一种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂及其应用。它是以鼠李糖乳杆菌作为菌种接种于添加了有机硒转化促进剂的特定培养基中；培养15-21 h后向其中加入无机硒源，并继续培养27-36 h；培养结束后经干燥获得富硒乳酸菌制剂。该制剂中乳酸菌数在109cfu/g以上；含硒量为5.2-22.8 mg/kg,有机硒含量在50%以上。将该制剂以2-5%的添加量添加于肉鸡饲料中，可显著改善肉鸡肌肉肉色指标亮度、红度值以及肌肉组织含硒量和抗氧化能力，能够有效发挥提高肉鸡肌肉肉色的作用。该制剂在提高动物肌肉肉品质方面具有广阔的应用前景。
【专利说明】-种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及食品生物技术和饲料添加剂生产领域，具体地说涉及一种提高肉鸡肌 肉肉色的富硒乳酸菌制剂的制备方法，以及该富硒乳酸菌制剂的应用。
【背景技术】
[0002] 随着人民生活水平和保健意识的提高，人们对食物的追求已经从量的要求上升到 对质的要求，对于动物性食品的要求更是如此。作为膳食中重要组成部分的畜禽肉类，不仅 要在数量上满足人民群众的需要，更要在口感、肉色、滴水损失、营养组分等肉品"质量"方 面满足人民更高层次的需求。通过各种途径改善畜禽肉品质是当今食品科学和动物科学领 域研究的热点之一。
[0003] 肉品质是有关鲜肉或加工肉的外观、口感和营养特性有关的一些理化指标，肉色 是其中最重要的指标之一。目前在畜禽饲养阶段提高畜禽肉色的主要手段包括在饲料中添 加维生素和矿物质、益生素、微生态制剂、中草药添加剂、不饱和脂肪酸和抗氧化剂等。
[0004] 硒是动物和人所必需的微量元素。硒的抗氧化、提高机体免疫力和抗病力，调节机 体代谢，影响动物和人的繁育机能，抗肿瘤，延缓衰老，拮抗有毒元素等多种生物学功能已 为人们所共知。硒作为体内重要的抗氧化剂，对肉品质亦有一定的提高作用。研究认为，肉 鸡饲喂硒可以降低肉鸡肌肉的滴水损失，提高肉的嫩度，且有机硒比无机硒效果更明显；另 有研究表明硒的添加能改善肉色，减少白肌的发生。
[0005] 部分乳酸菌具有改善肠胃功能、提高免疫力、抑制大肠杆菌和沙门氏菌等有害菌、 降低血液胆固醇、调节血脂等诸多作用。研究表明，某些乳酸菌不仅具备上述生理功能，还 能够直接或者间接对畜禽产品的肉质产生影响。乳酸菌对鸡肉肉品质的提高主要包括提高 肉鸡肌肉中不饱和脂肪酸的含量，降低肌肉失水率、提高肉的嫩度、改善肉色等。
[0006] 综上所述，硒和某些乳酸菌能够对畜禽肉类的肉品质产生一定影响。国内外已有 单独应用硒或乳酸菌来提高肉色品质的研究报道；但尚未见到将硒和乳酸菌联合应用来提 高肉鸡肌肉肉色的专利或报道，更未有通过乳酸菌的生物转化作用将培养液中无机硒转化 为有机硒并制成富硒乳酸菌制剂进而应用于提高肉鸡肌肉肉色的专利或报道。
【发明内容】
[0007] 本发明的目的是提供一种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂的生产技术以及 该富硒乳酸菌制剂的应用方法。
[0008] 本发明公开了一种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂，其特征在于： 该制剂是利用鼠李糖乳杆菌在添加了有机硒转化促进剂的特定培养基中生长并将培 养基中的无机硒转化为有机硒的活菌制剂；该制剂中的鼠李糖乳杆菌数在l〇9cfu/g以上； 含硒量为5. 2-22. 8 mg/kg，其中有机硒含量在50%以上； 所述的有机硒转化促进剂指的是：每升培养基中加入甘露低聚糖1-5 g，甘露糖1-3 g， 果糖 1-3 g，赖氨酸 0.01-0. 03 g，蛋氨酸 0.01-0· 05 g; 特定培养基的组成是：葡萄糖50-150 g/L，酵母粉5-20 g/L，蛋白胨10-30 g/L，牛肉 膏 15-30 g/L，K2HPO4 2-4g/L，MnS04.4H20 0.01-0.2 g/L，柠檬酸二铵 1-5 g/L，乙酸钠 2-8 g/L，MgSO4 · 7H20 0· 2-0. 8 g/L，吐温 80 1-2 mL/L，番茄汁 50-150 mL/L。
