专利名称：一种利用机械振荡来制备超声造影剂的方法
技术领域：
本发明涉及超声造影剂，特别涉及一种利用机械振荡来制备超声造影剂的方法，该方法适用于制备多种超声造影剂，包括常规增强组织显影的超声造影剂(脂类、白蛋白类、多聚体类、表面活性剂类等)、靶向超声造影剂、纳米级微泡超声造影剂和兼药物或基因靶向载体的治疗型超声造影剂；本发明还具体涉及一种利用机械振荡来制备脂类超声造影剂的方法。
背景技术：
常规超声造影剂是一种含有高浓度微气泡的悬浮液，微气泡的平均直径约2～4微米，小于红细胞，可以自由通过肺循环，但不透过血管，是一种血流示踪剂。造影剂经外周静脉注入后，由于微泡与周围组织不同的声学特性，从而增强血流及周围组织的回声对比，明显改善超声影像对组织血流灌注的评价，显著提高超声诊断的敏感性和特异性，进一步拓展超声诊断领域。
近年来，随着研究的深入，人们发现，超声造影剂不仅可用于常规造影增强，还可用于靶向诊断和介入治疗通过在造影剂表面结合特异性配体制备靶向超声造影剂，使超声诊断的敏感性和特异性进一步提高；而介入治疗的研究，使超声造影剂的应用范围不断扩大，应用价值不断提升。如利用造影剂微泡降低超声空化阈值，从而促进超声溶栓或提高高功率聚焦超声的治疗效果；或利用超声波破坏携带基因或药物的造影剂微泡，使基因或药物靶向释放并促进其穿透，以介导基因转移或药物靶向治疗；或利用造影引导射频或微波治疗并即时评价治疗效果，等。
为此，国外医疗机构预测超声造影剂不久将成为超声诊断或治疗中的常用试剂，具有巨大的社会效益和经济价值。
超声造影剂的发展经历了从空气微泡到氟碳微泡的进步第一代含空气微泡造影剂，如Levovist、Albunex等，因增强效果微弱、持续时间短，诊断价值不大，2000年后已逐渐退出造影剂市场及研究领域；第二代含氟碳微泡造影剂，不仅增强效果显著，而且持续时间明显延长，对于多种疾病有明确的诊断价值。
超声造影剂发展的另一个进步是成膜材料的改进。从造影剂研制的历史看，上世纪九十年代初期多采用人血白蛋白作为成膜材料，而后期开始向脂质材料或多聚体材料方向发展。原因在于，从安全方面考虑，人血白蛋白存在传播艾滋病、乙型肝炎等血液传播性疾病的可能性；从造影效果看，脂类造影剂由大分子脂质构成的膜更稳定、更有弹性，造影效果更好，持续时间更长，更能满足临床的需要。因此，新批准上市的造影剂，如美国的Definity和Imageat、欧洲的SonoVue均属脂类造影剂。
目前，国外已有多种新一代产品上市，包括美国的Optison、Definity和Imageat，欧洲的SonoVue；而国内没有自主上市的新一代造影剂，欧洲Bracco公司生产的SonoVue是唯一被我国卫生部批准商品化的超声造影剂，价格十分昂贵。此外，目前市场上的造影剂在性能上也并非十分理想，突出表现在造影持续时间上。据报道，SonoVue对实质性器官的有效增强时间仅4～8分钟，这很难满足一个脏器详细超声检查(一般需要10～15分钟)的需要。从发展的角度看，超声造影剂要进一步在介入治疗领域发展，就更需要提高造影剂在血液循环中的稳定性，延长在体循环时间。
