感（25分）四个方面，打分人员 独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留 整数，具体见表2:
[0151 ] 表2感官品评统计结果
[0153] 注：同一行内标不同小写字母表示差异显著（P < 0.05)，标不同大写字母表示差 异极显著（P < 〇. 01)，标有相同字母表示差异不显著（P > 〇. 05)。
[0154] 以上结果表明，本发明制备的含活菌的果浆食品从外观、质地、风味和口感任何一 方面都要明显优于市售含活菌的果浆食品，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同 年龄段、不同消费层次的消费者食用。
[0155] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的含活菌的果浆食品同样具有上述实验效 果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0156] 实施例9果汁感官、卫生、理化质量指标及酶活性对比试验
[0157] 以西瓜为原料，以本发明实施例2步骤2)方法制得的西瓜原汁为试验组，以采用 现有的热力护色、钝酶工艺制备的西瓜汁为对照组，分别对试验组和对照组的西瓜汁进行 感官、理化及卫生指标（按果蔬汁饮料卫生标准GB19297-2003中低温复原果浆检测菌落总 数、大肠杆菌、致病菌、霉菌、酵母、残留农药、重金属等卫生指标，）、多酚氧化酶酶活性下降 率进行检测，结果如表3 :
[0158] 表 3
[0159]
[0161] 以上结果表明：本发明制备的西瓜原汁（试验组）与现有技术（对照组）相比可最 大限度地保留西瓜天然色泽和风味，与西瓜的天然色泽、口感和风味基本接近，不添加任何 香精和色素，可溶性固形物含量较高，具有较高的榨汁率；本发明制备的西瓜原汁污染杂菌 种类少，含量低，过程污染风险小，对照组菌落总数和大肠菌群虽然合格，但微生物种类多、 含量较高，如不热力杀菌，存在后期益生菌发酵失败的风险；本发明果汁制备过程对原料采 用了超声清洗，有效降低了农残、毒素及重金属离子的含量，现有技术制备的西瓜原汁虽然 合格，但存在较大的食品安全隐患，长期食用会对人体造成积累性严重危害；本发明制备的 西瓜原汁多酚氧化酶活性低，有效防止了后序加工过程的酶促褐变。
[0162] 经检测，本发明实施例3-6制备的果汁与实施例2感官、理化及卫生指标、酶活性 下降率检测结果无显著性差异，同样具有优良的食品安全性、非生物稳定性和微生物稳定 性。
[0163] 实施例10本发明含活菌的果浆食品益生性试验
[0164] 将本发明实施例2制备的含活菌的果浆食品，用无菌水制备成活菌数为 2X lOtFU/mL的益生菌溶液，于4°C保存备用；
[0165] 1、取保存好的IOmL益生菌溶液注入到试管1中，采用十倍逐级稀释至10 8,取ImL 稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45°C的MRS琼脂培养基倾注在平板（灭菌）上，迅速摇 匀。再将装有IOmL益生菌溶液的试管2置于80-90°C水浴锅中加热15-25min，取加热后的 益生菌溶液进行十倍逐级稀释至10 8,取ImL稀释液在平板上，将灭菌后冷却至45°C的MRS 琼脂培养基倾注在平板（灭菌）上并迅速摇匀。最后将加热前和加热后的平板均在35°C条 件下培养24h，计算加热前后的数量。
[0166] 结果表明，活菌存活率达到了 88%以上。
[0167] 2、模拟胃液及肠液的耐受试验：取100g/L的盐酸16. 4mL加蒸馏水稀释，使pH值 分别为I. 5、2. 5和3. 5,取IOOmL稀盐酸溶液，分别加入Ig胃蛋白酶，使其充分溶解，得模拟 胃液，微孔滤膜除菌（0. 22 μ m)备用。取磷酸二氢钾6. 8g，加水500mL使溶解，用0.1 moL/ L氢氧化钠溶液调节pH值至6. 8 ;另取胰蛋白酶10g，加水IOOmL使溶解，将两液混合后， 加水稀释至1000ml，得模拟肠液，微孔滤膜除菌（0.22μπι)备用。取ImL保存好的益生菌 溶液加入到9mL的模拟胃液中（即十倍逐级稀释），并迅速在振荡器上充分混匀，然后置于 30-45°C静置培养2-4h。分别在lh、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数，与 原活菌数进行比较，结果表明，活菌存活率为98%。然后取在人工胃液中消化不同时间的培 养液各lmL，分别接种于9mL pH值为6. 8的人工肠液中，置于3〇-45°C静置培养2-4h，并分 别在0、3、6、24h取样，测定其活菌数，与原活菌数进行比较，结果表明活菌存活率为99%。