[0009] 本发明进一步公开了提高肉鸡肌肉品质的富硒乳酸菌制剂的制备方法，主要按如 下的步骤进行： (1) 菌种：鼠李糖乳杆菌（Z. 购自中国科学院微生物研究所，由本实验室保 存； (2) 菌种活化培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g， 柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，琼脂 粉 20 g，水 1000 mL，调 ρΗ=6·2-6·4;121 °C 高压蒸汽灭菌 20-30 min，备用； (3) 种子培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g，朽1檬 酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，水 1000 mL，调 pH=6. 2-6. 4 ;121 °C 高压蒸汽灭菌 20-30 min,备用； (4) 制剂生产培养基：葡萄糖50-150 g/L，酵母粉5-20 g/L，蛋白胨10-30 g/L，牛肉膏 15-30 g/L，K2HP04 2-4 g/L，MnS04.4H20 0.01-0.2 g/L，柠檬酸二铵 1-5 g/L，乙酸钠 2-8g/ L，MgSO4 · 7H20 0· 2-0. 8 g/L，吐温 80 1-2 mL/L，番茄汁 50-150 mL/L。
[0010] (5)无机硒源：配制含硒量为0· 5-2 mg/ml的亚硒酸钠溶液，121°C高压蒸汽灭菌 20-30min，备用； (6)有机硒转化促进剂：每升培养基中加入甘露低聚糖1-5 g，甘露糖1-3 g，果糖1-3 g，赖氨酸 0.01-0. 03 g，蛋氨酸 0.01-0. 05 g。
[0011] (7)菌种的活化与种子液的获得：将保存的鼠李糖乳杆菌接种于菌种活化培养基 中，37°C，培养32-48 h ;如此连续活化3?5次后，再接种于种子培养基中，37°C，培养32-48 h，得到鼠李糖乳杆菌种子液，其cfu数在l〇7ml以上； (8)制剂生产：将鼠李糖乳杆菌种子液按照2-5%接种量接种于制剂生产培养基中，培 养15-21 h后将无机硒源加入培养基中，使培养基中硒浓度为5-10 mg/L，并继续培养27-36 h;整个培养过程中培养温度为35-39 °C，通气量为0.02-0. 04 m3/h，转数为70-80 r/min， 罐压为0. 04Mpa，培养结束时，将富硒乳酸菌培养液用玉米淀粉吸附(玉米淀粉质量与培养 基体积比为0.5 kg/L - I kg/L)，在32-42 °C干燥后分装，得到富硒乳酸菌制剂；该制剂中 乳酸菌数在109cfu/g以上，含硒量为5. 2-22. 8 mg/kg，其中有机硒含量在50%以上。
[0012] 本发明进一步公开了提高肉鸡肌肉品质的富硒乳酸菌制剂的使用方法，其特征在 于所述的富硒乳酸菌制剂按照2%-5%的添加量添加到肉鸡基础日粮中。本发明建议的肉鸡 的饲养管理方法及基础日粮的配制可根据国家相关法规和饲养标准确定；具体使用方法为 将富硒乳酸菌制剂以2%_5%的添加量添加于基础日粮中连续饲喂，自由采食和饮水，常规 管理和免疫。
[0013] 本发明更进一步公开了提高肉鸡肌肉肉色品质的富硒乳酸菌制剂在改善肉鸡肌 肉肉色、提高肉鸡肌肉组织含硒量和抗氧化能力方面的应用。本发明的实验结果表明： (1)该富硒乳酸菌制剂可显著降低肉鸡肌肉肉色指标亮度（L)值、提高肉鸡肌肉肉色指 标红度（a)值，说明该制剂可显著提高肉鸡肌肉肉色。
[0014] (2)该富硒乳酸菌制剂可显著提高肉鸡肌肉组织含硒量，因而提高了肉鸡肌肉的 营养价值。
[0015] (3)该富硒乳酸菌制剂可显著提高肉鸡肌肉组织抗氧化能力，有助于延长肉鸡肌 肉的保质期。
[0016]
【具体实施方式】
[0017] 下面结合实施例说明本发明，这里所述实施例的方案，不限制本发明，本领域的专 业人员按照本发明的精神可以对其进行改进和变化，所述的这些改进和变化都应视为在本 发明的范围内，本发明的范围和实质由权利要求来限定。其中所用到的各种试剂均有市售。
