专利名称：脯氨酸酯类及含有它的经皮给与制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及适于用作高血压、心力衰竭治疗药的依那普利拉潜药的脯氨酸酯类、含有它的医药以及含有它的经皮给与制剂。
背景技术：
现在，在临床上一般使用钙拮抗剂、血管紧张素转换酶(ACE)阻碍剂、血管紧张素受体拮抗剂等多种经口给与制剂作为高血压症的治疗药。但是，在高血压症患者中，由于有经口给与障碍的吞咽困难的患者、具有消化道障碍的患者等也较多，所以希望开发通过除了经口给与以外的给与途径的降压剂。由于经皮给与制剂由皮肤吸收药物，适合作为有经口给与障碍的患者的治疗方法，但是从通常降压剂经皮吸收性差等理由来看，作为经皮给与制剂的临床使用并未实现。
另一方面，依那普利作为具有ACE阻碍作用的降压剂，在临床上广泛使用经口剂。依那普利是在作为其代谢活体的依那普利拉的两个羧基中，将位于分子中央附近的羧基乙酯化的潜药，经口给与时，由消化道吸收，然后通过肝脏时由代谢转换为依那普利拉而显现出作为ACE阻碍剂的治疗效果。
依那普利和依那普利拉虽然进行经皮吸收，但是制剂中有效成分的物理化学稳定性极差，经皮给与制剂化是不可能的。作为原因显然是由于依那普利和依那普利拉都与脯氨酸环部分的羧基和丙氨酸的二级胺缩合，在分子内进行环化(Analytical Profiles of DrugSubstances，USA Academic press，Inc.，1987，Vol.16，p.207-244、Drug Development And Industrial Pharmacy，USA，Marcel Dekker，Inc.，1986、Vol.12、14，p.2467-2480)。另外，已知依那普利即使经皮吸收，在皮肤中也不会转换为依那普利拉，另外即使在血浆中也不会转换为依那普利拉(Drug Metabolism And Disposition，USA，The American Society for Pharmacology and ExperimentalTherapeutics，1982，Vol.10，1，p.15-19)。因此，由于经皮吸收后需要通过体循环在肝脏内等待代谢活化，从而还存在要想显示出ACE阻碍作用就需要较长的时间，治疗效果易于产生偏差等问题。
另外，还研究了将依那普利拉进行化学改性，转换为具有仍旧保持原来药效的适于经皮吸收物理性质的药剂，即所谓的潜药化。例如，已知报道了不但依那普利分子中央部分的羧基，而且脯氨酸环部分的羧基也被乙酯化的潜药，并且与马来酸依那普利相比经皮吸收性提高了(THE STUDY OF TRANSDERMAL ADMINISTRATION OF ACE INHIBITORSAND IMPROVED ABSORPTION OF THEIR PRODRUGS”、[online]、2000年11月2日、Noven pharmaceuticals，Inc.，AAPS Annual Meetingand Exposition(2000)，internet<URLhttp//www.noven.com/NovenDoc 3.pdf>)。但是，在该化合物中，脯氨酸环上羧基的乙酯虽然通过人皮肤内的酯酶水解50％以上，但是由于另一方的乙酯不水解，所以与依那普利同样地存在需要在肝脏中代谢活性化的问题。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供将依那普利拉通过经皮吸收在临床上用于治疗，经皮吸收性和物理化学稳定性极好，而且在经皮吸收的过程易于转换为依那普利拉的依那普利拉潜药、含有它的医药以及含有它的经皮给与制剂。
在该情况下，本发明者们合成并研究了大量可以成为依那普利拉潜药的化合物，结果发现虽然将依那普利拉脯氨酸环上的羧基用烷基酯化所得的化合物不能改善经皮吸收性，但是用具有特定取代基的低级烷基酯化的化合物物理化学稳定性极好，皮肤渗透性高，皮肤渗透时适于以高的比例作为转换为依那普利拉的潜药，从而完成了本发明。
即，本发明提供了用通式(I)表示的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐以及含有它的医药、特别是经皮给与制剂 (式中，R1表示羟基低级烷基、低级烷氧基低级烷基或者低级烷氧基低级烷氧基低级烷基)。
另外，本发明提供了用于制造含有上述通式(I)表示的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐的医药的用途。
另外，本发明提供了以给与用上述通式(I)表示的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐为特征的由ACE活化而受影响或者引起的疾病的处置方法。
本发明的脯氨酸酯类(I)及其药学上可接受的盐适于作为有利于高血压症、心脏病(心肥大、心力衰竭、心肌梗塞等)、肾炎和脑卒中等循环系统疾病等预防、治疗的药剂的依那普利拉的潜药，含有这些的医药从药效和使用性的观点来看适合作为经皮给与制剂、特别是贴剂。
具体实施例方式
作为通式(I)的式中R1和后述的通式(II)中的R2的各取代基的用语中，“低级烷基”指碳原子数1～6的直链状或者支链状的烷基，“低级烷氧基”指碳原子数1～4的直链状或者支链状的烷氧基。
作为用R1表示的羟基低级烷基可列举羟基C1-6烷基，例如羟甲基、羟乙基、羟丙基、羟丁基、羟戊基、羟己基等，其中优选2-羟乙基、3-羟丙基、4-羟丁基。
作为用R1表示的低级烷氧基低级烷基可列举C1-4烷氧基-C1-6烷基，例如甲氧基乙基、乙氧基乙基、丙氧基乙基、异丙氧基乙基、丁氧基乙基、异丁氧基乙基、仲丁氧基乙基、叔丁氧基乙基、甲氧基丙基等，其中优选甲氧基乙基。
作为用R1表示的低级烷氧基低级烷氧基低级烷基可列举C1-4烷氧基-C1-4烷氧基-C1-6烷基，例如甲氧基甲氧基乙基、甲氧基乙氧基乙基、甲氧基甲氧基丁基等，其中优选甲氧基乙氧基乙基。
