专利名称：果糖基肽基氧化酶和用于测定糖化蛋白质的传感器的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的果糖基肽基氧化酶(FPOX)。更具体地，本发明涉及在用于测量糖化蛋白质(glycated proteins)，例如糖化白蛋白、果糖胺、HbAlc、果糖基六肽、果糖基缬氨酸和果糖基缬氨酰组氨酸的试剂盒和传感器中使用的果糖基肽基氧化酶。
背景技术：
糖化的蛋白质通过蛋白质上的氨基和糖的还原端之间的共价键非酶促地产生，并又被称作Amadori化合物。在血液中，葡萄糖在血红蛋白β链的N端结合缬氨酸，从而产生糖化的血红蛋白(糖化血红蛋白(glycohemoglobin^HbAlc)。与正常的健康个体相比，在患有糖尿病的患者中HbAlc与血红蛋白(Hb)的丰度比值较高，且已知血液中的HbAlc浓度反映了在过去几周内的血糖水平。因此血液中的HbAlc浓度在诊断糖尿病的临床检测和在患有糖尿病的患者的血糖控制中非常重要。可使用对果糖基缬氨酸具有特异性的酶测量血液中的HbAlc浓度。果糖基氨基酸氧化酶是FAD依赖性酶，其催化下述反应，其中果糖基氨基酸被氧化，从而生成2-酮基-D-葡萄糖和相应的氨基酸。已经从多种生物中分离出果糖基氨基酸氧化酶，且已表明可使用这样的酶分析糖化蛋白质，例如糖化白蛋白、HbAlc和果糖胺。为了以高特异性测定HbAlc，果糖基氨基酸氧化酶优选地具有对果糖基缬氨酸的选择性(相比果糖基赖氨酸)。更优选地，果糖基氨基酸氧化酶可具有对果糖基缬氨酰组氨酸的氧化酶活性，果糖基缬氨酰组氨酸对应于Hb的N端的2个氨基酸。Hirokawa等人 (Biochem Biophys Res Commun, 311(1)，2003，104-111)公开了来源于 Achaetomiella 和Chaetomius属的丝状细菌的果糖基肽基氧化酶。本发明的目的是提供用于测量糖化蛋白质的新的果糖基肽基氧化酶。
发明内容
本发明是基于具有图1所示的氨基酸序列(SEQ ID NO: 1)的来源于小麦颖枯病菌 (.Phaeosphaeria floi/ory )的果糖基肽基氧化酶的发现。在一个方面，本发明提供了包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并对果糖基缬氨酰组氨酸具有ImM或更低的Km值的果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途。 本发明还提供了包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并对果糖基缬氨酰组氨酸具有10U/mg · mM或更高的Vmax/Km值的果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途。本发明还提供了包含与SEQ ID N0:1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并且当在50°C热处理10分钟时具有50%或更高的残留活性的果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途。在另一个方面，本发明提供了测定样品中的糖化蛋白质的方法，其包括使样品接触如上定义的果糖基肽基氧化酶，并测量被果糖基肽基氧化酶氧化的糖化蛋白质的量。在还另一个方面，本发明提供了测定HbAlc的方法，其包括消化样品中的HbAlc以产生果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸，使果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸接触如上定义的果糖基肽基氧化酶，并测量被氧化的果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸的量。