一种抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒，它包括任选的用于检测VEGFA基因rs943080变异的相关试剂。本发明还公开了VEGFA基因rs943080变异在制备抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂中的用途。本发明提供的试剂盒，可以评估抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果，对湿性老年黄斑疾病的治疗有重要作用。
【专利说明】一种抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及SNP领域，特别涉及与抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病相关的SNP。
【背景技术】
[0003]黄斑变性疾病(AMD)被认为是一类以进行性中心视力下降及黄斑部视网膜色素上皮变性为特征的异质性疾病，是重要的致盲性眼病。湿性黄斑变性疾病(湿性AMD)，多引起视力的严重障碍，其视力破坏的原因主要是异常的新生血管在视网膜下生长，引起视网膜出血、水肿及视网膜组织的破坏，最终导致疤痕形成，从而引起视力的丧失。湿性AMD —旦发病，病程迅速，常规治疗的效果不佳，难以大幅度地恢复其已经丧失的视功能。
[0004]湿性AMD可采用激光光凝法、放射治疗、手术、经瞳温热疗法、光动力疗法和抗血管内皮生长因子类药物等手段进行治疗。其中，抗血管内皮生长因子类药物是治疗AMD的重要方法，目前，眼科临床中常用的抗VEGF药物有雷珠单抗Ranibizumab和贝伐单抗Bevacizumab。因老年黄斑是一种异质性疾病，与多种因素有关,相同治疗方法对不同患者的治疗效果不尽相同。所以，评估湿性AMD患者对不同治疗方法和药物的敏感性，为AMD患者选择合适的治疗方法，对降低治疗风险，节约治疗费用显得尤为重要。
[0005]SNP,单核苷酸多态性，是指染色体DNA序列的某个位点上的单个碱基(A，T，C或者G)发生的变异，是继限制性片段长度多态性(RFLP)和微卫星多态性这两种遗传标记之后出现了第三代遗传标记。SNP分布广泛、数目多且相对稳定地存在人类染色体上，与许多生物性状的改变直接相关。
【发明内容】
[0006]为了解决上述问题，本发明提供了抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒，以及VEGFA基因rs943080变异在制备抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂中的用途。
[0007]本发明抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒，它包括任选的用于检测VEGFA基因rs943080变异的相关试剂。
[0008]所述试剂盒包括检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂；还包括任选的用于扩增包含VEGFA基因rs943080的基因片段的试剂。
[0009]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为Snapshot试剂。
[0010]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为测序用试剂。
[0011]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。[0012]本发明VEGFA基因rs943080变异在制备抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂中的用途。
[0013]其中，所述的试剂包括检测VEGFA基因rs943080C —T变异的试剂；所述试剂还包括任选的用于扩增包含VEGFA基因rs943080的基因片段的试剂。
[0014]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为Snapshot试剂。
[0015]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为测序用试剂。
[0016]其中，所述的检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
[0017]本发明首次阐明了 VEGFA基因rs943080位点多态性与抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病效果的相关性。使用本发明提供的试剂盒，可以预测待检人群抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果，对昂贵的抗体药的临床用药个体化提供指导依据，为患者降低用药风险和治疗成本，具有良好的临床应用前景。
[0018]染色体DNA同一位置上的每个碱基类型叫做一个等位位点，SNP在人群中只有两种等位型，故亦称为双等位标记，其检测是一种“+/ 或“全/无”的检测方式。SNP的检测方法多种多样，可分为测序法、杂交法、溶解法、电泳法、化学法、酶学法、物理法以及它们的组合方法，这些方法均是检测SNP的常规实验手段。
[0019]显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例形式的【具体实施方式】，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1Snapshot检测rs943080基因型为TT的图谱。
[0022]图2Snapshot检测rs943080基因型为CT的图谱。
[0023]图3Snapshot检测rs943080基因型为CC的图谱。
【具体实施方式】
[0024]用于下列实施例中表示试剂均为市售品，其英文缩写如下。
[0025]需要时，用高压锅(120°C，20分钟)灭菌
[0026]EDTA:乙二胺四乙酸二钠
[0027]SDS:十二烷基硫酸纳
[0028]TE: IOmM Tris-HCl (pH7.5)、ImM EDTA (ρΗ8.0)
[0029]dNTP:脱氧核苷三磷酸
[0030]SAP:虾碱性磷酸酶
[0031]EXO 1:大肠杆菌外切酶I
[0032]NEB Tag:NEB Tag 酶
[0033]实施例1样本收集和基因组DNA的提取
[0034]样本为临床诊断为湿性黄斑变性(AMD)的高加索人患者(Caucasianpatients),受试眼数为223例，抗血管内皮生长因子药物贝伐单抗Bevacizumab)或雷珠单抗Ranibizumab为玻璃体腔注射，每月一次，持续4月，每个月进行眼科检查，包括:最佳矫正视力(BCVA)，用LogMAR视力表进行评价；黄斑中心凹厚度(CFT)。12个月后评价应答水平，以最佳矫正视力(BCVA)用EDTRS表检测后增加一行视标识别或增加5个字母识别为应答者，未达到上述要求视为无应答者。
[0035]如表广2所示，抗血管内皮生长因子药物治疗有应答者148只眼(其中，59只眼的治疗药物为雷珠单抗Ranibizumab,89只眼的治疗药物为贝伐单抗Bevacizumab),平均年龄80±0.8岁，其中，男性占49.3% ;抗血管内皮生长因子药物治疗无应答者75只眼(无应答中，30只眼的治疗药物为雷珠单抗Ranibizumab，45只眼的治疗药物为贝伐单抗Bevacizumab)，平均年龄81 ±0.9岁，其中，男性占60.0%。
[0036]表1入选样本临床资料和基本统计数据
[0037]
【权利要求】
1.一种抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂盒，其特征在于:它包括任选的用于检测VEGFA基因rs943080变异的相关试剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于:它包括检测VEGFA基因rs943080C— T变异的试剂；还包括任选的用于扩增包含VEGFA基因rs943080的基因片段的试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述检测VEGFA基因rs943080C—T变异的试剂为Snapshot试剂。
4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述检测VEGFA基因rs943080C— T变异的试剂为测序用试剂。
5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于:所述检测VEGFA基因rs943080C— T变异的试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
6.VEGFA基因rs943080变异在制备抗血管内皮生长因子药物治疗湿性老年黄斑变性疾病的效果评估试剂中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于:所述试剂包括检测VEGFA基因rs943080C — T变异的试剂；所述试剂还包括任选的用于扩增包含VEGFA基因rs943080的基因片段的试剂。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于:所述检测检测VEGFA基因rs943080C— T变异的试剂为Snapshot试剂。
9.根据权利要求7所述的 用途，其特征在于:所述检测检测VEGFA基因rs943080C— T变异的试剂为测序用试剂。
10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于:所述检测检测VEGFA基因rs943080C—T变异的试剂为限制性片段长度多态性方法用试剂或者单链构象多态性分析用试剂。
【文档编号】C12Q1/68GK103805685SQ201210448128
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2012年11月9日 优先权日:2012年11月9日
【发明者】张康 申请人:张康