在本发明的化合物(I)中，含有水合物、各种溶剂合物，还包括所有结晶形式。
作为本发明的化合物(I)的药学上可接受的盐可列举例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、磷酸盐等与无机酸的盐；乙酸盐、丙酸盐、三氟乙酸盐、草酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、苹果酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐等与有机酸的盐；锂盐、钠盐、钾盐等与碱金属的盐，钙盐、镁盐等与碱土金属的盐等。
作为本发明的化合物(I)，优选1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-羟乙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸3-羟丙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸4-羟丁酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-甲氧基乙酯。
本发明的化合物(I)例如可按如下所示的反应式制造。
(式中，R2表示苄氧基低级烷基、低级烷氧基低级烷基或者低级烷氧基低级烷氧基低级烷基，Bn表示苄基，R1与上述相同)。
即，可以通过将化合物(II)接触还原使苄基脱保护来制造本发明的化合物(I)(工序A)。
反应在甲醇、乙醇、醚、四氢呋喃、二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺等或者这些的混合溶剂中，在钯炭、钯黑、氯化三(三苯基膦)铑、氧化铂等金属催化剂存在下，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，在常压或者中压氢压下通过伴随接触还原来进行。由该反应可以进行苄酯或者苄醚的脱保护。
作为本发明化合物(I)的制造中间体的化合物(II)，例如，可以根据下面的反应式，通过使依那普利(III)叔丁酯化获得化合物(IV)(工序B)、选择性地使该化合物(IV)的乙酯水解获得化合物(V)(工序C)、使该化合物(V)苄酯化获得化合物(VI)(工序D)、以及使该化合物(VI)的叔丁酯水解(工序E)，接着使R2OH(VIII)与其反应获得。
(式中，R2和Bn与上述相同)。
工序B在醚、四氢呋喃、二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺等或者这些的混合溶剂中，在浓硫酸或者三氟化硼醚络合物等酸催化剂存在下，在由-78℃至室温的的温度范围内，通过使依那普利(III)与异丁烯反应进行。工序C通过使化合物(IV)在氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液等碱性水溶液中酯水解来进行。工序D在醚、四氢呋喃、二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿等或者这些的混合溶剂中，在氨基化钠、氨基化钾、氢化钠、碳酸钠、叔丁醇钾等碱存在下，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，通过使苄基卤化物与化合物(V)反应来进行。工序E在醚、四氢呋喃、二噁烷、二氯甲烷、氯仿等或者这些的混合溶剂中，在甲酸、乙酸、三氟乙酸、盐酸、氯化氢-二噁烷溶液等酸存在下，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，通过进行化合物(VI)的叔丁基酯的脱保护来进行。工序(F)在苯、甲苯、二甲苯等或者这些的混合溶剂中，在对甲苯磺酸等酸催化剂存在下，在溶剂的沸点温度下，通过使化合物(VII)和醇(VIII)反应来进行。
另外，化合物(II)可以根据如下的反应式，通过使化合物(IX)水解获得化合物(X)(工序G)、进行苄酯化而成为化合物(XI)(工序H)、使该化合物(XI)再与L-丙氨酸叔丁酯反应成为化合物(XII)(工序I)、选择性地使该化合物(XII)的叔丁酯水解(工序J)、接着使化合物(XIV)与其缩合(工序K)来进行制造。
(式中，R2和Bn与上述相同)。
工序G通过使化合物(IX)在氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液等碱性水溶液中酯水解来进行。工序H在醚、四氢呋喃、二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、氯仿等或者这些的混合溶剂中，在氨基化钠、氨基化钾、氢化钠、碳酸钠、叔丁醇钾等碱存在下，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，通过使苄基卤化物与化合物(X)反应来进行。工序I通过使化合物(XI)在二氯甲烷、氯仿等溶剂中，在2，6-二甲基吡啶存在下，与三氟甲磺酸酸酐反应成为三氟甲磺酸酯，然后使其与L-丙氨酸叔丁酯盐酸盐反应来进行。工序J在醚、四氢呋喃、二噁烷、二氯甲烷、氯仿等或者这些的混合溶剂中，在甲酸、乙酸、三氟乙酸、盐酸、氯化氢二噁烷溶液等酸存在下，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，通过进行化合物(XII)的叔丁基酯的脱保护来进行。工序K在醚、四氢呋喃、二噁烷、N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、氯仿、苯、甲苯等或者这些的混合溶剂中，在0℃至溶剂沸点的温度范围内，根据需要在三乙胺、乙基二异丙基胺、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一烷-7-烯等碱存在下，使用1-羟基-1H-苯并三唑、N-羟基琥珀酰胺、N，N’-二环己基碳化二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基碳化二亚胺)等缩合剂使化合物(XIII)和化合物(XIV)缩合来进行。