在还另一个方面，本发明提供了测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、 果糖基六肽或HbAlc的装置，其包含如上定义的果糖基肽基氧化酶和电子转移介质。优选地，电子转移介质是N，N-双羟乙基-4-亚硝基苯胺。也优选地，所述装置还包含一种或多种选自皂苷、胆红素氧化酶和蛋白酶N的试剂。在另一个方面，本发明提供了测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlC的试剂盒，其包含如上定义的果糖基肽基氧化酶和电子转移介质。在还另一个方面，本发明提供了酶电极，其具有固定在电极上的如上定义的果糖基肽基氧化酶。优选地，使用可光交联的聚乙烯醇树脂将果糖基肽基氧化酶固定在电极上。在还另一个方面，本发明提供了测定果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的酶传感器，其包含本发明的酶电极作为工作电极。
图1显示了来自小麦颖枯病菌的果糖基肽基氧化酶的氨基酸序列。图2显示了果糖基肽基氧化酶的纯化步骤。图3显示了纯化的果糖基肽基氧化酶的SV曲线。图4显示了果糖基肽基氧化酶的热稳定性。图5显示了在m-PMS/DCIP系统中使用果糖基肽基氧化酶测量果糖基缬氨酸。图6显示了使用果糖基肽基氧化酶测量果糖基六肽。图7显示了使用果糖基肽基氧化酶测量HbAlc。图8显示了在H2A系统中使用具有果糖基肽基氧化酶的电极测量果糖基缬氨酸。图9显示了在普鲁士蓝系统中使用具有果糖基肽基氧化酶的电极测量果糖基缬氨酸。图10显示了在亚硝基苯胺(NA)系统中使用具有果糖基肽基氧化酶的电极测量果糖基缬氨酸。图11显示了在m-PMS系统中使用具有果糖基肽基氧化酶的电极测量果糖基缬氨酸。
具体实施例方式本发明的果糖基肽基氧化酶(PnFPOX)来源于小麦颖枯病菌，并具有图1中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO: I).在本发明中也可使用具有与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列至少80%序列同一性的修饰的氨基酸序列的果糖基肽基氧化酶变体。优选地，序列同一性为至少85%，更优选地至少90%，和最优选地至少95%。小麦颖枯病菌的基因组序列已被公开，但此基因还没有被注释。没有迹象或暗示显示小麦颖枯病菌具有果糖基肽基氧化酶或此基因可能编码任意种类的酶。PnFPOX 的氨基酸序列显示了与 FP0X-E (土正青霉(Eupenicillum terrenum)ATCC 18547; GenBank: BAD00185. 1)的 71% 的同一性和与FP0X-C (锥毛壳属物种(Coniochaeta sp. )NISL 9330; GenBank: BAD00186. 1)的74%的同一性。与其他已知果糖基氨基酸氧化酶的序列同源性为约30%。如在下面的实施例中所描述地，PnFPOX显示了对果糖基缬氨酸的更高的活性(相比对果糖基赖氨酸)。其也显示了对果糖基缬氨酰组氨酸的甚至更高的活性。PnFPOX对果糖基缬氨酰组氨酸的Km值是ImM或更低，优选地0. 5mM或更低，和更优选地0. 3mM或更低， 这比FPOX-E和FPOX-C的低约10倍。PnFPOX对果糖基缬氨酰组氨酸的Vmax/Km值是IOU/ mg · mM或更高。此特征在使用此酶以更高的灵敏度和特异性测定HbAlc中特别有利。本发明的果糖基肽基氧化酶的另一个有利特征是其热稳定性。当在10 mM PPB (pH 7.0)中在50°C热处理PnFPOXlO分钟时，观察到约75%的残留活性。可使用本领域熟知的技术通过重组表达制备本发明的果糖基肽基氧化酶。PnFPOX 的核酸序列可见GenBank: ΧΡ_001798711. 1。可适当地修饰或设计序列，从而在选定的宿主生物中获得更好的表达水平。编码PnFPOX的多核苷酸可从小麦颖枯病菌中克隆，或使用一系列化学合成的寡核苷酸通过PCR制备，或使用自动化DNA合成仪完全合成。将编码PnFPOX的基因插入合适的表达载体，并将载体引入合适的宿主细胞，例如大肠杆菌。