专利名称：和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明属天然化合物的用途，涉及从植物提取的或人工合成的和厚朴酚的新用途，尤其涉及和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性的药物中的用途。
背景技术：
和厚朴酚是从植物厚朴中提取的一种天然化合物。其化学结构如下 和厚朴酚在对其抗血栓、抗焦虑等体内实验时(1-5)，证明能被胃肠道吸收，并具有体内滞留时间较长、没有明显毒副作用等特点。
肿瘤多药耐药(Multdrug resistance，MDR)是指肿瘤细胞在化疗药物或其他因素作用下，对多种化学结构相似或不同的其他药物产生耐药性(6-9)。MDR是临床化疗失败的重要原因，大多数肿瘤患者的死因与耐药直接或间接相关，因此，寻找多药耐药逆转剂是抗肿瘤药物研究的重要策略之一。肿瘤多药耐药形成的分子机制有多种机制，其中最主要的机制是肿瘤细胞多药耐药基因mdr1高表达，mdr1的编码产物为P-糖蛋白(permeabiliaty-glycoprotein，P-gp)。P-gp为跨膜蛋白质，分子量约170KD，其功能就像一个“药泵”，在消耗ATP时把细胞内的药物逆浓度梯度泵出细胞外，使细胞内药物积聚减少，产生耐药。临床上使用的多种化疗药物包括紫三醇类、蒽环类、长春碱类等均是P-gp的底物。因此，当肿瘤细胞产生由p-gp高表达引起的耐药性时，肿瘤细胞将对多种结构和功能不同的药物产生抗药性，导致肿瘤化疗的失败。多种因素可导致肿瘤细胞内P-gp的高表达，如药物诱导、低氧等可诱导多种肿瘤细胞和肿瘤组织mdr1基因转录与表达4。
发明内容
本发明的目的是提供一种和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性的药物中的用途，该和厚朴酚英文名为honokiol，CAS number35354-74-6，分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，对人体毒性小，本发明制备的和厚朴酚药物包括制剂允许的药物赋形剂或载体。
本发明的和厚朴酚也在制备临床肿瘤化疗药物中的应用。
所述的和厚朴酚药物可按本制剂领域已知方法制成肠道或非肠道组合药的剂型。制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、滴丸剂或注射剂。
制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。
本发明所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤药物中的应用的有益效果如下(1)和厚朴酚可有效抑制肿瘤的多药耐药性，该化合物作用于mdr1，能有效控制肿瘤血管的生成，具有临床应用前景；(2)和厚朴酚毒性低，而目前所用的临床抗肿瘤药物对人体都有较大的毒性；(3)目前临床上缺乏能逆转肿瘤多药耐药性的药物，因此和厚朴酚具有很好的临床抗肿瘤药的应用前景。
图1为mdr1基因在敏感细胞KB和耐药细胞KBV200中转录水平的表达。
图2为柔红霉素在KB和KBV中的积聚。
图3A为和厚朴酚对KBV200细胞内耐药基因mdr1和低氧诱导因子-1的mRNA含量的影响。
图3B为和厚朴酚对KBV200细胞内耐药基因mdr1和低氧诱导因子-1的mRNA含量的影响的直方图。
图4A为和厚朴酚对KBV200细胞内低氧诱导因子-1的蛋白质含量的影响。
图4B为和厚朴酚对KBV200细胞内低氧诱导因子-1的蛋白质含量影响的直方图。
图5为和厚朴酚对KBV200细胞内耐药基因mdr1产物P-gp含量的影响。
图6A为和厚朴酚对KBV200细胞内罗丹明123积聚的影响。
图6B为和厚朴酚对KBV200细胞内罗丹明123积聚的影响的直方图。
具体实施例方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1人口腔鳞癌细胞系KB及其抗药细胞株KBV200细胞内的mdr1表达的测定。
(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌细胞系KB及其抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所。
仪器电泳仪，紫外成像仪。
