专利名称：一种埃坡霉素缓释植入组合物及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植入型抗肿瘤的药物组合物，尤其涉及一种缓慢释放的体内植入型埃坡霉素缓释植入组合物及其应用，属于药物技术领域。
背景技术：
埃坡霉素A-F(Epothilones A-F)为1987年德国药物学家从南非的纤维堆囊粘细菌中发现的天然化合物，1993年发现其抗肿瘤活性。
埃坡霉素A-F的详细结构式如下 埃坡霉素AR1＝H，R2＝H埃坡霉素BR1＝CH3，R2＝H 埃坡霉素CR1＝H埃坡霉素ER1＝H，R2＝CH3埃坡霉素FR1＝CH3，R2＝CH3埃坡霉素DR1＝CH3近年来，随着埃坡霉素类化合物研究的逐渐深入，已经有几百个衍生物被报道，且有多个组分及其衍生物正在进行临床试验，研究表明，埃坡霉素及其衍生物不仅具有强效的抗肿瘤作用，而且在抑制肿瘤多药耐药性方面有较强的作用，其抗肿瘤作用机制与紫杉醇非常相似，是一类新型微管稳定剂，具有促进GTP依赖性微管蛋白聚合形成微管的作用，并且对微管具有稳定作用，而通过稳定微管组装过程抑制微管的解聚，导致微管束的排列异常，形成星状体，进而抑制了细胞形成正常的有丝分裂纺锤体，从而抑制肿瘤细胞的生长，甚至诱导其死亡。
临床上，将埃坡霉素及其衍生物用于治疗患者疾病之前，必须将其配制成可给予患者的制剂形式。目前，国外采用主药和可药用溶剂制成注射液或冻干制剂，专利WO 2004032866、WO 9939694和WO 0110412对此有详细描述。但埃坡霉素及其衍生物全身用药后，在杀灭肿瘤细胞的同时也杀死了体内的正常细胞，造成如骨髓抑制、呕吐、腹泻等胃肠道反应及其他毒性，因此将埃坡霉素及其衍生物制备成缓释植入用组合物，可以保持肿瘤局部的高浓度，减少全身用药的剂量，降低药品的不良反应。
体内植入型药物缓释制剂通过将药剂直接植入体内而实现局部用药，只需一次植入就可达到长期释药的效果，既可大大方便患者、又可避免使用常规药物制剂那样必须定时用药、否则会影响疗效甚至可能危及生命的缺陷。
由于体内植入药物缓释制剂还具有一定的靶向性、可以在一段长时间内维持体内需药部位一定的药物浓度，所以既可提高药物的疗效，又可减少药物的用量，既可降低药物的毒副作用，避免一般口服药物制剂对肝、肾、胃以及全身性免疫系统可能产生的不利反应和影响，又可减少患者的用药开支。体内植入型药物制剂的靶向功能，还可使受血脑屏障影响而药物难以达到的颅内疾病的治疗成为可能，达到其它药物剂型无法达到的疗效。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种埃坡霉素缓释植入组合物及其应用，本发明的埃坡霉素缓释植入组合物包括埃坡霉素或埃坡霉素衍生物和药用辅料，埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在所述组合物中的重量百分比为0.1-90％，优选为1-50％，最优选为1-20％。
本发明的埃坡霉素或埃坡霉素衍生物为埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、氮杂埃坡霉素B(内脂环中的氧被氮取代的埃坡霉素B)、21，26位分别或同时被氨基取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、9，10位去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、10，11位去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、26，27位被卤素取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、21，26-二羟基埃坡霉素B或埃坡霉素D、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素C、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、12，13位环丙基或环丁基埃坡霉素B。