培养转化体，并从细胞或培养基中收集在转化体中表达的果糖基肽基氧化酶。这样得到的重组果糖基肽基氧化酶可通过本领域已知的任意纯化技术纯化，所述技术包括离子交换柱层析、亲和层析、液体层析、过滤、超滤、盐沉淀、溶剂沉淀、免疫沉淀、 凝胶电泳、等电电泳和透析。本发明的果糖基肽基氧化酶在测定样品中的糖化蛋白质中有用。测定方法包括使样品接触本发明的果糖基肽基氧化酶，并测量被果糖基肽基氧化酶氧化的糖化蛋白质的量。通过本发明测定的糖化蛋白质包括，例如，果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽、HbAlc、糖化白蛋白和果糖胺。在一个方面，本发明提供了测定HbAlc的方法，其包括消化样品中的HbAlc以产生果糖基缬氨酸，使果糖基缬氨酸接触本发明的果糖基肽基氧化酶，并测量被氧化的果糖基缬氨酸的量。可用蛋白酶(proteinase)(例如蛋白酶(protease) 和蛋白酶N)消化HbAlc。在优选的实施方案中，所述方法包括用蛋白酶N消化样品中的 HbAlc以产生果糖基缬氨酰组氨酸，使果糖基缬氨酰组氨酸接触本发明的果糖基肽基氧化酶，并测量被氧化的果糖基缬氨酰组氨酸的量。在另一个方面，本发明提供了通过内切蛋白酶(endoprotease) Glu-C消化HbAlc以产生果糖基六肽，并通过本发明的果糖基肽基氧化酶测定果糖基六肽来测定HbAlc的方法。现在令人惊讶地发现，来自小麦颖枯病菌的果糖基氨基酸氧化酶能够氧化果糖基六肽，而现有技术的FPOX-C (锥毛壳属物种MSL 9330 ； GenBank: BADOO186. 1)不能。可通过本领域已知的任意方法，例如使用H2A检测试剂如4AA/T0DB/P0D (4_氨基安替比林/N，N -双磺丁基)-3-甲基苯胺二钠盐/辣根过氧化物酶)或通过钼电极测量产生的H2A的量来实现被果糖基肽基氧化酶氧化的糖化蛋白质的量的测量。可选地，可在电子介质的存在下进行测定，并使用例如mPMS/DCIP (1-甲氧基-5-甲基吩嗪 甲基硫酸化物/2，6-二氯靛酚)，cPES (三氟乙酸-1-(3-羧基-丙氧基)-5-乙基-吩嗪 H，NA BM31_1144 (N，N-双(羟乙基)-3-甲氧基-亚硝基苯胺盐酸化物，NA BM31_1008 (N, N- 二羟乙基-4-亚硝基苯胺)和N-N-4- 二甲基-亚硝基苯胺测量转移至介质的电子的量。其中，特别优选NA_BM31_1008。在另一个方面，本发明提供了测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的装置，其包含本发明的果糖基肽基氧化酶。测定装置可具有与常规的、市售的用于监控血糖水平的测量电流的生物传感器检测条类似的结构。这样的装置的实例具有放置在绝缘基质上的2个电极(工作电极和参考电极或对电极)、试剂端口和样品接收器。试剂端口包含本发明的果糖基肽基氧化酶、FAD 和电子转移介质。当向样品接收器中加入例如血样的样品时，样品中包含的果糖胺将与果糖基肽基氧化酶反应从而产生电流，其指示样品中果糖胺的量。当使用全血作为样品时， 装置还可包含用于溶血的试剂。特别优选的溶血试剂是皂苷。在另一个优选的实施方案中，装置还可包含胆红素氧化酶(BOD)以减少由全血样品中包含的还原性成分导致的传感器的背景电流。在另一个优选的实施方案中，装置还可包含蛋白酶N以实现果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸从血液中存在的糖化白蛋白中的释放。皂苷、BOD和蛋白酶N可被单独地固定在装置上，使得全血样品与皂苷接触以实现溶血，然后与BOD和蛋白酶N接触。适于测定酶底物的电化学传感器的一般实例是已知的，例如来自WO 2004/113900和US 5，997，817。作为电化学传感器的替代选择，可使用光学检测技术。一般地，这样的光学装置是基于包含酶、电子转移介质和指示剂的试剂系统中发生的颜色变化。可使用荧光、吸收或减轻(remission)的测量定量颜色变化。