专利名称：银杏内酯原料的指纹图谱质量检测方法
技术领域：
本发明是关于银杏内酯的制剂，特别是含有银杏内酯的注射剂，该注射剂以中药银杏叶的提取物银杏内酯为有效成份制备而成，属于药物领域。
背景技术：
银杏内酯是从中草药银杏叶当中提取获得的有效物质，该物质从结构上还可以进一步细分为银杏内酯A、B、C、K(银杏内酯K是发明人新发现的一个银杏内酯单体，已另案申请)等，对于银杏内酯的提取方法已经有详细的文献报道，例如，李新岗等人介绍了银杏内酯的实验室提取方法(参见李新岗等，银杏叶中银杏内酯的实验室提取方法研究，中国医药工业杂志1998年第1期)，中国专利文献CN1195665A介绍了银杏内酯的提取方法和含有银杏内酯的制剂，该方法是将银杏叶用水煮沸提取，用吸附剂对提取滤液吸附，再用乙醇脱附，回收乙醇，将析出的结晶溶解，重结晶，干燥制得银杏内酯。中国专利文献CN1313287A公开了一种银杏内酯的生产工艺。从银杏内酯的总提取物当中分离银杏内酯单体的方法，也有很多相关的文献报道，例如，游松等人介绍了银杏叶中银杏内酯的分离与结构测定方法(参见游松等，银杏叶中银杏内酯的分离与结构测定，中国药物化学杂志1995年第4期)。中国专利文献CN1287121A公开了由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯A、B的方法。银杏内酯作为一个有效的活性物质，可以将其制备成不同的临床药物剂型。用银杏内酯制备注射剂的方法已经在中国专利文献CN1315175A当中公开。刘洁等使用银杏叶注射剂治疗急性脑梗塞取得了一定疗效[参见刘洁等，银杏叶注射液对急性脑梗塞后肢体运动功能及TXB_2、6-Keto-PGF_(1a)的影响]。关于银杏内酯的药理作用，已经有较为详细的文献报道(参见陈维军等，银杏内酯的化学结构及药理作用研究进展，中国药学杂志1998年第9期)。尽管现有技术当中对于银杏内酯及其制剂的研究已经有很多的报道，但是，对于银杏内酯的研究一直没有停止，特别是对于银杏内酯单体的分离及其衍生物的研究，不断有文献报道。目前对于银杏内酯当中有效单体的研究，已经报道了银杏内酯A、B、C等结构，将银杏内酯制备成注射剂，很重要的一项技术问题是对产品质量的控制，到目前为止，尚没有发现能够准确控制银杏内酯注射液产品当中有效成分含量的方法，而且，银杏内酯注射剂制备过程当中，对于助溶剂的选择也非常重要，这直接影响到产品的稳定性和临床疗效。本发明通过银杏内酯注射液产品当中有效成份指纹图谱的测定，控制产品的质量，特别是，在发现了银杏内酯K的结构基础上，增加了一个新的质量控制指标，使得银杏内酯注射剂的工业化生产得以实现，并且通过实验研究，选择了理想的助溶剂，从而能够很好的控制银杏内酯注射剂产品的稳定性，完成了本发明。
发明内容
本发明目的是提供一种含有银杏内酯的制剂，特别是银杏内酯注射剂，同时还提供该注射剂的制备工艺。
本发明所述的银杏内酯注射剂是以高纯度的银杏内酯为有效成份制备而成，注射液各组份的重量比为银杏内酯∶葡甲胺∶氯化钠＝(2-8)∶(2-8)∶(4-12)上述组份的优选重量配比为银杏内酯∶葡甲胺∶氯化钠＝(4-6)∶(4-6)∶(6-10)上述组份的优选重量配比为银杏内酯∶葡甲胺∶氯化钠＝5∶5∶8其中还可以加入适量的10％柠檬酸溶液。
以制备1000毫升本发明的银杏内酯注射剂计算，其组成如下银杏内酯5.0g葡甲胺 5.0gNaCl 8.0g10％柠檬酸溶液 适量本发明银杏内酯注射剂的制备方法如下取葡甲胺加新鲜注射用水1000ml溶解，于120℃高压灭菌30min，取出后于一万级配料室加热至80℃，加入研细过80目筛的银杏内酯，加热至溶解，冷却至室温后用10％的柠檬酸水溶液调pH至8.0，加入NaCl 8.0g，针用活性炭2.0g，室温搅拌吸附30min，过滤除炭，加新鲜注射用水至总量1000ml，于100级无菌车间用无菌滤板下衬0.22μm微孔滤膜过滤，分装于10ml安瓿熔封，质检，印字，包装。