[0018] 实施例1 提高肉鸡肌肉品质的富硒乳酸菌制剂的制备方法： (1) 菌种：鼠李糖乳杆菌（Z. 购自中国科学院微生物研究所，由本实验室保 存； (2) 菌种活化培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g， 柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，琼脂 粉 20 g，水 1000 mL，调 pH=6. 2-6. 4 ;121 °C 高压蒸汽灭菌 20 min，备用； (3) 种子培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g，朽1檬 酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，水 1000 mL，调pH=6. 2-6. 4 ;121 °C高压蒸汽灭菌20 min,备用； (4) 制剂生产培养基：葡萄糖150 g/L，酵母粉5/L，蛋白胨10 g/L，牛肉膏15 g/L， K2HPO4 2 g/L，MnS04*4H20 0.01 g/L，柠檬酸二铵 I g/L，乙酸钠 2 g/L，MgS04*7H20 0.2 g/ L，吐温 80 I mL/L，番茄汁 150 mL/L。
[0019] (5)无机硒源：配制含硒量为0. 5 mg/ml的亚硒酸钠溶液，121°C高压蒸汽灭菌 20min，备用； (6)有机硒转化促进剂：在培养开始时每升培养基中加入甘露低聚糖I g，甘露糖I g， 果糖I g，赖氨酸0.01 g，蛋氨酸〇. Olg。
[0020] (7)菌种的活化与种子液的获得：将保存的鼠李糖乳杆菌接种于菌种活化培养基 中，37°C，培养32 h ;如此连续活化3次后，再接种于种子培养基中，37°C，培养32 h，得到鼠 李糖乳杆菌种子液，其cfu数在l〇7ml以上； (8)制剂生产：将鼠李糖乳杆菌种子液按照2%接种量接种于制剂生产培养基中，培养 15 h后将无机硒源加入培养基中，使培养基中硒浓度为5 mg/L，并继续培养27 h;整个培养 过程中培养温度为35°C，通气量为0. 02 m3/h，转数为70 r/min，罐压为0. 04 Mpa，培养结束 时，将富硒乳酸菌培养液用玉米淀粉吸附(玉米淀粉质量与培养基体积比lkg/L)，在32°C 干燥后分装，得到富硒乳酸菌制剂；该制剂中乳酸菌数为9. 8 X 109cfu/g，含硒量为5. 2 mg/ kg，其中有机硒含量为69. 37%。
[0021] 实施例2 提高肉鸡肌肉品质的富硒乳酸菌制剂的制备方法： (1)菌种：鼠李糖乳杆菌（Z. 购自中国科学院微生物研究所，由本实验室保 存； (2) 菌种活化培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g， 柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，琼脂 粉 20 g，水 1000 mL，调 pH=6. 2-6. 4; 121 °C 高压蒸汽灭菌 30 min,备用； (3) 种子培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g，朽1檬 酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，水 1000 mL，调pH=6. 2-6. 4 ;121 °C高压蒸汽灭菌30 min,备用； (4) 制剂生产培养基：葡萄糖50 g/L，酵母粉20 g/L，蛋白胨30 g/L，牛肉膏30 g/L， K2HPO4 4 g/L，MnS04.4H20 0.2 g/L，柠檬酸二铵 5 g/L，乙酸钠 8 g/L，MgS04.7H20 0.8 g/ L，吐温 80 2 mL/L，番茄汁 50 mL/L。
[0022] (5)无机硒源：配制含硒量为2 mg/ml的亚硒酸钠溶液，121 °C高压蒸汽灭菌 30min，备用； (6)有机硒转化促进剂：在培养开始时每升培养基中加入甘露低聚糖5 g，甘露糖3 g， 果糖3 g，赖氨酸0.03 g，蛋氨酸0.05 g。
[0023] (7)菌种的活化与种子液的获得：将保存的鼠李糖乳杆菌接种于菌种活化培养基 中，37°C，培养48 h ;如此连续活化5次后，再接种于种子培养基中，37°C，培养48 h，得到鼠 李糖乳杆菌种子液，其cfu数在l〇7ml以上； (8)制剂生产：将鼠李糖乳杆菌种子液按照5%接种量接种于制剂生产培养基中，培养 21 h后将无机硒源加入培养基中，使培养基中硒浓度为10 mg/L，并继续培养36 h;整个培 养过程中培养温度为39°C，通气量为0. 04 m3/h，转数为80 r/min，罐压为0. 04 Mpa，培养 结束时，将富硒乳酸菌培养液用玉米淀粉吸附(玉米淀粉质量与培养基体积比〇. 5kg/L)，在 42°C烘干后分装，得到富硒乳酸菌制剂；该制剂中乳酸菌数为2. 86 X IO9Cfu /g，含硒量为 22. 8 mg/kg，其中有机硒含量为52. 39%。