另外，化合物(XIV)可以在苯、甲苯、二甲苯等或者这些的混合溶剂中，在对甲苯磺酸等酸催化剂存在下，在溶剂的沸点温度下，通过使脯氨酸(XV)和醇(VIII)反应获得(工序L)。
(式中，R2与上述相同)。
这样得到的本发明化合物(I)可以通过再结晶、柱层析法等通用的手段进行单离精制。
另外，本发明化合物(I)可以用常规方法衍生出药学上可接受的与酸或者碱的盐。
本发明化合物(I)及其药学上可接受的盐通过经皮给与，由于可转换为依那普利拉，所以具有极好的ACE阻碍活性。因此，可以用于由ACE活化而受影响或者引起的疾病等，例如高血压症、心脏病(心肥大、心力衰竭、心肌梗塞等)、肾炎和脑溢血等循环系统疾病等预防、治疗。本发明化合物(I)的成人每天的给与量可以根据患者的症状和体重、年龄、化合物种类的不同而改变，但是优选为约1～1000mg。
作为本发明的经皮给与制剂，还优选混合用于更好地进行经皮吸收性的经皮吸收促进剂。作为经皮吸收促进剂，例如，可以使用选自脂肪酸酯和非离子性表面活性剂的一种或者二种以上。
作为脂肪酸酯，可列举例如由碳原子数6～22的脂肪酸类和碳原子数1～20的醇类组成的脂肪酸酯。作为碳原子数6～22的脂肪酸类可列举例如己酸、庚酸、辛酸、癸酸、十一碳烯酸、月桂酸、十四烷酸、棕榈酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亚油酸等一羧酸和己二酸、癸二酸等二羧酸等。作为碳原子数1～20的醇类，可列举例如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇、叔丁醇、己醇、辛醇、1-辛基十二烷醇等。因此，作为脂肪酸酯，可列举例如己二酸二异丙酯、癸二酸二乙酯、十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、硬脂酸丁酯、十四烷酸十八烷酯、十四烷酸丁酯、月桂酸己酯、棕榈酸辛酯、油酸乙酯等。其中，优选十四烷酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、癸二酸二乙酯等，特别优选十四烷酸异丙酯。
作为非离子表面活性剂，可列举例如聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯烷基芳基醚、脂肪酸酰胺、甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、嵌段聚合物型非离子表面活性剂、聚甘油脂肪酸酯等，但是其中，优选聚氧乙烯烷基醚、脂肪酸酰胺、甘油脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。
作为聚氧乙烯烷基醚，可列举聚氧乙烯十六烷基醚、聚氧乙烯油醚、聚氧乙烯十二烷基醚等，但是特别优选聚氧乙烯十二烷基醚(月桂聚乙二醇)。
作为脂肪酸酰胺，可列举月桂酸一乙醇酰胺、月桂酸二乙醇酰胺、油酸二乙醇酰胺等，但是特别优选月桂酸二乙醇酰胺。
作为甘油脂肪酸酯，可列举一辛酸甘油酯、一月桂酸甘油酯、一棕榈酸甘油酯、一油酸甘油酯、一硬脂酸甘油酯等，但是特别优选一辛酸甘油酯和一月桂酸甘油酯。
作为山梨糖醇酐脂肪酸酯，可列举山梨糖醇酐一辛酸酯、山梨糖醇酐一月桂酸酯、山梨糖醇酐一棕榈酸酯、山梨糖醇酐一油酸酯、山梨糖醇酐一硬脂酸酯等，但是特别优选山梨糖醇酐一辛酸酯。
作为聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯，可列举聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐一棕榈酸酯等，但是特别优选聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。
作为经皮吸收促进剂，优选选自十四烷酸异丙酯、月桂聚乙二醇、月桂酸二乙醇酰胺、一辛酸甘油酯、一月桂酸甘油酯、山梨糖醇酐一辛酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。
本发明的经皮给与制剂的剂型没有特别的限制，但是可列举软膏剂、乳剂、贴剂、洗剂等，从患者使用性的方面来看优选贴剂。
作为贴剂的形式，可列举由公知的粘附剂和支撑体构成的，可通过在支撑体的一个面上形成含有本发明化合物(I)或者其盐以及经皮吸收促进剂等添加剂的粘合剂层，然后裁剪为规定大小获得。另外，在不与支撑体接触侧，也可以通过如剥离片的保护体，或者通过使自身形成辊状进行保护。
作为粘合剂，可使用例如在常温下具有压敏性的丙烯酸系粘合剂、橡胶系粘合剂、硅系粘合剂等。
作为丙烯酸系粘合剂，优选例如把(甲基)丙烯酸烷基酯(其中，(甲基)丙烯酸意味着甲基丙烯酸或者丙烯酸)作为主成分的均聚物或者与其它共聚性单体的共聚物等。作为(甲基)丙烯酸烷基酯单体，可列举例如(甲基)丙烯酸-2-乙基己酯、(甲基)丙烯酸乙酯、(甲基)丙烯酸丁酯、(甲基)丙烯酸异丁酯、(甲基)丙烯酸己酯、(甲基)丙烯酸辛酯、(甲基)丙烯酸癸酯、(甲基)丙烯酸异癸酯、(甲基)丙烯酸月桂基酯、(甲基)丙烯酸硬脂酰基酯等。作为共聚性单体，可列举例如丙烯酸、甲基丙烯酸、马来酸、富马酸、(甲基)丙烯酸2-羟乙酯、(甲基)丙烯酸羟丙酯、丙烯酰胺、二甲基丙烯酰胺、二乙基丙烯酰胺、丁氧基甲基丙烯酰胺、乙氧基甲基丙烯酰胺、N-乙烯基-2-吡咯烷酮、醋酸乙烯酯、丙酸乙烯酯、苯乙烯、α-甲基苯乙烯、氯乙烯、丙烯腈、乙烯、丙烯、丁二烯等。
作为橡胶系粘合剂没有特别的限制，可列举例如苯乙烯-丁二烯共聚物、苯乙烯-异戊二烯共聚物、苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯嵌段共聚物、天然橡胶、合成异戊二烯橡胶、聚异丁烯、聚乙烯醚、聚氨酯、聚异戊二烯、聚丁二烯等。
