明的技术生产工艺简单、独特、生产周期短。
具体实施方式
以下用实例来进一步说明所提供的技术方案实施的全过程实施例一准确称取洗净、晾干的鱼鳞1千克，送进粉碎机中粉碎，并过100目标准筛，将过筛后的鱼鳞粉加入8千克蒸馏水，搅拌均匀，至鱼鳞粉呈混悬液状态。将混悬液升温至35℃～70℃，用碱液调节pH＝7.5，加入10克木瓜蛋白酶进行第一次酶解，酶解时间为5小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后降温至40℃～60℃，加入15克氨肽酶进行第二次酶解，酶解时间为8小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后将酶解液过滤得到上清液和滤渣，上清液经浓缩、干燥得到鱼鳞小分子胶原蛋白。
实施例二准确称取洗净、晾干的鱼鳞3千克，送进粉碎机中粉碎，并过200目标准筛，将过筛后的鱼鳞粉加入30千克蒸馏水，搅拌均匀，至鱼鳞粉成混悬液状态。将混悬液升温至35℃～55℃，用碱液调节pH＝8.5，加入30克胰蛋白酶进行第一次酶解，酶解时间为8小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后降温至40℃～60℃，加入30克羧肽酶进行第二次酶解，酶解时间为10小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后将酶解液过滤得到上清液和滤渣，上清液经浓缩、干燥得到鱼鳞小分子胶原蛋白。
实施例三准确称取洗净、晾干的鱼鳞8千克，送进粉碎机中粉碎，并过120目标准筛，将过筛后的鱼鳞粉加入80千克蒸馏水，搅拌均匀，至鱼鳞粉呈混悬液状态。将混悬液升温至35℃～70℃，用碱液调节pH＝8.0，同时加入80克碱性蛋白酶和80克复合蛋白酶进行第一次酶解，酶解时间为4小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后降温至40℃～60℃，同时加入50克羧肽酶和50克氨肽酶进行第二次酶解，酶解时间为5小时，酶解完毕，升温到90℃保持10分钟使酶失活，然后将酶解液过滤得到上清液和滤渣，上清液经浓缩、干燥得到鱼鳞小分子胶原蛋白。
权利要求
1.一种利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦味胶原肽的方法，其特征在于包括以下制作工艺(1)采用洗净晾干的鱼鳞作为提取胶原肽的原料，将鱼鳞粉碎并过80～200目标准筛。(2)将过筛后的鱼鳞粉按其重量的6～20倍配水搅拌均匀，得到混悬液。(3)控制温度为35℃-70℃，pH在6～10，按鱼鳞重量的0.5％～5％加入内肽酶进行第一次酶解，酶解时间为3～12小时。升温到90℃，保持10分钟灭酶；(4)所述内肽酶为胰蛋白酶、胃蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶中的一种或几种。(5)将灭酶后的第一次酶解液在35～70℃时，按鱼鳞重量的0.1％～3％加入端肽酶，进行第二次酶解，酶解时间为6～16小时，酶解完毕升温到90℃，保持10分钟灭酶，经过滤、浓缩、干燥得到无苦鱼鳞胶原肽。
2.如权利要求1所述的一种利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦味胶原肽的方法，其特征在于所述无苦鱼鳞胶原肽可以作为添加剂广泛用于食品、保健品、化妆品，亦可用于医药。
全文摘要
利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦胶原肽的方法。包括采用鱼鳞作为本发明的主要原料，并利用内肽酶和端肽酶从鱼鳞中提取无苦鱼鳞胶原肽。所述鱼鳞胶原肽须经将鱼鳞粉碎过80～200目标准筛，按鱼鳞重量加入6～20倍的水搅拌均匀。将得到的混悬液控制温度为35℃－70℃，pH在6～10，按鱼鳞重量的0.5％～5％加入内肽酶酶解3～12小时，并灭酶。将酶解液降温至35～70℃时，按鱼鳞重量的0.1％～3％加入端肽酶酶解6～16小时，并灭酶。然后经过浓缩、干燥、粉碎得到无苦鱼鳞胶原肽粉末。
文档编号C12P21/02GK1814781SQ20051012654
公开日2006年8月9日 申请日期2005年11月28日 优先权日2005年11月28日
发明者程云开, 凌海军 申请人:海南莱顿生物技术有限公司