专利名称：冰结晶化抑制物质的制作方法
技术领域：
本发明涉及冰结晶化抑制物质、该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质的活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。
背景技术：
作为生物体在低温时的防御物质的一种，已知有冰结晶化抑制蛋白质。冰结晶化抑制蛋白质也被称为“抗冻蛋白”或“Anti-Freeze Protein”。以下，将它们简称为“AFP”。 在水冷冻的冰点下的温度区域中，AFP具有吸附在细胞内生成的冰结晶的表面阻止冰结晶的生长、从而防止细胞冻结的功能。这样的AFP从例如鱼类、昆虫、植物、菌类、微生物等中被发现。对于鱼类、昆虫来源的AFP的研究不断发展，已经知道了数种不同类型的AFP。I 型AFP例如从鲽科、杜父鱼科鱼类等中发现。作为I型AFP已有报道有如下的物质含有连续的Ala残基并形成为单链α螺旋结构，分子量为3. 3 5. OkDa(非专利文献1)。例如在亚洲胡瓜鱼(# ^々〗J々才)、大西洋鲱(夕4七4 3々二* > )中发现了 II型AFP。作为II型AFP，已经报道有如下的物质该物质具有S-S键，与钙依赖型凝集素的糖识别区域具有高同源性，分子量为14kDa以上(非专利文献1)。III型AFP是获得较多三维结构信息的球状蛋白质，其分为与阴离子交换树脂结合的III型AFP和与阳离子交换树脂结合的III型AFP。例如，在Macrozoarces americanus 中所发现的。作为III型AFP，有报道其是分子量为6 7kDa的物质(非专利文献1)。IV型AFP富含Glu和Gln，其显示与载脂蛋白E3的高同源性，并且含有大量α螺旋结构。在IV型AFP的存在下形成的冰结晶的特征为六方偏四面体型。作为IV型AFP， 已经报道有如下的物质例如包含108残基的，分子量为12kDa的杜父鱼科的多刺床杜父鱼 (Myoxocephalus octodecemspinosus)来源的物质(非专禾丨J文献 1)。有报道称β螺旋型AFP由在特定的位置含有-Thr-Xaa-Thr-(式中、“fcia”表示任意的氨基酸)和Cys的12个残基 13个残基的重复氨基酸序列构成，并显示高热滞效应。在例如黄粉虫(f \ 4 π 二 > 7 m Λ *夕‘* )的幼虫和谷物害虫的幼虫等中所发现的。作为β螺旋型AFP，已经报道了分子量为约9kDa的物质(非专利文献1)。已知抗冻糖蛋白(AFGP)主要由-Ala-Ala-Thr-重复构成，Thr的侧链被与冰结晶结合相关的二糖所修饰。是在例如南极鱼科(7卜力二 7科)鱼类中发现的。作为抗冻糖蛋白，已经报道了分子量为2. 2 33kDa的物质(非专利文献1)。作为植物来源的AFP，已知有冬黑麦(冬，^麦)、胡萝卜来源的物质等。已知例如冬黑麦来源的AFP含有葡聚糖酶、几丁质酶、奇异果甜蛋白类蛋白质，其形成复合体，亚基的分子量为16 35kDa (非专利文献幻。已知胡萝卜来源的AFP以分子量36kDa的单体形式存在(非专利文献3)。作为菌类来源的AFP，已知有例如Typhula ishikariensis、南极蘑菇(Flammulina
4belutipes KUAF-1)等担子菌类来源的物质。这些AFP为细胞外分泌蛋白质。已经报道了 Typhula ishikariensis来源的AFP的分子量为15 30kDa(专利文献1、2)。作为微生物来源的AFP，已知有例如黄杆菌属(FlavcAacterium)来源的AFP。已经报道了其分子量为19kDa，其显示0.5°C以上的高热滞活性(专利文献幻。已知由恶臭假单胞菌O^eudomonas putida)GR12-2分泌的抗冻蛋白是分子量为164kDa的新的脂糖蛋白 ('J糖夕質)(非专利文献4)。但是，在利用目前所报道的含AFP的鱼类、植物、昆虫、菌类、细菌等时，存在如下问题在生物体内仅含有微量的AFP，由此从生物体中提取AFP的效率较差，或者，即使在该生物体内含有大量AFP，对这样的生物的捕获和培养较为困难。由此，在上述这些生物中，没有可用于工业生产食品用途的AFP的生物。有报道显示针对鱼类或昆虫类的AFP，使用基因重组技术可以提高生产性(专利文献4、5)。