一种高效提取猴头菇多糖的方法
【专利摘要】一种高效提取猴头菇多糖的方法，该提取方法具体步骤为：（1）材料预处理；（2）微波提取；（3）超声提取；（4）酶解提取；（5）超滤分离；（6）真空干燥。本发明的一种高效提取猴头菇多糖的方法，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，最后进行超滤分离，使其收率高、纯度好。
【专利说明】一种高效提取猴头菇多糖的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种多糖提取方法，特别是一种高效提取猴头菇多糖的方法。
【背景技术】
[0002]猴头菇又叫猴头菌，原是一种深藏于密林中的珍贵食用菌。子实体圆而厚，常悬于树干上，布满针状菌刺，形状极似猴子的头，故而得名猴头菇。猴头菇，性平味甘，人胃经，有助于消化，利五脏，扶正固本，具有健脑提神的功效，有“素中荤”之称，长期以来人们把它同“熊掌，海参，鱼翅”共同列为四大名菜，或把它与燕窝相提并论，民间谤语有“多食猴头，返老还童”之说闭。《临海水土异物志》中记载“民皆好淡猴头羹，虽五肉膝不能及之”其俗称为“宁负千石粟不愿负猴头羹”都说明了人们对猴头菇的喜爱。
[0003]目前，猴头菇的药用价值引起了国内外学者的广泛关注。猴头菇富含多糖体、多肤等物质，能抑制癌细胞中遗传物质的合成，从而预防和治疗消化道癌症和其他恶性肿瘤；此外，猴头菇中含有多种氨基酸等物质，能够提高肌体免疫力，延缓衰老。
[0004]猴头菇的有效药理成分尚未完全研宄清楚，到目前为止已从猴头菌中分离得到许多化合物。但已知有确切疗效的是猴头菇多，猴头菇多糖是最主要的活性物质，多糖具有广泛的生物学活性，如免疫调节剂、抵抗肿瘤增殖、抵抗病原感染、降低糖尿病患者的血糖浓度、降低患者血脂浓度等的作用。
[0005]猴头菇多糖目前已制成各种药物及保健品，深受人们喜爱。猴头多糖应用前景广泛，已吸引了越来越多研宄者的注意。进一步开展猴头菇多糖的分离纯化等实验研宄，对药物和食品开发以及猴头菇资源的利用都具有重要的意义。
[0006]目前常用的猴头菇多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量，也比较多，有一定的适用范围，所以本发明在水提的基础上，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提高了多糖的提取含量。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种高效提取猴头菇多糖的方法，复合微波、超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，最后进行超滤分离，使其收率高、纯度好。
[0008]本发明的目的通过以下技术方案来实现:一种高效提取猴头菇多糖的方法，该提取方法具体步骤为:
(1)材料预处理:取干燥猴头菇，粉碎，过50?120目筛，得干燥猴头菇粉末，按干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5?35的重量配比，加入蒸馏水，于50°C?65°C得温度条件下，浸泡1-5小时，得到待提取物；
(2)微波提取:取步骤(I)的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为500-1000W，处理时间为5_15min ；
(3)超声提取:把步骤(2)微波处理后的物质置于超声波中，在20?60°C的温度条件下，用5?20KHz超声波萃取0.5h?2.0h，过滤，得到滤液I ;
(4)酶解提取:调节滤液I的pH为3?6，加入足量纤维素酶，在30?60°C的温度条件下，水解0.5h?3.0h,离心分离取滤液2，调滤液2的pH为3?6，加入足量果胶酶，在30?60°C的温度条件下，水解0.5h?1.5h，离心分离取滤液3，调滤液3的pH为3?6，加入足量木瓜蛋白酶，在30?60°C的温度条件下，水解1.0h?2.0h,离心分离取滤液4，备用；
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9，加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%双氧水，于40-45°C的温度下搅拌0.5h-lh，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量1000道尔顿以上的组分；
(6)真空干燥:取步骤(5)中得到的分子量1000道尔顿以上的组分，在真空度-0.095MPa，干燥温度20_50°C的条件下，干燥20min，得到猴头菇多糖。
[0009]所述纤维素酶，为酶治性为10000?20000 u/g的纤维素酶，质量为滤液I质量的
0.5-1.0 倍。
[0010]所述果胶酶，为酶活性为15000?25000 u/g的果胶酶，质量为滤液2质量的
1.0-1.5 倍。
[0011]所述木瓜蛋白酶，为酶活性为800000-1000000 u/g的木瓜蛋白酶，质量为滤液3质量的0.5-1.5倍。
[0012]本发明的有益效果:
1、本发明采用微波、超声的提取方法，微波可穿透萃取介质，直接作用于物料内部，使内部温度迅速上升，增大目标物质在介质中的溶解度，质量稳定，所制得产品纯度高，生物活性尚;
2、针对猴头菇子实体本身含有纤维素、果胶、蛋白质等杂质的干扰，筛选适用于此的纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶反应体系，使杂质充分脱除，猴头菇粗多糖得率可达15.3% ;
3、采用双氧水脱色，条件温和，不易损坏多糖结构，且副产物为水，绿色环保，符合保健食品的生产要求；
4、采用聚砜膜，将切向流过滤技术应用到猴头菇多糖的制备中，在过滤的同时也对聚砜膜表面冲刷，使膜表面不会形成杂质大分子凝胶层，从而确保稳定，快速的超滤速度，大大缩短工艺时间，便于工业化生产。
【具体实施方式】
[0013]实施例1
