一种液体复合菌种的制备方法
【专利摘要】一种液体复合菌种的制备方法，该菌种包括固氮菌、解钾细菌和抗生菌，固氮菌为根瘤菌、圆褐固氮菌、根癌土壤杆菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氮螺菌Yu-62、联合固氮菌K1ebsie11a?p1antico1a19-1或棕色固氮菌Az230之一；解钾细菌为硅酸盐细菌NBT菌株、钾细菌JF88菌株或硅酸盐细菌G10菌株之一；抗生菌为链霉菌、青霉菌、多粘芽孢杆菌或5406抗生菌之一；制备方法为：固氮菌、解钾细菌、抗生菌中各选一种细菌，分别制作对应的菌种培养基，pH值为6～8.5；然后分别按常规装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作，得到液体菌种；再将三种液体菌种混合，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为1：1：（0.025～0.05）。本发明满足生产营养均衡复混肥的要求，投资少、易掌握及容易、成本低。
【专利说明】一种液体复合菌种的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种用于液体复合菌种的制备方法，该液体复合菌种可用于液体肥料的制备。
【背景技术】
[0002]现有的液体速效复混肥都是采用氮、磷、钾等化学肥料有针对性地混制而成的无机肥料。由于化学肥料存在有损地力、造成土壤板结等缺陷，人们逐渐将研究方向瞄准了环保、高效、无害、可增强地力的天然肥料，特别是经腐化后的天然肥料。
[0003]液体复合菌种是生产天然液体速效复混肥的必须菌种，现有的液体复合菌种结构单一，难于满足生产营养均衡复混肥的要求。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题在于，提供一种液体复合菌种的制备方法，克服现有液体复合菌种结构单一、难于满足生产营养均衡复混肥要求的缺陷。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:提供一种液体复合菌种的制备方法，其特征在于，该液体复合菌种包括固氮菌、解钾细菌和抗生菌；其中:
[0006]固氮菌为根瘤 菌、圆褐固氮菌、根癌土壤杆菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氣螺菌Yu_62、联合固氣菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氣菌Az230之一；
[0007]解钾细菌为硅酸盐细菌NBT菌株、钾细菌JF88菌株或硅酸盐细菌GlO菌株之一；
[0008]抗生菌为链霉菌、青霉菌、多粘芽孢杆菌或5406抗生菌之一；
[0009]该制备方法包括如下步骤:
[0010]S1、在所述固氮菌、解钾细菌、抗生菌中各选择一种细菌，分别制作选定细菌的菌种培养基，三种细菌的菌种培养基配方PH值为6~8.5 ;
[0011]S2、将三种菌种培养基分别按常规进行装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作，得到液体菌种；
[0012]S3、将三种细菌的液体菌种进行混合，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为 I:1:(0.025 ~0.05)。
[0013]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，步骤S2中，培养时间为3~7天。
[0014]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，步骤S2中，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为1:1:0.03。
[0015]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，步骤SI中，所述三种细菌的培养基配方PH值为7。
[0016]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，步骤S2中，灭菌操作采用高压灭菌，灭菌温度为121°C，灭菌时间为20~30分钟。
[0017]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，步骤SI中，在所述固氮菌、解钾细菌、抗生菌中分别选择根瘤菌、钾细菌JF88菌株和5406抗生菌；[0018]所述根瘤菌的液体菌种培养基配方为:葡萄糖10克、磷酸二氢钾0.5克、碳酸钙3克、硫酸镁0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5 ;
[0019]所述钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基配方为:蔗糖5克、磷酸氢二钠2克、硫酸镁0.5克、三氯化铁0.005克、碳酸钙0.1克、铝土矿0.5克、水I升，PH值6~7.5 ;
[0020]所述5406抗生菌的液体菌种培养基配方为:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化钠10克、水I升，PH值6~7.5。[0021]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，所述根瘤菌的液体菌种培养基、钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基分别装于三角瓶中进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到30°C以下，在无菌接种箱内接入菌种，然后放置在25°C~30°C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存；所述5406抗生菌的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基装于装三角瓶进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到60 C左右，在无囷接种箱内接入囷种，然后放直在25 C~30 C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存。
[0022]实施本发明的液体复合菌种的制备方法，与现有技术比较，其有益效果是:
[0023]1.本液体复合菌种包括三种细菌菌种，能够满足生产营养均衡复混肥的要求；
[0024]2.菌种生产仅需常规的高压灭菌锅、接种箱及培养设备，投资少、易培训，菌种的采集、保管及培养操作容易，综合成本低。
【具体实施方式】
[0025]下面将结合实施例对本发明作进一步说明。
[0026]在本发明的液体复合菌种的制备方法中，制备的液体复合菌种包括固氮菌、解钾细菌和抗生菌。其中:
[0027]固氮菌为根瘤菌、圆褐固氮菌、根癌土壤杆菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氣螺菌Yu_62、联合固氣菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氣菌Az230的其中一种。
