利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法及其使用的实验装置制造方法
【专利摘要】本发明涉及利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法及其使用的实验装置，具体地说是一种自制菌液进行布品加速降解的检测实验及其实验装置。它公开了具体按照以下步骤实施：土壤采集；土壤处理；Ⅰ代富集；Ⅱ代富集；降解试样的制备；试样及试验液装进实验装置；生物接触作用；降解过程取样。它菌液培养快，对C13~C31的组分降解率均在90%以上。实验装置有效固定被检样品，使被检样品的尺寸不变，不会皱折、卷缩或粘合等，与菌液接触面积不变。使被检数据更精确。
【专利说明】利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法及其使用的实验装置
【技术领域】
[0001]本发明及一种布品加速降解的检测方法及其实验装置，具体地说是一种自制菌液进行布品加速降解的检测实验及其实验装置。
【背景技术】
[0002]根据GBT 22047-2008, ISO 17556-2003、诸葛健，唐是雯.工业微生物实验技术手册[M].中国轻工业出版社:1994和杨汝德，吴虹，林晓珊.现代工业微生物实验技术[M].科学技术出版社:2009所指导进行菌液加速降解实验，其实验的菌液培育缓慢、筛选不精，普通的实验装置在进行布品实验时，实验装置内的布品因为没有被很好的固定，所以加速降解过程中会皱折、卷缩或粘合等，因而对后续检测的数据会产生一定的影响。
【发明内容】
[0003]本发明目的提供利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法及其使用的实验装置。 [0004]本发明的技术解决方案是具体按照以下步骤实施:
步骤I，土壤采集；
在所用的天然土壤从田地和/或森林，取离地面5-15cm处土壤表层，或已经预曝置的土壤，用小铲子除去表土，收集的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标好，记录采样时间、地点、环境条件信息，以备查考；
步骤2，土壤处理；
过筛土壤，以获得尺寸小于2_的土壤微粒，并去除明显的植物材料、石头和其他惰性材料；将约20克新鲜的泥土去除明显的杂质物后，至于底部置有脱脂棉的三角形漏斗中，采用去离子蒸馏水200毫升淋洗，对淋洗液采用2000r/min离心后，采用pH计测试其pH值，三次平行测试结果取均值；
步骤3，I代富集；
称取处理好的土壤样品10g，加入已装有90mL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得I代土壤细菌混合菌群液；
步骤4，II代富集；
用移液器移取ImL第I代混合菌群液到装有IOOmL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得II代土壤细菌混合菌群液；
步骤5，降解试样的制备；
从每种样品上选取有代表性的试样，裁剪试样规格:250X50mm，裁剪试样数量为18件；所有试样使用前需在115°C下高温高压灭菌20min ；
步骤6，试样及试验液装进实验装置；
准备实验装置，洗净烘干，用封口膜包扎封住实验装置，在121°C下高温高压灭菌15min，使其在使用前保持无菌状态；在高温灭菌过的实验装置中各加入试样15件，同时加入试验液350mL，封口膜包扎封住实验装置开口处，于115°C下灭菌20min，为降解实验装置；
步骤7，生物接触作用；
用移液器移取ImL试验菌群液加入上述降解实验装置，封好实验装置开口处；将所有降解实验装置置于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h后，常温下静置；每3天取样后置于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡lh，再常温下静置；
步骤8，降解过程取样；
降解过程中，用高温灭菌的镊子，将试样从降解实验装置中取出，试样用蒸馏水冲洗4遍，于40-50°C电热鼓风干燥箱中干燥后，冰箱保存，以备分析测试；每种试样每次取3个平行样，每3天取样一次；以备降解材料性能参数之测试。
[0005]所述营养肉汤为1.5g 的 MgSO4, Ig 的 CuSO4,0.2g 的 MnSO4,0.3g 的 Fe SO4.7H20，Ig 的 CaCl2。
