专利名称：一种从血清中提取微核糖核酸的方法
技术领域：
本发明属于一种从血清中提取微核糖核酸的方法。
背景技术：
miRNA (microRNA微核糖核酸)是一类内源性的单链非编码RNA (核糖核酸)，一般由21个核苷酸组成。2010年9月10日发布的Sanger miRNA数据库16. 0版中收录了来自142个物种的17341条成熟miRNA序列信息，其中包括人类细胞已克隆到的1048种 miRNA (http://www. mirbase. org)。作为微型调节分子，miRNA通过与mRNA (信使核糖核酸) 的3’-UTR特异性结合，抑制蛋白质翻译或直接导致mRNA降解，在转录后水平调控蛋白质的表达。生物信息学预测结果显示，在哺乳动物中50%左右的蛋白编码基因的翻译活性都会受到miRNA的调控。功能学研究显示，miRNA参与调控几乎所有细胞生命活动过程，并在人类多种病理条件下都会发生表达量的变化。2008年，在循环核酸的基础上，Chim在孕妇血浆中检测到了循环胎盘miRNA (微核糖核酸)，很快便提出了循环miRNA这一概念，旨在探索存在于体液(特别足血清/血浆) 中的miRNA作为生物标志物，以便为疾病分型和预后提供新的途径。近两年已经在心血管疾病、肿瘤、组织损伤等领域开展了一系列循环miRNA标志物的研究与开发。在进行该方面工作中面临的问题之一就是如何最大限度地从血清或血浆中提取获得miRNA用于检测。当前从体液中分离纯化微核糖核酸的技术主要有2种，即常规TRIzoI法和柱分离技术。常规TRIzoI法沿用到血清miRNA的提取，基本上是沿用mRNA的分离技术，未考虑 miRNA与mRNA在物理性质和存在方式上的差别。如miRNA在长度上远小于mRNA，此外miRNA 在细胞中主要以蛋白复合体的方式存在；常规TRIzol提取方法会造成血清miRNA的大量丢失。针对miRNA的分离柱提取方法可在一定程度上解决问题，但柱材料的吸附同样会造成 miRNA的损失，且分离柱法成本高，提取一个样本的价格一般为TRIzol法的10倍左右。
发明内容
本发明的目的是提供一种从血清中提取微核糖核酸的方法，具有方法简单实用， 能有效避免血清微核糖核酸在提取过程中的损失，提取成本低、速度快和提取率高的优点。为此，本发明的方法的步骤如下(1) 500 μ 1血浆或血清中加入500 μ 1 TRIzol，涡旋震荡器剧烈震荡30s，室温静置 5min ；(2)加100 μ 1异丙醇，颠倒混勻，涡旋震荡器剧烈震荡30s，至液体透明，室温静置 5min ；(3) 3000rpm 4°C离心lOmin，将上清液移至新的离心管中；(4)在该离心管的上清液中加500 μ 1氯仿，颠倒混勻，13000rpm 4°C离心IOmin,
再将上清液移至新的离心管中；(5)在该离心管中加入占其内上清液体积2. 5倍量的乙醇，颠倒混勻，室温静置
权利要求
1. 一种从血清中提取微核糖核酸的方法，其特征在于该方法的步骤如下(1)500μ 1血浆或血清中加入500 μ 1 TRIzol，涡旋震荡器剧烈震荡30s，室温静置 5min ；(2)加100μ 1异丙醇，颠倒混勻，涡旋震荡器剧烈震荡30s，至液体透明，室温静置 5min ；(3)3000rpm 4°C离心lOmin，将上清液移至新的离心管中；(4)在该离心管的上清液中加500μ 1氯仿，颠倒混勻，13000rpm 4°C离心lOmin，再将上清液移至新的离心管中；(5)在该离心管中加入占其内上清液体积2.5倍量的乙醇，颠倒混勻，室温静置 IOmin ；(6)13000rpm 4°C离心 lOmin，沉淀 RNA ；(7)吸净乙醇，干燥RNA;(8)30 μ 1 DEPC水溶解RNA，58°C水浴lOmin，得本发明提取物。
全文摘要
本发明提供一种从血清中提取微核糖核酸的方法，它的的方法是取500μl血浆或血清中加入500μl TRIzol，涡旋震荡器剧烈震荡30s，室温静置5min；加100μl异丙醇，颠倒混匀，涡旋震荡器剧烈震荡30s，至液体透明，室温静置5min；3000rpm 4℃离心10min，将上清液移至新的离心管中；在该离心管的上清液中加500μl氯仿，颠倒混匀，13000rpm 4℃离心10min，再将上清液移至新的离心管中；在该离心管中加入占其内上清液体积2.5倍量的乙醇，颠倒混匀，室温静置10min；13000rpm 4℃离心10min，沉淀RNA；吸净乙醇，干燥RNA；30μl DEPC水溶解RNA，58℃水浴10min，得本发明提取物。本发明方法简单实用，能有效避免血清微核糖核酸在提取过程中的损失，提取成本低、速度快和提取率高的优点。
文档编号C12N15/10GK102226175SQ201110109080
公开日2011年10月26日 申请日期2011年4月29日 优先权日2011年4月29日
发明者丛祥凤, 侯剑峰, 张洋, 聂宇, 陈曦, 顾海勇 申请人:中国医学科学院阜外心血管病医院