专利名称：新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，属于一种新的动物诊断试剂，主要用来鉴别诊断强毒株感染的家禽；应用于畜牧兽医学领域。
背景技术：
新城疫(Newcastle disease ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus NDV)引起的禽类一种急性高度接触性传染疾病，是影响养禽业最重要的病毒性传染病之一，其分布十分广泛，许多发达国家也时有发生。其发病率和死亡率较高，本病被国际兽疫局列为必报疫病名录之一。新城疫对我国养禽业的危害仍然很大，尽管我国目前已经普遍采取了以免疫预防为主的综合预防措施，但新城疫还没有从根本上得到控制。免疫鸡群仍然时有新城疫的发生，原因是多方面的，但与NDV的变异、强弱毒株的混合感染可能有很大关系，特别是近年来我国一方面非典型新城疫逐年增多，在外界环境因素的影响下不断的发生变异，给新城疫的诊断和预防带来了难度。研究表明，新城疫病毒基因组编码两种囊膜糖蛋白，即血凝素-神经氨酸酶蛋白 (HN蛋白)和融合蛋白(F蛋白);四种结构蛋白，即基质蛋白(M蛋白)、核衣壳蛋白(NP蛋白)、 磷蛋白(P蛋白)和大蛋白(L蛋白)，此外还编码两种非结构蛋白。F基因的序列已经被测定，其大小为1792bp，编码553个氨基酸。F蛋白前体H)经裂解产生Fl和F2两个片段后， 才使病毒具有感染性。新城疫病毒根据毒力的不同分为三种类型，即速发型、中发型和缓发型，对不同毒株F基因的序列分析表明，毒力不同的毒株F基因裂解位点区氨基酸的组成不同。因此，F基因裂解位点区的氨基酸组成是新城疫病毒致病力的分子基础。目前新城疫病毒强弱毒株的鉴定方法有MDT(最小致死量致死鸡胚平均死亡时间)、ICPI (I日龄雏鸡脑内接种致病指数)、IVPI (6周龄鸡静脉接种致病指数)、RT-PCR技术、蚀斑形成和ELISA。但是，MDT、ICPI、IVPI以及蚀斑形成鉴定NDV株的强弱试验检测效率低，耗时长，不适于大量样品的快速检测。RT-PCR方法是新兴的一种快速诊断方法，但是其受操作人员技术水平和现场条件的约束较多，不利于在现场进行大规模样品的检测。而 ELISA诊断方法虽然简便易学，但操作时间长并需要专门的检测设备。因此研制特异性强、 灵敏度高、检测准确的免疫胶体金快速诊断试纸条是新城疫检疫的当务之急。免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其利用免疫学抗原抗体能特异性结合原理，胶体金标记新城疫强毒株F蛋白串联多肽后与样品中特异性抗体结合，这种抗原抗体结合物再与SPA结合，形成抗原-抗体-SPA结合物在硝酸纤维素膜(NC膜)上出现颜色反应，可以肉眼观察；具有简单、快速、敏感和特异性好等特点。 并且价格低廉，适用于基层或临床鉴别诊断新城疫强弱毒株。本发明的技术方案是这样实现的一种鉴别新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在不吸水的支撑薄片上；其中结合垫上包被有胶体金标记的抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白；硝酸纤维素膜上分别包被有SPA构成的检测线T线和抗新城疫强毒株F蛋白串联多肽单克隆抗体构成的质控线C线。所述的结合垫上包被的胶体金标记的抗新城疫强毒株F蛋白串联多肽单克隆抗体1D8的制备方法如下
(I)新城疫病毒强毒株F蛋白裂解位点的串联及人工合成，将编码国内外目前普遍流行的新城疫强毒株F蛋白裂解位点区GRRQRRF、GRRQKRF多肽的氨基酸序列和编码国内外目前新发现的新城疫强毒株F蛋白裂解位点区RRRQKRF、GRRKKRF多肽的氨基酸序列以编码柔性氨基酸(_甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸_，即-G-G-G-G-S-)的氨基酸序列相互联结，人工合成Fp (F protein multitude peptide)四拷贝体4Fp和八拷贝体8Fp碱基。(2)通过连接、转化、酶切鉴定、原核表达制备碱基翻译成蛋白即抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白。(3)标记胶体金，制备金标抗原，用O. IM碳酸钾调胶体金的PH值至8. 2，按IOOug 抗体/毫升胶体金加入抗新城疫强毒株串联多肽8Fp，磁力搅拌器混匀30分钟，加BSA至终浓度为1%，静置I小时。4°C 13000rpm离心30分钟，弃上清，沉淀用标记洗涤保存液洗涤两次，用十分之一初始胶体金体积的洗涤保存液重悬沉淀，4°C备用。(4)将结合垫浸泡于封闭液即2% BSA、0. 5%吐温-20、2. 5%蔗糖、O. 05%叠氮钠、