[0024] 实施例3 应用实例 天津市静海县某肉鸡场 1、富硒乳酸菌制剂的制备： (1)菌种：鼠李糖乳杆菌（Z. 购自中国科学院微生物研究所，由本实验室保 存。
[0025] (2)菌种活化培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠 5 g，柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0.05 g，K2HPO4 2 g，琼脂粉 20 g，水 1000 mL，调 ρΗ=6· 2-6. 4; 121 °C 高压蒸汽灭菌 20 min,备用。
[0026] (3)种子培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g， 柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 I mL，MgSO4 · 7H20 0· 58 g，MnSO4 · 4H20 0· 05 g，K2HPO4 2 g，水 1000 mL，调 ρΗ=6·2_6·4;121 °C 高压蒸汽灭菌 30 min,备用。
[0027] (4)制剂生产培养基：葡萄糖60 g/L，酵母粉15 g/L，蛋白胨25 g/L，牛肉膏20 g/ UK2HPO4 2 g/L，MnSO4MH2O 0.05 g/L，柠檬酸二铵 2 g/L，乙酸钠 4 g/L，MgSO4 ·7Η20 0.4 g/L，吐温 80 I mL/L，番茄汁 50 mL/L。
[0028] (5)无机硒源：配制含硒量为I mg/ml的亚硒酸钠溶液，121°C高压蒸汽灭菌 30min，备用。
[0029] (6)有机硒转化促进剂：为促进无机硒转化为有机硒，在培养开始时向培养基中加 入有机硒转化促进剂，其成分如下：每升培养基中加入甘露低聚糖3 g，甘露糖I g，果糖1 g，赖氨酸0.01 g，蛋氨酸0.01 g。
[0030] (7)菌种的活化与种子液的获得：将保存的鼠李糖乳杆菌接种于菌种活化培养基 中，37°C，培养48 h ;如此连续活化3次后，再接种于种子培养基中，37°C，培养36 h，得到鼠 李糖乳杆菌种子液，其cfu数在l〇7ml以上。
[0031] (8)制剂生产：将乳杆菌种子液按照2. 5%接种量接种于制剂生产培养基中，培养 15 h后将无机硒源加入培养基中，使培养基中硒浓度为5 mg/L，并继续培养36 h;整个培 养过程中培养温度为36°C，通气量为0. 03 m3/h，转数为80 r/min，罐压为0. 04 Mpa。培养 结束时，将富硒乳酸菌培养液用玉米淀粉吸附(玉米淀粉质量与培养基体积比〇. 85 kg/L)， 在37°C烘干后分装。得到富硒乳酸菌制剂，该制剂中乳酸菌数为6. 2 X 101(lCfu/g ;含硒量为 5.92 mg/kg，其中有机硒含量为64. 60%。
[0032] 2、富硒乳酸菌制剂对AA肉鸡肌肉肉色的作用效果 (1)实施动物与分组 选用1日龄健康雄性AA商品肉仔鸡200羽，随机分成对照组和试验组，每组5个重复， 每重复20羽。
[0033] (2)日粮与饲养管理 对照组饲以基础日粮，参照NRC (1994)和我国鸡饲养标准（NY/T33-2004)关于肉鸡所 需营养进行配比，基础日粮组成及营养水平见表1。试验组饲以添加4%富硒乳酸菌的基础 日粮，试验过程中自由采食和饮水，按常规程序进行免疫；各组均饲喂基础日粮预试7d后， 开始饲喂相应的试验日粮，试验期为30d。
[0034] 表I AA肉鸡基础日粮组成和营养水平
【权利要求】
1. 一种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂，其特征在于该制剂是利用鼠李糖乳杆菌 在添加了有机硒转化促进剂的特定培养基中生长并将培养基中的无机硒转化为有机硒的 活菌制剂；该制剂中的鼠李糖乳杆菌数在109cfu/g以上；含硒量为5. 2-22. 8 mg/kg，其中 有机硒含量在50%以上；所述的有机硒转化促进剂指的是：每升培养基中加入甘露低聚糖 1-5 g、甘露糖 1-3 g，果糖 1-3 g，赖氨酸 0.01-0. 03 g，蛋氨酸 0.01-0. 05 g; 特定培养基的组成是：葡萄糖50-150 g/L，酵母粉5-20 g/L，蛋白胨10-30 g/L，牛肉 膏 15-30 g/L，K2HP04 2-4g/L，MnS04.4H20 0.01-0.2 g/L，柠檬酸二铵 1-5 g/L，乙酸钠 2-8 g/L，MgS04 ? 7H20 0? 2-0. 8 g/L，吐温 80 1-2 mL/L，番茄汁 50-150 mL/L。