适于测定酶底物的光学装置的一般实例是已知的，例如来自 US 7,008,799，US 6, 036, 919,和 US 5，334，508。在还另一个方面，本发明提供了用于测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的试剂盒，其包含本发明的果糖基肽基氧化酶。可使用本发明的果糖基肽基氧化酶构建用于测量果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸或果糖基六肽的试剂盒。除了本发明的果糖基肽基氧化酶以外，试剂盒可包含测量所必需的缓冲液，合适的介质，用于制作校准曲线的果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸或果糖基六肽或其衍生物的标准品，和使用说明书。试剂盒也可包含内切蛋白酶Glu-C，用于消化HbAlc以产生果糖基六肽。可以多种形式提供本发明的果糖基肽基氧化酶，例如作为冻干试剂或作为在合适的储存溶液中的溶液。也有可能使用本发明的果糖基肽基氧化酶构建果糖胺、糖化白蛋白或HbAlc测定试剂盒。酶促或化学消化果糖胺、糖化白蛋白或HbAlc，从而产生果糖胺化合物例如糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸，其然后通过使用本发明的果糖基肽基氧化酶被定量。因此， 用于果糖胺、糖化白蛋白或HbAlc的本发明的测定试剂盒可还包含用于水解的试剂或蛋白酶。优选的蛋白酶是蛋白酶N，其将消化HbAlc以产生果糖基缬氨酰组氨酸。在另一个方面，本发明提供了具有固定在电极上的本发明的果糖基肽基氧化酶的酶电极。在优选的实施方案中，使用聚合物将本发明的果糖基氨基酸氧化酶固定在电极上，以避免BOD和蛋白酶N与果糖基氨基酸氧化酶和介质接触。否则，BOD将干扰介质的氧化还原性能，且蛋白酶N将降解果糖基氨基酸氧化酶。优选的聚合物是可光交联的聚乙烯醇树脂，例如由Toyo Gosei有限公司(Chibii，Japan)提供的具有叠氮化物单元侧基的 (azide-unit pendant)水溶性光聚合物(AWP)。为了构建酶电极，向电极表面应用包含AWP、 果糖基氨基酸氧化酶和介质如NA_BM31_1008的缓冲溶液。在干燥溶液后，辐射紫外光以实现聚合物的交联。在另一个方面，本发明提供了用于测定果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的酶传感器，其包含本发明的酶电极作为工作电极。
可通过测量通过酶反应产生的电子的量测定样品中果糖胺的浓度。本发明的果糖基肽基氧化酶被固定在电极，例如碳电极、金属电极和钼电极上。可通过交联、封装进大分子基质、用透析膜覆盖、光交联聚合物、导电聚合物、氧化还原聚合物或本领域技术人员熟知的其它方法和任意其组合固定酶。当在测量电流的系统中进行测量时，使用具有固定的PnFPOX的碳电极、金电极或钼电极作为工作电极，同时使用对电极(例如钼电极)和参考电极(例如Ag/AgCl电极)。将电极插入包含介质的缓冲液并维持在预定的温度下。对工作电极应用预定的电压，然后加入样品并测量电流的增加值。在测定中使用的介质的实例包括铁氰化钾、二茂铁、锇衍生物、钌衍生物、吩嗪甲基硫酸化物等等。一般也可能使用所谓的双电极系统，其具有一个工作电极和一个对电极或假参考电极。为了制造用于测量果糖胺、糖化白蛋白或HbAlc的传感器，将上述用于测量果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸的传感器进一步与包含固定的蛋白酶(如蛋白酶N或蛋白酶，优选蛋白酶N)的膜组合，以构建复合传感器。这样的通过组合多种酶基于连续反应的复合传感器的结构是本领域熟知的。见，例如Anthony P. F. Tuner, Isao Karube和George S. Wilson 的“Biosensor - Fundamental 禾口 Applications，，，Oxford University Press, 1987。在本说明书中引用的所有专利和参考文件内容以其整体引入本文作为参考。 实施例通过下面的实施例将详细说明本发明，尽管本发明不应受限于这些实施例。实施例1
