一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺的制作方法
【专利摘要】本发明针对中草药、抗氧化肽产品在降血糖应用方面的技术不足，公开了一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，以满足日益增多的糖尿病患者对高效、安全、无害降血糖保健品的需求。本发明采用“中草药超声波乙醇浸提+谷朊粉超声波辅助酶解+好氧厌氧二步发酵工艺”显著提升了中草药活性成分提取率及谷朊粉肽中多肽含量，得到的降血糖中草药保健谷朊粉肽产品粉末状，无杂质，略带中草药味，总蛋白质中分子量在1000道尔顿以下的肽含量≥98%；谷朊粉肽的还原能力达到0.486，ABTS自由基清除能力达到2.45mmol/LTrolox，动物试验结果表明本发明产品具有较好的降血糖作用。
【专利说明】一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，属于保健食品领域。
【背景技术】
[0002] 糖尿病（diadetes mellitus)是一组以长期高血糖为主要特征的代谢综合征，它 是由于胰岛素缺乏和、或胰岛素生物作用障碍导致糖代谢紊乱，同时伴随脂肪、蛋白质、水 和电解质代谢障碍，可并发眼、肾、神经、心血管等多器官的慢性损伤。其患病率正随着人民 生活水平的提高，人口老化，生活方式的改变而迅速增加，已成为继心血管病和肿瘤之后的 第三大非传染性疾病，对社会和经济带来沉重的负担。由于对糖尿病的病因和发病机制尚 未充分明了，目前还没有一种药物能治愈糖尿病，患者需终身服药维持血糖平衡。近二十年 来，保健食品发展非常迅猛，逐渐被人们所重视。具有辅助降血糖功能的保健食品对糖尿病 患者生活质量的改善十分有益，受到越来越多患者的青睐。
[0003] 中草药资源是我国传统文化的瑰宝，因其功效显著、绿色、安全、无副作用，在保健 食品领域中的应用愈加广泛。研究结果表明，利用中草药研制的保健酒含有丰富的营养成 分，不但保留了中草药中原有的多糖、黄酮、氨基酸、钾钙等微量元素、维生素等活性营养成 分，而且在发酵过程中产生了大量的糖、蛋白质、人体必需氨基酸等营养成分，长期合理饮 用能够调节人体机能，增强免疫力、滋补强身、延年益寿等功效。近年来中草药被越来越多 的用于预防和治疗糖尿病，但其应用效果亟需进一步提升。
[0004] 生物活性肽（Bioactive peptides, BAP)来源广泛，目前已成为世界范围内的研 究热点，特别是抗氧化肽，它具有消除自由基、抑制或减缓氧化反应的特点，可用于改善食 品品质、延长食品的保质期，减轻生物体内自由基对机体的损伤等。近年来，由于化学抗氧 化添加剂的不安全性，高效低毒的天然食品抗氧化剂已成为目前研究的一大热点。抗氧化 肽可以抑制体内自由铁离子、血红蛋白、脂氧合酶和体外单线态氧催化的脂肪酸败作用，也 能抑制多酚氧化酶（Polyphenol Oxidase, ΡΡ0)的活性以及可直接与ΡΡ0的催化产物醌作 用阻止黑色多聚氧化物的形成，降低酶促反应的速度；同时还具有重金属清道夫和过氧化 氢分解促进剂作用，可降低自氧化速率，减少脂肪过氧化氢含量，减少自由基生成，在动物 饲料和人类食品市场中具有巨大的开发前景。
【发明内容】
[0005] 本发明针对中草药、抗氧化肽产品在降血糖应用方面的技术不足，提供一种降血 糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，满足日益增多的糖尿病患者对高效、安全、无害降血糖 保健品的需求。