但是，目前的现状是即使不利用这样的重组技术，也需要通过更为简单的方法来实现高效，廉价地提供AFP的方法。鉴于这样的情况，仅利用以往公知的冰结晶化抑制物质是不充分的，强烈需要开发新的有用的冰结晶化抑制物质。现有技术文献专利文献专利文献1 日本特开2004-24237号公报专利文献2 日本特开2004-275008号公报专利文献3 日本特开2004-161761号公报专利文献4 国际公开W092/16618号小册子专利文献5 国际公开W097/28260号小册子非专利文献非专利文献1 生物物理，2003，Vol. 43，No. 3，pp. 130-135非专利文献2 =Plant Physiology, 1999，Vol. 119，pp. 1361-1369非专利文献3 =Biochem. J.，1999，Vol. 340，pp. 385-391非专利文献4 :Can. J. Microbiol.，1998，Vol. 44，p. 6
发明内容
发明要解决的问题本发明的目的在于提供一种冰结晶化抑制物质，其具有能够实用的优异的冰结晶化抑制活性，能够通过可用于食品制造的安全工序，简单、高效、廉价地制造。此外，本发明的目的在于提供一种该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。解决问题的方法本发明人等为了解决上述问题进行了深入的研究。其结果发现，可以通过植物容易地获得，并利用工业上极其简便的方法、高效地制造的冰结晶化抑制物质，从而完成了本申请的发明。本发明涉及的冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。本发明涉及的上述冰结晶化抑制物质的制造方法，其特征在于，包含使用截留分子量为5000以上的分离膜，从植物分离冰结晶化抑制物质的工序。本发明涉及的多肽，其特征在于，该多肽是上述冰结晶化抑制物质的一部分，并且具有冰结晶化抑制活性。本发明涉及的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品，其特征在于，包含上述冰结晶化抑制物质和/或上述多肽。
具体实施例方式如下所述针对本发明的一实施方式进行说明。本发明涉及的冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。本发明涉及的冰结晶化抑制物质是具有抑制冰结晶生长功能的蛋白质。AFP(抗冻蛋白)通常与初期冰结晶的表面发生作用并阻碍冰结晶的生长，或者控制冰结晶的形状从而抑制冰结晶的生长。由此，本发明的冰结晶化抑制活性，可以通过观察冰结晶结构来确认。当然，也可以直接测定冰结晶的生长抑制。本发明涉及的冰结晶化抑制物质是来源于植物的物质，可以从植物中提取。对于含有本发明涉及的冰结晶化抑制物质的植物没有特别地限定，可以举出例如，选自属于十字花科、伞形科、百合科及菊科的植物中的1以上的植物、以及它们的类似品种及改良品种。作为属于十字花科的植物，可以列举选自白菜、萝卜、西兰花、青菜、油菜、芜菁、大阪白菜、野泽菜、广岛菜、水菜及芥菜(Brassica juncea)中的1以上的植物、以及它们的类似品种及改良品种。属于伞形科的植物可以列举如胡萝卜等，属于百合科的植物可以列举如葱等，属于菊科的植物可以列举茼蒿(feirland chrysanthemum春菊)等。作为十字花科植物，优选芥菜(Brassica juncea)、以及其类似品种及改良品种。 对于上述Brassica juncea种的植物，没有特别地限定，可以列举例如芥菜(Brassica juncea mustard greens)(Brassica juncea integrifolia) ^'( (Brassica juncea tumida) (Brown Mustard, Brassica juncea)。 Brassica juncea ft 41 ^TW 易地获得，此外，只要使用Brassica juncea种的植物，即可以高效地获得本发明涉及的冰结晶化抑制物质。Brassica junceaAX^ Brassica juncea。 Brassicgi juncea可以更为容易地获得。