小麦颖枯病菌果糖基肽基氧化酶的制备
在公开数据库中的小麦颖枯病菌的基因组信息中发现PnFPOX的核苷酸序列 (GenBank: XP_001798711. 1)。由于推定的ORF包含大肠杆菌中的一些稀有密码子，因此优化了基因的密码子使用以在大肠杆菌中表达基因。在此优化后，在序列中不存在显著的稀有密码子。将合成的基因亚克隆进表达载体pET28a以构建pEPN (pET28a-PnFP0X)。在50 ml补充50 μ g/ml卡那霉素的LB培养基中在37°C培养用PnFAOD表达载体(pEPN)转化的大肠杆菌BL21 (DE3)细胞，并在0D660nm = 0.8时加入IPTG (终浓度0. 4 mM)。在25°C继续培养，直到0D660nm达到约3。通过离心(5，000xg, 4°C，10分钟)收集细胞，洗涤(0.85% NaCl 溶液，6，000xg，4°C , 5 分钟)，在:3ml 10 mM PPB (pH 7.0)中悬浮，并通过超声波均质器均质。将得到的悬浮液离心(10，OOOxg，4°C , 20分钟)，并进一步离心上清(60，000 rpm, 4°C，60分钟)。将上清针对添加25 μ M FAD的IOmM PPB (ρΗ7. 0)透析以得到水溶性级分。在SDS-PAGE分析中，水溶性级分显示了约48_50kDa的条带，这与PnFPOX的预测分子量一致。使用P0D/T0DB/4A. A.法用3种底物果糖基缬氨酸(FV)、果糖基赖氨酸(ΠΟ和果糖基缬氨酰组氨酸(FVH)检查水溶性级分的氧化酶活性。果糖基肽基氧化酶不仅显示了对果糖基氨基酸(FV、HO的氧化活性，而且显示了对果糖基二肽(FVH)的氧化活性。实施例2
小麦颖枯病菌果糖基肽基氧化酶的纯化和表征在图2中总结了纯化步骤。在含有50 yg/ml卡那霉素的LB培养基(7L)中在37 V 有氧培养用pEPN (pET28a-PnFP0X)转化的大肠杆菌BL21 (DE3)。在达到1. 4的A660nm 值后，用0. 3 mM IPTG诱导细胞，并在25 °C继续培养，直到达到3. 0的A660nm值。通过离心收获细胞，并将1/4的收获细胞(约10. 5g)在10 mM PPB, pH 7.0中重悬，并通过2个通道穿过弗氏压碎器(1，000 kg cm-2)裂解。以10，OOOg在4 °C离心裂解液20分钟，并以 40, 000 rpm在4 ！离心上清90分钟。然后将上清对含有25 μ M FAD的10 mM PPB, pH 8.0透析。向透析的上清中加入硫酸铵至35%饱和，然后通过以15，OOOg离心20分钟沉淀形成的沉淀物。向上清中加入硫酸铵至95%饱和，以15，OOOg离心20分钟。在含有25 μ M FAD和1%甘露糖的IOmM PPB, pH 8. 0中溶解得到的沉淀物，并在4 °C对相同的缓冲液透析,并且之后对含有25 μ M FAD的10 mM PPB, pH 8. 0透析。对用10 mM PPB, pH 8. 0平衡的RESOURCE Q柱(GE Healthcare)应用透析的酶溶液。收集活性流通(flow-through) 级分，并用1 M NaCl洗脱显示无FAOD活性的吸附的蛋白质。收集活性流通级分，并对10 mM PPB, pH 7. 0 透析。对用10 mM PPB, pH 7. 0 平衡的 HiLoad 16/60 Superdex 75 pg 柱(GE Healthcare)应用透析的酶溶液。用相同的缓冲液进行凝胶过滤层析。收集活性级分，并将纯化的酶溶液对含有100 μ M FAD的10 mM PPB, pH 7.0透析，并储存在4 °C。通过 SDS-PAGE验证纯化的酶的纯度，并使用DC蛋白质测定试剂盒(Bio-Rad，CA, USA)测量蛋白质浓度。如在表1中总结的，通过硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，从大肠杆菌BL21(DE3)/pEPN(pET28a-PnFP0X)的细胞提取物中纯化了 35倍的PnFPOX。纯化的制品在SDS-PAGE上显示了接近单个条带。 表1重组PnFPOX的纯化
