专利名称：Carba-nad的酶促合成的制作方法
技术领域：
本发明涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD/NADH和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸 NADP/NADPH的稳定类似物、即所谓“carta-NAD”，如分别包含代替核糖的碳环糖的NAD/ NADH或NADP/NADPH的类似物的酶促合成。
背景技术：
用于生化分析的测量系统是临床相关分析方法的重要组成部分。其首先涉及分析物、例如借助酶而直接或间接地测定的代谢物或底物的测量。目标分析物常常借助酶-辅酶复合物进行转化，随后经由该酶促反应来定量。在该过程中，在合适反应条件下待测定的分析物与适合的酶以及辅酶接触，由此辅酶发生改变，例如通过酶促反应而被氧化或被还原。该过程可直接地或借助中介物而以电化学法或光度法来测定。通常，标准曲线提供测量值与目标分析物浓度之间的直接相关，由此可测定分析物浓度。辅酶是共价或非共价地与酶结合的有机分子，并且通过分析物的转化而发生变化。辅酶的突出实例是可通过还原分别形成NADH和NADPH的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 以及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)。如US 2008/0213809中所描述，常规测量系统的缺陷，如有限的贮藏期限，对贮藏条件如冷却或干燥贮存的特殊要求以实现改良的贮藏寿命，可以通过本文公开的稳定的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD/NADH)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP/NADPH)衍生物而在至少很大程度上克服。这些稳定的NAD(P)H类似物适于消除由于不恰当、疏忽、不良的贮藏所引起的错误结果，所述储藏在例如由最终用户自己进行的测试如葡萄糖自我监测中是特别重要的。如US 2008/0213809中所描述，carba-NAD的化学合成极其有挑战性，需要至少8 个合成步骤，具有相当低的产率，因此相当昂贵。附
图1描述了合成carta-NAD的化学路线。 急需可替代的合成路线。因此，本发明的目的在于以较少繁琐的方式，以高产率和有吸引力的低成本提供目前意外地发现，可以利用酶替代传统化学方式而以节省成本和便利的方式来提 carba-NAD ο
发明内容
本发明涉及酶促合成carta-NAD或其类似物的方法，该方法包括以下步骤a)借助NRK酶将3-氨基甲酰基-1- (2，3- 二羟基-4-羟甲基-环戊基)-吡啶鐺-甲磺酸盐或其类似物磷酸化，b)借助NMN-AT酶，用腺苷或结构相关的化合物将步骤(a)的磷酸化产物腺苷酸化，由此获得carta-NAD或其类似物。
具体实施例方式
3
优选实施方式中，本发明涉及合成carba-NAD或其类似物的方法，该方法包括以下步骤a)借助烟酰胺核糖激酶(NRK)酶，将式I的化合物磷酸化，
权利要求
1.carba-NAD或其类似物的合成方法，所述方法包括以下步骤a)借助烟酰胺核糖激酶(NRK)酶，将式I的化合物磷酸化
2.如权利要求1所述方法，其中所述NRK酶选自已知的来自酿酒酵母、绿脓杆菌、血链球菌和人的NRK。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述NMN-AT选自由已知的来自枯草杆菌、大肠杆菌、詹氏甲烷球菌、硫磺矿硫化叶菌、酿酒酵母和人的NMN-AT构成的组。
4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中在所述式I化合物中的Rl选自由0Η、 NH2和O-甲基构成的组。
5.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述式II化合物中的R2为NH2或0Η。
6.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述式II化合物中的R3为H或0Η。
7.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其中所述式I化合物中的X为O。
8.根据上述权利要求任一项所述的方法，其中Rl为NH2,R2为NH2, R3为H，并且X为0。
全文摘要
本发明涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD/NADH和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸NADP/NADPH的稳定类似物，即所谓“carba-NAD”，如分别包含代替核糖的碳环糖(carbacyclic sugar)的NAD/NADH或NADP/NADPH的类似物的酶促合成。
文档编号C12P19/32GK102471793SQ201080033434
公开日2012年5月23日 申请日期2010年7月23日 优先权日2009年7月27日
发明者C·霍恩, D·海因德尔, H·迪费尔, R·施姆克, T·迈尔 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司