[0006] 本发明上述目的是通过以下技术方案予以实现的： 本发明提供一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，其特征在于具体包括以下步 骤： (1)复方中草药的制备：按照黄苗15?20份、枸杞15?18份、葛根10?14份、绞股 蓝10?15份、桑堪8?10份、甘草8?10份、何首乌8?10份、生地6?10份、人参6? 10份、山茱萸6?10份、白术4?8份、女贞子5?8份、茯苓4?6份、知母4?6份、罗 布麻4?6份、淫羊藿3?5份、银杏叶2?3份、灵芝2?3份的配方准确称量中草药，将 其粉碎至40?60目，混合均匀，制得复方中草药； (2) 超声波辅助降解：向复方中草药粉剂中加入5?10倍的无水乙醇，在超声波辅助 作用下，回流降解20?30min ; (3) 减压浓缩：减压浓缩浸提物至膏状物，回收无水乙醇； (4) 谷朊粉预处理：按谷朊粉质量比3?5倍的比例向谷朊粉中加水，搅拌均匀； (5) 加酶：按谷朊粉质量比1?2%、0. 5?1%的比例分别加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶， 调节ρΗ7· 0?8. 0 ; (6) 超声波辅助酶解：控制酶解温度40?50°C条件下，在超声波辅助作用下 (400w, 25kHz)，酶解 30 ?60min ; (7) 液化：按谷朊粉质量比2?3%。的比例分别加入淀粉酶，调节pH6. 0?7. 0, 60°C左 右保温3?4h ; (8) 糖化：按谷朊粉质量比3?5%。的比例分别加入糖化酶，控制40°C左右水解1? 2h ； (9) 配制培养基：向水解后的谷朊粉中加入等质量的中草药浸提膏，并加入3?5% (相 对于谷朊粉质量比，下同)糖蜜、2?3%玉米浆、1. 5?2%尿素、1?1. 5%硫酸铵、0. 1?0. 2% 磷酸二氢钾，调整初始pH为7. 0左右； (10) 灭菌：121°C灭菌 30min ; (11) 产朊假丝酵母、酿酒酵母活化：将产朊假丝酵母、酿酒酵母分别接到Yro培养基 中，30°C，180r/min转速下恒温摇瓶24小时；然后以1:100比例，将种子液接到YH)培养基 中，得到酿酒酵母和产朊假丝酵母液体种子； (12) 好氧发酵：将产朊假丝酵母、酿酒酵母按2?3%、1?2%(相对谷朊粉质量比）接 种比例接种至培养基，28°C左右培养12?24h ; (13) 厌氧发酵：将固体乳酸菌粉按1?2%(相对谷朊粉质量比）的接种比例接种至培 养基，26?30°C厌氧培养14h左右； (14) 离心：发酵液离心得发酵上清液； (15) 吸附：按谷朊粉质量的1?2%加入硅藻土，50?60°C搅拌吸附1?2h，过滤，除 去娃藻土； (16) 脱盐：采用膜分离技术进行脱盐； (17) 浓缩：真空低压浓缩； (18) 喷雾干燥：将浓缩液进行喷雾干燥得到降血糖中草药保健谷朊粉肽。
[0007] 本发明提供一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，得到的降血糖中草药 保健谷朊粉肽产品粉末状，无杂质，略带中草药味，总蛋白质中分子量在1000道尔顿以下 的肽含量彡98% ;谷朊粉肽的还原能力达到0· 486, ABTS自由基清除能力达到2. 45mmol/L Trolox〇