(I)材料预处理:取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到)，粉碎，过80目筛，得猴头菇干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50°C?65°C下，侵泡4小时；
(2 )微波提取:取步骤(I)的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为500W，处理时间为 1min ；
(3)超声提取:接着把步骤(2)的物质放入超声波中，20?60°C下用5?20KHz超声波萃取0.5h，过滤，取滤液I ;滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取； (4)酶解提取:调节滤液pH为4.5，加入足量纤维素酶，30?60°C水解0.5h，离心取滤液2调pH为4.5，加入足量果胶酶，30?60°C水解0.5h，离心取滤液3调pH为4.5，加入足量木瓜蛋白酶，30?60 °C水解1.0h，离心，取滤液4 ;
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9，加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%，双氧水，于40-45°C保温搅拌0.5h-lh，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量1000道尔顿以上的组分；
(6)真空干燥:在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50°C下，干燥20min，得到猴头菇多糖。
[0014]提取的猴头菇多糖得率为19.05%。
[0015]实施例2
(I)材料预处理:取干燥猴头菇(可由新鲜猴头菇经自然风干得到)，粉碎，过80目筛，得猴头菇干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50°C?65°C下，侵泡4小时；
(2 )微波提取:取步骤(I)的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为800W，处理时间为 1min ；
(3)超声提取:接着把步骤(2)的物质放入超声波中，20?60°C下用5?20KHz超声波萃取1.0h，过滤，取滤液I ;滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取；
(4)酶解提取:调节滤液pH为4.5，加入足量纤维素酶，30?60°C水解1.0h，离心取滤液2调pH为4.5，加入足量果胶酶，30?60°C水解1.0h,离心取滤液3调pH为4.5，加入足量木瓜蛋白酶，30?60°C水解1.0h5，离心，取滤液4 ；
(5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9，加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%，双氧水，于40-45°C保温搅拌0.5h-lh，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量1000道尔顿以上的组分；
(6)真空干燥:在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50°C下，干燥20min，得到猴头菇多糖。
[0016]提取的猴头菇多糖得率为21.32%。
【权利要求】
1.一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于:该提取方法具体步骤为: (1)材料预处理:取干燥猴头菇，粉碎，过50?120目筛，得干燥猴头菇粉末，按干燥猴头菇粉末与蒸馏水1:5?35的重量配比，加入蒸馏水，于50°C?65°C得温度条件下，浸泡1-5小时，得到待提取物； (2)微波提取:取步骤(I)的待提取物，放入微波中，调节微波的功率为500-1000W，处理时间为5_15min ； (3)超声提取:把步骤(2)微波处理后的物质置于超声波中，在20?60°C的温度条件下，用5?20KHz超声波萃取0.5h?2.0h，过滤，得到滤液I ; (4)酶解提取:调节滤液I的pH为3?6，加入足量纤维素酶，在30?60°C的温度条件下，水解0.5h?3.0h,离心分离取滤液2，调滤液2的pH为3?6，加入足量果胶酶，在30?60°C的温度条件下，水解0.5h?1.5h，离心分离取滤液3，调滤液3的pH为3?6，加入足量木瓜蛋白酶，在30?60°C的温度条件下，水解1.0h?2.0h,离心分离取滤液4，备用； (5)超滤分离:调节滤液4的PH值为8-9，加入体积为滤液4体积0.5-1.0倍的30%双氧水，于40-45°C的温度下搅拌0.5h-lh，以5k的聚砜膜超滤，收集分子量1000道尔顿以上的组分； (6)真空干燥:取步骤(5)中得到的分子量1000道尔顿以上的组分，在真空度-0.095MPa，干燥温度20_50°C的条件下，干燥20min，得到猴头菇多糖。
2.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于:所述纤维素酶，为酶治性为10000?20000 u/g的纤维素酶，质量为滤液I质量的0.5-1.0倍。
3.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于:所述果胶酶，为酶活性为15000?25000 u/g的果胶酶，质量为滤液2质量的1.0-1.5倍。
4.根据权利要求1所述的一种高效提取猴头菇多糖的方法，其特征在于:所述木瓜蛋白酶，为酶活性为800000-1000000 u/g的木瓜蛋白酶，质量为滤液3质量的0.5-1.5倍。
【文档编号】C12P19/14GK104480162SQ201410700484
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年11月28日 优先权日:2014年11月28日
【发明者】戴路 申请人:哈尔滨墨医生物技术有限公司