[0006]所述营养肉汤为1.5g 的 K2HPO4.3H20，Ig 的 KH2PO4,0.2g 的 MgSO4.7 H2O, 0.5g 的NH4NO3,0.03g 的 CaCl2,0.03g 的 FeCl3,0.5L 去离子水，ρΗ7.5。
[0007]所述营养肉汤为1.5g 的 K2HPO4.3H20, Ig 的 KH2PO4,0.2g 的 MgSO4.7 H2O, 0.5g 的NH4NO3,0.03g 的 CaCl2,0.03g 的 FeCl3, Ig 的调和油，IOg 的琼脂，0.5L 去离子水，ρΗ7.0~7.5。
[0008]其包括了容器(1)，容器盖(2)，所述容器(I)内腔设置有至少一对的样品架固定插槽(6)，所述每对样品架固定插槽(6)内固定有样品架(7)，所述样品架(7)的两侧各设有至少一个夹持装置(8 )，所述每对夹持装置(8 )各夹持有条状样品(9 )。
[0009]所述容器盖(2)上设有左温度计(4)和右温度计(5)，容器盖(2)上还设有注液孔
(3);所述容器(I)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
[0010]所述容器(I)内设有三对样品架固定插槽(6 )或五对样品架固定插槽(6 );所述样品架固定插槽(6)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢；所述样品架(7)的两侧各设有三个夹持装置(8 )或五个夹持装置(8 );所述样品架(7 )和夹持装置(8 )由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
[0011]所述各夹持装置(8)由调节螺母(10)固定在样品架(7)的内侧壁上。
[0012]所述各夹持装置(8)由弹簧(11)固定在样品架(7)的内侧壁上。
[0013]所述一侧的夹持装置(8)较另一侧夹持装置(8)长。
[0014]本发明优点在于:
1、菌液培养快，对C13飞31的组分降解率均在90%以上。
[0015]2、实验装置有效固定被检样品，使被检样品的尺寸不变，不会皱折、卷缩或粘合等，与菌液接触面积不变。
[0016]3、使被检数据更精确。
【专利附图】
【附图说明】 [0017]图1是本发明的俯视构造示意图。
[0018]图2是本发明的容器的俯视构造示意图。
[0019]图3是本发明的A —A剖面构造示意图。[0020]图4是本发明的样品架的构造示意图。
[0021]图5是本发明的带调节螺母样品架的构造示意图。
[0022]图6是本发明的带弹簧样品架的构造示意图。
[0023]图7是本发明的一侧夹持装置较另一侧夹持装置长的构造示意图。
【具体实施方式】
[0024]实施例1
步骤I，土壤采集；
在所用的天然土壤从田地和/或森林，取离地面5-15cm处土壤表层，或已经预曝置的土壤，用小铲子除去表土，收集的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标好，记录采样时间、地点、环境条件信息，以备查考；
步骤2，土壤处理；
过筛土壤，以获得尺寸小于2_的土壤微粒，并去除明显的植物材料、石头和其他惰性材料；将约20克新鲜的泥土去除明显的杂质物后，置于底部置有脱脂棉的三角形漏斗中，采用去离子蒸馏水200毫升淋洗，对淋洗液采用2000r/min离心后，采用pH计测试其pH值，三次平行测试结果取均值；
步骤3，I代富集；
称取处理好的土壤样品10g，加入已装有90mL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得I代土壤细菌混合菌群液；
步骤4，II代富集；
用移液器移取ImL第I代混合菌群液到装有IOOmL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得II代土壤细菌混合菌群液；
步骤5，降解试样的制备；
从每种样品上选取有代表性的试样，裁剪试样规格:250X50mm，裁剪试样数量为18件；所有试样使用前需在115 °C下高温高压灭菌20min ；
步骤6，试样及试验液装进实验装置；
准备实验装置，洗净烘干，用封口膜包扎封住实验装置，在121°C下高温高压灭菌15min，使其在使用前保持无菌状态；在高温灭菌过的实验装置中各加入试样15件，同时加入试验液350mL，封口膜包扎封住实验装置开口处，于115°C下灭菌20min，为降解实验装置；
步骤7，生物接触作用；