O.OlM PBS中30分钟，37°C烘干；然后将制备好的金标抗原均匀喷涂于结合垫上，每毫升铺 20平方厘米，冻干、保存。(5)然后制备抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白单克隆抗体，利用免疫Balb/c小鼠、杂交瘤技术通过细胞融合、细胞克隆筛选建立的抗4Fp、8Fp杂交瘤细胞株 2E9、1D8，经ELISA方法检测，显示1D8效价高于2E9，因此选用多肽单克隆抗体1D8构成的质控线作为C线。所述的硝酸纤维素膜上的检测线T线是选用包被缓冲液稀释的SPA喷涂于检测线上，用包被缓冲液将SPA稀释到50-100ug/ml，调整机器划线为检测线T线，即为检测线靠近结合垫，距结合垫端约5mm。所述的抗新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联多肽单克隆抗体构成的质控线C线是选用包被缓冲液稀释的抗新城疫强毒株F蛋白裂解位点串联多肽单克隆抗体喷涂于检测线上，用包被缓冲液将抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白单克隆抗体稀释到 50-100ug/ml，调整机器划线为质控线C线，即为对照线靠近吸收垫，距吸收垫端约3mm ;两线距离5-8mm，在硝酸纤维素膜NC膜上的质控线上，可与金标抗体结合，以此检验试纸条的有效性。所述该纸条的检测方法是样品中新城疫病毒强毒株特异性F蛋白裂解位点特异性抗体先和胶体金标记的新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白结合，由于毛细管作用，反应复合物沿包被膜向前泳动，若样品中存在新城疫病毒强毒株F蛋白裂解位点特异性抗体，到达检测线时遇到包被在硝酸纤维素膜上的SPA，就会形成金标抗原-新城疫强毒株F裂解位点特异性抗体-SPA抗复合物，从而凝集在检测线上，形成特异性的红色沉淀线； 没有和新城疫强毒株F蛋白裂解位点特异性抗体结合的金标抗原则会直接通过检测线，富集在质控线上形成红色沉淀线，即判为阳性结果。若样品中无新城疫强毒，反应复合物到达检测线时遇到SPA就不会形成金标抗原-新城疫强毒F蛋白裂解位点特异性抗体-SPA复合物，反应复合物通过检测T线，富集在质控C线上，形成红色沉淀，即判为阴性结果。本发明的积极效果是
I、具有生物安全性，其所使用的金标抗原、SPA及抗新城疫强毒株F裂解位点单克隆抗体，不含活病毒，因此不存在散毒的危险。2、特异性强，胶体金试纸条金标抗原专门针对强毒株F蛋白裂解位点，SPA具有良好的结合抗体能力，质控线为敏感性和特异性较好的单克隆抗体，因此提高了检测的特异性和敏感性。3、生产成本低,金标抗原由大肠杆菌表达,易于大规模生产,抗新城疫强毒株F裂解位点串联多肽单克隆抗体可由相应的杂交瘤细胞株产生，便于规模化生产，二者通过辛酸-硫酸铵纯化而大量获得。4、其可快速检测即5-10分钟；不需特殊仪器设备，可用于现场操作；操作简单，一步完成，无需专业人员操作；检测成本低；储存方便。
图I本发明所涉及单抗的杂交瘤细胞株。图2本发明试纸条的结构模式图。图3本发明试纸条结果判定示意图。
具体实施例方式下面结合具体实例对本发明做详细说明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例I新城疫病毒强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白的原核表达 (O新城疫强毒株F蛋白裂解位点基因的串联
将编码国内外目前普遍流行的新城疫强毒株F蛋白裂解位点区GRRQRRF、GRRQKRF多肽的氨基酸序列和编码国内外目前新发现的新城疫强毒株F蛋白裂解位点区RRRQKRF、 GRRKKRF多肽的氨基酸序列以编码柔性氨基酸(_甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸-，即-G-G-G-G-S-)的氨基酸序列相互联结，设计多肽Fp (F protein multitude peptide)及其四倍体4Fp和八倍体8Fp。实施例2新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白的原核表达(I)目的基因4Fp和8Fp的克隆