埃坡霉素AR1＝H，R2＝H埃坡霉素BR1＝CH3，R2＝H 埃坡霉素CR1＝H埃坡霉素ER1＝H，R2＝CH3埃坡霉素FR1＝CH3，R2＝CH3埃坡霉素DR1＝CH3上述埃坡霉素衍生物还可选择中国专利CN99124010中所涉及的异埃坡霉素或如下结构的6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素(ZK-EPO)
本发明的埃坡霉素或埃坡霉素衍生物优选为埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、氮杂埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、21-羟基埃坡霉素B、21-羟基埃坡霉素D、26-羟基埃坡霉素B、26-羟基埃坡霉素D、26-氨基埃坡霉素B、26-氨基埃坡霉素D、6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素、9，10去氢埃坡霉素D、26-氟埃坡霉素B、10，11去氢埃坡霉素D。
本发明的埃坡霉素或埃坡霉素衍生物最优选为埃坡霉素A或埃坡霉素B。
本发明的埃坡霉素或埃坡霉素衍生物还包括埃坡霉素及其衍生物的各种盐，如但不限于铵盐、钠盐、钾盐、硫酸盐、磷酸盐、盐酸盐、乳糖酸盐、醋酸盐、天冬酸盐、硝酸盐、枸橼酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、嘌呤盐、嘧啶盐或琥珀酸盐。
本发明所用的药用辅料为聚乳酸、聚乳酸和羟基乙酸的共聚物、壳聚糖及其衍生物、明胶、胶原蛋白、阿拉伯胶、氯化钠之一或其任意二种或其任意三种的组合。
上述药用辅料优选为下列之一或其任意二种或其任意三种的组合(a)分子量为12000-18000，21000-28000，36000-44000，51000-60000，60000-70000或70000-80000的聚乳酸；(b)分子量为12000-18000，21000-28000，36000-44000，51000-60000，60000-70000或70000-80000的聚乳酸和羟基乙酸的共聚物；(c)明胶或氯化钠。
在本发明中，药用辅料主要采用生物可降解高分子聚合物，生物相容性可降解高分子多聚物植入人体后，在体液和酶等的作用下，降解为人体内已有的小分子化合物被人体吸收、代谢，然后排出体外，对人体无毒副作用，且无需手术取出，可使患者免受二次手术的痛苦。并且，生物相容性可降解高分子多聚物在体内降解后，结构变得疏松而使药物释放量增加，因而可以弥补由于总含药量减少所引起药物释放量的下降，是实现药物恒量释放的、理想的药物载体材料。
利用本发明所述埃坡霉素缓释植入组合物制备的制剂为体内植入剂、缓释剂或缓释植入剂，优选为体内植入剂、缓释植入剂。
为了临床使用方便和保证药品质量的均一性，本发明的埃坡霉素缓释植入剂还可以制备成不同大小的颗粒，其直径大小为0.01mm～20mm，优选0.1mm～2mm。除制备成颗粒状外，还可以制备成片状、薄片状、膜状、球状、块状及棒状等形状；还可添加不同用途的药用辅料，如阻滞剂、填充剂、致孔剂、等渗剂、增溶剂等，以最大程度的满足临床用药的需要。
本发明的埃坡霉素缓释植入组合物的制备方法可以采用本领域技术人员常用的制备缓释制剂的方法进行操作，如但不限于如下的方法(1)熔融法将埃坡霉素或埃坡霉素衍生物与药用辅料研细后混合均匀，在熔融条件下制成所需要的形状，射线灭菌后密封包装；(2)溶剂挥发法把药用辅料完全溶解于二氯甲烷或丙酮等有机溶剂后，将埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在以上溶液中混合均匀，然后除去有机溶剂，干燥制成所需要的形状，射线灭菌后密封包装；(3)微球压片法精密称取埃坡霉素适量(使埃坡霉素∶药用辅料之比为1∶1至1∶10，优选为1∶2)，完全溶解在药用辅料浓度为1％～20％，优选为5％的有机溶剂中，作为油相，将油相缓缓加入水相(浓度为0.2％-10％，优选0.5％-5％的明胶水溶液)中，超声乳化1～5分钟，优选1-2分钟，或以600转/分～4000转/分的转速，优选900转/分-2000转/分的转速搅拌得到乳剂。然后减压干燥除去乳剂中的有机溶剂，离心收集微球，用蒸馏水洗涤3-4次，直接加入水配制成含微球的水混悬液，冷冻干燥得到微球，压片，射线灭菌后密封包装；(4)喷雾干燥法。还可以将该品制备成脂质体或乳剂后，再与药用辅料混合或溶解均匀，干燥制粒。
