色或粉红色圆形菌落，进一步纯化培养。根据各菌种类胡萝卜素的积累量，筛 选类胡萝卜素产量高的菌种。其中类胡萝卜素产量较高的海洋红酵母WYN1，细胞为卵圆形， 没有假菌丝；在海水配置的YEro培养基上形成红色菌落，表面光滑，边缘整齐；在产孢培养 基上不产子囊孢子，多边芽殖，无掷孢子；不发酵糖，不形成类淀粉化合物，不同化肌醇。根 据上述特点，初步确定属于红酵母属（Rhodotorula)。斜面保存于冰箱中。
[0034] (2)海洋红酵母WYNl的发酵培养
[0035] 将菌种转接到斜面培养基上活化，28 °C培养24h后，接种于YH)液体种子培养基 中，28°(：振荡培养3611得种子液，按10%接种量接入装有6〇1^发酵培养基的25〇1^三角瓶 中，28°C，振荡培养48h (摇床转速为180r/min)。发酵培养基组成为葡萄糖2 %，蛋白胨1 %， 酵母膏1%，硫酸镁〇. 02%，磷酸二氢钾0. 15%，盐度20。28°C摇床培养48h，转速为180r/ min〇
[0036] (3)耐铜能力驯化
[0037] 将海洋红酵母菌WYNl接种于铜离子含量为50mg/L (硫酸铜配置）培养基中，置于 28°C，180r/min恒温摇床上震荡培养24h。然后从该培养物中取3ml发酵物接种到不含铜 的麦芽汁培养基中，培养24h。反复培养几代，使酵母在含铜的培养基中生长稳定，且数量不 再增多时，再逐步提高培养基的铜浓度。如此反复便可使得酵母菌能够适应铜离子含量为 300mg/l的环境，获得了耐铜的特性。本发明经过对海洋红酵母进行耐铜能力驯化后，能有 效地提高细胞生物量、类胡萝卜素的产量及酵母的富铜能力。
[0038] (4)细胞生物量的测定
[0039] 将发酵液3000r/min离心10min，弃上清液，菌体经无菌水洗2~3次后再次离心， 所得菌体置于60°C烘箱中干燥至恒重，准确称重。
[0040] (5)类胡萝卜素的提取：
[0041] 将Ig干菌体放入IOOmL三角瓶中，加入5mL 3mol/L的盐酸室温浸泡lh，沸水浴 4min，迅速冷却，3000r/min离心15min沉淀为细胞残渣，用丙酮定容至20mL萃取，得类胡萝 卜素浸提液。
[0042] (6)类胡萝卜素的测定
[0043] 将提取液适当稀释后，用722型分光光度计在475nm条件下测定光吸收值。按下 式计算类胡萝卜素含量：
[0045] 式中：A λ max为475nm波长处的吸光度；D为测定试样时的稀释倍数；V为丙酮用 量（mL) ;0. 16为类胡萝卜素的克分子消光系数;W为红酵母菌体干重（g)。
[0046] (7)酵母含铜量测定
[0047] 用原子吸收法测定。
[0048] ⑶菌种保藏
[0049] 将上述经过驯化的富铜海洋红酵母WYNl保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏 编号为：CCTCC No :M 2014592。
[0050] 胡萝卜素产量及胞内螯合铜含量分别为27. 52g/L、25. 12mg/L和6240 yg/g干菌。 [0051 ] 实施例2 -种红酵母培养物的制备方法
[0052] 将海洋红酵母WYNl斜面菌种接种于YH)液体种子培养基中，28°C振荡培养36h得 种子液；
[0053] 发酵培养：初始pH为8,将种子培养液按接种量5%接种于发酵培养基，摇床转速 为65r/min，26°C培养12小时后调整温度为18°C进行低温静止培养，停止搅拌，pH调整为 4,保持3小时；之后每小时升温2°C至26°C，pH调整为5,按照发酵液重量体积比2. 5%的 添加量添加蛋白胨，按照2%的量添加酵母粉；摇床转速为80r/min，继续发酵12h ;
[0054] 发酵结束后，发酵液经孔径500 μ m粗滤，然后与15°C循环超滤浓缩去除水分得固 形物含量30%浓缩液，浓缩液经真空冷冻干燥、超微粉碎得红酵母培养物。
[0055] 发酵培养基质量体积比组成为：葡萄糖1%，酶解玉米粉2%，蛋白胨2. 5%，硫酸 镁0. 02 %，磷酸二氢钾0. 15 %，铜含量180mg/L，氯化钠20 %，其余为水；
[0056] 所述酶解玉米粉的制备方法为：将玉米粉配料罐中，以V:m为2:1加入纯净水，调 节pH值5,加入中温淀粉酶，酶活为30u/g玉米粉，与酶活为30u/g玉米粉的蛋白酶，边搅拌 边升温至50°C保温25min，然后缓慢升温至62°C保温25min，冷冻干燥备用。