(2)实验方法细胞培养KB和KBV200细胞用10％小牛血清RPMI 1640培养液(美国Sigma公司)在37C、5％CO2条件下培养。耐药细胞株KBV200为长春新碱诱导建立的耐药株，维持在200ng/ml长春新碱(VCR)中稳定生长，实验前一周停药培养。
逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测MDR基因mdr1的表达，β-actin(肌动蛋白)作为内参照。总RNA用RNA提取试剂盒Trizol抽提并参照试剂盒说明书进行操作。分别取1×10-5/ml的细胞，采用RNA提取试剂盒Trizol(美国Invitrogen公司)试剂按操作说明提取总RNA，经紫外分光光度计测定，进行RNA定量。采用美国Promega公司的逆转试剂盒，按其方法说明进行cDNA合成。反应体系中RNA 2ug，AMV-RT缓冲液4ul，RNA酶抑制剂RNasin 20U，dNTP 2ul，cDNA引物50pmol/L，酶转录酶AMV 20U，25mmol/L MgCl24ul，置37C水浴60分钟，95C 10分钟合成cDNA。MDR1引物上游序列5’TGTACCCATCATTGCAATAGCAGG3’，下游序列为5’ATATGTTCAAACTTCTGCTCCTGA3’，间隔序列长度为164bp。25ul的PCR反应体系，含5×PCR反应液5ul，上下游引物各7.5pmol/L，1.5U Taq酶和50ng cDNA，反应条件为95℃ 5分钟→1循环{95℃ 1.5分钟58℃ 1分钟，72℃ 3分钟}→33循环{95℃ 0.75分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟}→1循环{95℃ 0.75分钟，58℃ 1分钟，72℃ 3分钟}→72℃ 7分钟→4℃保持。β-actin作为内对照，同MDR1的PCR体系，上游引物为5’AGGCCAACCGCGAGAAGATGACC3’，下游引物为5’GAAGTCCAGGGCGACGTAGCAC3’，上下游引物序列间隔为350bp，反应条件为95℃ 5分钟→25-28循环{95℃ 20秒→55℃ 20秒→72℃ 30秒→72℃ 7分钟→4℃保持。
(3)实验结果参见图1，其中M为分子量标记。RT-PCR检测mdr1基因的转录水平的表达发现KB为阴性，KBV200为强阳性，说明KBV细胞为P-gp高表达的多药耐药细胞。
实施例2柔红霉素在KB和KBV200细胞内积聚。
(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌细胞系KB及其抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所。柔红霉素(DNR)为浙江海正药业有限公司产品。
仪器美国BECTON DICKSON(BD)流式细胞仪。
(2)实验方法细胞培养KB和KBV200细胞均由浙江大学肿瘤研究所提供，用10％小牛血清RPMI 1640培养液在37C、5％CO2条件下培养。耐药细胞株KBV200为长春新碱诱导建立的耐药株，维持在200ng/ml VCR中稳定生长，实验前一周停药培养。
流式细胞仪检测细胞内DNR含量DNR为蒽环类药物，具有自发荧光的特点。可采用流式细胞仪检测荧光法测定细胞内DNR含量，以DNR荧光强度(fluore秒cent inten秒ity，FI)代表细胞内DNR浓度的相对含量。KB和KBV200细胞分别制成1×106细胞悬液，加入2ug/ml DNR，在37℃、5％CO2条件下孵育1h，离心，冷磷酸缓冲液(PBS)洗涤2次，行流式细胞仪(FCM)检测。
(3)实验结果用FCM计数10,000细胞中的荧光值，结果显示KBV200细胞中DNR含量明显低于KB细胞。从荧光均值来比较，KB荧光均值为1000.6，而KBV200则只有200.2，KB约为KBV200的5倍，参见图2，KB和KBV200细胞中均加入2ug/mlDNR，其中图aKBV200细胞内DNR荧光均值为200.2，图bKB细胞内的DNR荧光均值为1000.6。据此可看出KBV200能通过P-gp有效外排DNR，实施例3和厚朴酚对mdr1和低氧诱导因子mRNA表达的抑制作用(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌细胞系KB及其抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所。柔红霉素(DNR)为浙江海正药业有限公司产品。
仪器电泳仪，紫外成像仪，细胞培养箱。
