皮肤外用溶菌酶复合制剂及制造方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种溶菌酶复合制剂，具体是一种皮肤外用溶菌酶复合制剂及制造方 法。
【背景技术】
[0002] 溶菌酶（lysozyme)，正式定名为N-乙酰己糖胺酶，又称N-乙酰胞壁质聚糖水解 酶，属胞壁质酶。溶菌酶自被发现以来一直是生物技术领域的研究热点，研究成果也不断涌 现，现在已被广泛应用于医药、食品、饲料和化妆品等领域。溶菌酶具有生物相容性好、对组 织无刺激和无毒性等优点。溶菌酶作为一种存在于人体正常体液及组织中的非特异性免疫 因素，具有多种药理作用，它具有抗菌、抗病毒和抗肿瘤的功效。目前可检索到溶菌酶相关 专利166项，其中药物制剂相关专利17项。从剂型上划分目前已有的专利覆盖了注射剂、 喷雾剂、乳膏剂、泡腾片等几乎所有剂型。从溶菌酶的来源来看目前大多使用蛋清溶菌酶和 海洋生物溶菌酶。从药用成分配伍上看既有溶菌酶单独使用的也有和抗生素联合使用的。 目前文献尚未有蛋清溶菌酶和萝卜溶菌酶配伍使用的剂型。蛋清溶菌酶对革兰氏阳性菌、 好气性孢子形成菌、枯草杆菌和耐辐射微球菌均有良好的分解作用。萝卜溶菌酶的抑菌效 果与蛋清溶菌酶有所不同，其对大肠杆菌等6种革兰氏阴性菌具有不同程度的抑制作用。 如将二者制备成溶菌酶复合制剂，必将取得更为广谱的抑菌效果。
【发明内容】
[0003] 为了克服上述现有技术的缺点，本发明提供一种皮肤外用溶菌酶复合制剂及制造 方法，蛋清溶菌酶和萝卜溶菌酶并配以相关辅料制备成溶菌酶复合制剂，具有更为广谱的 抑囷效果。
[0004] 本发明是以如下技术方案实现的：一种皮肤外用溶菌酶复合制剂，由以下质量份 数数的原料制成：蛋清溶菌酶25~75份、萝卜溶菌酶25~75份、磷酸氢二钠30~50份、 磷酸二氢钠40~60份、EDTA-2Na2~4份、氯化钠15~20份、薄荷脑1~2份、无水乙 醇15~25份、苯扎溴铵1~2份，甘油450~550份、羧甲基纤维素钠280~320份，水 3800 ~4200 份，pH值为 5. 5-6. 5。
[0005] 优选的，一种皮肤外用溶菌酶复合制剂，其特征在于：由以下质量份数的原料制 成，蛋清溶菌酶50份、萝卜溶菌酶50份、磷酸氢二钠39份、磷酸二氢钠52份、EDTA-2Na3 份、氯化钠17份、薄荷脑1份、无水乙醇20份、苯扎溴铵1份，甘油500份、羧甲基纤维素钠 300份，水4000份，pH值为5. 9。
[0006] -种皮肤外用溶菌酶复合制剂的制造方法，具体步骤如下：（1)薄荷脑用乙醇溶 解，备用； (2)称取EDTA-2Na、Nacl、NaH2P0jPNa2HP04用热注射用水溶解，搅拌均匀后，降温至 45°C左右，加入步骤（1)中的薄荷脑乙醇溶液，搅拌混合； (3)苯扎溴铵用水溶解，加入步骤（2)溶液中，搅拌混合； (4) 溶菌酶用45°C以下的水溶解，加入上述步骤（3)的溶液中，搅拌混合； (5) 向步骤（4)混合后的溶液中加入甘油，然后搅拌混合； (6) 定容，过滤； (7) 在步骤（6)中的溶液中加入羧甲基纤维素钠，搅拌混合； (8) 灌装。