用移液器移取ImL试验菌群液加入上述降解实验装置，封好实验装置开口处；将所有降解实验装置置于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h后，常温下静置；每3天取样后置于37°C 士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡lh，再常温下静置；
步骤8，降解过程取样；
降解过程中，用高温灭菌的镊子，将试样从降解实验装置中取出，试样用蒸馏水冲洗4遍，于40-50°C电热鼓风干燥箱中干燥后，冰箱保存，以备分析测试；每种试样每次取3个平行样，每3天取样一次；以备降解材料性能参数之测试。
[0025]实施例2在实施例1的基础上，所述营养肉汤为1.5g的MgSO4, 1g的CuSO4,0.2g的MnSO4,0.3g的 Fe SO4.7H20, 1g 的 CaCl2。
[0026]实施例3
在实施例1的基础上，所述营养肉汤为1.5g的K2HPO4.3H20, Ig的KH2PO4,0.2g的MgSO4.7 H2O, 0.5g 的 NH4NO3,0.03g 的 CaCl2,0.03g 的 FeCl3,0.5L 去离子水，ρΗ7.5。
[0027]实施例4
在实施例1的基础上，所述营养肉汤为1.5g的K2HPO4.3H20, Ig的KH2PO4,0.2g的MgSO4.7 H2O, 0.5g 的 NH4NO3,0.03g 的 CaCl2,0.03g 的 FeCl3, 1g 的调和油，IOg 的琼脂，0.5L去尚子水，pH7.0 7.5。
[0028]实施例5
根据图1至7任一图所示，实施例1的实验装置包括了容器(1)，容器盖(2)，所述容器(O内腔设置有至少一对的样品架固定插槽(6)，所述每对样品架固定插槽(6)内固定有样品架(7)，所述样品架(7)的两侧各设有至少一个夹持装置(8)，所述每对夹持装置(8)各夹持有条状样品(9 )。
[0029]实施例6
在实施例2的基础上，所述容器盖(2)上设有左温度计(4)和右温度计(5)，容器盖(2)上还设有注液孔(3);所述容器(I)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
[0030]实施例7
在实施例2的基础上，所述容器(1)内设有三对样品架固定插槽(6)或五对样品架固定插槽(6);所述样品架固定插槽(6)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢；所述样品架(7)的两侧各设有三个夹持装置(8)或五个夹持装置(8);所述样品架(7)和夹持装置(8)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
[0031]实施例8
在实施例2的基础上，所述各夹持装置(8)由调节螺母(10)固定在样品架(7)的内侧壁上。
[0032]实施例9
在实施例2的基础上，所述各夹持装置(8)由弹簧(11)固定在样品架(7)的内侧壁上。
[0033]实施例10
在实施例2的基础上，所述一侧的夹持装置(8)较另一侧夹持装置(8)长。
【权利要求】
1.利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法，其特征在于，具体按照以下步骤实施: 步骤I，土壤采集； 在所用的天然土壤从田地和/或森林，取离地面5-15cm处土壤表层，或已经预曝置的土壤，用小铲子除去表土，收集的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标好，记录采样时间、地点、环境条件信息，以备查考； 步骤2，土壤处理； 过筛土壤，以获得尺寸小于2_的土壤微粒，并去除明显的植物材料、石头和其他惰性材料；将约20克新鲜的泥土去除明显的杂质物后，置于底部置有脱脂棉的三角形漏斗中，采用去离子蒸馏水200毫升淋洗，对淋洗液采用2000r/min离心后，采用pH计测试其pH值，三次平行测试结果取均值； 步骤3，I代富集； 称取处理好的土壤样品10g，加入已装有90mL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得I代土壤细菌混合菌群液； 步骤4，II代富集； 用移液器移取ImL第I代混合菌群液到装有IOOmL营养肉汤的250mL三角瓶里，于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h，得II代土壤细菌混合菌群液； 