基于此，我们研制了一种长效脂类超声造影剂“脂氟显”(中国发明专利专利号ZL 02 1 33720.9)，该造影剂采用声振法制备，具有微泡产出率高、使用剂量小、造影效果优异、持续时间长、安全性好、造价低廉等特点，尤其在造影增强时间方面效果显著，在心腔、肝脏、肾脏等脏器中的持续时间长达30分钟以上，优于国内外多种造影剂。但在进一步的开发过程中，我们发现，声振法有一定的局限性，突出表现在①探头式声振仪的工艺参数，包括功率、探头在液面的位置、深度等，不易控制，工艺重现性受到一定影响；②声振过程中很难做到无菌操作，并存在金属污染的可能，给造影剂的质量控制、制备工艺增加了一定难度；③声振过程中产生较多的热量，对脂质的活性，尤其在制备携带某些配体、药物或基因的造影剂时，对同时声振的配体、药物或基因的活性产生很大的影响。此外，声振法是目前应用最广泛的一种制备方法，中国发明专利公开的几种类型的超声造影剂，包括白蛋白类(CN1156626、CN1243753)、脂类(CN1631444)、多聚体类(CN1398640)、表面活性剂类(CN1369311)等，其制备过程都是采用声振法，而声振法的局限性在其制备过程中普遍存在。因此，寻找一种更好的制备方法以取代声振法很有必要，也很有价值。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种采用机械振荡取代超声振荡制备超声造影剂的方法。
本发明的目的之二是在采用机械振荡一种制备长效脂类超声造影剂的新方法。
1.采用机械振荡制备超声造影剂的方法分析声振法制备超声造影剂的原理各种类型超声造影剂的制备都是利用超声波振荡时产生的高频变换的正负声压，其中的负声压使存在于造影剂制备液中的气体膨胀形成微小气泡，此时，制备液中的脂质或白蛋白、表面活性剂、多聚体等趁机包裹微小气泡形成稳定的造影剂微泡。同理，高频机械振荡时，由于制备液中各点受力的时相不同产生不同的正负压力，其中的负压也可使存在于制备液中的气体形成微小气泡。
根据机械振荡法的原理，频率越高，正负压力的变换越快，负压的时间越短，气体膨胀越小，形成的气泡就越小；振幅越小，产生的负压力越小，相同时间情况下，由负压产生的气体膨胀越小，形成的气泡就越小。由于制备超声造影剂需要形成较小的微气泡，因此，制备超声造影剂的机械振荡装置需要较高的频率、较低的振幅。此外，机械振荡方式也是一个重要的影响因素。机械振荡方式一般分为两种往复式和漩涡式，其中往复式又分为水平往复和垂直往复。在超声造影剂的制备过程中，漩涡式产生的涡流容易导致已形成的造影剂微泡相互碰撞而融合、破裂，因此往复式振荡是更好的选择。
综合以上的要求，我们发现，胶囊式银汞调合器是现有仪器中最符合用于制备超声造影剂的机械振荡装置。胶囊式银汞调合器是口腔科治疗龋齿使用银汞胶囊使之完成汞齐化的专用设备，它采用往复式振荡方式，具有振荡频率高、性能稳定、自动保护、价格低廉、使用方便等特点，其构造主要包括电机、夹头(或卡口)、防护罩、控制面板等，使用时只需将银汞胶囊装在夹头上，盖好防护罩，选定振荡时间，按下启动开关即可。本发明所采用的机械振荡装置正是在胶囊式银汞调合器的基础上改装而成，改装主要包括(1)根据一次制备造影剂剂量的多少，选择不同的振荡瓶(常规用西林瓶)，相应调整仪器的大小，包括电机、夹头及防护罩的大小；(2)根据造影剂制备的效果，在仪器定型前，反复探索不同工作参数(包括振荡频率、振幅、时间)对造影剂制备的影响，以选择最优的工作参数或参数范围。根据反复摸索、实践的结果，我们认为，制备超声造影剂的机械振荡装置应满足以下条件(1)振荡方式为往复式；(2)振荡频率≥3000次/分；(3)振动幅度10～30mm；其基本制备方法是将造影剂的制备液置于振荡瓶内，气体置换(即用所需的气体将振荡瓶头部的空气置换)后机械振荡30～180秒；或将造影剂的制备液制成冻干粉剂，制备前重新水合形成制备液，然后机械振荡30～180秒，其中，气体置换可在制成冻干粉剂的同时，也可在重新水合形成制备液后。