此外，就Brassica juncea而言，从每单位重量的植物体得到的提取物所具有的冰结晶化抑制活性更为优异。在本发明中，“类似品种”是指，例如科的类似品种，是指即使属于同一目的植物， 在学术分类上也是近似科的品种，具体植物的类似品种，是指即使属于同一科的植物，学术分类上也是近似的品种。此外，“改良品种”是通过人为选择、杂交、突然变异、基因重组等改良的植物。这些植物可以在如下状态使用通过低温驯化等公知的方法诱导出植物中的冰结晶化抑制物质的状态。对于低温驯化的温度没有特别限定，但下限温度优选为o°c以上，上限温度优选为20°c以下。此外，对于低温驯化的时间没有特别地限定，但优选进行3天以
6上。以下，针对本发明涉及的冰结晶化抑制物质的性状进行详细说明。本发明人等实际得到的植物来源的冰结晶化抑制物质，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上，是至少含有一个以上具有34000 士 500Da或71000 士 IOOODa分子量的低分子亚基的复合体。在此，认为亚基是能够从分子量400kDa以上的冰结晶化抑制物质中解离得到的多肽， 是在例如二硫苏糖醇等还原剂的存在下，通过SDS-PAGE分析上述分子量为400kDa以上的冰结晶化抑制物质时确认的低分子条带。就本发明的冰结晶化抑制物质而言，可以是由这些亚基构成的单体，或含有2个以上亚基而形成的复合体，也可以含有复合体的一部分。作为复合体的一部分，可以列举例如34000士500Da及71000士 IOOODa的亚基，只要具有冰结晶化抑制活性即可，没有特别地限定。需要说明的是，作为特征为上述冰结晶化抑制物质的一部分，并且具有冰结晶化抑制活性的多肽，可以列举上述的34000 士 500Da及71000 士 IOOODa的亚基。即，本发明涉及的冰结晶化抑制多肽可以通过解离上述冰结晶化抑制物质来制造。另外，作为本发明的冰结晶化抑制物质，优选具有以下性质的物质·在pH8. 0的条件下，能够通过使用各种阴离子交换树脂的色谱法作为吸附级分形式得到·在pH6. 0的条件下，能够通过使用各种阳离子交换树脂的色谱法作为未吸附级分形式得到·在pH7. 4的条件下，不与各种糖结合蛋白质结合、吸附。对于此处的阴离子交换体，没有特别地限定，可以举出例如DEAE(二乙基氨基乙基(Diethylaminoethyl))、Q(季铵(Quaternary Ammonium))等。此外，对于阳离子交换体没有特别地限定，可以列举例如CM(羧基甲基(Carboxymethyl))、SP(磺丙基 (Sulphopropyl))等。此外，糖结合蛋白质(凝集素)是指特异地识别糖链并结合，从而形成交联的蛋白质的总称，作为这样的糖结合蛋白质，没有特别地限定，可以举出例如ConA(直立刀豆凝集素)、RCA120 (蓖麻子(t 7 7 ^ )凝集素)、WGA (小麦胚芽凝集素)等。上述的冰结晶化抑制剂与冰结晶的结晶面结合，抑制冰结晶的生长。此外，该结合可以阻止自由水进一步与冰结晶结合从而抑制冰结晶的生长。通过使用具有这样性质的冰结晶化抑制物质，例如将其添加到冷冻食品中，通过抑制食品中所含有的水的冰结晶化，从而可以防止该食品的味道的劣化等。例如，防止淀粉老化，或可以抑制如下现象食品中的水冰结晶化从而物理地压迫蛋白质、油脂成分等，使其结构发生变化，由此导致味道和品质等的劣化。本发明涉及的上述冰结晶化抑制物质的制造方法，其特征在于，包括使用截留分子量为5000以上的分离膜，从植物分离冰结晶化抑制物质的工序。本发明的冰结晶化抑制物质可以适当地经过如下工序来回收通过提取等分离含有由植物得到的冰结晶化抑制物质的溶液，另外，也可以适当地经过如下工序来回收经过纯化工序从分离的溶液中纯化冰结晶化抑制物质。作为得到含有本发明涉及的冰结晶化抑制物质的溶液的方法，没有特别地限定， 优选使用水或有机溶剂，从Brassica juncea种等的植物中提取。对于用于提取的植物的形态没有特别地限定，可以是植物体整体，或者可以是例如，芽、叶、叶柄等植物的一部分。
