褐藻胶寡糖的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及生物医药领域，公开了一种褐藻胶寡糖的应用。本发明试验结果表明，褐藻胶酶解寡糖直接作用于细菌不产生抑制细菌生长效果，但是褐藻胶酶解寡糖可提高人巨噬细胞THP-1对异物的吞噬能力，而且对小鼠巨噬细胞RAW264.7诱导刺激后，F-actin表达量增加，细胞形态由圆形向梭形变化、长宽比增大。GOM刺激THP-1和RAW264.7细胞后，可以明显增强其对外来微生物的杀伤作用。小鼠体内实验也表明，GOM能显著诱导小鼠腹水免疫细胞数目的增加，增强小鼠对体内微生物的清除能力。因此，将褐藻胶寡糖用于制备促进巨噬细胞活性的药物和保健品具有广阔的前景。
【专利说明】褐藻胶寡糖的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医药领域，尤其涉及褐藻胶寡糖用于制备促进巨噬细胞吞噬活性的药物和保健品的新应用。
【背景技术】
[0002]褐藻胶是由互为C5差向异构体的两种单体——甘露糖醛酸和古罗糖醛酸相互嵌合而成的线性大分子。寡糖 是由2-10个单糖经脱水缩合形成糖苷键连接成直链或支链的低聚糖，其水溶性好，易被吸收。褐藻胶寡糖具有抗氧化、抗凝血、降血脂等多种生物活性，但尚未发现褐藻胶寡糖用于促进巨噬细胞吞噬活性。
【发明内容】
[0003]本发明所要解决的技术问题在于提供褐藻胶寡糖制备促进巨噬细胞活性药物和保健品的新应用，所述褐藻胶寡糖制备的药物和保健品能有效促进巨噬细胞的吞噬微生物的活性。
[0004]本发明所采用的技术方案为:提供褐藻胶寡糖的应用，将所述褐藻胶寡糖用于制备促进巨噬细胞吞噬活性的药物或保健品。
[0005]进一步地，所述褐藻胶寡糖为褐藻酸钠经褐藻胶裂解酶酶解制得。
[0006]进一步地，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗肿瘤的药物或保健品。
[0007]进一步地，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗菌的药物或保健品。
[0008]进一步地，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗病毒的药物或保健品。
[0009]本发明的有益效果在于:本发明首次发现褐藻胶酶解寡糖具有可促进巨噬细胞吞噬活性的作用，并提供将褐藻胶酶解寡糖用于制备促进巨噬细胞活性的应用。本发明大量试验结果表明，褐藻胶酶解寡糖作用于巨噬细胞可促进其活性，提高其对外来微生物的吞噬及杀伤能力，将褐藻胶寡糖用于制备促进巨噬细胞活性的药物或保健品具有广阔的前
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【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1是褐藻胶酶解寡糖对THP-1细胞吞噬能力的影响图；
[0011]图2是褐藻胶酶解寡糖对经IgG调理及未经IgG调理的THP-1细胞吞噬作用的影响图；
[0012]图3是激光共聚焦显微镜所观察到的RAW264.7细胞骨架结构图(注:图3A为阴性对照Ctrl组；图3B为GOM处理组；图3C为PG处理组)；
[0013]图4是实施例3中不同处理组RAW264.7细胞长宽比变化图；
[0014]图5是实施例3中不同处理组RAW264.7细胞面积变化图；
[0015]图6是实施例3中不同处理组RAW264.7细胞的荧光强度变化图；
[0016]图7是褐藻胶酶解寡糖作用于THP-1细胞影响吞噬金黄色葡萄球菌存活率的变化图；
[0017]图8为褐藻胶酶解寡糖作用于RAW264.7细胞影响吞噬金黄色葡萄球菌存活率的变化图；
[0018]图9是实施例6褐藻胶酶解寡糖作用于小鼠腹水上清液中菌落数比较图；
[0019]图10是实施例6褐藻胶酶解寡糖作用于小鼠腹水贴壁细胞的吞噬菌落数比较图。
【具体实施方式】
[0020]为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0021]实施例1褐藻胶寡糖的制备
[0022]将褐藻酸钠经HCl水解分级，通过调pH至2.85，得到纯度较高的聚甘露糖醛酸(PM)和聚古罗糖醛酸(PG)。分别加入适量的褐藻胶裂解酶，于37°C恒温反应过夜，通过加热终止酶解反应后，冷却酶解液，用0.45 μ m滤膜过滤，冻干备用。PM的酶解产物为甘露糖醛酸寡糖混合物，简称MOM ；PG的酶解产物即古罗糖醛酸寡糖混合物，简称G0M。
[0023]实施例2褐藻胶寡糖直接抑菌作用测试
[0024]采用琼脂扩散法中的打孔法，通过观察抑菌圈的大小来考察褐藻胶寡糖的抑菌效果。配制浓度分别为0.1%、0.5%、1%的MOM、GOM三种样品溶液，用无菌水作为空白对照，用氨苄青霉素作为阳性对照。取500 μ I活化菌液(菌种选取:金黄色葡萄球菌(G+)和大肠杆菌(G_))加入到100ml灭菌的LB培养基中，迅速摇匀后倒入培养皿中，同时用打孔器打孔。待培养基冷却凝固后，取微量培养基均匀的铺在洞孔底部。取100μ I各样品溶液加样于洞孔中，置于37°C培养箱中培养24h后观察抑菌圈检测抑菌效果。
[0025]测量抑菌圈，见表1，褐藻胶酶解寡糖MOM和GOM对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌都没有产生明显的抑菌圈，所以都没有直接体外抑菌活性。
[0026]表1褐藻胶寡糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的作用观察
[0027]
【权利要求】
1.褐藻胶寡糖的应用，其特征在于，将所述褐藻胶寡糖用于制备促进巨噬细胞吞噬活性的药物或保健品。
2.根据权利要求1所述褐藻胶寡糖的应用，其特征在于，所述褐藻胶寡糖为褐藻酸钠经褐藻胶裂解酶酶解制得。
3.根据权利要求1所述褐藻胶寡糖的应用，其特征在于，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗肿瘤的药物或保健品。
4.根据权利要求1所述褐藻胶寡糖的应用，其特征在于，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗菌的药物或保健品。
5.根据权利要求1所述褐藻胶寡糖的应用，其特征在于，将所述褐藻胶寡糖用于制备抗病毒的药物或保健品。
【文档编号】C12P19/00GK103565817SQ201310556900
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】续旭, 毕德成, 魏高斌, 李超, 吴小婷, 万敏 申请人:深圳大学