[0008] 试验测定本发明降血糖中草药保健谷朊粉肽的降血糖能力，试验方法及试验结果 如下： 试验方法：取小鼠60只，按150mg/kg体重剂量尾静脉注射四氧嘧啶溶液，在四氧嘧啶 作用下，破坏小鼠胰岛β细胞，造成胰岛素发生障碍，形成实验性糖尿病小鼠模型。糖尿病 小鼠造模1周后，随机分为以下5组，每组12只小鼠，另一组为造模实验对照组，饲喂标准 基础饲料；试验1组为饲喂本发明产品组，试验2组饲喂本申请复方中草药浸提膏状物组， 试验3组饲喂谷朊粉肽组，试验4组饲喂与本申请中草药比例不同中草药谷朊粉肽组；另 设未造模的空白对照组，分别对各组动物进行尾静脉取血以邻甲苯胺法测定血糖值并做记 录，分别给空白对照组、造模对照组饲喂符合美国官方分析化学师协会（AOAC)动物营养标 准的基础饲料，给试验1-4组分别饲喂添加含有添加剂的标准基础饲料，饲养环境同前。实 验3周后，禁食10h，分别断尾取血测定血糖值。
[0009] 试验结果：
【权利要求】
1. 一种降血糖中草药保健谷朊粉肽的制备工艺，其特征在于具体包括以下步骤： (1) 复方中草药的制备：按照黄苗15?20份、枸杞15?18份、葛根10?14份、绞股 蓝10?15份、桑堪8?10份、甘草8?10份、何首乌8?10份、生地6?10份、人参6? 10份、山茱萸6?10份、白术4?8份、女贞子5?8份、茯苓4?6份、知母4?6份、罗 布麻4?6份、淫羊藿3?5份、银杏叶2?3份、灵芝2?3份的配方准确称量中草药，将 其粉碎至40?60目，混合均匀，制得复方中草药； (2) 超声波辅助降解：向复方中草药粉剂中加入5?10倍的无水乙醇，在超声波辅助 作用下，回流降解20?30min ; (3) 减压浓缩：减压浓缩浸提物至膏状物，回收无水乙醇； (4) 谷朊粉预处理：按谷朊粉质量比3?5倍的比例向谷朊粉中加水，搅拌均匀； (5) 加酶：按谷朊粉质量比1?2%、0. 5?1%的比例分别加入木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶， 调节ρΗ7· 0?8. 0 ; (6) 超声波辅助酶解：控制酶解温度40?50°C条件下，在超声波辅助作用下 (400w, 25kHz)，酶解 30 ?60min ; (7) 液化：按谷朊粉质量比2?3%。的比例分别加入淀粉酶，调节pH6. 0?7. 0, 60°C左 右保温3?4h ; (8) 糖化：按谷朊粉质量比3?5%。的比例分别加入糖化酶，控制40°C左右水解1? 2h ； (9) 配制培养基：向水解后的谷朊粉中加入等质量的中草药浸提膏，并加入3?5% (相 对于谷朊粉质量比，下同)糖蜜、2?3%玉米浆、1. 5?2%尿素、1?1. 5%硫酸铵、0. 1?0. 2% 磷酸二氢钾，调整初始pH为7. 0左右； (10) 灭菌：121°C灭菌 30min ; (11) 产朊假丝酵母、酿酒酵母活化：将产朊假丝酵母、酿酒酵母分别接到Yro培养基 中，30°C，180r/min转速下恒温摇瓶24小时；然后以1:100比例，将种子液接到YPD培养基 中，得到酿酒酵母和产朊假丝酵母液体种子； (12) 好氧发酵：将产朊假丝酵母、酿酒酵母按2?3%、1?2%(相对谷朊粉质量比）接 种比例接种至培养基，28°C左右培养12?24h ; (13) 厌氧发酵：将固体乳酸菌粉按1?2%(相对谷朊粉质量比）的接种比例接种至培 养基，26?30°C厌氧培养14h左右； (14) 离心：发酵液离心得发酵上清液； (15) 吸附：按谷朊粉质量的1?2%加入硅藻土，50?60°C搅拌吸附1?2h，过滤，除 去娃藻土； (16) 脱盐：采用膜分离技术进行脱盐； (17) 浓缩：真空低压浓缩； (18) 喷雾干燥：将浓缩液进行喷雾干燥得到降血糖中草药保健谷朊粉肽。
【文档编号】A23L1/29GK104187682SQ201410493150
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月25日 优先权日:2014年9月25日
【发明者】董书阁, 侯文燕, 王金波, 董静静, 侯文杰, 段智岗 申请人:青岛嘉瑞生物技术有限公司