作为硅系粘合剂没有特别的限制，可列举例如聚硅氧烷等硅橡胶等。
在这些粘合剂之中，特别优选与本发明化合物(I)的相溶性特别好，另外形成贴剂时的物性良好的苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯嵌段共聚物等。
作为支撑体优选药物不渗透性的，可列举例如聚对苯二甲酸乙二酯、乙酸纤维素、乙基纤维素、尼龙、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、聚乙烯、聚氨酯等树脂薄膜。由于作为支撑体要求柔软性，所以其厚度通常是300μm以下，优选2～100μm以下。
作为剥离片，由于需要使用时简单地从粘合层剥离，所以通常在与粘合层的接触面上使用进行硅涂布的聚对苯二甲酸乙二酯、聚氯乙稀、聚偏氯乙烯、聚酯等薄膜，或者透明玻璃纸等层压薄膜等。剥离片的厚度是1000μm以下，优选30～150μm。
作为贴剂含有治疗需要量的本发明化合物(I)，但是在粘合层中本发明化合物(I)及其盐的混合量相对于粘合层的干燥总质量优选为0.1～30质量％，更优选0.5～20质量％。而且，粘合层的厚度优选为10～400μm。
另外，粘合层中经皮吸收促进剂的混合量相对于粘合层的干燥总质量优选为0.1～60质量％，更优选1～40质量％。特别地，粘合层中脂肪族的混合量优选为1～40质量％，非离子表面活性剂的混合量优选为1～20质量％。
作为形成贴剂粘合层的方法没有特别的限制，但是优选溶液涂布方法。即，将粘合剂、药物、根据需要的经皮吸收促进剂、各种添加剂混合，并将用有机溶剂稀释分散的分散液用给料器涂布在支撑体的表面上，通过使其干燥除去有机溶剂来形成。也可以将上述分散液涂布于剥离片上并使其干燥，然后转印至支撑体上。
本发明的经皮给与制剂在是软膏剂、乳剂或者洗剂的情况下，其基质没有特别的限制，但是可列举白色凡士林、流动石蜡、石蜡、鲨烯、液体石蜡的烃类；鲸蜡醇、硬脂酰醇等高级醇类；异硬脂酸、油酸、月桂酸等高级脂肪酸类；羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素、甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚丙烯酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、涂胶、海藻酸、海藻酸钠、明胶等增粘剂类；甘油、丙二醇、1，3-丁二醇等多元醇类等。
作为本发明的经皮给与制剂也可以根据需要混合抗氧化剂、填充剂、药物溶解辅助剂、抗菌剂、降低皮肤刺激剂等添加剂。作为抗氧化剂，可列举维生素E、维生素C等。作为填充剂，可列举高岭土、皂土、二氧化钛等。作为药物溶解辅助剂，可列举α-环糊精、β-环糊精、Y-环糊精、羟丙基化-β-环糊精、硫代丁醚化-β-环糊精等。作为抗菌剂，可列举氯化新洁尔灭、苯甲酸、甲基对羟基苯甲酸酯等。作为降低皮肤刺激剂可列举硅酸酐等。另外，也可以加入其它的吸收调整剂。作为其它的吸收调整剂，可列举聚异戊二烯氮杂环烷烃类(例如，1-十二烷氮杂环庚烷-2-酮等)、油脂类(例如，橄榄油、蓖麻油、ホホバ油、玉米胚芽油、向日葵油、棕榈油、鲨烯、角鲨烯、橙油、矿物油等)等。
实施例下面通过列举参考例、实施例和制剂例更加详细地说明本发明，但是本发明并不限于这些。
参考例11-[N-[(1S)-1-乙氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸叔丁酯(化合物(IV))将5.0g马来酸依那普利悬浮于40ml水中，然后加入60ml饱和碳酸氢钠水溶液使其完全溶解。用10w/v％盐酸使水溶液pH为4～5，然后用氯仿萃取，用无水硫酸钠干燥有机层。减压下馏去溶剂，使得到的残渣溶解于二噁烷，然后加入浓硫酸1.0ml和30ml异丁烯，移入封管反应装置中后进行密闭，室温下搅拌2天。用饱和碳酸氢钠水溶液中和反应液，然后用乙醚萃取，用水和饱和食盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸钠干燥。用硅胶柱层析法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)精制减压下馏去溶剂得到的残渣，获得作为无色油状物质的标题化合物2.74g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.21-1.38(6H，m)，1.45(9H，s)，1.87-2.25(7H，m)，2.59-2.80(2H，m)，3.24(1H，t，J＝6.6Hz)，3.43-3.60(2H，m)，4.18(2H，q，J＝7.2Hz)，4.41-4.46(1H，m)，7.14-7.30(5H，m).IR(neat)νmax2977，2932，2875，1737，1650，1453，1422，1367，1154，1094，1031，750，701cm-1.
MS m/z(ESI+)433(M+H)+.
参考例2 1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸叔丁酯(化合物(V))使2.0g化合物(IV)溶解于15ml甲醇，然后在0℃下加入1mol/L氢氧化钠水溶液15ml，在室温下搅拌3小时。用10w/v％盐酸中和反应液并馏出甲醇，然后用氯仿萃取，用无水硫酸钠干燥有机层。减压下馏去溶剂，获得作为无色非晶的标题化合物1.87g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.47(3H，d，J＝6.8Hz)，1.87-2.01(3H，m)，2.10-2.25(3H，m)，2.76-2.83(2H，m)，3.33-3.61(3H，m)，4.04-4.15(1H，m)，4.36-4.41(1H，m)，7.10-7.23(5H，m).