[0168] 3、模拟胆盐的耐受试验：用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0. 8%的猪 胆盐，用10%的NaOH调整pH为8. 0,然后用0. 45 μ m微滤膜过滤并除菌。将0. 5mL保存好 的益生菌溶液接种到4. 5mL模拟胆盐中，培养24h后得到培养液，计数残存的活菌数。将培 养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10 8,并用MRS倾注，然后置于35°C静置培养24h。 结果表明活菌存活率为99%。
[0169] 以上试验结果表明，本发明含活菌的果浆食品中的益生菌益生性（耐热性、耐pH 性、耐胆盐）较强，非常适合人体胃肠环境，在模拟胃肠环境中存活率大，可有效改善胃肠 功能。
[0170] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的含活菌的果浆食品同样具有上述实验效 果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0171] 实施例11本发明含活菌的果浆食品小鼠肠道性能试验
[0172] 将本发明实施例2制备的含活菌的果浆食品，用无菌水制备成活菌数为 2X lOtFU/mL的益生菌溶液，于4°C保存备用；
[0173] 选取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18_20g，常规词养。从中随机挑选40只，每 天早晨9:00灌胃盐酸林可霉素0. 2mL (20mg) /只，其它作为对照组，每天同一时间灌胃等量 灭菌生理盐水，连续一周，制备肠道菌群失调的小鼠模型。模型组小鼠饮食下降，未出现死 亡和明显的腹泻现象，排软粪，外形正常含水分较多，垫料潮湿。将40只肠道菌群失调小 鼠，随机分为2组，一组20只作为治疗组，每天灌胃保存好的益生菌溶液0. 5ml (2 X IO1Yfu/ ml) /只，另20只作为自然恢复组，每天同一时间灌胃等量灭菌生理盐水，连续两周。整个试 验期21天，每天观察小白鼠的生长和排便情况，于第8、21天对含活菌的果浆食品治疗组和 自然恢复组的小鼠进行称重，计算各组体重平均增长率，结果如表4 ;每5天测各组小鼠粪 便大肠杆菌数量，计算平均数，结果如表5。取小鼠粪便约0. lg，于无菌操作台内加入3粒 玻璃珠（以0.1 g粪样加0. 5mL稀释液），稀释并接种麦康凯琼脂培养基，计算每克湿便中的 大肠杆菌数。
[0174] 表4小鼠增重情况
[0178] 含活菌的果浆食品治疗组小鼠体重平均增长率（67. 96% )显著高于自然恢复组 (32. 14% );饲喂溶液后肠道大肠杆菌数量显著下降，降低97. 07%，显著低于自然恢复组 (24. 78% )，表明本发明含活菌的果浆食品中的益生菌在小白鼠肠道内迅速定植，形成优势 菌群，并有效抑制大肠杆菌等病原菌的生长繁殖，并且定植时间长，持续、有效改善了肠道 性能。
[0179] 需要说明的是：本发明实施例3-6制备的含活菌的果浆食品同样具有上述实验效 果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
[0180] 实施例12本发明含活菌的果浆食品对机体免疫力的影响
[0181] 1实验目的
[0182] 通过运动耐力测试（小鼠游泳试验），验证本发明含活菌的果浆食品的提高免疫 力、抗疲劳作用。
[0183] 2实验材料与试剂
[0184] 2.1供试药物：
[0185] 市售含活菌的果浆食品（Gl);市售含活菌的果浆食品（G2);本发明实施例2-6制 备的含活菌的果浆食品（G3-G7)。
[0186] 2. 2 试剂：
[0187] 肝/肌糖原测试盒，购自南京建成生物制品研究所；浓硫酸（AR)，南京化学试剂有 限公司；生理盐水，山东长富洁晶药业有限公司。
[0188] 3.实验动物
[0189] ICR小鼠，?，清洁级，体重18_22g，由北京医科大学比较医学中心提供，实验期间 小鼠自由饮食。
[0190] 4.主要仪器
[0191] 错制游泳箱（50cmX50cmX40cm)，铅丝，低温高速离心机：5804R型，Eppendrof公 司；水浴锅：DK-S26型，上海精宏实验设备有限公司；电子称：BS224S型，Sartorius公司； 秒表，温度计
[0192] 5.实验分组
[0193] 5. 1剂量分组及受试样品给予时间：随机将小鼠分为8组，每组10只，第1组至第 7组分别给Gl~G7的药物，第8组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1 次，灌胃体积为〇. 2ml/10g，连续给予受试样品30天。