基因片段在PMD-18T中的克隆将合成目的片段4Fp、8Fp，利用T-A原理，与pMD_18T 载体连接，转化DH5ci感受态大肠杆菌，涂布于氨苄青霉素的LB片板，12小时后挑取典型白色单菌落培养，提质粒DNA。通过XbaI和SpeI双酶切鉴定，命名为pMD_4Fp和pMD_8Fp ； pMD-4Fp和pMD-8Fp基因在pET_28a中的克隆原核表达载体pET_28a是上游带有His标签的高效表达载体，用XbaI和SpeI双酶切重组质粒pMD_4Fp和pMD_8Fp，分别插入片段4Fp (546bp)、8Fp (1086bp)，分别回收其中 546bp、1086bp，用 XbaI 和 SpeI 双酶切 pET_28a，与带有相同粘端的4Fp、8Fp基因连接，转化大肠杆菌BL21感受态菌，卡娜青霉素抗性筛选， 挑取单菌落少量培养基过夜培养，小提质粒DNA，通过限制性内切酶鉴定重组质粒，得到重组克隆命名为 pET-28a-4Fp 和 pET_28a_8Fp。(2)目的基因4Fp和8Fp的诱导表达
将含有重组质粒的新鲜大肠杆菌(BL-21)单菌落在LB培养基中37°C振荡培养过夜， 次日按I %体积比转接5ml新鲜培养基，37°C继续培养，当菌液0D600值达O. 6-0. 8时，加入无菌IPTG溶液，使其终浓度为lmmol/L。诱导3_4小时后停止培养，取Iml离心收集菌体，PBS (pH7. 4)洗涤，用50 μ I PBS悬浮菌体，与10 μ I 5 X SDS上样缓冲液混合，煮沸变性 5分钟。进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，分离胶的丙烯酰胺浓度为12%，将只含载体的大肠杆菌同样诱导做为阴性对照，O. 25%考马斯亮兰染色；经鉴定后，大量摇菌， 离心沉淀菌体，超声破碎后经电洗脱得到高纯度的重组蛋白，于_80°C保存备用。实施例3抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白的制备如图I所示；
I、动物免疫选择6-8周龄健康BALB/ C小鼠以弗氏完全佐剂乳化纯化的新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白免疫小鼠，每只小鼠腹腔注射50 μ g左右，14d后以弗氏不完全佐剂乳化新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白腹腔注射100μ g，最后一次加强免疫时，直接腹腔注射IOOyg纯重组蛋白，融合前3 4d尾静脉注射50 μ g纯重组蛋白。2、细胞融合尾静脉采血后，取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0混合于融合管内，以 300g离心10 min,弃去上清，振荡细胞，使两种细胞尽量混合均匀，然后45s内缓慢滴加预热的PEG溶液，再缓慢加入无血清的1640培养基终止融合，静置后再以I 000 r/ min离心10 min，弃去上清后加入HAT培养基，使细胞悬浮并混勻，加入适量饲养细胞， 于96孔培养板培养，第IOd换液并开始检测筛选。3、阳性杂交瘤细胞的筛选和克隆化阳性克隆的筛选采用间接ELISA试验。间接ELISA中，用合成多肽包被酶标板，并以骨髓瘤细胞上清作为阴性对照，融合前所采小鼠血清作为阳性对照进行平行筛选。对筛选的阳性杂交瘤细胞进行克隆，将检出的阳性孔再次克隆和亚克隆，直到所有的孔都为阳性，最后选择OD值高、细胞活力好、只有一株细胞的孔扩大培养，再建株、冻存。通过三次细胞克隆最终获得抗4Fp单抗2E9、ICl和抗8Fp单抗1D8、3D9杂交瘤细胞株。4、腹水的制备0.5 mL的高压灭菌的石蜡油注射到小鼠腹腔，7d后注入IO6个杂交瘤细胞于小鼠腹腔，7 10 d后，当小鼠腹部极度膨胀时抽取腹水，将收集好的腹水置 370C 24h，随后置4°C过夜，第二天将腹水离心，上清56°C灭活30 min即可。5、单克隆抗体的纯化用4倍体积醋酸缓冲液稀释腹水，调至pH4. 5，缓慢滴加3.3 %的正辛酸，搅拌30 min，离心取上清，加入1/10体积的10倍PBS，调至pH7. 4，4°C预冷后，用45 %饱和硫酸铵沉淀，离心后取沉淀，用PBS稀释后移入透析袋，在50倍体积PBS 中透析，透析期间多次换液，透析结束后，紫外分光光度计280 nm测定蛋白浓度并分装冻存。6单克隆抗体的特性鉴定