IR(KBr)νmax3435，2981，1735，1654，1450，1368，1226，1152，1095，1042，849，750，701cm-1.
MS m/z(ESI+)405(M+H)+. D＝-44.2°(CHCl3，c1.07).
参考例3 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸叔丁酯(化合物(VI))使1.47g化合物(V)溶解于7.0ml的N，N-二甲基甲酰胺，加入684mg溴化苄和502mg碳酸钾，然后在室温下搅拌1小时。向反应液中加入70ml水并用乙酸乙酯萃取，然后用水和饱和食盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸钠干燥。用硅胶柱层析法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)精制减压下馏去溶剂得到的残渣，获得作为无色油状物质的标题化合物1.65g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(3H，d，J＝6.8Hz)，1.43(9H，s)，1.75-2.25(7H，m)，3.20-3.52(4H，m)，4.38(1H，dd，J＝3.6，8.3Hz)，5.13(1H，d，J＝12.1Hz)，5.18(1H，d，J＝12.1Hz)，7.05-7.47(10H，m).
IR(neat)νmax2976，1736，1648，1496，1454，1423，1367，1154，750，700cm-1. D＝-86.4°(CHCl3，c1.39).
参考例4 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸(化合物(VII))使1.50g化合物(VI)溶解于6.0ml二氯甲烷，在0℃下滴下6.0ml三氟乙酸，然后在室温下搅拌2小时。减压下馏出溶剂，然后用饱和碳酸氢钠水溶液使反应液成为碱性，接着用10w/v％盐酸使pH为4～5，用氯仿萃取。用无水硫酸钠干燥有机层，然后用硅胶柱层析法(氯仿∶甲醇＝50∶1)精制减压下馏去溶剂得到的残渣，获得作为无色非晶的标题化合物1.09g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.77-2.33(6H，m)，2.55-2.78(2H，m)，3.21-3.45(3H，m)，3.50(1H，q，J＝6.8Hz)，4.40-4.50(1H，m)，5.11(1H，d，J＝12.1Hz)，5.17(1H，d，J＝12.1Hz)，7.06-7.46(10H，m).IR(KBr)νmax3448，3030，2954，2879，1736，1638，1497，1454，1382，1191，749，698cm-1. D＝-86.4°(CHCl3，c1.14).
参考例5 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-苄氧基乙酯(化合物(IIa))使1.06g化合物(VII)溶解于5.0ml苯，加入1.85g的2-苄氧基乙醇和555mg对甲苯磺酸水合物，然后加热回流下，一边通过共沸除去生成的水一边搅拌3小时。馏出溶剂，然后加入乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。用硅胶柱层析法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)精制减压下馏去溶剂得到的残渣，获得作为无色油状物质的标题化合物1.02g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.70-2.35(7H，m)，2.51-2.77(2H，m)，3.20-3.76(6H，m)，4.16-4.42(2H，m)，4.46-4.58(3H，m)，5.12(1H，d，J＝12.1Hz)，5.17(1H，d，J＝12.1Hz)，7.04-7.47(15H，m).IR(neat)νmax3474，3325，3062，3029，2953，2874，1742，1645，1496，1454，1424，1366，1277，1184，1028，916，746，700 cm-1. D＝-67.6°(CHCl3，c1.27).
参考例6 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸3-苄氧基丙酯(化合物(IIb))与参考例5相同地由800mg化合物(VII)和1.52g的3-苄氧基丙醇获得作为无色油状物质的标题化合物943mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.23(3H，d，J＝6.8Hz)，1.75-2.27(9H，m)，2.54-2.73(2H，m).
3.20-3.59(6H，m)，4.09-4.29(2H，m)，4.42-4.54(1H，m)，4.48(2H，s)，5.12(1H，d，J＝12.1Hz)，5.17(1H，d，J＝12.1Hz)，7.04-7.45(15H，m).IR(neat)νmax3473，3322，3061，3029，2956，2871，1740，1646，1496，1454，1423，1364，1277，1182，1096，1046，1029，916，741，699cm-1. D＝-67.3°(CHCl3，c1.02).
参考例7 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸4-苄氧基丁酯(化合物(IIc))
与参考例5相同地由800mg化合物(VII)和1.64g的4-苄氧基丁醇获得作为无色油状物质的标题化合物831mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.24(3H，d，J＝6.6Hz)，1.56-2.30(11H，m)，2.55-2.75(2H，m)，3.21-3.59(6H，m)，4.01-4.20(2H，m)，4.40-4.54(1H，m)，4.49(2H，s)，5.12(1H，d，J＝12.1Hz)，5.18(1H，d，J＝12.1Hz)，7.03-7.45(15H，m).
IR(nea.t)νmax3448，3324，3061，3029，2952，2869，1740，1648，1496，1454，1422，1362，1277，1182，1095，1055，1029，740，699cm-1. D＝-60.9°(CHCl3，c1.56).
参考例8 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-甲氧基乙酯(化合物(IId))与参考例5相同地由800mg化合物(VII)和694mg的2-甲氧基乙醇获得作为无色油状物质的标题化合物725mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(3H，d，J＝6.8Hz)，1.79-2.33(7H，m)，2.54-2.75(2H，m)，3.22-3.73(6H，m)，3.36(3H，s)，4.15-4.33(2H，m)，4.52(1H，dd，J＝3.7，8.4Hz)，5.13(1H，d，J＝12.1Hz)，5.18(1H，d，J＝12.1Hz)，7.07-7.44(10H，m).