[0194] 5. 2样品配制：第1组至第7组：称取2. 25g药物样品，用蒸馏水配至150ml ;空白 对照组（第8组）：双蒸水150ml。
[0195] 6.实验方法
[0196] 6. 1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温 25±1°C，鼠尾根部负荷5%体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时 间。
[0197] 6. 2小鼠血清尿素测定末次给药30min后，在温度为30 °C的水中不负重游泳 90min，休息60min后摘眼球采血0. 5mL (不加抗凝剂），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/ min离心15min,取血清送北京医科大学附属医院检验科检测。
[0198] 6. 3肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25± 1°C的水中不负重游泳90min， 颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏l〇〇mg，肝糖原检 测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。
[0199] 6. 4血乳酸的测定末次给药30min后采血，然后不负重在温度为30°C的水中游泳 IOmin后停止。乳酸仪测定方法：分别在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20 μ L 加入40yL破膜液中，立即充分振荡破碎细胞用乳酸仪测定。（血乳酸曲线下面积=5Χ (游 泳前血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0200] 7.观察指标负重游泳时间，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0201] 8.统计方法实验数据用表示，采用t检验进行组间比较
[0202] 9.实验结果
[0203] 9. 1本发明含活菌的果浆食品对小鼠体重的影响
[0204] 各组小鼠在给予Gl~G7药物后，前、中，后期体重分别见下表所示，各组小鼠的 初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异（P > 0. 05)，表明Gl~G7药物均无明 显的毒性。实验结果详见表6。
[0205] 表6负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重
[0206]
[0207] 9. 2本发明含活菌的果浆食品对小鼠负重游泳时间的影响
[0208] 经口给予小鼠 Gl~G7药物后，Gl~G2药物与空白对照组比较，可以明显延长小 鼠负重游泳时间，具有显著性差异（P < 0. 05)，本发明含活菌的果浆食品G3~G7药物与空 白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异（P< 0.01)，且明显优 于Gl~G2药物。结果详见表7。
[0209] 表7含活菌的果浆食品对小鼠负重游泳时间的影响
[0211] "*"p〈0. 05vs 空白对照；
[0212] "**"ρ〈0· Olvs 空白对照；
[0213] 9. 3本发明含活菌的果浆食品对小鼠运动前后血乳酸的影响
[0214] 经口给予小鼠本发明的含活菌的果浆食品后，本发明含活菌的果浆食品G3~G7 药物对小鼠运动后血乳酸曲线下面积与对照组比较有统计学差异（Ρ < 〇. 05)，Gl~G2药 物组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较虽有所降低，但并无统计学差异（Ρ> 0.05)。结 果见表8。
[0215] 表8本发明含活菌的果浆食品对小鼠运动前后血乳酸水平的影响
[0217] "*"ρ〈0· 05vs 空白对照；
[0218] 9. 4本发明含活菌的果浆食品对小鼠肝糖原的影响
[0219] 经口给予小鼠 Gl~G7药物后，Gl~G2药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量 均有明显的升高，具有显著性差异（P < 〇. 05)，本发明含活菌的果浆食品G3~G7药物与与 空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异（P< 0.01)，且明显 优于