制备本发明银杏内酯注射剂所使用的银杏内酯原料，可以通过已知的提取方法提取，或者通过市售购得，但是，该原料需符合按如下方法测定的指纹图谱标准。
银杏内酯的指纹图谱测定1.供试品溶液制备精密称取于105℃干燥至恒重的银杏内酯样品30.0mg置10.0mL量瓶中，以50％丙酮溶液溶解并稀释至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
2.参照物溶液制备以银杏内酯B对照品适量，加50％丙酮溶液制成每1mL含1mg的溶液，即得。
3.测定方法照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录VI D)测定。
4.色谱条件与系统适应性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂(Hypersil C185μm 250×4.6mm)；柱温30℃；流动相A为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(85∶10∶5，V/V)，流动相B为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(35∶60∶5，V/V)；梯度0～5min，5％B；5～55min，5％B～55％B；55～56min，55％～100％B，100％B保持10min；流速1.0mL/min；检测波长220nm，理论塔板数以内酯B计应不低于7000。
5.测定方法吸取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，即得。
6.指纹图谱及技术参数用高效液相色谱法测定，记录时间为60分钟。银杏内酯的指纹图谱见图1，记录2小时的指纹图谱见图2。经检查空白(图3)无干扰。
本品指纹图谱中，有4个共有指纹峰。以银杏内酯B的保留时间为1计，其余共有指纹峰以相对保留时间标定，指纹图谱中，以银杏内酯B的峰面积为1，计算各共有指纹峰的面积比值，相对保留时间和相对峰面积技术参数见表1。
表1 银杏内酯指纹图谱技术参数
上述4个共有峰当中，共有峰1是银杏内酯C，共有峰2是银杏内酯A，共有峰3是银杏内酯B，共有峰4是银杏内酯K。
非共有峰面积供试品的测定结果，非共有峰面积不得大于5％。
本发明银杏内酯注射剂当中的银杏内酯包括银杏内酯A、B、C、K，其中银杏内酯A、B、K的总含量不低于90％，最佳含量为96.05％，其中银杏内酯B的含量为50％-65％，银杏内酯A的含量为30-40％，银杏内酯K的含量为0.5-5％。按每ml注射剂产品计算，每毫升本发明注射剂含有总银杏内酯2-10毫克，优选4毫克。所述总银杏内酯当中各单体的比例为银杏内酯A35.59％、银杏内酯B58.39％、银杏内酯K2.07％。
因此，本发明提供了含有上述三种银杏内酯的药物组合物，该组合物含有银杏内酯A 30-40％，银杏内酯B 50％-65％，银杏内酯K0.5-5％。
上述各组份的最佳配比是35.59％的银杏内酯A、58.39％的银杏内酯B、2.07％的银杏内酯K。
为了使制备本发明银杏内酯注射剂的银杏内酯原料纯度达到90.0％以上，将市售或自制的银杏内酯原料(薄层鉴别应检查出银杏内酯A、B、C、K)溶于温热(35-45摄氏度)的乙醇中，过滤，50摄氏度减压回收部分乙醇，放置、冷却、析晶，过滤，残液另行处理，取析出的晶体进行检测，如纯度未达90％以上，按上述方法重复精制步骤，直至达到含量要求。
在银杏内酯原料达到纯度要求后，取样品100g，加入冷乙醇或丙酮100ml，搅拌，静置，抽滤，按指纹图谱检测方法检测，如银杏内酯原料未达到指纹图谱要求，重复上述处理步骤直至样品达到要求。亦即银杏内酯A、B、K及其他成分的比例范围达到指纹图谱要求。