对于用于提取冰结晶化抑制物质的溶剂没有特别地限定，可以适当地组合选自水、亲水性有机溶剂、超临界二氧化碳、亚临界水等构成的组中的1种以上的溶剂。作为亲水性有机溶剂，可以列举例如甲醇、乙醇等，优选可以用于食品加工的溶剂，可以列举乙醇等。在这些溶剂中，优选水及乙醇。此外，也可以将水和有机溶剂混合使用。在使用水时， 优选使用经加温的水，特别优选使用热水，在使用有机溶剂的情况下，优选使用经加温的有机溶剂。对于经加温的水或有机溶剂的温度没有特别地限定。下限优选为o°c以上，进一步优选为20°C以上。上限优选为160°C以下，进一步优选为120°C以下。除此之外，作为水性溶剂可以列举乙酸钠缓冲液等各种缓冲液、醇和水的混合溶剂等，但并不限定于上述这些。 提取溶剂的种类和量，可以根据进行提取的植物体的种类和量进行适当地选择。由于本发明涉及的冰结晶化抑制物质是高分子的复合体，通过上述方法从植物中将其分离之后，可以通过使用各种超滤膜、透析膜等的膜分离而容易地进行纯化、回收。作为其纯化方法，没有特别地限定，例如可以适当地组合使用反渗透、超滤、微滤等。对于膜分离的截留分子量没有特别地限定。将目标物回收在膜非透过物中时，截留分子量的下限优选为5000以上，更优选为10000以上，非常优选为50000以上，最优选为100000以上，上限只要不超过400000均可以适当地使用。在膜分离法中，分子量小的成分选择地透过膜，其结果，实现了对溶液中的分子量大的成分的纯化、浓缩，在实际过程中，溶液中的溶质由于在膜表面附近积累(浓差极化)、吸附到膜表面和细孔内等，因此随着时间其透过性能会降低。将本发明的冰结晶化抑制物质回收至高分子一侧时，使用的膜的截留分子量低于5000 则对溶液中的夹杂成分的除去不充分，此外容易引起膜的堵塞，因此不优选。此外，截留分子量如果高于400000，则对分子量为400kDa以上的该冰结晶化抑制物质的纯化、回收实质上变得困难，因此，优选为400000以下。根据需要，也可以对本发明的冰结晶化抑制物质进一步纯化。例如，可以适当地组合使用倾析、过滤、离心分离等以除去夹杂成分。此外，例如也可以适当地组合进行如下方法利用盐析、有机溶剂进行的沉淀；通过亲和色谱法、离子交换柱色谱法、凝胶过滤等进行的纯化；通过透析、超滤等进行的浓缩。进一步，根据需要，可以固体化形成粉末状或颗粒状等任意形态。对于固体化的方法没有特别限定，可以举出例如通过喷雾干燥、冷冻干燥等常规方法对上述的提取物进行粉末化的方法，或将提取物吸附、负载于赋形剂，固体化为粉末或颗粒状物质的方法等。这些操作是本领域技术人员公知的，可以根据相应的用途适当地选择使用。在水发生冰结晶化而产生阻害的各领域中，出于抑制该阻害的目的可以利用本发明涉及的冰结晶化抑制物质。例如，可以用于食品领域、机械领域、土木领域、化妆品领域、 使用生物体试样的医疗领域等。在食品领域中，通过抑制食品中所含有的水的冰结晶化，可以防止该食品味道的劣化等。例如，防止淀粉老化，或可以抑制如下现象食品中的水发生冰结晶化、物理地压迫蛋白质和油脂成分等，使其结构变化，由此导致味道和品质等的劣化。在机械领域和土木领域中，可以用作机械的可活动部、道路、地基等的防冻剂。在化妆品领域中，可以作为防止化妆品品质劣化等的添加剂、皮肤的保护剂使用。 例如，如果含油脂成分的化妆品被冷冻，该化妆品中所含有的水发生冰结晶化，可能会物理地压迫该油脂成分从而破坏其结构，导致品质和使用感觉的劣化。如果使用本发明涉及的
8冰结晶化抑制物质，通过防止水的冰结晶化可以保持油脂成分的结构，由此可以抑制品质的劣化等。在医疗领域中，可以作为冷冻保存生物体试样时的保护剂使用。例如，如果将细胞、血液、血小板、器官等组织等的生物体试样加入到以往公知的保存液中以冷冻保存，则保存液中的水分冻结产生冰结晶，该冰结晶可能会损伤生物体试样。但是，如果添加本发明涉及的冰结晶化抑制物质，则由于能够抑制冰结晶的产生、生长，由此可以保护生物体试样不受由冰结晶所导致的损害。本发明的冰结晶化抑制物质的形态根据其用途可以是多种多样的，可以是该物质本身、溶液、浓缩液、悬浮液、冷冻干燥物、粉末、颗粒、片剂等。接下来，对本发明涉及的提取物的活性测定法和蛋白质量的测定法进行说明。本发明的冰结晶化抑制物质的冰结晶化抑制活性的测定方法，可以根据植物的种类等适当地使用。例如，可以通过对冰结晶结构的观察、对冰结晶化抑制的直接测定等公知的方法来进行，按照任意方法确认冰结晶化抑制活性提高的情况，均包含在本发明的范围内。