(2)实验方法细胞培养KBV200细胞接种于40ml玻璃培养瓶，用含10％小牛血清的RMPI-1640培养基、放置于37℃、5％CO2的孵葙培养；用120-40ng/ml的长春新碱递减维持耐药性，停药后两天用于实验；细胞增殖至90％满时用0.25％胰酶-0.02％二乙胺四乙酸(EDTA)消化，生理盐水洗2次，离心去胰酶残留后用新鲜培养基配成1×105/ml的细胞悬液；取500ul接种于24孔板作PCR检测，或取2000ul接种于6孔板作FCM和西部印迹法(Western Blot)检测；实验前培养细胞约24小时使贴壁。
细胞分组把细胞分为常氧组(N)与低氧组(H)两大组。低氧组用100uMCoCl2(氯化鈷)模拟；然后根据和厚朴酚的浓度各分为3个小组，分别为N0、N1、N5和H0、H1、H5，其中N/H之后的数值表示和厚朴酚的浓度，如N1表示常氧组和厚朴酚浓度1ug/ml，H1表示低氧组和厚朴酚浓度1ug/ml，依此类推。
RT-PCR新鲜培养基稀释和厚朴酚母液(5mg/ml)，使成0-5ug/ml的工作液，充分混匀后以此更换细胞培养液，放置5％CO2、37℃孵葙培养；常氧组加药后连续培养12小时，低氧组培养1小时后加入CoCl2溶液，使成终浓度100uM，继续培养11小时；分别取1×10-5/ml的细胞，采用Trizol(Invitrogen公司)试剂按操作说明提取总RNA，经紫外分光光度计测定，进行RNA定量。采用Promega公司的逆转试剂盒，按其方法说明进行cDNA合成。反应体系中RNA 2ug，AMV-RT缓冲液4ul，RNA酶抑制剂(Rnasin)20U，dNTP 2ul，cDNA引物50pmol/L，逆转录酶AMV 20U，25mmol/L MgCl24ul，置37C水浴60分钟，95C 10分钟合成cDNA。
表1mdr1、低氧诱导因子-1(HIF-1)和那对照β-actin的引物序列引物 上游引物(5’-3’) 下游引物(5’-3’) PCR产物(碱基对bp)HIF-1αCCAGTTACGTTCCTTCGATCAG TCACCAAACAGAGCAGGAAAAG 143MDR1 TGTACCCATCATTGCAATAGCAGG ATATGTTCAAACTTCTGCTCCTGA165β-actin AGGCCAACCGCGAGAAGATGACC GAAGTCCAGGGCGACGTAGCAC 350PCR条件HIF-194℃ 5分钟→35循环{94℃ 30秒→54℃ 30秒→72℃30秒}→72℃ 5分钟→4℃保存MDR195℃ 5分钟→1循环{95℃ 1.5分钟 58℃ 1分钟，72℃ 3分钟}→33循环{95℃ 0.75分钟，58℃ 1分钟，72℃ 1分钟}→1循环{95℃ 0.75分钟，58℃ 1分钟，72℃ 3分钟}→72℃ 7分钟→4℃保持。
β-actin95℃ 5分钟→25-28循环{95℃ 20秒→55℃ 20秒→72℃ 30秒→72℃ 7分钟→4℃保持。
(3)实验结果设置0、1和5ug/ml三个浓度作为检测化学低氧及常氧时和厚朴酚对KBV200细胞多药耐药的影响。参见图3AN常氧；H化学低氧，即用CoCl2处理；Honokiol和厚朴酚；β-actin为β-肌动蛋白；MDR1为多药耐药基因；HIF-1α为低氧诱导因子-1α。KBV200细胞基础水平HIF-1αmRNA表达水平较低，CoCl2(100uM)明显上调HIF-1α及MDR1mRNA表达，PCR产物电泳条带的灰度值分别增加48.5％和35.7％。常氧时，和厚朴酚浓度依赖性抑制HIF-1αmRNA表达，1ug/ml时的抑制率为84％，和厚朴酚对化学低氧时HIF-1αmRNA表达的抑制同样显著，1ug/ml时的抑制率达到90％。和厚朴酚对KBV200细胞MDR1mRNA的影响趋势基本与HIF-1α一致CoCl2(100uM)作用11hr秒上调MDR1mRNA表达，PCR产物比基础水平增加36％。和厚朴酚浓度依赖性下调常氧和化学低氧时MDR1mRNA的表达，参见图3A和图3B，图3B中a为和厚朴酚对HIF-1mRNA表达的影响；b为和厚朴酚对MDR1 mRNA表达的影响；N0表示常氧；N1和N5表示在常氧下加1和5μg/ml和厚朴酚；H0、H1、H5表示在CoCl2处理同时加入0，1，5μg/ml和厚朴酚。但下调低氧时的幅度更大，5ug/ml浓度在化学低氧时抑制率达到98％，而同样浓度在常氧时抑制率是51％。
实施例4和厚朴酚下调低氧诱导因子-1α在KBV细胞中的积聚。
