一种产朊酵母还原生产碘苯基丙酸甲酯的方法
【专利摘要】一种细胞法生产手性溴苯基丙酸甲酯的方法。一种挪威假丝酵母细胞直接催化还原制备手性(-)-(2R,3S)-3-（4-溴苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯的方法，反应罐中加入磷酸盐缓冲液，加入苎麻纱布调控底物、产物浓度，用酵母细胞进行生物还原反应，产品收率高，对映体过量率高，具有很好应用价值。
【专利说明】一种产朊酵母还原生产碘苯基丙酸甲酯的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于制药工程【技术领域】，特别涉及到产朊假丝酵母细胞生物还原制备手 性医药中间体（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯的技术。
【背景技术】
[0002] 羟基手性酯是合成手性药物、精细化学品、农药品和其他特殊材料的重要中间体。 生物催化羰基化合物的不对称还原具有环境友好、条件温和、选择性高等优点，作为绿色 高效制备羟基手性酯的优先途径，被越来越多地应用于生产一些高附加值的羟基手性酯。 生物催化制备羟基手性酯具有很好的应用前景。
[0003] 生物催化具有催化效率高、选择性强、条件温和、环境友好等突出优点，是可持续 发展过程中替代和拓展传统有机化学合成的重要方法。其中手性拆分和不对称合成是生物 催化最具吸引力的应用领域。在作为生物催化剂的六大类酶中，水解酶能够催化动力学拆 分外消旋体得到手性产品，在工业生物催化中一直扮演着重要角色。近几年来，氧化还原 酶在工业上的应用得到了迅速增长。目前，采用水解酶动力学拆分法、生物还原法和生物 氧化法工业制备光学活性手性化合物的比例为4:2:1。
[0004] 生物还原法相对于动力学拆分法而言，最大的优势在于理论收率可达100%，原子 经济性好。然而生物还原反应需要辅酶或辅因子的参与，一定程度上限制了其应用。由于 辅酶依赖性的缘故，生物还原反应中多釆用整细胞作为催化剂，实现体内辅酶循环再生的 同时免去了酶的分离纯化步骤。
[0005] (_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羟基-2-甲基丙酸甲酯是合成手性药物、精细 化学品、农药品的重要手性砌块，由于有2个手性中心，使得化学合成较为困难，成本高。本 发明将采用生物催化制备（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯。
【发明内容】
[0006] 本发明采用产朊假丝酵母细胞催化制备（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3_羟 基-2-甲基丙酸甲酯，反应式如下：
【权利要求】
1. 一种产朊假丝酵母细胞生物还原制备（-)-(2S，3S)-3-(4-碘苯基)-3-羟基-2-甲 基丙酸甲酯的方法，其特征在于反应罐中加入磷酸盐缓冲液，装料系数为0.6-0. 7, pH为 6. 2,加入吸附了底物的硅藻土，使底物2-(4-氟苯甲酰)-2-丙烯酸甲酯添加量为80-90 g/ L，麦芽浸膏22-26 g，木糖12-13 g/L，直链的10碳醇聚氧乙烯醚为16-18g/L，121°C高压灭 菌30分钟；冷却至30-31°C时，加入湿酵母细胞使浓度为29-32g/L，通气比为0. 17-0. 2V/ (V分钟)，进行生物还原反应，反应时间为81-86小时；反应结束后，分别滤出细胞、硅藻土， 用乙酸乙酯萃取反应液、萃取硅藻土，合并乙酸乙酯萃取液和萃取硅藻土的乙酸乙酯，蒸出 乙酸乙酯，得到产物（_)-(2S，3S)-3- (4-碘苯基）-3-羟基-2-甲基丙酸甲酯，反应转化 率94-96 %，产品收率92-94 %，对映体过量率97-98 %。
2. 权利要求1所述的方法，其特征在于湿酵母细胞制备过程如下：产朊假丝酵母经斜 面、摇瓶、种子罐培养得到种子液；发酵罐加入培养液，装料系数为〇. 6-0. 7,121°C高压灭 菌30分钟，冷却至27-28°C，将产朊假丝酵母种子液接种至发酵罐，接种比例为6-6. 5%，通 气比为1. 7-1. 8V/ (V分钟)，27-28°C培养21-23小时，用过滤式离心机离心得到湿酵母细 胞，用作生物还原反应催化剂。
3. 权利要求1所述的方法，其特征在培养液成份为：葡萄糖20-22 g/L，麦芽浸膏23-25 g/L，木糖 6-7 g/L，（NH4)2S04 4. 8-5 . 3 g/L，KH2P04 9-11 g/L，MgS04.7H20 0.3-0.4 g/L， CaCl2 0· 35-0. 4 g/L,硫酸铵 0· 2-0. 25g/L，硫酸镁 0· 3-0. 4g/L, ρΗ6· 2。
4. 权利要求1所述的方法，其特征在于所述吸附了底物的硅藻土制作方法为，将底物 溶于乙酸乙酯，底物与乙酸乙酯的比率为0. 5 :2,得到底物的乙酸乙酯溶液，用硅藻土吸收 此溶液，然后，烘干、回收乙酸乙酯，即得到吸附底物的硅藻土，调节底物与硅藻土用量，使 得底物与硅藻土的质量比率为〇. 37-0. 4。
【文档编号】C12P7/62GK104263767SQ201410518174
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年10月1日 优先权日:2014年10月1日
【发明者】张媛媛, 梁方方, 张银, 刘慧 , 王美玲, 隋洪南, 刘均洪 申请人:青岛科技大学