本发明的埃坡霉素缓释植入剂可以在瘤内、瘤周、瘤腔内放置。通过注射、介入、直接植入等方法放置在血管内、粘膜内、腹腔内、胸腔内、子宫内、阴道内，可以直接放置在手术切除肿瘤组织后留下的腔隙内，也可以通过静脉、动脉等介入治疗方法放置于供应肿瘤组织营养的血管内。
本发明的埃坡霉素缓释植入组合物还可以和常规化疗、免疫治疗、激素治疗、高热治疗、光化学治疗、磁疗、放疗等同时使用，以达到疾病治疗的最佳效果。
本发明的埃坡霉素缓释植入组合物的应用，用于制备治疗起源于人及动物大脑、中枢神经系统、肾脏、肝脏、胆囊、胰腺、甲状腺、肺脏、食管、胃、乳腺、子宫、子宫内膜、子宫颈、卵巢、输卵管、前列腺、膀胱、结直肠、头颈部、眼睛、咽部、口腔、淋巴结、淋巴液、皮肤、粘膜、腺体、血液、血管、脂肪的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤的药物。优选用于制备治疗起源于人的大脑、中枢神经系统、肝脏、胆囊、胰腺、甲状腺、肺脏、食管、胃、乳腺、子宫、子宫内膜、子宫颈、输卵管、卵巢、膀胱、结直肠、淋巴结、皮肤等器官的原发性或继发性的实体肿瘤的药物。
本发明的埃坡霉素缓释植入组合物可以使用棕色药用玻璃西林瓶、药用塑料瓶或药用铝箔无菌密闭包装。
利用本发明所述的埃坡霉素缓释植入组合物进行动物体内试验，以小鼠抑瘤试验为例，结果表明接种S180瘤株的小鼠瘤内植入和腹腔注射埃博霉素缓释植入组合物后，小鼠均生长发育正常，被毛浓密而有光泽，运动活泼，鼻腔、口腔、耳道、眼、肛门及生殖器官未见异常，相同浓度埃坡霉素缓释植入组合物肿瘤局部植入组较腹腔注射组抑瘤率高，埃坡霉素缓释植入组合物较普通冻干剂和阴性对照组抑瘤率高且毒副作用小，说明本发明的埃博霉素缓释植入组合物肿瘤内植入或腹腔用药不仅能够有效的抑制肿瘤生长，而且能够显著降低药物的全身毒副作用。
具体实施例方式
实施例1将180mg分子量为60000聚乳酸置入试管中，加入10ml二氯甲烷溶解并混合均匀，然后加入20mg氮杂埃坡霉素B细末及2mg氯化钠，重新摇匀后在45℃水浴中真空干燥除去有机溶剂。待有机溶剂挥发完，将干燥后的固体组合物植入模具中成形，然后将成型的制剂，用蒸馏水冲洗4-5次，除去制剂中的氯化钠。检验合格后，射线灭菌密封包装。
经试验测试上述制剂在37℃生理盐水中浸泡15天，释药量为38％-43％。
实施例2将1000mg分子量为22000聚乳酸置入试管中，加入100ml二氯甲烷溶解并混合均匀，然后加入20mg埃坡霉素B细末，重新摇匀后在45℃水浴中真空干燥除去有机溶剂。待有机溶剂挥发完后，将干燥后的固体组合物植入模具中成形，检验合格后，射线灭菌后密封包装。
经试验测试上述制剂在37℃生理盐水中浸泡15天，释药量为51％-56％。
实施例3精密称取100mg分子量为27000的聚乳酸，置入试管内，用5ml二氯甲烷溶解完全后，再精密称取50mg埃坡霉素D，置入试管内完全溶解，作为油相；制备20ml 1％明胶水溶液作为水相；将油相缓缓加入水相中，超声乳化1～2分钟得到乳剂。然后真空干燥除去乳剂中的有机溶剂，离心收集到微球，用蒸馏水洗涤3-4次，直接加入水配制成含微球的水混悬液，冷冻干燥得到微球，压片，射线灭菌后密封包装。
经试验测试上述制剂在37℃生理盐水中浸泡15天，释药量为60％-66％。
实施例4精密称取120mg分子量为55000的聚乳酸与羟基乙酸的聚合物，置入试管内用10ml二氯甲烷完全溶解，再精密称取80mg21-氨基埃坡霉素B，置入试管内混合均匀，然后在45℃水浴中真空干燥除去溶液中的有机溶剂，干燥后的固体组合物植入模具中成形，检验合格后射线灭菌并密封包装。
经试验测试上述制剂在37℃生理盐水中浸泡15天，释药量为31％-37％。