本发明的机械振荡装置及方法成功地实现了本发明的目的之一，它不仅克服了既往声振法的局限性，使操作更简单，性能更稳定，工艺重现性更好，而且应用范围更广。
根据现有超声造影剂制备的原理，本发明的机械振荡装置可用于制备目前各种类型的超声造影剂。常规超声造影剂中，脂类、表面活性剂类、多聚体类等可直接利用该装置加普通振荡瓶制备；白蛋白类，由于在制备过程中需要较高温度使白蛋白变性，因此需要通过在振荡瓶内加入小珠子来增加摩擦产热。靶向超声造影剂的制备有两种选择，一种是目前最常用的在常规超声造影剂制备完成后加入特异性配体，通过该装置振荡一定时间后制备；另一种是在造影剂制备完成前的制备液中预先加入特异性配体，在形成造影剂微泡的同时结合上特异性配体。后一种选择是以往采用声振法制备所不能的，其优点一是减少了制备环节，二是减少了制备环节中微泡的破坏。
该机械振荡装置最大的优点是在造影剂制备过程中产热少，因此尤其适合用于制备兼药物或基因靶向载体的超声造影剂。造影剂微泡携带基因或药物的方式分为两种黏附法和整合法，其中整合法具有明显的优势，原因在于黏附法仅仅通过简单的混合将药物或基因黏附在造影剂微泡表面，一方面结合量少，另一方面黏附的药物或基因与微泡结合不牢固，经静脉注射后，在血流冲击下很容易脱落，靶向性差；而整合法既可以将药物或基因黏附在微泡表面，更可将其整合在微泡膜上或包裹在微泡内，在使结合量增加的同时，又使靶向性更好。但既往采用声振法时，由于在制备过程中产生较高的温度，因此在制备时不能同时加入药物或基因，只能采用黏附法制备兼药物或基因靶向载体的超声造影剂。而本发明的机械振荡装置在造影剂制备过程中产热量少，因此可以采用整合法制备兼药物或基因靶向载体的超声造影剂。
2.一种制备长效脂类超声造影剂的新方法为验证本发明的机械振荡装置制备超声造影剂的效果，也为了优化“脂氟显”的制备工艺，本发明的目的之二是用本发明的机械振荡装置取代超声振荡仪，相应调整“脂氟显”的制备工艺，探索一种制备长效脂类超声造影剂的新方法。
调整后，“脂氟显”制备的主要步骤为(1)水合将造影剂成膜材料中的脂质、高分子聚合物与水溶液或非水溶剂充分混匀，形成脂质混悬液；(2)冷冻干燥将步骤(1)的脂质混悬液冷冻干燥形成冻干粉；(3)再水合将步骤(2)的冻干粉用水合液充分混匀，重新形成脂质混悬液；(4)气体置换将盛有步骤(3)的脂质混悬液的振荡瓶内头部的空气用含氟气体置换；(5)机械振荡将步骤(4)的振荡瓶置于机械振荡装置的夹头上，按设置好的工作参数进行机械振荡，振荡后即形成含有大量微气泡的超声造影剂。
上述步骤(1)中所述的脂质为磷脂和/或附加剂。磷脂具有双亲分子特性、生物降解性和生物相容性，在超声造影剂的制备过程中形成单分子或双分子层结构的膜，包裹气体形成微气泡，因而是脂类超声造影剂制备中所必需的成分，其中，最常用的磷脂为卵磷脂(即磷脂酰胆碱)，包括天然的，如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂；半合成的，如部分或充分氢化的卵磷脂；以及合成磷脂，如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)。其它常用的磷脂还包括磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、心磷脂、鞘磷脂，以及卵磷脂和任何上述磷脂的氟化类似物。