一种灵芝果酒及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种灵芝果酒及其制备方法，该工艺涉及生物工程【技术领域】，以玉米、小麦和大米为主要原料采用固体发酵技术和酿酒工艺制得灵芝酒。玉米和小麦浸泡，使含水率达到40～80%，灭菌后接入5～30%灵芝种子液，用保鲜膜密封发酵，加入30~70%灵芝发酵物重量的大米煮成的米饭，和大米重量1~5%的酒曲，2~5倍的水，经过10~30℃，10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。该酒酒精度8~30%，灵芝三萜含量50～500mg/L，蛋白质60～500mg/L，还原糖<2.0%，多糖100~800mg/L，色质米黄色至褐色。该灵芝果酒，具有保护肝脏和抗氧化等功效。
【专利说明】一种灵芝果酒及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物工程【技术领域】，特指利用大米、玉米、小麦为主要原料，以灵芝为菌种，采用固体发酵技术生产灵芝果酒的方法和用途。
【背景技术】
[0002]灵芝XGanoderma又称红芝、木灵芝、灵芝草,在分类学上属于真菌界、担子菌亚门、多孔菌目、多孔菌科、灵芝属。灵芝是一种非常珍贵的药用真菌，是中国医药宝库中的精品。灵芝自古以来就有“仙草”之称，不但可以治疗多种疾病，而且具有滋补强体、扶正固本、有利于机体保持或恢复稳态等功效，备受人们青睐。灵芝菌盖木栓质，肾形，红褐、红紫、或者暗紫色，具有漆状光泽，有换装棱纹和辐射状皱纹，大小和形态变化很大。菌柄侧生，极少偏生，长于菌盖直径，红褐色，有光泽。灵芝喜高温高湿，强散射光，通气良好的环境,多生长在阔叶树的木桩旁、枯树根和倒木上,夏秋雨季后生长旺盛。灵芝性温,味甘，具有益精气，强筋骨等药用功能。人工培植的灵芝约50~60天子实体成熟。公元前300年左右的《礼记》，记载有“食所加庶，羞有芝柄”。公元前239年《吕氏春秋》有这样的记载“和之美者，越骆之菌”。可见我国的祖先很早就开始服食灵芝。关于灵芝，很多古代文献也提及它可以作为一种食品服用。陶弘景曾指出:“凡得芝草，便正尔食之，无余节度，故皆不云服法也。”李时珍亦指出:“昔四酷采芝，群仙服食，则芝亦菌属可食者，故移入菜部”。这些都是在我国历史上灵芝药食两用的记载。
[0003]灵芝具有生理活性的成分主要有生物碱类、多糖类、氨基酸、三萜类、有机锗微量元素及核苷酸类。灵芝能治疗神经衰弱、支气管哮喘、头晕、失眠和心悸等疾病，对肾盂肾炎、胃病、十二指肠溃疡、高血压、慢性肝炎、冠心病、白血球减少、高血清胆固醇以及癌症有不同程度的疗效，且无副作用。
[0004]国内关于灵芝酒有部分研究和报道，已经申请发明专利二十多项，这些专利基本上采用浸泡、用灵芝提取液勾兑或者液体发酵为主获得的灵芝酒。如李中、何金兴公开了用红灵芝或红灵芝提取液，甜灵芝或用包`覆剂除苦味的红灵芝提取液、甜灵芝提取液、甜菊糖和用水、白糖、柠檬酸炼成的糖浆按勾兑酒基得到灵芝酒(专利号92107554.5);邓凤翔公开了将灵芝等补药用酒进行多次浸提后，再用水煎煮，将浸泡用的酒和煎煮汁混合制得补养酒液，再经调制过滤、贮存得到具有美容、养生、保健功效的灵芝酒(93117937.8);冯选凹介绍了用优质高粱酒作基酒，并配有灵芝提取液，将灵芝子实体置于加入了灵芝提取液的高粱酒中进行泡制得到灵芝酒的方法(94106761.0);田希文公开了利用红高梁、糯米、灵芝菌丝体及酵母混合发酵得到灵芝酒的方法(93111978.2)等等，用这些方法获得灵芝酒成本较高、生产周期长或者产生较多的废水污染。严重制约着灵芝酒的发展。
[0005]固态发酵是微生物在没有或基本没有游离水的固态基质上的发酵方式，固态基质中气、液、固三相并存，即多孔性的固态基质中含有水和水不溶性物质同。水分活度低，基质水不溶性高，微生物易生长，酶活力高，酶系丰富；由于发酵过程中没有或有少量的自由水，因此基质抑制或者产物抑制现象很少发生，因此代谢产物浓度较高；发酵过程粗放，不需严格无菌条件；设备构造简单、投资少、能耗低、易操作；后处理简便、污染少，基本无废水排放。
[0006]因此本专利采用固态发酵技术，以玉米和小麦为基质繁殖灵芝菌丝体获得含有灵芝多糖和灵芝三萜的发酵物，该发酵物与大米米饭、酒曲混合制得灵芝酒，该灵芝酒由于含有灵芝三萜和灵芝多糖等活性物质，因此该酒具有保肝、抗氧化、增强肌体免疫之功效。
【发明内容】
[0007]本发明提供的是一种灵芝果酒的酿制技术，以小麦、玉米和大米为主要原料，利用灵芝采用固体好氧发酵技术，酒精发酵技术相结合，经过两次菌种发酵获得的发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。
[0008]灵芝果酒，该酒该酒酒精度8-30% (质量/体积m/V)，灵芝三萜含量50_500mg/L，蛋白质60-500mg/L，还原糖〈2.0%，灵芝多糖100_800mg/L。
[0009]本发明的目的在于提供一种灵芝果酒的制备方法，按下述步骤制备得到:
(1)液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶40~150mL，100~130°C灭菌10~60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60~180转/分钟，温度22~33°C培养5~10天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
(2)液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50~80%转入种子罐，经过100~120°C灭菌，冷却至室温，以3~10% (体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度22~33°C， 罐压0.03~0.08兆帕，搅拌转速60~250转/分，通风量1:0.3~1:1.2 (v/v/m)培养3~8天，制得灵芝液体深层培养菌种；
(3)灵芝固态发酵:玉米和小麦按照1:0.5~4 (重量/重量)的比例混合均匀，用水浸泡使含水率达到40~80%(重量百分含量)，110~150°C灭菌10~60分钟，冷却到室温后，以5~20% (体积与重量比)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22~33°C，湿度55~90%培养5~20天获得灵芝发酵物；