(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚，中国药品与生物制品鉴定所；聚偏氟乙烯膜(PVDF)膜(Bio-Rad公司)，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠抗体(KPL，美国)，鼠抗人HIF-1α(NeoMarkers，美国)，化学发光检测系统ECL反应液(SantaCruz公司)，蛋白质测定试剂盒(DC Protein Assay Kit，Bio-Rad公司)，免疫组织化学试剂盒(福州迈新公司)。
仪器培养瓶，培养板，二氧化碳培养箱，电泳仪，电转膜仪。
(2)实验方法细胞培养分组根据不同和厚朴酚浓度分为5组，分别以1、2、3、4、5表示。1组为对照；2组加CoCl2(150uM)；3组CoCl2(150uM)+和厚朴酚0.1ug/ml；4组CoCl2(150uM)+和厚朴酚0.5ug/ml；5组CoCl2(150uM)+和厚朴酚1ug/ml。
药物诱导KBV200细胞2×104每孔接种于24孔板，每组3个复孔；用含3％小牛血清的RPIM 1640培养基稀释和厚朴酚储存液(5mg/ml)，充分混匀，配成所需浓度，并以此更换细胞培养液；药物作用1小时后加入CoCl2(对照组除外)，使其终浓度为150uM，继续培养3小时。收集细胞，提取RNA或蛋白质，做西部印迹法(Western Blot)检测细胞内的HIF-1蛋白质含量。
Western blot收集培养细胞，用生理盐水洗两次，细胞沉淀加入1×蛋白提取缓冲液(protein extract buffer)，吹散，沸水中煮15分钟，13000转速(rpm)离心20分钟，取上清测定蛋白质浓度(按DC Protein Assay Kit说明书进行)。取蛋白提取物50ug，加入等量的2×SDS上样缓冲液，100℃煮沸5分钟，做十二烷基硫酸纳-聚丙稀酰氨凝胶(SDS-PAGE)电泳，积层胶恒压50V，分离胶恒压100V，电泳至溴酚蓝染料到达凝胶最前沿，停止电泳。
转膜电泳结束后揭胶，并将凝胶浸于适量的转膜缓冲液(Transferbuffer)中，平衡30分钟。同时截取适当大小的聚偏氟乙烯膜(PVDF)膜和2张3M滤纸，将PVDF膜先在无水甲醇中浸湿，然后同滤纸一同浸于Transferbuffer中，平衡10～15分钟，膜放阳极、胶放阴极，两面各垫2张3M滤纸，恒流110mA，4℃层析柜中转膜过夜。
封闭将转有蛋白的膜浸于含10％脱脂奶粉的缓冲液(TBST)中封闭1小时。杂交取出已封闭的膜，然后浸于1∶400-500稀释的鼠抗人HIF-1(用含5％脱脂奶粉的缓冲液(TBST)、pH7.4配制)中，4℃过夜，TBST漂洗5分钟×5次，再浸于1∶10000稀释的辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG抗体(用含5％脱脂奶粉的TBST、pH7.4配制)中，TBST漂洗5分钟×5次。
压片、洗片取出膜，配制显色液(ECL A液0.7ml+ECL B液0.7ml)，加在膜上，5分钟后吸去多余液体，保鲜膜封膜，固定在暗盒内，压片，洗片。
(3)实验结果和厚朴酚0、1、5ug/ml分别作用于常氧及化学低氧组KBV200细胞，培养12小时后提取细胞总蛋白，作Western blot检测。参见图4A和图4B，图中N表示常氧；H表示化学低氧，即用CoCl2处理；Honokiol为和厚朴酚；β-actin为β-肌动蛋白；HIF-1α为低氧诱导因子-1α。KBV200细胞有较高基础水平的HIF-1α蛋白表达，CoCl2(100uM)所致化学低氧小幅上调(24.5％)HIF-1α蛋白积聚。和厚朴酚1ug/ml和5ug/ml均明显下调常氧时HIF-1α蛋白积聚，两个浓度无组间差异。化学低氧时，和厚朴酚浓度依赖性抑制KBV200细胞对低氧的反应性，表现为HIF-1α蛋白表达呈梯度下调。由于mdr1是HIF-1的靶基因，即HIF-1可调节mdi-1基因的表达，因此细胞内HIF-1α蛋白质积聚的减少有可能导致mdr1表达的下调。
实施例5和厚朴酚对KBV200细胞P-gp表达的影响(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所。FITC标记的鼠抗人P-gp单克隆抗体为美国BECTON DICKSON(BD)公司产品。
仪器细胞培养箱，流式细胞仪。