为制备携带特异性配体的靶向超声造影剂，磷脂还可以携带聚合链，如携带具有两亲性质的聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯酮(PVP)及其衍生物。根据同性相斥的原理，要增加超声造影剂的稳定性，在脂质的组成中加入或全部利用带净电荷(如负电荷)的磷脂是非常有利的，如天然存在的(如大豆或蛋黄衍生的)、半合成的(如部分或充分氢化的)和合成的磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酸和心磷脂。附加剂本身并不形成单分子或双分子层结构，因而并不是造影剂制备所必需的，但它可参与到磷脂膜中，调节膜的功能，如胆固醇可以调节膜的流动性、通透性，十八胺(含正电荷)可改变膜表面的电荷性质。本发明所采用的脂质至少包括一种磷脂，最好为合成磷脂；如果是单一磷脂，则最好是带净电荷的磷脂；如果是多个磷脂(两个或两个以上)形成的混合磷脂，则至少一种是带净电荷的磷脂。
上述步骤(1)中所述的高分子聚合物为聚乙二醇，更优选的方案是聚乙二醇4000(PEG4000)。高分子聚合物的使用为造影剂膜提供一个支持结构，同时，由于膜表面包裹了一层亲水性的聚乙二醇膜所形成的亲水性屏障以及聚乙二醇分子较大的空间位阻，可防止造影剂被血浆蛋白和网状内皮系统识别而吞噬，使造影剂在血液循环中的滞留时间延长，在肝、脾、骨髓等网状内皮系统中吞噬减少，增加造影剂的体内稳定性，延长造影剂在组织显影的有效增强时间。
上述步骤(1)中所述的水溶液选自水(包括注射用水、去离子水、蒸馏水、超纯水等)、生理盐水、盐水/甘油的混合物(其中甘油所占的体积为5％～20％)和盐水/甘油/丙二醇的混合物(体积比为8∶1∶1)；所述的非水溶剂选自丙二醇、聚乙二醇300、叔丁醇、正叔丁醇。在更优选的实施方案中，所述的水溶液选择水。
上述步骤(1)中所述脂质、高分子聚合物与水溶液或非水溶剂混合的比例为每毫升水溶液或非水溶剂中含脂质1～10mg、含高分子聚合物50～200mg。
上述步骤(1)中所述的充分混匀包括本领域技术人员所掌握的各种手段，其中最常用的是加热和振荡，加热温度应略高于所选脂质的最高相变温度。
上述步骤(2)中所述的冷冻干燥为常规技术，冷冻干燥的目的一是增大脂质的溶解性，使脂质再水合时更容易分散，所形成的脂质混悬液更细小、均匀；二是增大脂质的表面积。冻干后，脂质更细小，但相对表面积更大，因此，在制备造影剂时可以形成更多、更小的微泡，使造影剂微泡的产率及质量明显提高。
上述步骤(3)中所述的水合液选自高渗糖、高渗糖/甘油/丙二醇的混合物(体积比为8∶1∶1)以及上述溶液和起泡剂的混合物。其中，高渗糖为浓度＞10％的葡萄糖、果糖及其异构体、多聚糖；起泡剂为非离子的表面活性剂，包括吐温80、司盘80等，具体应用时选择吐温80，加入的比例为每毫升水合液中含吐温80 0.001～0.01ml。在更优选的实施方案中，所述的水合液为高渗糖/甘油/丙二醇的混合物(体积比为8∶1∶1)，其中高渗糖的浓度为20％～50％。加入水合液的量为加入后每毫升脂质混悬液中含脂质1～3mg，更优选的方案为1.5mg。使用高渗糖的目的是为了增加溶液的粘滞度，减少造影剂微泡的相互融合倾向，同时糖上的氢键也直接与脂质的氢键相互作用，两者共同增强了造影剂微泡的稳定性。甘油和丙二醇的加入，一是增加了溶液的粘滞度，减少造影剂微泡的相互融合倾向；二是可作为助乳化剂，使脂质容易成膜，以增加微泡的产率。使用起泡剂的目的一是为了增加微泡的产出率；二是对脂膜起到稳定作用，以延长造影剂在组织显影的时间。