[0057] 采用上述方法发酵培养海洋红酵母WYN1，发酵液中生物量、类胡萝卜素产量及胞 内螯合铜含量分别为32. 52g/L、40mg/L和8000 μ g/g干菌。
[0058] 实施例3 -种复合酶制剂及其制备方法
[0059] -种复合酶，由以下重量份数的组分组成：
[0060] 木聚糖酶100份，纤维素酶35份，β -葡聚糖酶70份，蛋白酶120份，中温α -淀 粉酶25份，复合维生素5份，复合微量元素10份，抗菌肽15份，红酵母培养物25份；
[0061] 所述复合微量元素每公斤包含碘lOOOmg，钾180mg，铁1800mg，硒80mg,钴200mg， 镁145mg，猛1400mg，络20mg,锌llOOmg，铜800mg ;其余量为载体，所述载体为木肩；
[0062] 所述木肩的制备方法包括如下步骤：将无发霉、无病虫锯木末或废木肩除去杂物， 置于超声波清洗机中于200W、30KHz清洗10min，冲洗、沥干，放入蒸汽釜中于0. 3MPa蒸煮 25min，然后置微波干燥机于2000W、120°C进行间歇式干燥3min，使之水分达到10%，最后 2. 0筛片粉碎、密封包装即得木肩；
[0063] 所述超声波清洗机中清洗液为质量百分比浓度0. 5%的碳酸氢钠溶液；
[0064] 所述间歇式干燥工艺为：微波辐射10s，停留20s，如此重复，循环干燥。
[0065] 所述复合维生素每公斤包含维生素 A 2800mg，维生素 BI 3000mg，维生素 C 2000mg，核黄素 1600mg，泛酸 1900mg，维生素 B6 1800mg，维生素 B12 1200mg，肌醇 5000mg， 维生素 E 600mg，维生素 D3 5500mg，维生素 K3 4000mg;其余量为载体，所述载体为上述制 备的木肩。
[0066] 按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β -葡聚糖酶，中温α -淀粉酶，蛋 白酶，抗菌肽，以及上述复合微量元素和复合维生素，和实施例2所得的红酵母培养物，于 25°C条件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保 存。
[0067] 实施例4 一种复合酶制剂及其制备方法
[0068] -种复合酶，由以下重量份数的组分组成：
[0069] 木聚糖酶80份，纤维素酶30份，β -葡聚糖酶40份，蛋白酶100份，中温α -淀 粉酶20份，复合维生素3份，复合微量元素5份，抗菌肽10份，红酵母培养物30份；
[0070] 所述复合微量元素同实施例3 ;
[0071] 所述复合维生素同实施例3 ;
[0072] 按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β -葡聚糖酶，中温α -淀粉酶，蛋 白酶，抗菌肽，复合微量元素和复合维生素，以及实施例2所得的红酵母培养物，于25°C条 件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。
[0073] 实施例5 -种复合酶制剂及其制备方法
[0074] -种复合酶，由以下重量份数的组分组成：
[0075] 木聚糖酶120份，纤维素酶40份，β -葡聚糖酶100份，蛋白酶150份，中温α -淀 粉酶30份，复合维生素8份，复合微量元素20份，抗菌肽20份，红酵母培养物20份；
[0076] 所述复合微量元素同实施例3 ;
[0077] 所述复合维生素同实施例3 ;
[0078] 按上述重量份数取市售的木聚糖酶，纤维素酶，β -葡聚糖酶，中温α -淀粉酶，蛋 白酶，抗菌肽，复合微量元素和复合维生素，以及实施例2所得的红酵母培养物，于25°C条 件下在混合机中搅拌均匀，搅拌时间为5分钟。搅拌均匀装箱后于常温或冷室中保存。
[0079] 实施例6实施例3所得复合酶在断奶仔猪中的使用效果试验
[0080] 试验方法：
[0081] 选取120头断奶仔猪，按体重、血统及性别无差异分为实验组和对照组，每组3个 重复，每个重复20头猪。实验期为28天，实验组每吨饲料添加实施例3所述复合酶120g， 对照组不添加复合酶，于试验期的始末日早晨空腹称重，计算饲料转化率、