2. 权利要求1所述的提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于按 如下的步骤进行： (1) 菌种：鼠李糖乳杆菌（Z. rAafflfliostts):购自中国科学院微生物研究所，由本实验室保 存； (2) 菌种活化培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g， 柠檬酸二铵 2 g，吐温 80 1 mL，MgS04 ? 7H20 0? 58 g，MnS04 ? 4H20 0? 05 g，K2HP04 2 g，琼脂 粉 20 g，水 1000 mL，调 pH=6. 2-6. 4 ;121°C 高压蒸汽灭菌 20-30 min，备用； (3) 种子培养基：蛋白胨10 g，酵母膏5 g，葡萄糖20 g，牛肉膏10 g，乙酸钠5 g，朽1檬酸二铵 2 g，吐温 80 lmL，MgS04 ? 7H20 0? 58 g，MnS04 ? 4H20 0? 05 g，K2HP04 2 g，水 1000 mL，调 pH=6. 2-6. 4; 121 °C 高压蒸汽灭菌 20-30 min,备用； (4) 制剂生产培养基：葡萄糖50-150 g/L，酵母粉5-20 g/L，蛋白胨10-30 g/L，牛肉膏 15-30 g/L，K2HP04 2-4 g/L，MnS04 ? 4H20 0? 01-0. 2 g/L，柠檬酸二铵 1-5 g/L，乙酸钠 2-8 g/L，MgS04 ? 7H20 0? 2-0. 8 g/L，吐温 80 1-2 mL/L，番茄汁 50-150 mL/L ; (5) 无机硒源：配制含硒量为0.5-2 mg/ml的亚硒酸钠溶液，121 °C高压蒸汽灭菌 20-30min，备用； (6) 有机硒转化促进剂：每升培养基中加入甘露低聚糖1-5 g，甘露糖1-3 g，果糖1-3 g，赖氨酸 0.01-0. 03 g，蛋氨酸 0.01-0. 05 g; (7) 菌种的活化与种子液的获得：将保存的鼠李糖乳杆菌接种于菌种活化培养基中， 37°C，培养32-48 h ;如此连续活化3?5次后，再接种于种子培养基中，37°C，培养32-48 h，得到鼠李糖乳杆菌种子液，其cfu数在109/ml以上； (7)制剂生产：将鼠李糖乳杆菌种子液按照2-5% (w/w)接种量接种于制剂生产培养基 中，培养15-21 h后将无机硒源加入培养基中，使培养基中硒浓度为5-10 mg/L，并继续培 养27-36 h ;整个培养过程中培养温度为35-39°C，通气量为0. 02-0. 04 m3/h，转数为70-80 r/min，罐压为0. 04 Mpa，培养结束时，将富硒乳酸菌培养液用玉米淀粉吸附，其中玉米淀粉 质量与培养基体积比为〇. 5 kg/L - 1 kg/L，在32-42°C干燥后分装，得到富硒乳酸菌制剂； 该制剂中乳酸菌数在l〇9cfu/g以上，含硒量为5. 2-22. 8 mg/kg，其中有机硒含量在50%以 上。
3. -种提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂的使用方法，其特征在于所述的富硒乳酸 菌制剂按照2%-5% (w/w)的添加量添加到肉鸡基础日粮中。
4. 权利要求1所述提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂在改善肉鸡肌肉肉色方面的 应用。
5.权利要求1所述提高肉鸡肌肉肉色的富硒乳酸菌制剂在提高肉鸡肌肉组织含硒量 和抗氧化能力方面的应用。
【文档编号】C12R1/225GK104480049SQ201410819192
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2014年12月25日 优先权日:2014年12月25日
【发明者】秦顺义, 黄宝霞, 马吉飞, 金天明, 张建斌, 刘田生, 罗安智, 陈甫, 王宏祥 申请人:天津农学院