上述步骤(3)中所述的充分混匀包括本领域技术人员所掌握的各种手段，其中最常用的是加热和振荡。由于脂质经冷冻干燥后更容易分散，因此，此步骤的充分混匀难度不大，一般仅手摇片刻即可。
上述步骤(4)中所述的振荡瓶常规用西林瓶，其大小应适合所采用机械振荡装置的夹头。此外，实验发现，振荡瓶内脂质混悬液的容积占整个振荡瓶容积的比例对造影剂的制备效果有很大的影响。振荡瓶内脂质混悬液所占的比例越小，机械振荡时脂质混悬液运动的幅度就越大(相当于振幅越大)，所形成的微气泡就越大；相反，脂质混悬液所占的比例越大，所形成的微气泡就越小。因此，振荡瓶内脂质混悬液的容积占整个振荡瓶容积的比例应适当。经过反复实践，此比例应在30％～70％的范围之内，最好在大约40％。
上述步骤(4)中所述的含氟气体包括全氟化碳气体、氟化硫气体，更优选的方案是全氟丙烷气体(C3F8)。含氟气体为惰性气体，分子量大，在血液中的溶解度和弥散性差，稳定性好。气体置换的方法有很多种，实验室常用的方法有①将振荡瓶直立，直接向振荡瓶内注入一定量的含氟气体(体积与振荡瓶头部的空气相当)，借助重力作用(含氟气体比空气重得多)将空气置换出来；②利用三通管，先抽出振荡瓶内的空气，再注入同等量的含氟气体；工业优选的方法是把已分装的振荡瓶放入冷冻干燥室内，用含氟气体置换振荡瓶头部的空气，也可以使用本领域技术人员已知的其它方法。
上述步骤(5)中所述的工作参数包括机械振荡的频率、振幅、时间，其中频率为3000～8000次/分，幅度为10～30mm，时间为30～90s。
需要说明的是，以上仅仅是造影剂制备工艺中的主要步骤，其它还包括(1)脂质混悬液的无菌化处理常采用在分装前高温加压过滤除菌的方法；也可以采用终末灭菌的方法，即将分装后密封的振荡瓶在高压蒸汽灭菌器中灭菌，由于高压灭菌可引起脂质一定程度的降解，因此要掌握好灭菌的条件，一般是126～130℃灭菌1～10min；或同时应用上述两种方法。
(2)脂质混悬液的分装及密封根据制备工艺流程的不同，脂质混悬液的分装可以在上述制备的主要步骤(1)之后，也可以在上述制备的主要步骤(3)之后。前者的优点是只需一次冷冻干燥过程就可以完成水合→冷冻干燥→气体置换→密封等全过程，高压灭菌后就可以作为冻干粉制成品；缺点是该冻干粉制成品需配送水合液，使用时要先将水合液加入冻干粉成品中，摇匀后机械振荡数十秒才能成为所需要的造影剂成品。后者的缺点是工艺流程相对复杂，要先后经过水合→冷冻干燥→再水合→分装→冷冻干燥室进行气体置换→密封→无菌化处理等过程，才能成为制成品，而且制成品为水剂，保质期不如冻干粉剂；优点是包装及使用更简单，不需配送水合液，使用时直接机械振荡数十秒即可。
本发明采用机械振荡来制备长效脂类超声造影剂“脂氟显”不仅保留了原方法微泡产出率高、使用剂量小、造影效果优异、持续时间长、安全性好、造价低廉等特点，还具有以下特点(1)采用机械振荡装置取代超声振荡仪，成功地克服了既往声振法制备时的局限性；(2)本方法制备的造影剂微泡不仅产出率高，而且微泡的粒径范围窄，大小均匀，制备后马上即可使用；而声振法制备后由于有一定数量的较大微泡存在，使用前要通过静置或滤过的办法除去大微泡后才能使用；(3)本方法可在含脂质混悬液的振荡瓶中加入特异性配体，一次性制备长效靶向脂类超声造影剂；也可在含脂质混悬液的振荡瓶中加入所需的药物或基因，将药物或基因整合在膜上或包裹在膜内，一次性制备兼药物或基因靶向载体的长效脂类超声造影剂；(4)由于小型化的机械振荡装置价格低廉(不到1000元)，因此，本发明制备的“脂氟显”可以先做成脂质混悬液的冻干粉剂或水针剂，使用前再机械振荡制备成造影剂。与既往造影剂微泡的冻干粉剂比较，该方法制备工艺更简单，制作成本更低，但同样便于保存和运输。