冰结晶化抑制活性的测定，可以按照下述方法进行例如，将含有30w/V%蔗糖的植物提取物溶液冷却至-40°C后，再升温至_6°C，测定通过显微镜观察的冰结晶的平均面积。由于冰结晶化抑制活性越强，则该冰结晶的平均面积变得越小，因此，以该数值作为指标，可以定量地评价植物提取物的冰结晶化抑制活性。与对照相比，只要添加有冰结晶化抑制物质时对冰结晶的形成稍有抑制即判定为具有冰结晶化抑制活性。对本发明的提取物的蛋白质含量的测定方法，并无特别限定，可以按照例如Lowry 法或二辛可宁酸(Bicinchoninic acid) (BCA)法、Bradford 法(Coomassie 法)等公知的方法进行。作为标准蛋白质，并无特别限定，优选使用例如牛血清白蛋白(BSA)。本发明涉及的冰结晶化抑制物质可以容易地从植物中获取。由此，本发明涉及的冰结晶化抑制物质对于生物体来说安全性非常高。此外，本发明涉及的冰结晶化抑制物质也容易纯化，在工业上可以极其简便地制造。另外，通过向食品中添加本发明的冰结晶化抑制物质，可以起到保持冷冻食品的品质的作用。此外，本发明的冰结晶化抑制物质，还可以有效地用作器官、细胞、血液、血小板等生物体试样在冷冻保存中的生物体试样保护剂或化妆品(皮肤保护剂)等。以下通过实施例，对本发明的实施方式做以更加详细的说明。当然，本发明并不限定于下述实施例，详细内容可以有各种不同的形态。进一步地，本发明并不限定于上述的实施方式，可以在权利要求中所示范围内有各种不同的变更，将各种公开的技术手段进行适宜组合得到的实施方式也包含在本发明的范围内。此外，本说明书中所记载的所有的专利文献和非专利文献，可以援引在本说明书中作为参考。实施例以下通过实施例，对本发明的实施方式做以更加详细的说明。当然，本发明并不限定于下述实施例，详细内容可以有各种不同的方式。进一步地，本发明并不限定于上述的实施方式，可以在权利要求中所示范围内有各种不同的变更，将各种公开的技术手段进行适宜组合得到的实施方式也包含在本发明的范围内。此外，本说明书中所记载的所有的专利文献和非专利文献，可以援引在本说明书中作为参考。需要说明的是，实施例及比较例中的份及％如无特别规定则是以重量为基准的。
实施例1将市售的芥菜芽(湿重500g，村上农园制造)在15°C冷却10天，驯化诱导冰结晶化抑制蛋白质。然后，加入IOOOg的去离子水，于105°C提取20分钟。通过减压过滤分离提取液，然后，利用蒸发器(Rotary Evaporator ；EYELA公司制造)将其浓缩，从而得到提取液(l!35mL)。实施例2向实施例1中得到的提取液(50mL，蛋白质含量400mg)中加入活性炭(500mg)， 以150rpm振荡30分钟。然后，以10000X g离心分离30分钟，由此除去活性炭，回收溶液 (45mL)。实施例3利用超滤膜(Amicon Ultra-15, MILLIP0RE公司制造)将实施例2得到的溶液浓缩。除去分子量IOkDa以下的蛋白质，在液体量达到IOmL时终止超滤处理，得到滤液 (35mL)。另外，利用去离子水(6mL)清洗过滤膜，回收浓缩液(16mL)。实施例4测定实施例1 3的各溶液的蛋白质浓度和冰结晶化抑制活性。通过BCA法测定蛋白质的浓度。按照以下方法测定冰结晶化抑制活性。将实施例1 3的各溶液，与60w/V%的蔗糖溶液以1 l(v/v)的比例混合。使用盖玻片将该混合物(IyL)夹住。将具备加热冷却载物台(LINKAM公司制造，LK 600PM)的光学显微镜(OLYMPUS公司制造，B)(50)的玻璃盘保持在20°C，将上述盖玻片放置在上面，以100°C /min的速度冷却至_40°C。然后，以100°C / min的速度升温至_6°C。以升温至_6°C时作为0分钟，然后，将光学显微镜保持其原状态， 拍摄其30分钟后的图像。此外，作为对照，对30w/V%的蔗糖溶液进行了同样地测定。计算在所得图像中存在的冰结晶的平均面积，并以此作为冰结晶化抑制活性的指标。其结果如表1所示。表1中，冰结晶的平均面积越小表示冰结晶化抑制活性越强。[表 1]
权利要求
1.一种冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。