IR(neat)νmax3473，3322，3061，3028，2952，2880，1741，1650，1604，1496，1454，1423，1371，1351，1278，1183，1130，1095，1032，751，700cm-1. D＝-77.8°(CHCl3，c1.06).
参考例9 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-(甲氧基乙氧基)乙酯(化合物(IIe))与参考例5相同地由720mg化合物(VII)和986mg的2-(甲氧基乙氧基)乙醇获得作为无色油状物质的标题化合物675mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25(3H，d，J＝6.6Hz)，1.80-2.30(7H，m)，2.54-2.77(2H，m)，3.29(2H，t，J＝6.6Hz)，3.37(3H，s)，3.40-3.76(8H，m)，4.17-4.35(2H，m)，4.36-4.57(1H，m)，7.06-7.44(5H，m).
IR(neat)νmax3481，3321，3061，3028，2952，2928，2878，1741，1646，1454，1423，1366，1278，1184，1112，1047，1030，972，917，850cm-1. D＝-71.1°(CHCl3，c1. 02).
参考例10(R)-2-羟基-4-苯基丁酸(化合物(X))使(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯(化合物(IX))500mg溶解于5.0ml乙醇，然后在0℃下滴下10w/v％氢氧化钠水溶液1.2ml，在0℃下搅拌1小时。馏出溶剂，然后向残渣中滴下1mol/L盐酸，使pH为3，用二乙醚萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压下馏去溶剂，获得作为无色粉末的标题化合物412mg。
m.p.104-107℃1H-NMR(CD3OD)δ1.85-1.95(1H，m)，1.97-2.11(1H，m)，2.74(2H，t，J＝7.9Hz)，4.08(1H，dd，J＝4.2，8.3Hz)，7.13-7.28(5H，m).
IR(KBr)νmax3459，2925，1733，1242，1097，695 cm-1. D＝-8.5°(MeOH，c1.04).
参考例11(R)-2-羟基-4-苯基丁酸苄酯(化合物(XI))使化合物(IX)1.0g溶解于10ml的N，N-二甲基甲酰胺，然后在0℃下加入碳酸氢钠611mg和溴化苄660μL，在50℃下搅拌8小时。馏出溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压下馏去溶剂。使得到的粗结晶用正己烷进行重结晶，获得作为无色结晶的标题化合物1.1g。
m.p.59-60℃1H-NMR(CDCl3)δ1.89-2.00(1H，m)，2.07-2.18(1H，m)，2.63-2.81(2H，m)，4.23(1H，dd，J＝4.0，7.5Hz)，5.16(1H，d，J＝12.7Hz)，5.20(1H，d，J＝12.7Hz)，7.14-7.20(3H，m)，7.24-7.29(2H，m)，7.35-7.39(5H，m).
IR(KBr)νmax3458，2943，1728，1450，1251，1103，699cm-1.
参考例12 N-[(1S)-1-(苄氧基羰基)-3-苯基]-L-脯氨酸叔丁酯马来酸盐(化合物(XII))使2.0g化合物(XI)溶解于20ml二氯甲烷，然后在0℃下加入0.94ml的2，6-二甲基吡啶和1.4ml三氟甲磺酸酐，在0℃下搅拌2小时。向反应液中加入氯仿，用5w/v％重硫酸钾溶液和饱和碳酸氢钠溶液进行洗涤。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥，然后减压下馏出溶剂，获得作为2-三氟甲磺酰氧基-4-苯基丁酸苄酯的褐色粘稠性物质3.5g。使L-脯氨酸叔丁酯盐酸盐2.0g溶解于20ml水中，加入碳酸铵1.7g和2-三氟甲磺酰氧基-4-苯基丁酸苄酯3.5g的硝基甲烷溶液15ml，在50℃下搅拌3小时。向反应液中加入乙酸乙酯，用5w/v％重硫酸钾溶液、饱和碳酸氢钠溶液、水和饱和食盐水进行洗涤。用无水硫酸钠干燥，然后减压下馏出溶剂。使残渣溶解于乙酸乙酯14ml，加入马来酸859mg，加热回流，使所有的结晶溶解，然后慢慢冷却到室温获得标题化合物的粗结晶。使粗结晶用乙酸乙酯进行重结晶，获得作为无色结晶的标题化合物2.63g。
m.p.137-138℃1H-NMR(CDCl3)δ1.44(9H，s)，1.48(3H，d，J＝7.2Hz)，2.24(2H，t，J＝7.3Hz)，2.60-2.79(2H，m)，3.69(1H，q，J＝7.2Hz)，3.77(1H，t，J＝6.2Hz)，5.20(1H，d，J＝11.9Hz)，5.27(1H，d，J＝11.9Hz)，6.34(1H，s)，7.08-7.10(2H，m)，7.18-7.28(3H，m)，7.38-7.39(5H，m).