[0007] 本发明的有益效果是： (1) 广谱抗菌：本产品对革兰氏阳性菌、好气性抱子形成菌、枯草杆菌和、微球菌、大肠 杆菌均具有良好的分解作用，较单纯蛋清溶菌酶制剂具有更为广谱的抗菌性； (2) 不含抗生素：本产品有效成分完全为具有抑菌活性的活性蛋白，不含抗生素，较溶 菌酶与抗生素符合制剂具有更高的安全性； (3) 不会产生耐药性：因本品有效成分为溶菌酶，目前尚未见溶菌酶抗药性的报道，因 此本品较含抗生素的制剂具有更高的抗耐药性； (4) 给药方便、安全：本品为皮肤外用药，相对于内服制剂而言不受胃肠道因素的影响， 避免肝脏的首过效应，释药平稳，不良反应小。
【具体实施方式】
[0008] -种皮肤外用溶菌酶复合制剂，由以下质量份数数的原料制成：蛋清溶菌酶25~ 75份、萝卜溶菌酶25~75份、磷酸氢二钠30~50份、磷酸二氢钠40~60份、EDTA-2Na2~ 4份、氯化钠15~20份、薄荷脑1~2份、无水乙醇15~25份、苯扎溴铵1~2份，甘油 450~550份、羧甲基纤维素钠280~320份，水3800~4200份，pH值为5. 5-6. 5。其中， 磷酸氢二钠、磷酸二氢钠为酸碱度缓冲液，用以维持制剂的PH值；EDTA-2Na为活性增强剂、 金属螯合剂，实验证明一定量的EDTA-2Na可有效促进溶菌酶的活性；氯化钠为渗透压调节 齐U，用以调节制剂的渗透压；薄荷脑为清凉剂；无水乙醇为薄荷脑助溶剂，用以溶解薄荷 脑，实验证明少量乙醇溶液不影响溶菌酶活性；苯扎溴铵为抑菌剂；甘油为增强剂；羧甲基 纤维素钠为凝胶基质。
[0009] 上述皮肤外用溶菌酶复合制剂的制造方法，具体步骤如下： (1) 薄荷脑用乙醇溶解，备用； (2) 称取EDTA-2Na、Nacl、NaH2P0jPNa2即04用适量热注射用水溶解，搅拌均匀后，降 温至45°C左右，加入步骤（1)中的薄荷脑乙醇溶液，搅拌混合； (3) 苯扎溴铵用适量水溶解，加入步骤（2)溶液中，搅拌混合； (4) 溶菌酶用适量45°C以下的水溶解，加入上述溶液中，搅拌混合； (5) 向步骤（4)混合后的溶液中加入甘油，然后搅拌混合； (6) 定容，过滤； (7) 在步骤（6)中的溶液中加入羧甲基纤维素钠，搅拌混合； (8) 灌装。
[0010] (1)不同配方溶菌酶制剂的体外抑制溶壁微球菌的实验效果。
[0011] (a)实验材料 试验菌株：溶壁微球菌。
[0012] 培养基：LB培养基。
[0013]实验处方： 处方1 :蛋清溶菌酶50份、磷酸氢二钠39份、磷酸二氢钠52份、EDTA-2Na3份、氯化钠 17份、薄荷脑1份、无水乙醇20份、苯扎溴铵1份，甘油500份、羧甲基纤维素钠300份，水 4000 份，pH值为 5.9。
[0014] 处方2 :萝卜溶菌酶50份、磷酸氢二钠39份、磷酸二氢钠52份、EDTA-2Na3份、氯 化钠17份、薄荷脑1份、无水乙醇20份、苯扎溴铵1份，甘油500份、羧甲基纤维素钠300 份，水4000份，pH值为5.9。
[0015] 处方3 :蛋清溶菌酶50份、萝卜溶菌酶50份、磷酸氢二钠39份、磷酸二氢钠52份、 EDTA-2Na3份、氯化钠17份、薄荷脑1份、无水乙醇20份、苯扎溴铵1份，甘油500份、羧甲 基纤维素钠300份，水4000份，pH值为5. 9。阴性对照：生理盐水。
