专利名称：中和等渗细菌病毒漱口采样液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中和等渗细菌病毒漱口采样液；特别是一种用于手足口病和呼吸道致病菌、病毒中和等渗漱口采样液的配方及制备方法。手足口病又名发疹性 水泡性口腔炎，是我国近年出现的一种儿童传染病，由多种肠道病毒感染引起，以手足、臀 部和口腔前部为好发部位的出疹性疾病，可发生于四季，夏秋季易流行，本病系病毒感染性 疾病，经抗病毒及对症治疗后预后良好，很少有并发症。但是重症患者可合并心肌炎及脑膜 炎危及生命。据报告，1998年台湾发生手足口病的总病例数达到了 12. 9万，其中重症405 例，死亡78例；危重病例中91%年龄<5岁，70%合并病毒性脑炎。对本病的采样检查多采 用咽拭子HANKS液，其优点是作为维持液，能够很好保存小核糖核酸病毒科的肠道病毒(例 如柯萨奇病毒(Coxsackie virus) A组的4、5、7、9、10、16型，柯萨奇病毒B组的2、5型；部 分埃可病毒(ECHO-viruses)和肠道病毒71型)。提高实验室病毒分离的阳性率。为卫生 部手足口病采样规范中推荐的第一采样保存液。其缺点是配方较复杂，成本高；采用咽拭子 采样时，容易引起幼儿呕吐反射，不适感等。如作为漱口液，会被幼儿吞咽下，引起不良反应 (含有镁离子、酚红成分)，幼儿家长对此方法不好接受。而目前市面上商品化供应的细胞 的生长液(GM)、细胞的维持液(MM)及Eagle— s液(MEM)，均含有抗生素P. S溶液(青霉素 及链霉素)，对过敏性的手足口病患儿有一定性的危害。另外手足口病患儿，在有明显的临 床症状后，大部分应用了抗生素治疗，采样残余的抗生素对实验室诊断有一定的影响。采用 咽拭子采样是检查手足口病病毒最可靠的方法。用于在实验室做细胞培养进行分离，因此， 多年来细胞培养一直做为手足口病检测的“金标准”，细胞培养对设备、技术、标本采集和运 送等的要求都非常高，从口腔采集的柱状细胞，不宜混有多核细胞及粘液脓性分泌物，不宜 含有过多的杂质。对采集拭子也有要求应是棉拭子而不应是木制拭子，因为木制拭了可能 抑制病毒生长。标本必须放置在特制的转运培基中，冷冻，24小时内包埋到细胞培养盘中。 无论在费用上、设备、技术方面都要求非常高，因此，费用和时间是影响基层医疗单位手足 口病病毒诊断方法使用和推广的最大障碍，很多研究人员在手足口病病毒的采样方法的改 进上进行了多方面探索。本发明的中和等渗细菌病毒漱口采样液，具有指导临床诊断和治 疗的作用，为防止滥用抗菌药物也具有重要意义。
背景技术：
目前，细胞培养仍是诊断手足口病病毒感染最为可靠的实验方法，习惯 上把细胞培养作为“金标准”。用细胞培养的方法来确定手足口病病毒的感染涉及5个方面 的影响因素均有一定性的副作用。本发明的目的在于提供一种中和等渗细菌病毒漱口采样 液，与其它类采样液相比具备下列特点1、配方简单，易制备，基层实验室即可制备出合格 品，也能较好保存小核糖核酸病毒科的肠道病毒(例如柯萨奇病毒(Coxsackie virus)A 组的4、5、7、9、10、16型，柯萨奇病毒B组的2、5型；部分埃可病毒(ECHO-viruses)和肠道 病毒71型)。并且在利用PCR诊断技术方面，与HANKS液具有等同保存及运送效果。在卫 生部确定的手足口病采样规范中，规定可利用生理盐水作为采样保存液，现又在生理理盐 水中加入D-葡萄糖、胎牛血清能够为病毒提供部分营养，延长保存期，故更能较好保存小 核糖核酸病毒科的肠道病毒，达到提高实验室病毒分离的阳性率的目的。2、在采集咽部标 本时，可用漱口的方式较轻易采集到所需部位的标本样，不用咽拭子方式采样，故不易引起呕吐等不适感。当幼儿误吞咽后，因漱口液成分为等渗的糖盐溶液，对人体无害，很容易取 得幼儿的配合及幼儿家长的接受。胎牛血清和甘氨酸能中和采样残余的抗生素与传统试剂 比较，检出率高，污染小，临床应用效果满意。发明内容本发明的要点在于选择合适的组分，并进行合理混配，经加温、溶解、混 合、冷却、分装、高温灭菌等工艺而成一种中和等渗细菌病毒漱口采样液。 本发明选择的培养基配方如下(克、ml/每IOOml蒸馏水)氯化纳8. 