IR(KBr)νmax2987，1746，1458，1352，1162，996，697cm-1. D＝1.43°(CHCl3，c1.38)参考例13 N-[(1S)-1-(苄氧基羰基)-3-苯基]-L-脯氨酸(化合物(XIII))向2.5g化合物(XII)中加入水，用饱和碳酸氢钠水溶液使pH为8，然后用乙酸乙酯萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，用无水硫酸钠干燥。减压下馏出溶剂，然后滴下氯化氢-二噁烷溶液45ml，在室温下搅拌13小时。减压下馏出溶剂，加入水，加入饱和碳酸氢钠水溶液使pH为6。滤取沉淀物，然后用乙酸乙酯进行重结晶，获得作为无色粉末的标题化合物1.5g。
m.p.160-161℃1H-NMR(CD3OD)δ1.48(3H，d，J＝7.2Hz)，2.14-2.21(2H，m)，2.52-2.62(1H，m)，2.67-2.77(1H，m)，3.57(1H，q，J＝7.2Hz)，4.05(1H，t，J＝6.1Hz)，5.18(1H，d，J＝11.9Hz)，5.36(1H，d，J＝11.9Hz)，7.08-7.27(5H，m)，7.36-7.45(5H，m).
IR(KBr)νmax2781，1739，1618，1356，1262，1192，698cm-1[α]D＝6.6°(MeOH，c1.10).
参考例14 L-脯氨酸3-苄氧基丙酯草酸盐(化合物(XIV))使L-脯氨酸2.30g溶解于20ml苯中，然后加入对甲苯磺酸水合物4.57g和3-苄氧基丙醇1.58ml，加热回流下，一边通过共沸除去生成的水一边搅拌15小时。馏出溶剂，然后加入饱和碳酸氢钠水溶液用氯仿萃取，用饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。减压下馏去溶剂，然后使得到的残渣溶解于16ml乙酸乙酯，加入草酸693mg并加热溶解，然后置于室温下。滤取析出的结晶，用乙酸乙酯进行重结晶，获得作为无色粉末的标题化合物1.92g。
m.p.84-85℃1H-NMR(CDCl3)δ1.90-2.11(5H，m)，2.13-2.45(1H，m)，3.41-3.50(1H，m)，3.52(2H，t，J＝6.0Hz)，4.24-4.39(2H，m)，4.43-4.51(1H，m)，4.48(2H，s)，7.30-7.38(5H，m).
IR(KBr)νmax3348，2873，1742，1637，1560，1458，1402，1279，1229，1108，720，497cm-1[α]D＝-28.7°(CHCl3，c1.17).
参考例15 1-[N-[(1S)-1-苄氧基羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸3-苄氧基丙酯(化合物(IIb))使化合物(XIV)500mg溶解于水6ml，加入饱和碳酸氢钠水溶液使pH为8，然后用氯仿萃取。用饱和食盐水洗涤有机层，然后用无水硫酸钠干燥。使减压下馏出溶剂得到的残渣溶解于氯仿7ml。在0℃下加入化合物(XIII)483mg、N，N’-二环己基碳化二亚胺291mg和1-羟基-1H-苯并三唑水合物237mg，由0℃至室温慢慢升温，在室温下搅拌23小时。将反应液用5w/v％硫酸氢钠水溶液、饱和碳酸氢钠水溶液、水和饱和食盐水洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。馏出溶剂，然后用硅胶柱层析法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶3-1∶2)精制得到的残渣，获得作为无色油状物质的标题化合物747mg。
实施例1 1-[N-[(1S)-1-羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-羟乙酯(本发明化合物1)使化合物(IIa)2.65g溶解于乙醇100ml，加入5质量％钯炭1.3g，在氢氛围下(4大气压)、室温下搅拌13小时。通过硅藻土过滤除去催化剂，将滤液在减压下浓缩，然后用硅胶柱层析法(氯仿∶甲醇＝3∶1)精制得到的残渣，获得作为无色非晶的标题化合物1.49g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.47(3H，d，J＝6.8Hz)，1.80-2.36(6H，m)，2.60-2.83(2H，m)，3.27-3.95(6H，m)，3.96-4.57(4H，m)，6.97-7.22(5H，m).
IR(KBr)νmax3422，3028，2956，2879，1742，1655，1560，1543，1509，1498，1451，1388，1282，1187，1087，1051，895，861，753，702cm-1.
MS m/z(ESI+)393(M+H)+. D＝-26.4°(CHCl3，c1.20).
实施例2 1-[N-[(1S)-1-羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸3-羟丙酯(本发明化合物2)与实施例1相同地由化合物(IIb)2.97g获得作为无色非晶的标题化合物2.06g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.55(3H，d，J＝7.0Hz)，1.78-2.38(8H，m)，2.65-2.87(2H，m)，3.31(1H，t，J＝7.0Hz)，3.36-3.80(5H，m)，4.00-4.15(1H，m)，4.17-4.39(2H，m)，4.47-4.60(1H，m)，7.07-7.28(5H，m).
IR(KBr)νmax3385，3027，2958，2878，174l，1655，1560，1543，1509，1498，1439，1388，1280，1186，1093，1053，920，863，751，702cm-1.
MS m/z(ESI+)407(M+H)+. D＝-33.0°(CHCl3，c1.04).
实施例3 1-[N-[(1S)-1-羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸4-羟丁酯(本发明化合物3)与实施例1相同地由化合物(IIc)4.51g获得作为无色非晶的标题化合物2.92g。
1H-NMR(CDCl3)δ1.35-2.31(10H，m)，1.49(3H，d，J＝6.8Hz)，2.63-2.83(2H，m)，3.33(1H，t，J＝6.8Hz)，3.38-3.77(5H，m)，3.88-4.55(4H，m)，7.00-7.24(5H，m).IR(KBr)νmax3386，3028，2953，2874，1742，1656，1451，1382，1281，1214，1184，1093，1046，944，859，752，701cm-1.
MS m/z(ESI+)421(M+H)+. D＝-32.9 °(CHCl3，c1.31).