(I)腹水效价测定间接ELISA方法测定，细胞培养上清与腹水分别从10倍和100倍开始做梯度稀释，同时分别以SP2/0细胞培养上清和腹水做同等稀释度作为阴性对照。通过检测得知2E9、1C1、1D8、3D9四株单抗的腹水效价分别为4X 104、1X 104、1X 106、2X IO4。(2)单克隆抗体的Ig亚类鉴定按鼠mAb Ig亚类检测试剂盒的说明书进行。具体方法是将纯化的每株单克隆抗体1000倍稀释后包被酶标板，每孔100 μ L，37°C孵育I h， 洗涤后每孔加入I 000倍稀释的抗体亚类试剂100 μ L，37°C孵育I h，洗涤3遍。然后加入羊抗鼠IgG酶标二抗，37°C孵育I h，洗涤后加入底物显色，确定四株单克隆抗体的亚类分别为 IgG2a、IgM、IgGl、IgM。(3)杂交瘤细胞株染色体的分析采用秋水仙素法对杂交瘤细胞株进行染色体分析，结果显示2E9、1C1、1D8、3D9四株杂交瘤细胞的染色体数目分别为98条、95条、101条、 97条。(4)单克隆抗体特异性鉴定将所获单克隆抗体分别与将已知强毒株NA-1、 F48E9、青岛株、广州株；中强毒株四平株，昌黎株；NDV弱毒株CC株、V4株、LaSota株及FPV、IBDV、IBV, AIV阳性血清进行间接ELISA试验，检测所得四株单克隆抗体与NA-1、 F48E9、青岛株、广州株阳性血清呈强阳性反应，与四平株，昌黎株阳性血清呈阳性反应，但 OD值明显低于强毒株，与CC株、V4株、LaSota株及FPV、IBDV、IBV、AIV阳性血清均成阴性反应。实施例4胶体金、金标重组蛋白抗原的制备 I、胶体金的制备
用双蒸去离子水将1%氯金酸稀释为O. 01%，加热煮沸，按每100 ml O. 01%氯金酸加入
2ml 1%柠檬酸钠，继续煮沸，直到液体呈亮红色即停止加热，冷却至室温补足水分。制备好的胶体金外观应纯净、透亮、无沉淀和漂浮物。2、胶体金标记抗原的制备
用O. IM碳酸钾调胶体金的PH值至8. 2，按IOOug抗体/毫升胶体金加入新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白，磁力搅拌器混匀30分钟，加BSA至终浓度为1%，静置I小时。40C 13000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗漆保存液洗漆两次,用十分之一初始胶体金体积的洗涤保存液重悬沉淀，4°C备用。实施例5如图2所示胶体金试纸条的组装 I、样品垫I的制备
将样品垫I浸泡于封闭液(2% BSA、0. 5%吐温-20、2. 5%蔗糖、O. 05%叠氮钠、O. OlM PBS)中30分钟，37 °C烘干，封装。2、结合垫2的制备
将结合垫2浸泡于封闭液(2% BSA、0. 5%吐温-20、2. 5%蔗糖、O. 05%叠氮钠、O. OlM PBS) 中30分钟，37°C烘干。然后将制备好的金标抗体均匀铺在结合垫2上，每毫升铺20平方厘米，冻干、保存。3、硝酸纤维膜3的制备
用包被缓冲液将SPA稀释到50-100ug/ml，调整机器划线为T线6，即为检测线T线 6靠近结合垫2，距结合垫2端约5_ ;用包被缓冲液将抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点重组蛋白单抗1D8稀释到50-100ug/ml，调整机器划线为质控线C线7，即为对照线靠近吸收垫4，距吸收垫4端约3mm。两线距离5_8mm，线应细致均匀，37°C烘干，备用。4、试纸条的组装
将硝酸纤维膜3、吸收垫4、结合垫2 (玻璃纤维)、样品垫I、支撑薄片5按图依次黏贴起来，切成3. 6mm宽的小条，即为胶体金试纸条。封存备用。实施例6胶体金试纸条的应用
I、本发明试纸条的使用方法，如图3所示；
(I)样品制备临床采集待检动物的血清用于检测。(2)检测取出试纸条，室温平衡20分钟，打开包装取出试纸条，将样品垫I浸入待见样品中，取出，平放，静置10-15分钟，判定结果。(3)结果判定当时纸条出现肉眼可见的紫红色质控线C线7，没有出现肉眼可见的紫红色检测线T线6，判为阴性，记为“一”；当试纸条出现肉眼可见的紫红色质控线C线
7,同时出现肉眼可见的紫红色检测线T线6，判为阳性，记为“十”;检测线T线6颜色深度与待检抗原量成正比，颜色越深说明待检抗原滴度越高，检测线T线6浓厚与质控线颜色一致或接近时判为+ + + +，颜色介于+和+ + + +之间酌情判为+ +或+ + +。达到+及以上深度时，判为被检样品抗原为阳性。质控线C线7无条带则判为试纸条失效。2、试纸条的敏感性试验
将已知强毒株NA-1、F48E9、青岛株、广州株；中强毒株四平株，昌黎株阳性阳性血清分别稀释成HI效价为2^21°的各5份，用试纸条进行检测，结果当HI效价为22以下时试纸条检测强毒株为阴性，HI效价为23及以上时试纸条检测为强毒株阳性；当HI效价为23以下时试纸条检测中强毒株为阴性，HI效价为24及以上时试纸条检测为强毒株阳性。结果见表I
权利要求
1.一种鉴别新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在不吸水的支撑薄片上；其中结合垫上包被有胶体金标记的新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白；硝酸纤维素膜上分别包被有SPA构成的检测线T线和抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点8Fp重组蛋白单抗1D8构成的质控线C线。