0-0. 85 ；D-葡 萄糖0. 8-1. 2 ；胎牛血清2-5ml ；甘氨酸0. 2-0. 4 ；双蒸水加至IOOml ；调pH至7. 2-7. 4。氯化纳、D-葡萄糖是组织细胞的体液平衡必不可少的物质；胎牛血清、甘氨酸是 组织细胞的营养平衡必不可少的物质；胎牛血清使用前要灭活(56°C，30min)，以消除补体 活性。同时进行无菌试验。优质血清应该为淡黄色，透明，无溶血，无沉淀，灭活后颜色稍深。 试验中加入胎牛血清后，采样液的PH可能还会变化，故亦可先加入小牛血清后调pH值。采 样液配好后，应先抽取少许放入培养瓶内，于37°C温箱内置24 48hr，以检测培养液是否 有污染。每次配液量以两周左右为宜，一次配液不要太多，防止营养成分(主要为氨基酸) 损失，造成实验繁琐或者污染。甘氨酸同时用于中和采样残余的抗生素。本发明产品的制备方法是1)、将胎牛血清使用前进行灭活(56°C，30min)，以消除补体活性，同时进行无菌试 验；2)、按比例将氯化纳、D-葡萄糖、甘氨酸加热溶解于蒸馏水中，冷却后调 PH7. 2-7. 4，压力蒸汽灭菌 115°C，20-30min，冷至 50°C ；3)、在无菌条件下加无菌的胎牛血清、混合均勻，无菌分装，冷藏备用。本发明具有以下优点(1)配方简单，易制备，基层实验室即可制备出合格品；(2) 临床应用效果满意，解决了咽拭子方式采样，易引起呕吐等不适感的采样困难；(3)等渗的 糖盐溶液，对人体无害；(4)营养丰富，可防止标本中残余的抗生素，达到提高实验室病毒 分离的阳性率的目的。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明按照下表所列数据(克、ml/每IOOml蒸馏水)及其所述步骤进行配置配方一氯化纳8. 0-0. 85 ；D-葡萄糖0. 8-1. 2 ；胎牛血清2. 0-5. Oml ；甘氨酸0. 2-0. 4 ；双蒸 水加至 IOOml ；调 pH 至 7. 2-7. 4。配方二
氯化纳8. 2-0.85; D-葡萄糖0.9-1. 2;胎牛血清3. 0-5. 0ml；甘氨酸0.3-0. 4;双蒸水加 至 100 ml；调 pH 至 7. 2 — 7. 4。
配方三
氯化纳8. 0-0. 83; D-葡萄糖0. 8-1. 0;胎牛血清2. 0-4. 0ml;甘氨酸0. 2-0. 3;双蒸水加 至 100 ml；调 pH 至 7. 2 — 7. 4。
配方四
氯化纳8.1-0.84; D-葡萄糖0.9-1.1:胎牛血清2. 5-3. 5ml;甘氨酸0. 2-0. 3;双蒸水加 至 100 ml；调 pH 至 7. 2 —7.4。
权利要求
本发明涉及一种中和等渗细菌病毒漱口采样液，其特征在于具有如下配方(克、ml/每100ml蒸馏水)氯化纳8.0-0.85；D-葡萄糖0.8-1.2；胎牛血清2-5ml；甘氨酸0.2-0.4；双蒸水加至100ml；调pH至7.2-7.4。
2.—种权利要求1所述中和等渗细菌病毒漱口采样液的制备方法，其特征在于具有如 下的步骤1)、将胎牛血清使用前进行灭活(56°C，30min)，以消除补体活性，同时进行无菌试验；2)、按比例将氯化纳、D-葡萄糖、甘氨酸加热溶解于蒸馏水中，冷却后调PH7.2-7. 4，压 力蒸汽灭菌115°C，20-30min，冷至50°C ；3)、在无菌条件下加无菌的胎牛血清、混合均勻，无菌分装，冷藏备用。
全文摘要
本发明涉及一种中和等渗细菌病毒漱口采样液；特别是一种用于手足口病和呼吸道致病菌、病毒中和等渗漱口采样液的配方及制备方法。本发明具有以下优点(1)配方简单，易制备，基层实验室即可制备出合格品；(2)临床应用效果满意，解决了咽拭子方式采样，易引起呕吐等不适感的采样困难；(3)等渗的糖盐溶液，对人体无害；(4)营养丰富，可防止标本中残余的抗生素，达到提高实验室病毒分离的阳性率的目的。
文档编号C12Q1/04GK101845478SQ20091011931
公开日2010年9月29日 申请日期2009年3月24日 优先权日2009年3月24日
发明者林思夏, 王永先 申请人:王永先;林思夏