(2)实验方法流式细胞仪FCM检测KBV200细胞表面P-pg表达细胞处理KBV200细胞接种于6孔板，每孔2×105细胞，培养24小时使贴壁；新鲜培养基稀释和厚朴酚母液(5mg/ml)，使成0-5ug/ml的工作液，充分混匀后以此更换细胞培养液，放置5％CO2、37℃孵葙培养；常氧组加药后连续培养12小时，低氧组加入不同浓度和厚朴酚培养1小时后加入CoCl2溶液，使成终浓度100uM，继续培养11小时。收集细胞弃去培养液，冰生理盐水洗2次，加入0.125％胰酶作用约30秒，吸去胰酶，每孔加1000ul冰生理盐水收集细胞，4℃离心，冰生理盐水洗2次，使细胞沉淀溶于500ul冰磷酸缓冲液(PBS)中，置冰上备用。抗体孵育细胞悬液加入荧光标记的鼠抗人P-gp单抗(1∶500稀释)，4℃避光孵育30分钟，用含1％小牛血清的PBS洗3次，4℃避光反应20分钟，PBS洗3次，最后用PBS制成细胞悬液。流式细胞仪检测荧光激发波长488nm，发射波长530nm，计数MDR阳性细胞数，以及阳性细胞表面的荧光强度，每组计数10000个细胞。分析评价CoCl2(100uM)化学低氧对KBV200细胞P-gp表达的影响，以及和厚朴酚对常氧及化学低氧时P-gp表达影响的程度(抑制率)。
(3)实验结果和厚朴酚0、1和5ug/ml分别作用于常氧及化学低氧组KBV200细胞，细胞悬液经荧光抗体孵育后用流式细胞仪检测膜表面P-gp蛋白的表达情况。参见图5N0、N1和N5表示在常氧下加0，1和5μg/ml的和厚朴酚，H0、H1，H5表示在CoCl2处理时，同时加入0，1，5μg/ml和厚朴酚，Fluorescent intensity为荧光强度。化学低氧明显增强KBV200细胞膜表面P-gp抗体的荧光强度，荧光值与对照组相比增强16.6％。和厚朴酚浓度依赖性下调常氧组P-gp蛋白表达，对对照组的抑制率分别为44.1％和74.3％。和厚朴酚1ug/ml和5ug/ml显著下调化学低氧所致的P-gp上调，抑制率分别为84.1％和85.4％。1ug/ml浓度时，和厚朴酚对化学低氧组P-gp的下调比对常氧组的下调幅度大，前者是后者的1.9倍，而5ug/ml时，对化学低氧组和常氧组的下调百分率分别是85.4％和74.3％，两者之间的比值是1.1，明显比1ug/ml时小(参见表1)。该结果充分说明和厚朴酚在常氧和化学低氧均可抑制P-gp的表达，并呈剂量依赖性。
实施例6和厚朴酚对MDR细胞KBV200细胞内药物积聚的影响。
(1)实验材料细胞株人口腔鳞癌抗药细胞株KBV200购自中国医学科学院血液学研究所。
试剂和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所。荧光素罗丹明123(Rh123)为美国Sigma公司产品。
仪器细胞培养箱，荧光显微镜。
(2)实验方法和厚朴酚对KBV200细胞内Rh123积聚的影响药物诱导KBV200细胞接种于6孔板，每孔2×105细胞，培养24小时使贴壁；新鲜培养基稀释和厚朴酚母液(5mg/ml)，使成0-5ug/ml的工作液，充分混匀后以此更换细胞培养液，于5％CO2、37℃孵葙培养12小时。Rh123孵育弃去培养液，0.125％胰酶作用约30秒，离心除去胰酶，用新鲜培养液制成细胞悬液；加入0.8％ug/ml的Rh123，37℃孵育1小时；细胞涂片制作收集细胞→4℃离心，冰生理盐水洗2次→加适量生理盐水制成细胞悬液→滴适量于载玻片上，甩片机甩片→放入避光盒备用。荧光显微镜观察荧光激发波长488nm，检测波长513nm。分别于100×及400×镜下取3个荧光最强的视野摄片。分析每组取3个荧光最强视野，用Scion Image图像软件处理，得到3个视野总荧光强度的平均灰度值，以平均灰度值作直方图，并作T检验求差异显著度。
(3)实验结果和厚朴酚1ug/ml和5ug/ml预处理KBV200细胞12小时，荧光显微镜观察细胞内Rh123的积聚情况。参见图6A和图6B，图6A中a为药敏细胞KB；b为多药耐药细胞KBV200；c为KBV200经1μg/ml和厚朴酚处理；d为KBV200经5μg/ml和厚朴酚处理。图6B中KB表示药敏细胞KB；KBV-H0表示多药耐药细胞KBV200+0μg/ml和厚朴酚；KBV-H1表示多药耐药细胞KBV200+1μg/ml和厚朴酚；KBV-H5表示多药耐药细胞KBV200+5μg/ml和厚朴酚。未经药物处理的KBV200细胞内的荧光积聚非常弱，总荧光强度只有其敏感株KB细胞的5.4％。和厚朴酚剂量依赖性增加细胞内荧光强度，1ug/ml浓度时对Rh123的积聚增加200％(P＜0.01)，5ug/ml浓度时增加275％(P＜0.01)。这些结果说明和厚朴酚处理KBV200细胞后，细胞内的P-gp表达被抑制，结果表现为Rh123的外排减少，即Rh123在KBV200细胞内的积聚增多。