2.根据权利要求1所述的冰结晶化抑制物质，其是由多个亚基构成的物质。
3.根据权利要求2所述的冰结晶化抑制物质，其中，通过SDS-PAGE测定，其至少1个亚基的分子量为 34000 士 500Da 或 71000 士 lOOODa。
4.根据权利要求1 3中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其中，所述植物是选自属于十字花科、伞形科、百合科及菊科植物中的1种以上的植物，或它们的类似品种或改良品种。
5.根据权利要求4所述的冰结晶化抑制物质，其中，属于十字花科的植物是选自白菜、 萝卜、西兰花、青菜、油菜、芜菁、大阪白菜、野泽菜、广岛菜、水菜、及芥菜中的1种以上的植物，或它们的类似品种或改良品种。
6.根据权利要求5所述的冰结晶化抑制物质，其中，属于十字花科的植物是Brassica jimcea种的芥菜，或它的类似品种或改良品种。
7.根据权利要求1 6中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其是在pH8时吸附于阴离子交换柱的物质。
8.根据权利要求7所述的冰结晶化抑制物质，其中，阴离子交换柱是DEAE柱。
9.根据权利要求7所述的冰结晶化抑制物质，其中，阴离子交换柱是Q柱。
10.根据权利要求1 9中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其是在pH6时未吸附于阳离子交换柱的物质。
11.根据权利要求10所述的冰结晶化抑制物质，其中，阳离子交换柱是SP柱。
12.根据权利要求1 11中任一项所述的冰结晶化抑制物质，其是在pH7.4时未吸附于糖结合蛋白质的物质。
13.根据权利要求12所述的冰结晶化抑制物质，其中，糖结合蛋白质是ConA。
14.权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质的制造方法，其特征在于，包括使用截留分子量为5000以上的分离膜，从植物分离冰结晶化抑制物质的工序。
15.根据权利要求14所述的制造方法，其中，通过超滤或反渗透进行分离。
16.一种多肽，其特征在于，所述多肽是权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质的一部分，并且具有冰结晶化抑制活性。
17.根据权利要求16所述的多肽，其通过SDS-PAGE测定的分子量为34000士500Da或 71000士lOOODa。
18.—种冰结晶化抑制组合物，其特征在于，包含权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质，和/或权利要求16 17中任一项所述的多肽。
19.一种食品，其特征在于，包含权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质，和/或权利要求16 17中任一项所述的多肽。
20.一种生物体试样保护剂，其特征在于，包含权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质，和/或权利要求16 17中任一项所述的多肽。
21. 一种化妆品，其特征在于，包含 权利要求1 13中任一项所述的冰结晶化抑制物质，和/或权利要求16 17中任一项所述的多肽。
全文摘要
本发明的目的在于提供一种冰结晶化抑制物质，其具有能够实用的优异的冰结晶化抑制活性，能够通过可用于食品制造的安全工序，简单、高效、廉价地制造。此外，本发明的目的在于提供一种该冰结晶化抑制物质的制造方法、作为该冰结晶化抑制物质活性部分的多肽、以及包含该冰结晶化抑制物质或多肽的冰结晶化抑制组合物、食品、生物体试样保护剂及化妆品。本发明涉及的冰结晶化抑制物质，其特征在于，其来源于植物，并且，通过凝胶过滤色谱法测定的分子量为400kDa以上。
文档编号A23L1/03GK102459319SQ20108002562
公开日2012年5月16日 申请日期2010年5月27日 优先权日2009年6月9日
发明者友野润, 横田真一, 毛笠秀昭, 河原秀久, 荒井直树 申请人:株式会社钟化