步骤5，降解试样的制备； 从每种样品上选取有代表性的试样，裁剪试样规格:250X50mm，裁剪试样数量为18件；所有试样使用前需在115°C下高温高压灭菌20min ； 步骤6，试样及试验液装进实验装置； 准备实验装置，洗净烘干，用封口膜包扎封住实验装置，在121°C下高温高压灭菌15min，使其在使用前保持无菌状态；在高温灭菌过的实验装置中各加入试样15件，同时加入试验液350mL，封口膜包扎封住实验装置开口处，于115°C下灭菌20min，为降解实验装置； 步骤7，生物接触作用； 用移液器移取ImL试验菌群液加入上述降解实验装置，封好实验装置开口处；将所有降解实验装置置于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡培养18_24h后，常温下静置；每3天取样后置于37°C士 2°C下，150-200r/min，摇床振荡lh，再常温下静置； 步骤8，降解过程取样； 降解过程中，用高温灭菌的镊子，将试样从降解实验装置中取出，试样用蒸馏水冲洗4遍，于40-50°C电热鼓风干燥箱中干燥后，冰箱保存，以备分析测试；每种试样每次取3个平行样，每3天取样一次；以备降解材料性能参数之测试。
2.根据权利要求1所述的利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法，其特征在于所述营养肉汤为 1.5g 的 MgSO4, Ig 的 CuSO4,0.2g 的 MnSO4,0.3g 的 Fe SO4.7Η20，Ig 的 CaCl2。
3.根据权利要求1所述的利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法，其特征在于所述营养肉汤为 1.5g 的 K2HPO4.3Η20，Ig 的 KH2PO4,0.2g 的 MgSO4.7 H2O, 0.5g 的 NH4NO3,0.03g的 CaCl2,0.03g 的 FeCl3 ,0.5L 去离子水，ρΗ7.5。
4.根据权利要求1所述的利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法，其特征在于所述营养肉汤为 1.5g 的 K2HPO4.3h20，1g 的 KH2PO4,0.2g 的 MgSO4.7 H2O, 0.5g 的 NH4NO3,0.03g的CaCl2,0.03g的FeCl3, 1g的调和油，IOg的琼脂，0.5L去离子水，ph7.0~7.5。
5.根据权利要求1-4任一项所述的利用自制菌液进行布品加速降解的检测方法所使用的实验装置，其特征在于其包括了容器(1)，容器盖(2)，所述容器(I)内腔设置有至少一对的样品架固定插槽(6)，所述每对样品架固定插槽(6)内固定有样品架(7)，所述样品架(7 )的两侧各设有至少一个夹持装置(8 )，所述每对夹持装置(8 )各夹持有条状样品(9 )。
6.根据权利要求5所述的实验装置，其特征在于所述容器盖(2)上设有左温度计(4)和右温度计(5)，容器盖(2)上还设有注液孔(3);所述容器(I)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
7.根据权利要求5所述的实验装置，其特征在于所述容器(I)内设有三对样品架固定插槽(6)或五对样品架固定插槽(6);所述样品架固定插槽(6)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢；所述样品架(7)的两侧各设有三个夹持装置(8)或五个夹持装置(8);所述样品架(7)和夹持装置(8)由惰性材料构成，惰性材料为玻璃或防腐不锈钢。
8.根据权利要求5所述的实验装置，其特征在于所述各夹持装置(8)由调节螺母(10)固定在样品架(7)的内侧壁上。
9.根据权利要求5所述的实验装置，其特征在于所述各夹持装置(8)由弹簧(11)固定在样品架(7)的内侧壁上。
10.根据权利要求5所述的实验装置，其特征在于所述一侧的夹持装置(8)较另一侧夹持装置(8)长。
【文档编号】C12M1/00GK103898187SQ201410082895
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2014年3月7日 优先权日:2014年3月7日
【发明者】吴淑焕, 严玉蓉, 张鹏, 朱锐钿, 詹志城, 王向钦, 杨欣卉, 张海亮, 苗振兴 申请人:广州市纤维产品检测院, 华南理工大学