权利要求
1.果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途，所述果糖基肽基氧化酶包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并对果糖基缬氨酰组氨酸具有ImM或更低的Km值。
2.果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途，所述果糖基肽基氧化酶包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并对果糖基缬氨酰组氨酸具有10U/mg · mM或更高的Vmax/Km值。
3.果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途，所述果糖基肽基氧化酶包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少70%同一性的氨基酸序列并且当在50°C 热处理10分钟时具有50%或更高的残留活性。
4.一种用于测定样品中的糖化蛋白质的方法，其包括使所述样品接触如在权利要求 1-3的任一项中定义的果糖基肽基氧化酶，并测量被所述果糖基肽基氧化酶氧化的糖化蛋白质的量。
5.一种用于测定HbAlc的方法，其包括消化样品中的HbAlc以产生果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸，使所述果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸接触如在权利要求1-3的任一项中定义的果糖基肽基氧化酶，并测量被氧化的果糖基缬氨酸或果糖基缬氨酰组氨酸的量。
6.一种用于测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的装置，其包含如在权利要求1-3的任一项中定义的果糖基肽基氧化酶和电子转移介质。
7.如权利要求6中要求保护的装置，其中所述电子转移介质是N，N-双羟乙基-4-亚硝基苯胺。
8.如权利要求6或7中要求保护的装置，其还包含一种或多种选自皂苷、胆红素氧化酶和蛋白酶N的试剂。
9.一种用于测定样品中果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的试剂盒，其包含如在权利要求1-3的任一项中定义的果糖基肽基氧化酶和电子转移介质。
10.如权利要求9中要求保护的试剂盒，其中所述电子转移介质是N，N-双羟乙基-4-亚硝基苯胺。
11.如权利要求10或11中要求保护的试剂盒，其还包含一种或多种选自皂苷、胆红素氧化酶和蛋白酶N的试剂。
12.一种酶电极，其具有固定在电极上的如在权利要求1-3的任一项中定义的果糖基肽基氧化酶。
13.如权利要求12中要求保护的酶电极，其中使用具有叠氮化物单元侧基的水溶性光聚合物(AWP)将果糖基肽基氧化酶固定在电极上。
14.如权利要求12或13中要求保护的酶电极，其还包含固定在电极上的N，N-双羟乙基-4-亚硝基苯胺。
15.一种用于测定果糖基缬氨酸、果糖基缬氨酰组氨酸、果糖基六肽或HbAlc的酶传感器，其包含权利要求12-14中任一项的酶电极作为工作电极。
全文摘要
公开了来源于芽殖酵母小麦颖枯病菌(Phaeosphaerianodorum)的果糖基肽基氧化酶用于测定样品中的糖化蛋白质的用途。本发明的果糖基肽基氧化酶具有对果糖基缬氨酸以及果糖基缬氨酰组氨酸的较高的活性，并以较高的灵敏度和特异性用于测定HbA1c。还公开了包含这种酶的电极传感器。
文档编号C12Q1/26GK102575278SQ201080033796
公开日2012年7月11日 申请日期2010年8月2日 优先权日2009年8月3日
发明者K.伊克布库罗, K.索德 申请人:究极酵素国际股份有限公司, 霍夫曼-拉罗奇有限公司