四
图1为本发明所采用的一种机械振荡装置；图2为采用机械振荡仪制备的脂类超声造影剂微泡在光镜下的图像(×400)；图3为造影剂对兔肝脏实质增强显像的动态图像。
参见附图2，图中表明造影剂稀释100倍后在400倍光镜下观察，微泡分布均匀。
参见附图3，该图为动物实验造影效果图，该附图表明造影剂能长时间增强肝实质的灰阶显像，动态观察，造影后60min，下腔静脉内仍可见造影剂微泡的回声(A、B、C、D、E、F分别为造影前、造影后11s、1min、12min、30min、60min)。
五具体实施例方式
用100ml锥形瓶称取二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)30mg、DSPC 30mg、PEG4000 1940mg，加入40ml在60℃恒温水浴中预热后的去离子水，将锥形瓶放入60℃恒温水浴摇床，调节摇床的速度约200rpm，振荡10～20min，直至脂质完全分散。用移液器将锥形瓶内的脂质混悬液分装入40瓶1ml西林瓶内(该西林瓶实际容积约3.5ml，适合作为振荡瓶)，冷冻干燥成为冻干粉剂。采用高渗糖/甘油/丙二醇的混合物(体积比为8∶1∶1)作为水合液，其中高渗糖为20％的葡萄糖，按每瓶1.2ml加入水合液，用手轻轻混匀。将西林瓶直立，直接向振荡瓶内注入约2.5ml全氟丙烷，借助重力作用将空气置换出来。将西林瓶用机械振荡装置(注该机械振荡装置的振荡频率和振幅在仪器成型后已固定，分别为频率4100次/分，幅度15±1mm)的夹头固定好，设定机械振荡的时间为45s，打开电源，启动开关，按预设的时间完成振荡过程，即制备所需的脂类超声造影剂。
造影剂制备后，用光镜观察微泡大小、形态，血球计数板测定微泡浓度，激光粒度分析仪测定粒径及分布、表面电位、pH值；以新西兰大白兔作为实验动物，经耳缘静脉按0.01ml/kg的剂量进行超声造影，观察该造影剂对兔正常肝脏的增强效果。结果1.造影剂微泡的粒径从数百nm到数个μm，全部均小于8μm(见图2)，平均浓度为2.56±0.15×1010/ml，平均粒径为1.67±0.11μm，表面电位为-37.5mV±0.3mV，pH值为6.46±0.21；2.该造影剂能长时间增强肝实质的灰阶显像，增强持续时间达60min以上(见图3)，而且安全性好，表现为整个造影过程，所有动物生命征平稳，实验后病检，所有组织，包括心、肝、肾、肺，大体及显微病理检查均未见异常；3.工艺重现性好，造影剂制备后，无论是物理性能，还是造影效果都基本一致。
权利要求
1.一种利用机械振荡来制备超声造影剂的方法，其特征在于将造影剂的制备液机械振荡30～180秒；其中，机械振荡的方式为往复式，振荡频率≥3000次/分，振荡幅度10～30mm。