实施例5精密称取140mg分子量为14000的聚乳酸与羟基乙酸的聚合物，置入试管内用5ml二氯甲烷完全溶解，再精密称取60mg21-羟基埃坡霉素B，置入试管内混合均匀，然后在45℃水浴中真空干燥除去溶液中的有机溶剂，干燥后的固体组合物植入模具中成形，检验合格后射线灭菌并密封包装。
经试验测试上述制剂在37℃生理盐水中浸泡15天，释药量为64％-71％。
实施例6埃坡霉素植入剂的体内抑瘤试验本实施例提供了实施例1-3所制备的埃博霉素B、氮杂埃坡霉素B和埃博霉素D缓释植入组合物用于治疗肿瘤的动物体内试验情况。具体步骤如下1、材料1.1试验动物成年健康KM小鼠60只，雌雄各半，体重20±2克，购于山东鲁抗医药集团有限公司。
1.2试验样品本发明实施例1-3所制备的埃博霉素缓释植入组合物。
1.3阳性对照埃坡霉素普通冻干制剂。
1.4肿瘤细胞株S180，购于山东省医科院药物研究所。
2、方法2.1动物分组动物称重，编号，随机分为6组，每组10只，雌雄各半，分笼饲养。
2.2样品处理取实施例1和实施例2的埃坡霉素缓释植入剂，直接植入肿瘤内，剂量分别为50mg/kg，作为第2和第3组；实施例3的埃坡霉素缓释植入剂，分别以50mg/kg剂量肿瘤内和腹腔内注射，作为第4组和第5组。
2.3埃坡霉素阳性对照组精密称取埃坡霉素B冻干制剂适量，用注射用水配制成埃坡霉素B混悬溶液，按0.1mg/kg的剂量腹腔注射，作为第6组。
2.4阴性对照0.5ml注射用生理盐水直接腹腔注射，作为第1组。
2.5接种肿瘤于每只小鼠右腋窝皮下注射0.2ml S180稀释液，待肿瘤生长5天。
2.6给药及观察5天后，以上各组分别肿瘤内直接植入或腹腔注射给药，观察小鼠特征变化，包括行为活动、被毛、精神状态、口腔、鼻腔、耳道、肛门、生殖器官是否正常，以及肿瘤生长和小鼠死亡的情况。第30天称重后脱椎处死，解剖剥离瘤块，称瘤重，计算肿瘤抑制率。
3.结论按照以下公式计算肿瘤抑制率
试验结果
P＜0.05结论由以上结果可以看出，接种S180瘤株的小鼠瘤内植入和腹腔注射埃博霉素缓释植入组合物后，小鼠均生长发育正常，被毛浓密而有光泽，运动活泼，鼻腔、口腔、耳道、眼、肛门及生殖器官未见异常，相同浓度埃坡霉素缓释植入组合物肿瘤局部植入组较腹腔注射组抑瘤率高，埃坡霉素缓释植入组合物较普通冻干剂和阴性对照组抑瘤率高且毒副作用小，说明本发明的埃博霉素缓释植入组合物肿瘤内植入或腹腔用药不仅能够有效的抑制肿瘤生长，而且能够显著降低药物的全身毒副作用。
权利要求
1.一种埃坡霉素缓释植入组合物，包括埃坡霉素或埃坡霉素衍生物和药用辅料，其特征在于，埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在所述组合物中的重量百分比为0.1-90％。
2.如权利要求1所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在组合物中的重量百分比为1-50％。
3.如权利要求2所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在组合物中的重量百分比为1-20％。
4.如权利要求1～3之一所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述埃坡霉素或埃坡霉素衍生物选自埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、氮杂埃坡霉素B、21，26位分别或同时被氨基取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、9，10位去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、10，11位去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、26，27位被卤素取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、9位，10位，11位，14位，21位，26位分别被羟基取代的埃坡霉素B或埃坡