专利名称：银杏叶提取物的制备方法
技术领域：
本发明属于天然植物药用成份的提取技术，具体地说是一种银杏叶提取物的制备方法。
银杏是世界上最古老的树种之一，被誉为“活化石”，银杏叶是一种重要的药用、保健食品原料，它的提取物(GBE，Egb，Extract of Ginkgo，biloba)具有相当强的抗氧化作用，能清除生物体内过剩的自由基，阳止体内脂质过氧化，提高机体免疫力，延缓衰老等功能，近年来，国内外特别是德国、日本、美国、法国等国家对银杏叶中的化学成份，分离方法进行了大量的研究，取得了较大进展，具有代表性的是用溶剂萃取的方法制备银杏叶提取物，如德国Sehwabe，Flaschman药厂，主要为银杏叶干粗粉，60％丙酮抽提，压滤以CCl4脱脂，丙酮水层用硫酸氨饱和，用甲乙酮提取，提取液减压浓缩后配成一定浓度的乙醇溶液，加适量Pb(OH)2过滤，滤液浓缩后再以硫酸氨饱和，甲乙酮提取，提取液干燥浓缩后以乙醇精制再浓缩干燥得银杏(GBE)提取物(见德国专利ED2117429.1767098)。此种方法，使用的有机、无机化学介质多，工艺复杂，成本高，且易造成残留影响产品的质量。目前国内的银杏叶提取物的生产技术，主要是采用水或醇类溶剂提取，再经大孔树脂吸附的方式，(中国专利申请号94114835.1)，但其提取得率低，所得提取物含量也不高。
本发明的目的在于提供一种高提取得率和高提取物有效成分含量的银杏叶提取物的制备方法。
实现本发明目的的技术方案它主要包括以下步骤(a)银杏叶用40％-95％乙醇或40％-100％甲醇或40％-100％丙酮提取；(b)取提取液浓缩回收乙醇或甲醇或丙酮；(c)浓缩液稀释冷却沉降；(d)上清液进苯乙烯型大孔吸附树脂柱吸附；(e)用醇类或丙酮溶液洗脱；(f)洗脱液减压浓缩干燥。
在上述方法中步骤(c)所述的浓缩液稀释剂可以是水或纯化水；在上述方法中所述的冷却温度可以在20℃以下，-1℃以上；在上述方法中步骤(a)中所述的是用浸渍提取，在一定温度下进行，温度区间可以取常温至80℃；在上述方法中步骤(c)也可以为浓缩液稀释后粗分离，再稀释，冷却自然沉降；在上述方法中步骤(e)还可以采用一次洗脱方式，洗脱剂浓度可以是30％-95％；在上述方法中步骤(e)可以采用梯度洗脱方式，而洗脱剂的浓度第一次可以是0％-30％；第二次可以是40％-95％；在上述方法中步骤(f)洗脱液减压浓缩温度为小于75℃。
本发明的一种银杏叶提取物的制备方法所用的介质没有或基本没有有害物质残留，工艺控制容易，提取得率高，产品有效物含量高，特别是白果内酯含量高，达3.5％以上，品质稳定。
以下结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明也不仅限于实施例的内容。
实施例一取银杏叶100kg，用40％乙醇12、10、10倍量(是指原料重量与溶剂体积比，续实施例与此相同)。80℃浸渍搅拌提取三次，每次2小时，放出提取液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的水稀释，药液经粗分离后再加入5倍量的纯化水在0℃或者-1℃下静置沉降。取上清液过苯乙烯型AB-8大孔吸附树脂，用2倍树脂体积的水洗，用20％的乙醇洗脱后，树脂再用70％的乙醇洗脱，收集得洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液减压浓缩，然后减压干燥，控制温度≤75℃，得含银杏黄酮醇苷26.5％，银杏萜内酯8.5％，其中白果内酯高达4.2％的银杏叶提取物2.4kg。
实施例二取银杏叶200kg粉碎成粗粉，用75％乙醇10、6、5倍量，70℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的纯化水稀释，药液经粗分离后再加纯化水定容至1600L，于温度20℃静置沉降。取上清液过DM-130型大孔吸附树脂柱(苯乙烯型吸附树脂)，用2倍树脂体积的纯化水洗，用30％的乙醇洗脱后，用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液小于75℃温度减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥28％，银杏萜内酯≥9％其中白果内酯高达4.5％的银杏叶提取物4.2kg。
实施例三取银杏叶200kg粉碎成小于1cm2的碎片，用40％丙酮15、14、13倍量，65℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的纯化水稀释，在20℃下静置。取上清液过AB-8型大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的丙酮洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥8％的银杏叶提取物4.6kg。
实施例四取银杏叶200kg，用40％甲醇16、15、14倍，70℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入8倍量的自来水稀释，在17℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)DM-130，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的甲醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物5.5kg。
实施例五取银杏叶500kg粉碎成粗粉，用85％乙醇8、6、5倍，55℃搅拌浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入12倍量的纯化水稀释，在7℃下静置。取上清液过滤后再过D101型大孔吸附树脂柱(苯乙烯型吸附树脂)，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液。树脂再用95％的乙醇再生后重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物13.5kg。
实施例六取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％乙醇5、3、2倍，60℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，在10℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)DM-130，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液。树脂再用95％的乙醇再生后重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥10％的银杏叶提取物26kg。
实施例七取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用85％甲醇8、6、5倍，常温搅拌浸提三次，每次5小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，在10℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D-101A，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的甲醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物23kg。
实施例八取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用100％甲醇8、6、5倍，50℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的自来水稀释，经粗分离后，再加5倍量的自来水搅匀后，在8℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的乙醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物29kg。