[0016] (b)实验内容 细菌平板的制备：取直径约90mm培养皿、LB培养基高压蒸汽灭菌，待冷却至60°C将培 养基无菌条件下注入培养皿，放置水平台面上使凝固。取溶壁微球菌悬液0. 2ml，注入已凝 固的平板培养基上，涂布均匀，即为细菌平板。
[0017]溶壁微球菌对不同处方的药敏实验：纸片法将以上不同处方的制剂制成药敏纸 片，测定抑菌圈的大小。方法：取直径为0.6厘米的灭菌滤纸片在不同处方的制剂中浸泡 40分钟，取出备用，在已制备好的细菌平板中，无菌操作放置药敏纸片，每种配方制剂放置 六个平板，然后将平板置37°C培养箱中培养24小时后测定抑菌圈的大小，取其平均值。
[0018] (c)实验结果
【主权项】
1. 一种皮肤外用溶菌酶复合制剂，其特征在于：由以下质量份数的原料制成：蛋清溶 菌酶25~75份、萝卜溶菌酶25~75份、磷酸氢二钠30~50份、磷酸二氢钠40~60份、 EDTA-2Na2~4份、氯化钠15~20份、薄荷脑1~2份、无水乙醇15~25份、苯扎溴铵 1~2份，甘油450~550份、羧甲基纤维素钠280~320份，水3800~4200份，pH值为 5. 5-6. 5〇
2. -种皮肤外用溶菌酶复合制剂，其特征在于：由以下质量份数的原料制成，蛋清溶 菌酶50份、萝卜溶菌酶50份、磷酸氢二钠39份、磷酸二氢钠52份、EDTA-2Na3份、氯化钠 17份、薄荷脑1份、无水乙醇20份、苯扎溴铵1份，甘油500份、羧甲基纤维素钠300份，水 4000 份，pH 值为 5.9。
3. -种皮肤外用溶菌酶复合制剂的制造方法，其特征在于：具体步骤如下：（1)薄荷脑 用乙醇溶解，备用； (2) 称取￡0了4-2似、似〇1、似112?04和似2即04用热注射用水溶解，搅拌均匀后，降温至 45°C左右，加入步骤（1)中的薄荷脑乙醇溶液，搅拌混合； (3) 苯扎溴铵用水溶解，加入步骤（2)溶液中，搅拌混合； (4) 溶菌酶用45°C以下的水溶解，加入上述步骤（3)的溶液中，搅拌混合； (5) 向步骤（4)混合后的溶液中加入甘油，然后搅拌混合； (6) 定容，过滤； (7) 在步骤（6)中的溶液中加入羧甲基纤维素钠，搅拌混合； (8) 灌装。
【专利摘要】本发明公开了一种皮肤外用溶菌酶复合制剂及制造方法，由以下质量份数数的原料制成：蛋清溶菌酶25～75份、萝卜溶菌酶25～75份、磷酸氢二钠30～50份、磷酸二氢钠40～60份、EDTA-2Na2～4份、氯化钠15～20份、薄荷脑1～2份、无水乙醇15～25份、苯扎溴铵1～2份，甘油450～550份、羧甲基纤维素钠280～320份，水3800～4200份,pH值为5.5-6.5。（1）薄荷脑用乙醇溶解；（2）称取EDTA-2Na、Nacl、NaH2PO4和Na2HPO4用热注射用水溶解,降温至45℃左右,加入薄荷脑乙醇溶液；（3）向步骤（2）溶液中加入苯扎溴铵；(4)溶菌酶用45℃以下的水溶解,加入步骤（3）的溶液中；(5)向步骤（4）的溶液中加入甘油；（6）定容，过滤；（7）在步骤（6）中的溶液中加入羧甲基纤维素钠；（8）灌装。
【IPC分类】A61K38-47, A61P31-04
【公开号】CN104623645
【申请号】CN201510045881
【发明人】宋凯, 袁绍莉, 陈文武
【申请人】徐州生物工程职业技术学院
【公开日】2015年5月20日
【申请日】2015年1月29日