(4)灵芝果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按30- 70% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2 — 5倍的水，混合均与，经过10 - 30°C,10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。用该工艺生产的灵芝果酒，其特征在于色质米黄色至褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0010]许多研究都已研究证明灵芝三萜具有保护肝脏功能(Su CH, Lain丽，ChanMH.Hepato-protective trit erpenoids from Ganoderma Tsugae Murri11.MushroomBiology and Mushroom Products.Hongkong: The Chinese University Press, 1993，275~283;王明宇，林志彬:灵芝三萜类成分在体内外对小鼠免疫性肝损伤的影响.中国药学杂志2000，35(12)，809-812)，灵芝多糖能够抗氧化(张志军；李淑芳；魏雪生；陈晓明.灵芝多糖体外抗氧化活性的研究；杨红梅；王黎；陈洁；李宜培；裴瑞；.灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响.中国老年学杂志，2009, 29(18):2351-2353)，因此本发明提供的灵芝果酒具有保护肝脏和抗氧化等功效。【具体实施方式】
[0011]下面结合实施例对本发明做进一步阐述:
其中所述的灵芝果酒功能性成分按下列方法测定:
蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝(陈建勋、王晓峰:植物生理学实验指导.实验19 --考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量.华南理工大学出版社p54~55);灵芝三萜测定采用紫外分光光度法(王翔飞，潘旭东，刘雯霞，等.黄花瓦松中总三萜成分的含量的测定.中国民族民间医药，2009，18(10):11)。多糖含量的测定采用硫酸一苯酚法(赵阳楠，常继东.苯酚硫酸法和间接碘量法测定灵芝多糖含量比较[J].食用菌，2007，(3): 58-61.)，还原糖含量测定采用3，5 —二硝基水杨酸法。
[0012]本发明中实施例1~3中所使用的灵芝菌种为可以购买到的任意一种灵芝菌种，包括:赤芝、紫芝、树舌等多种灵芝菌种。玉米浆为市售任意厂家生产，但是其蛋白质含量不低于37%。所采用的酒曲为黄酒酒曲或白酒酒曲的任意一种酒曲；灵芝斜面菌种采用PDA培养基制备。1000mLPDA培养基含200g马铃薯提取液(去皮马铃薯切成碎片、1000mL蒸馏水煮沸30分钟，八层纱布过滤，滤液定容至1000mL,滤液即为马铃薯提取液)加入蔗糖20g、琼脂20g，煮沸待琼脂完全溶化后分装试管，塞上棉塞，121°C灭菌，制成斜面。无菌接种灵芝菌种，30°C培养7天，4V冷藏待用。
[0013]实施例1
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20克，黄豆饼粉50克，玉米浆50克，麸皮60克，磷酸二氢钾0.6克，硫酸镁0. 5克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶40mL，100°C灭菌60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma在转速60转/分钟,温度22°C培养10
天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖100克，黄豆饼粉10克，玉米浆10克，麸皮10克，磷酸二氢钾0.6克，硫酸镁0.5克，豆油7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50%转入种子罐，经过100°C灭菌，冷却至室温，以10% (体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度22°C，罐压0.03兆帕，搅拌转速70转/分，通风量1:0.3v/v/m培养8天,制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:玉米与小麦按1:0.5 (重量比)混合均匀，用水浸泡使含水率达到45%，110°C灭菌60分钟，冷却到室温后，以20% (体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度32°C，湿度90%培养20天获得灵芝发酵发酵物；
灵芝果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按30% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的1.5%的酒曲，大米重量2倍的水，混合均与，经过10°C，50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。用该工艺生产的灵芝果酒，其特征在于色质米黄色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0014]实施例2
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖60克，黄豆饼粉30克，玉米浆30克，麸皮30克，磷酸二氢钾0.3克，硫酸镁0.3克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶80mL，115°C灭菌40分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma在转速120转/分钟,温度28°C培养7天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖60克，黄豆饼粉25克，玉米浆31克，麸皮30克，磷酸二氢钾0.25克，硫酸镁0.25克，豆油4.1克，水1000mL ；液体深层培养培养基按罐体积60%转入种子罐，经过115°C灭菌，冷却至室温，以6% (体积t匕)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度27°C，罐压0.05兆帕，搅拌转速120转/分，通风量1:0.8v/v/m培养5天，制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:玉米与小麦按1:2 (重量比)混合均匀，用水浸泡使含水率达到60%，130°C灭菌30分钟，冷却到室温后，以10% (体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度60°C，湿度85%培养10天获得灵芝发酵物；