综上所述，和厚朴酚可有效地抑制常氧和低氧条件下的P-gp表达，由于P-gp的高表达是肿瘤多药抗药性的一种最主要和最常见的原因，并且目前临床肿瘤化疗缺乏有效逆转和预防肿瘤多药耐药的药物，和厚朴酚具有很大的临床应用前景。
本发明涉及的部分参考文献1.Liou KT，Shen YC，Chen CF，Tsao CM，Tsai SK.The anti-inflammatory effect of honokiol on neutrophilsmechanisms in the inhibition of reactive oxygen species production.Eur J Pharmacol.2003；475(1-3)19-272.Teng CM，Chen CC，Ko FN，Lee LG，Huang TF，Chen YP，Hsu HY.Two antiplatlet agents from Magnoliaofficinalis.Thromb Res.1988；50757-7653.Liou KT，Lin SM，Huang SS，Chih CL，Tsai SK.Honokiol ameliorates cerebral infraction fromischemia-reperfusion injury in rats.Planta Med.2003；69(2)130-1344.Lo YC，Teng CM，Chen CF，Chen CC，Hong CY.Magnolol and honokiol isolated from Magnolia officinalisprotect rat heart mitochondria against lipid peroxidation.Biochem Pharmacol.1994；47549-5535.Watanabe K，Watanabe H，Goto Y，Yamaguchi M，Yamamoto N，Hagino K.Pharmacological properties ofmagnolol and honokiol extracted from Magnolia officinaliscentral depressant effects.Planta Med.1983；49103-1086.Juliano RL，Ling V.A surface glycoprotein modulating drug permeability in Chinese hamsterovary cell mutants.Biochim Biophys Acta.1976，455(1)152-162.
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权利要求
1.和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的用途，和厚朴酚的分子量266.33，化学命名为3，5’-diallyl-4，2’-dihydroxybiphenyl，分子式为C18H18O2，其特征是和厚朴酚与药物赋形剂或载体组合，在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的用途，其特征是在制备抗肿瘤化疗药物中的应用。
3.根据权利要求1-2所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的用途，其特征是和厚朴酚制备的药物组合物还可含有其他的抗肿瘤药物。
4.根据权利要求1-3所述的和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性药物中的用途，其特征是制剂形式主要包括液体制剂、颗粒剂、片剂、冲剂、胶丸、胶囊、缓释剂、滴丸剂或口崩制剂。
5.根据权利要求4所述的和厚朴酚制备的药物组合物的制剂，其特征是所述制剂的给药形式主要包括口服给药或注射给药。
全文摘要
一种和厚朴酚在制备抗肿瘤多药耐药性的药物中的用途，该和厚朴酚分子量266.33，化学命名为3，5’－diallyl－4，2’－dihydroxybiphenyl，分子式为C
文档编号A61K31/05GK1596881SQ200410025780
公开日2005年3月23日 申请日期2004年7月2日 优先权日2004年7月2日
发明者胡汛, 陈菲, 王弢, 潘锵荣 申请人:浙江大学