[0028]解钾细菌为硅酸盐细菌NBT菌株、钾细菌JF88菌株或硅酸盐细菌GlO菌株的其中一种。
[0029]抗生菌为链霉菌、青霉菌、多粘芽孢杆菌或5406抗生菌的其中一种。
[0030]本发明的液体复合菌种的制备方法如下:
[0031]首先，在上述固氮菌、解钾细菌、抗生菌中各选择一种细菌(例如，选择根瘤菌、钾细菌JF88菌株和5406抗生菌)，分别制作所选定细菌的菌种培养基，三种细菌的菌种培养基配方PH值为6~8.5(例如，可以根据情况，选择菌种培养基配方PH值为6、7、7.5、8、8.5等)。上述三类细菌均为现有技术，其中各种细菌的菌种培养基也为现有技术。例如，选择根瘤菌、钾细菌JF88菌株和5406抗生菌时，根瘤菌的液体菌种培养基配方为:葡萄糖10克、磷酸二氢钾0.5克、碳酸钙3克、硫酸镁0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5。钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基配方为:蔗糖5克、磷酸氢二钠2克、硫酸镁0.5克、三氯化铁0.005克、碳酸钙0.1克、铝土矿0.5克、水I升，PH值6~7.5。5406抗生菌的液体菌种培养基配方为:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化钠10克、水I升，PH值6~7.5。[0032]然后，将三种菌种培养基分别按常规进行装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作，得到液体菌种。例如，选择根瘤菌、钾细菌JF88菌株和5406抗生菌，按照如下常规方式进行装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作:对根瘤菌的液体菌种培养基、钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基分别装于三角瓶中进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到30°C以下，在无菌接种箱内接入菌种，然后放置在25°C~30°C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存。对5406抗生菌的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基装于装三角瓶进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到60°C左右，在无菌接种箱内接入菌种，然后放置在25°C~30°C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存。
[0033]最后， 将三种细菌的液体菌种进行混合，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为1:1:(0.025~0.05)(例如，根据情况，可以选择三种细菌液体菌种的重量配比为1:1:0.025、I:1:0.03、1:1:0.04、1:1:0.05 等)，得到液体复合菌种。
【权利要求】
1.一种液体复合菌种的制备方法，其特征在于，该液体复合菌种包括固氮菌、解钾细菌和抗生菌；其中: 固氮菌为根瘤菌、圆褐固氮菌、根癌土壤杆菌C58/PGV3850菌株、海南快生根瘤菌166、固氮螺菌Yu_62、联合固氮菌Klebsiella planticolal9_l或掠色固氮菌Az230之一； 解钾细菌为硅酸盐细菌NBT菌株、钾细菌JF88菌株或硅酸盐细菌GlO菌株之一； 抗生菌为链霉菌、青霉菌、多粘芽孢杆菌或5406抗生菌之一； 该制备方法包括如下步骤: 51、在所述固氮菌、解钾细菌、抗生菌中各选择一种细菌，分别制作选定细菌的菌种培养基，三种细菌的菌种培养基配方PH值为6~8.5 ; 52、将三种菌种培养基分别按常规进行装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作，得到液体菌种； 53、将三种细菌的液体菌种进行混合，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为1:1:(0.025 ~0.05)。
2.如权利要求1所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤S2中，培养时间为3~7天。
3.如权利要求1所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤S2中，固氮菌、解钾细菌、抗生菌的混合重量配比为1:1:0.03。
4.如权利要求1所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤SI中，所述三种细菌的培养基配方PH值为7。
5.如权利要求1所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤S2中，灭菌操作采用高压灭菌，灭菌温度为121°C，灭菌时间为20~30分钟。
6.如权利要求1至5之一所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，步骤SI中，在所述固氮菌、解钾细菌、抗生菌中分别选择根瘤菌、钾细菌JF88菌株和5406抗生菌； 所述根瘤菌的液体菌种培养基配方为:葡萄糖10克、磷酸二氢钾0.5克、碳酸钙3克、硫酸镁0.2克、酵母粉0.4克、水I升，PH值6~8.5 ; 所述钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基配方为:蔗糖5克、磷酸氢二钠2克、硫酸镁0.5克、三氯化铁0.005克、碳酸钙0.1克、铝土矿0.5克、水I升，PH值6~7.5 ; 所述5406抗生菌的液体菌种培养基配方为:蛋白胨10克、酵母提取物5克、氯化钠10克、水I升，PH值6~7.5。
7.如权利要求6所述的液体复合菌种的制备方法，其特征在于，所述根瘤菌的液体菌种培养基、钾细菌JF88菌株的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基分别装于三角瓶中进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到30°C以下，在无菌接种箱内接入菌种，然后放置在25°C~30°C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存；所述5406抗生菌的液体菌种培养基的装罐、灭菌、冷却、接种、培养操作为:将液体菌种培养基装于装三角瓶进行高压灭菌，在121°C保持20~30分钟，然后冷却到60°C左右，在无菌接种箱内接入菌种，然后放置在25°C~30°C恒温振动摇床上，振动培养3~7天，得到液体菌种，进行冷冻保存。
【文档编号】C12R1/80GK103614316SQ201310530981
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】方小红, 吴峰 申请人:深圳市新华南方生物科技股份有限公司