灵芝果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按50% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的3%的酒曲，大米重量3倍的水，混合均与，经过20°C，25天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。用该工艺生产的灵芝果酒，其特征在于色质浅褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0015]实施例3
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖100克，黄豆饼粉10克，玉米浆10克，麸皮10克，磷酸二氢钾0.06克，硫酸镁0.05克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶140mL, 128°C灭菌55分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma Iucidum)，在转速180转/分钟,温度33°C培养5天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
'液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20克，黄豆饼粉45克，玉米浆45克，麸皮60克，磷酸二氢钾0.06克，硫酸镁0.05克，豆油2克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积80%转入种子罐，经过120°C灭菌，冷却至室温，以3%(体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度33°C，罐压0.08兆帕，搅拌转速250转/分，通风量1:1.lv/v/m培养8天，制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:玉米与小麦按1:3.5 (重量比)混合均匀，用水浸泡使含水率达到75%，150°C灭菌10分钟，冷却到室温后，以5% (体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22 °C，湿度60%培养5天获得灵芝发酵发酵物；
灵芝果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按70% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物以及大米重量的5%的酒曲，大米重量5倍的水，混合均与，经过30°C，10天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。用该工艺生产的灵芝果酒，其特征在于色质褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0016]实施例1、实施例2和实施例3的测定结果显示在表1 表1:实施例1成分分析表
项目I实施例1 I实施例2 I实施例3~~
【权利要求】
1.灵芝果酒，其特征在于该酒该酒酒精度质量与体积比计8-30%，灵芝三萜含量50-500mg/L，蛋白质 60_500mg/L，还原糖〈2.0%，灵芝多糖 100_800mg/。
2.权利要求1所述的灵芝果酒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备得到: (1)液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，水1000mL,按照体积比16~60%分装三角瓶，100~130°C灭菌10~60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60~180转/分钟，温度22~33°C培养5~10天，制得灵芝液体摇瓶菌种； (2)液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50~80%转入种子罐，经过100~120°C灭菌，冷却至室温，以体积比3~10%接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度22~33°C，罐压0.03~0.08兆帕，搅拌转速60~250转/分，通风量1:.0.3~1:1.2 (v/v/m)培养3~8天，制得灵芝液体深层培养菌种； (3)灵芝固态发酵:玉米和小麦按照重量比1:0.5~4的比例混合均匀，用水浸泡使含水率达到重量百分含量40~80%，110~150°C灭菌10~60分钟，冷却到室温后，以体积与重量比5~20%的接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22~33°C，湿度55~90%培养5~20天获得灵芝发酵物； (4)灵芝果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按重量比30- 70%称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的1~5%的酒曲，大米重量2 — 5倍的水，混合均与，经过10 - 30°C，10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝果酒。
【文档编号】C12G3/02GK103695226SQ201210366382
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2012年9月27日 优先权日:2012年9月27日
【发明者】张志才, 张才九, 任晓峰, 谢德中 申请人:江苏大学