2.一种利用机械振荡来制备长效脂类超声造影剂的方法，其主要包括如下步骤(1)水合将造影剂成膜材料中的脂质、高分子聚合物与水溶液或非水溶剂充分混匀，形成脂质混悬液；(2)冷冻干燥将步骤(1)的脂质混悬液冷冻干燥形成冻干粉；(3)再水合将步骤(2)的冻干粉用水合液充分混匀，重新形成脂质混悬液；(4)气体置换将盛有步骤(3)的脂质混悬液的振荡瓶内头部的空气用含氟气体置换；(5)机械振荡将步骤(4)的振荡瓶置于机械振荡装置的夹头上，按设置好的工作参数进行机械振荡，振荡后即形成含有大量微气泡的超声造影剂。
3.根据权利要求2的方法，其中步骤(1)中所述的脂质为磷脂和/或附加剂，其中至少包括一种磷脂；所述的高分子聚合物为聚乙二醇；所述的水溶液选自水、生理盐水、盐水/甘油的混合物和盐水/甘油/丙二醇的混合物，所述的非水溶剂选自丙二醇、聚乙二醇300、叔丁醇、正叔丁醇。
4.根据权利要求2和3所述的方法，其中步骤(1)中所述的脂质为合成磷脂，其中至少包括一种是带净电荷的磷脂。
5.根据权利要求2和3的方法，其中步骤(1)中所述的高分子聚合物为聚乙二醇4000。
6.根据权利要求2和3所述的方法，其中步骤(1)中所述的水溶液选择水。
7.根据权利要求2的方法，其中步骤(1)中所述脂质、高分子聚合物与水溶液或非水溶剂混合的比例为每毫升水溶液或非水溶剂中含脂质1～10mg、含高分子聚合物50～200mg。
8.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(3)中所述的水合液选自高渗糖、高渗糖/甘油/丙二醇的混合物以及上述溶液和起泡剂的混合物；其中，高渗糖为浓度＞10％的葡萄糖、果糖及其异构体、多聚糖；起泡剂为非离子的表面活性剂，包括吐温80、司盘80等，具体应用时选择吐温80，加入的比例为每毫升水合液中含吐温800.001～0.01ml。
9.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(3)中所述的水合液为高渗糖/甘油/丙二醇的混合物，其中高渗糖的浓度为20％～50％；加入水合液的量为加入后每毫升脂质混悬液中含脂质1～3mg。
10.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(4)中所述的振荡瓶常规用西林瓶，其大小应适合所采用机械振荡装置的夹头，且加入脂质混悬液的容积占整个振荡瓶容积的比例应在30％～70％的范围之内。
11.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(4)中所述的含氟气体包括全氟化碳气体、氟化硫气体。
12.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(4)中所述的含氟气体为全氟丙烷气体。
13.根据权利要求2所述的方法，其中步骤(5)中所述的工作参数包括机械振荡的频率、振幅、时间，其中频率为3000～8000次/分，幅度为10～30mm，时间为30～90s。
全文摘要
本发明涉及一种利用机械振荡来制备超声造影剂的方法，该方法可用于制备多种超声造影剂，包括常规增强组织显影的超声造影剂(脂类、白蛋白类、多聚体类、表面活性剂类等)、靶向超声造影剂、纳米级微泡超声造影剂和兼药物或基因靶向载体的治疗型超声造影剂；本发明还具体涉及一种利用机械振荡来制备脂类超声造影剂的方法。
文档编号A61K49/06GK1785435SQ20051005737
公开日2006年6月14日 申请日期2005年11月9日 优先权日2005年11月9日
发明者谭开彬, 高云华, 刘政, 刘平, 夏红梅 申请人:中国人民解放军第三军医大学第二附属医院