2.根据权利要求I所述的一种鉴别新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于所述的结合垫上包被的胶体金标记的新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白的制备方法如下(A)首先制备新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白，人工合成目的基因片段 4Fp和SFp后，通过目的基因克隆和原核表达制备新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白；(B)选用新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白标记胶体金，制备金标抗体， 用O. IM碳酸钾调胶体金的PH值至8. 2，按IOOug抗体/毫升胶体金加入新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白，磁力搅拌器混匀30分钟，加BSA至终浓度为1%，静置I小时，40C 13000rpm离心30分钟,弃上清,沉淀用标记洗漆保存液洗漆两次,用十分之一初始胶体金体积的洗涤保存液重悬沉淀，4°C备用；(C)将结合垫浸泡于封闭液即2%BSA、0. 5%吐温-20,2. 5%蔗糖、O. 05%叠氮钠、O. OlM PBS中30分钟，37°C烘干；然后将制备好的金标抗原均匀喷涂于结合垫上，每毫升铺20平方厘米，冻干、保存。
3.根据权利要求I所述的一种鉴别新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上包被有SPA构成的检测线T线是作为抗体捕获剂喷涂于检测线上，用包被缓冲液将SPA稀释到50-100ug/ml，调整机器划线为检测线T线，即为检测线T线靠近结合垫，距结合垫端约5mm。
4.根据权利要求I所述的一种鉴别新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于所述的硝酸纤维素膜上包被有抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白单克隆抗体构成的检测线T线，其上抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点8Fp重组蛋白单抗的制备方法如下(A)首先制备抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白单抗，利用杂交瘤技术通过细胞融合、细胞克隆筛选建立的抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白单克隆抗体4株，所制备单抗具有抗新城疫病毒强毒株及中强毒株特异性，与新城疫弱毒株及实验所用其他病毒呈阴性反应，这就决定了试纸条的特异性；(B)选用抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白单抗构成的质控线C线是将抗新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点SFp重组蛋白单抗稀释到50-100ug/ml，调整机器划线为C线，即为对照线靠近吸收垫，距吸收垫端约3mm ;两线距离5-8mm，在硝酸纤维素膜NC 膜上的质控线上，可与金标抗体结合，以此检验试纸条的有效性。
全文摘要
本发明涉及一种鉴别诊断新城疫强弱毒株的胶体金快速诊断试纸条，其特征在于试纸条由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫依次粘附在不吸水的支撑薄片上；其中结合垫上包被有胶体金标记的新城疫强毒株串联F蛋白裂解位点8Fp重组蛋白；硝酸纤维素膜上分别包被有SPA构成的检测线T线和串联F蛋白裂解位点8Fp重组蛋白单克隆抗体1D8构成的质控线C线。其具有特异性强、灵敏度高、操作简单和诊断快速的显著优点，可用于新城疫强弱毒株的快速鉴别诊断。
文档编号C12N15/45GK102608331SQ20121006949
公开日2012年7月25日 申请日期2012年3月16日 优先权日2012年3月16日
发明者丁壮, 吕字华, 姜翠翠, 张晓东, 朱利塞, 李想, 母连志, 韩明明, 黄志强 申请人:吉林大学