实施例4 1-[N-[(1S)-1-羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-甲氧基乙酯(本发明化合物4)使化合物(IId)700mg溶解于乙醇4.0ml，加入5质量％钯炭140mg，在氢氛围下(常压)、室温下搅拌1小时。通过硅藻土过滤除去催化剂，将滤液在减压下浓缩，然后用硅胶柱层析法(氯仿∶甲醇＝20∶1)精制得到的残渣，获得作为无色非晶的标题化合物547mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.45(3H，d，J＝7.0Hz)，1.86-2.35(6H，m)，2.64-2.86(2H，m)，3.25(1H，t，J＝7.0Hz)，3.36(3H，s)，3.42-3.69(4H，m)，3.82(1H，q，J＝6.8Hz)，4.15-4.43(2H，m)，4.54(1H，dd，J＝3.5，8.3Hz)，7.06-7.25(5H，m).
IR(KBr)νmax3448，3028，2954，2882，1743，1655，1560，1543，1523，1509，1498，1450，1380，1280，1185，1129，1094，1034，916，865，753，702cm-1.
MS m/z(ESI+)407(M+H)+. D＝-44.5°(CHCl3，c1.10).
实施例5 1-[N-[(1S)-1-羰基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯(本发明化合物5)与实施例4相同地由化合物(IIe)640mg获得作为无色非晶的标题化合物465mg。
1H-NMR(CDCl3)δ1.43(3H，d，J＝6.8Hz)，1.87-2.32(6H，m)，2.64-2.85(2H，m)，3.22(1H，t，J＝6.4Hz)，3.37(3H，s)，3.4 3-3.80(8H，m)，4.17-4.45(2H，m)，4.55(1H，dd，J＝3.5，8.3Hz)，7.09-7.28(5H，m).
IR(KBr)νmax3448，3027，2930，2880，1742，1655，1560，1543，1523，1509，1498，1451，1382，1281，1187，1139，1109，1048，919，859，752，703cm-1.
MS m/z(ESI+)451(M+H)+. D＝-41.1°(CHCl3，c1.05).
实施例6稳定性试验分别向玻璃瓶中加入本发明化合物1～5和依那普利约5mg量，向其中加入十四烷酸异丙酯100μL而使其溶解(或者悬浮)。将这些密封地用塞子塞住保存于60℃的恒温槽中1周。向这些的溶液中加入甲醇使其溶解，把总量为100ml的溶液作为试样溶液，用HPLC法进行分析。计算出各化合物的峰面积对得到的所有峰面积总值的比(面积百分率)。该结果，如表1中所示，依那普利完全分解为闭环体及其它的分解物，与此相反，本发明化合物具有良好的稳定性。
表1
实施例7使用培养人皮肤的代谢试验将三维培养人皮肤模型(LSE-high，东洋纺)装入保温于37℃下的纵型扩散杯纵，向受体相内填充等渗压磷酸缓冲溶液(PBS，pH7.4)7ml。放置1小时，然后将使本发明化合物1～3和作为比较例的依那普利的浓度为1.0质量％地溶解于十四烷酸异丙酯所得的溶液200μL<p>表1制备经掺杂的热解法二氧化硅的实验条件
注初级空气＝中心管中空气的流量；H2core＝中心管中氢气的流量；气体温度＝中心管喷嘴处的气体温度；气溶胶流量＝盐溶液转化成气溶胶形态的质量流量；空气气溶胶＝气溶胶运载气体(空气)的流量表3
a)(依那普利)/(依那普利拉)的浓度比
权利要求
1.脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐，其用通式(I)表示 式中，R1表示羟基低级烷基、低级烷氧基低级烷基或者低级烷氧基低级烷氧基低级烷基。
2.权利要求1记载的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐，其中脯氨酸酯类选自1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-羟乙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸3-羟丙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸4-羟丁酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、1-[N-[(1S)-1-羧基-3-苯基丙基]-L-丙氨酰]-L-脯氨酸2-甲氧基乙酯。
3.医药，其含有权利要求1或者2记载的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐。
4.经皮给与制剂，其含有权利要求1或者2记载的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐。
5.权利要求4记载的经皮给与制剂，经皮给与制剂是贴剂。
6.权利要求4或者5记载的经皮给与制剂，其含有选自脂肪酸酯和非离子表面活性剂的一种或者二种以上的经皮吸收促进剂。
7.权利要求6记载的经皮给与制剂，其中，经皮吸收促进剂选自十四烷酸异丙酯、月桂聚乙二醇、月桂酸二乙醇酰胺、一辛酸甘油酯、一月桂酸甘油酯、山梨糖醇酐一辛酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇酐一油酸酯。
8.用于制造含有权利要求1或者2记载的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐的医药的用途。
9.权利要求8记载的用途，医药是经皮给与制剂。
10.权利要求8或者9记载的用途，医药是由ACE活化而受影响或者引起的疾病的预防或者治疗药。
11.疾病的处置方法，其是以给与权利要求1或者2记载的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐为特征的由ACE活化而受影响或者引起的疾病的处置方法。
12.权利要求11记载的处置方法，给与手段是经皮给与。
全文摘要
本发明提供了用通式(I)表示的脯氨酸酯类或者其药学上可接受的盐(式中，R
文档编号A61K9/00GK1681839SQ03821438
公开日2005年10月12日 申请日期2003年9月8日 优先权日2002年9月11日
发明者古石誉之, 南邦弘, 箕轮贵志, 小峰美穗, 木村邦彦 申请人:东亚荣养株式会社