霉素D、21，26-二羟基埃坡霉素B或埃坡霉素D、21-羟基-10，11去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9-酮-埃坡霉素C、4-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、4-去甲基-9，10-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、6-去甲基-10，11-二去氢埃坡霉素B或埃坡霉素D、12，13位环丙基或环丁基埃坡霉素B、异埃坡霉素或6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素。
5.如权利要求4所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述埃坡霉素或埃坡霉素衍生物选自埃坡霉素A、埃坡霉素B、埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素E、埃坡霉素F、氮杂埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素B、21-氨基埃坡霉素D、21-羟基埃坡霉素B、21-羟基埃坡霉素D、26-羟基埃坡霉素B、26-羟基埃坡霉素D、26-氨基埃坡霉素B、26-氨基埃坡霉素D、6-乙基，16-氟，17-吡啶埃坡霉素、9，10去氢埃坡霉素D、26-氟埃坡霉素B、10，11去氢埃坡霉素D。
6.如权利要求5所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述埃坡霉素或埃坡霉素衍生物选自埃坡霉素A或埃坡霉素B。
7.如权利要求1～3之一所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述药用辅料为聚乳酸、聚乳酸和羟基乙酸的共聚物、壳聚糖及其衍生物、明胶、胶原蛋白、阿拉伯胶、氯化钠之一或其任意二种或其任意三种的组合。
8.如权利要求7所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，所述药用辅料为下列之一或其任意二种或其任意三种的组合(a)分子量为12000-18000，21000-28000，36000-44000，51000-60000，60000-70000或70000-80000的聚乳酸；(b)分子量为12000-18000，21000-28000，36000-44000，51000-60000，60000-70000或70000-80000的聚乳酸和羟基乙酸的共聚物；(c)明胶或氯化钠。
9.权利要求1～3之一所述之埃坡霉素缓释植入组合物，其特征在于，利用所述埃坡霉素缓释植入组合物制备的制剂是体内植入剂、缓释剂或缓释植入剂。
10.权利要求1～3之一所述之埃坡霉素缓释植入组合物的应用，用于制备治疗起源于人及动物大脑、中枢神经系统、肾脏、肝脏、胆囊、胰腺、甲状腺、肺脏、食管、胃、乳腺、子宫、子宫内膜、子宫颈、卵巢、输卵管、前列腺、膀胱、结直肠、头颈部、眼睛、咽部、口腔、淋巴结、淋巴液、皮肤、粘膜、腺体、血液、血管、脂肪的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤的药物。
全文摘要
本发明公开了一种埃坡霉素缓释植入组合物，包括埃坡霉素或埃坡霉素衍生物和药用辅料，其中，埃坡霉素或埃坡霉素衍生物在所述组合物中的重量百分比为0.1－90％。本发明所述埃坡霉素缓释植入组合物制备的制剂是体内植入剂、缓释剂或缓释植入剂，用于制备治疗起源于人及动物组织或器官的原发或继发的癌、肉瘤或癌肉瘤的药物。本发明的植入剂的稳定性及缓释效果好，药效明显，降解产物对人体无毒副作用，且无需手术取出，可使患者免受二次手术的痛苦。
文档编号A61M31/00GK1813720SQ20051004543
公开日2006年8月9日 申请日期2005年12月2日 优先权日2005年12月2日
发明者彭继先 申请人:菏泽睿鹰制药集团有限公司