实施例九取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用70％丙酮7、6、5倍，80℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在2℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D-140，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的丙酮洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，然后在≤75℃减压干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物27kg。
实施例十取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用85％丙酮12、9、9倍，常温搅拌浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在10℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-17，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的丙酮洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25kg。
实施例十一取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％丙酮10、8、6倍，常温搅拌浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在6℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-16，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的丙酮洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物26kg。
实施例十二取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用100％丙酮8、6、6倍，60℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在5℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)LSA-20，用2倍树脂体积的纯化水洗，用70％的甲醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物27kg。
实施例十三取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％甲醇10、8、6倍，常温搅拌浸提三次，每次6小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入10倍量的纯化水稀释，经粗分离后，在10℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-600，用2倍树脂体积的纯化水洗，用40％的丙酮洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物24kg。
实施例十四取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％工业乙醇8、8、7倍，50℃浸提三次，每次3小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在4℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)ADS-17，用2倍树脂体积的纯化水洗，用95％的甲醇洗脱，收集洗脱液。树脂再生后可重复使用。洗脱液在≤75℃减压浓缩，≤75℃减压浓缩干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物28kg。
实施例十五取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用90％工业乙醇12、12、10倍，80℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在5℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)HPD-450，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物25kg。
实施例十六取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用95％药用乙醇8、6、4倍，常温搅拌浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在3℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)DA101D，用2倍树脂体积的纯化水洗，用75％的乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥6％的银杏叶提取物32kg。
实施例十七取银杏叶1000kg粉碎成粗粉，用食用乙醇6、5、4倍，65℃浸提三次，每次2小时，放出浸提液，合并浓缩至小体积，加入5倍量的纯化水稀释，经粗分离后，再加5倍量的纯化水搅匀后，在10℃下静置。取上清液过大孔吸附树脂(苯乙烯型吸附树脂)D-101，用2倍树脂体积的纯化水洗，用80％的乙醇洗脱，收集洗脱液。洗脱液在≤75℃减压浓缩，喷雾干燥，得含黄酮醇苷≥24％，银杏萜内酯≥8％的银杏叶提取物29kg。
权利要求
1.一种银杏叶提取物的制备方法，它主要包括下列步骤(a)银杏叶用40％-95％乙醇或40％-100％甲醇或40％-100％丙酮提取；(b)取提取液浓缩回收乙醇或甲醇或丙酮；(c)浓缩液稀释冷却沉降；(d)上清液进苯乙烯型大孔吸附树脂柱吸附；(e)用醇类或丙酮溶液洗脱；(f)洗脱液减压浓缩干燥。
2.根据权利要求1所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(c)所述的浓缩液稀释剂为水或纯化水。
3.根据权利要求1或2所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(c)所述的冷却温度为20℃以下。
4.根据权利要求1至3任一项所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于所述的洗脱剂为甲醇或乙醇或丙酮等。
5.根据权利要求4所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(a)是浸渍提取，温度区间为常温至80℃。
6.根据权利要求5所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(c)为浓缩液稀释后粗分离，再稀释，冷却自然沉降。
7.根据权利要求6所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(e)为一次洗脱方式，洗脱剂浓度为30％-95％。
8.根据权利要求6所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(e)为梯度洗脱方式，洗脱剂第一次洗脱浓度为0％-30％，洗脱剂第二次洗脱浓度为40％-95％。
9.根据权利要求7或8所述的银杏叶提取物的制备方法，其特征在于步骤(f)洗脱液浓缩温度为小于75℃。
全文摘要
本发明涉及的是一种银杏叶提取物的制备方法。其步骤包括银杏叶用含水乙醇或甲醇或丙酮多次提取，取提取液浓缩回收溶剂，浓缩液用水或纯化水稀释，在20℃以下冷却沉降，取上清液进大孔树脂柱吸附，用醇类溶液洗脱，洗脱液在小于75℃浓缩干燥即可。本制备方法所用的介质没有或基本没有有害物质残留，工艺控制容易，提取得率高，产品有效成分含量高，品质稳定。
文档编号A61P9/00GK1515581SQ0311482
公开日2004年7月28日 申请日期2003年1月8日 优先权日2003年1月8日
发明者王若谷, 邵胜荣, 范秀林, 鲍建伟, 郑珺, 雷凯琴 申请人:浙江康恩贝制药股份有限公司