本发明银杏内酯注射剂的产品，经检测，应当符合产品指纹图谱标准的要求。
本发明银杏内酯注射液产品的指纹图谱测定标准如下1.供试品制备精密量取样品溶液5.0mL置10.0ml容量瓶中，加入6mol/L盐酸溶液2mL，混匀室温放置3.5hr，离心(3000转/分钟)10min，弃去上清液，沉淀以50％丙酮溶解，混匀，经0.45μm微孔滤膜过滤即得。
2.参照物溶液制备以银杏内酯B对照品适量，加50％丙酮溶液制成每1mL含1mg的溶液，即得。
3.测定方法及测定仪器照高效液相色谱法(中国药典2000版一部附录VI D)测定。
仪器Agilent 1100 Series(G1312A Pump、G1313A ALS、G1316AColcom、G1315A DAD)；色谱条件与系统适应性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂，建议使用Hypersil C18 5μ4.6×250mm色谱柱；柱温30℃；流动相A为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(85∶10∶5，V/V)，流动相B为水-甲醇-四氢呋喃(重蒸馏)(35∶60∶5，V/V)，0～5min，5％B；5～55min，5％B～55％B；55～56min，55％～100％B，100％B保持10min；流速1.0mL/min；检测波长220nm，理论塔板数以内酯B计应不低于7000。
测定方法吸取供试品溶液各20μL注入液相色谱仪分析，即得。
4.指纹图谱及技术参数(1)指纹图谱采用高效液相色谱法测定，记录时间为60分钟。银杏内酯注射液的指纹图谱见图4，记录2小时的指纹图谱见图5。经检查空白(图6)无干扰。
(2)共有指纹峰的标定指纹图谱中，应有5个共有指纹峰。以银杏内酯B的保留时间为1计，其余共有指纹峰以相对保留时间标定。
分别在10批注射液中均出现的色谱峰作为注射液的共有峰，以银杏内酯B为自身参照物，计算各共有峰的相对保留时间(表2)，以此作为共有指纹峰标定的依据。各批供试品的图谱见附图(4)、图(5)。
表2 银杏内酯注射液相对保留时间
指纹图谱中5个共有峰的相对保留时间是0.58(1)、0.87(2)、1(3)(S)、1.72(4)、1.75(5)；这5个共有峰当中，1是银杏内酯A，2是银杏内酯A，3是银杏内酯B，5是银杏内酯K，而相对保留时间为1.72的峰是银杏内酯A转化物。
(3)共有指纹峰面积的比值指纹图谱中，以银杏内酯B的峰面积为1，计算各共有峰的面积比值应符合银杏内酯注射液指纹图谱技术参数的规定(见表3)。
表3 银杏内酯注射液指纹图谱技术参数
指纹图谱中5个共有峰的峰面积比值是0.03(1)、0.53±25％(2)、1(3)(S)、0.25(4)、4.75±20％(5)；(4)非共有峰面积供试品的测定结果，非共有峰面积不得大于5％。
本发明银杏内酯注射剂所含的银杏内酯K是发明人新发现的一种化合物，该化合物已另案申请专利，其提取分离方法如下取银杏内酯粗品3g置索氏提取器中，加乙酸乙酯(或丙酮)2500ml回流24小时，回收乙酸乙酯至浸膏状，用硅藻土拌样，烘干，研细，用石油醚∶乙酸乙酯/9∶1湿法装于低压硅胶柱(压力0.2-0.3k/cm2)，以石油醚∶乙酸乙酯梯度递增洗脱，当石油醚∶乙酸乙酯/6∶4时，97～121流分，经TCL检查(甲苯∶乙酸乙酯∶丙酮∶甲醇/5∶2.5∶2.5∶0.3，4％NaAc硅胶H板)出现银杏内酯斑点(与银杏内酯对照品比较)，将其合并浓缩，放置出现沉淀，母液留用。将沉淀以丙酮溶解，以制备型高效液相纯化，可得银杏内酯K。122～127流分经薄层检查(条件同上)斑点相同，将其合并，浓缩，放置，析出白色针晶，过滤得白色针晶，TCL检查与银杏内酯A对照品Rf值(0.64)一致，乙醇重结晶得银杏内酯A纯品(GA)。将所得母液与上述留用母液合并，浓缩后用少量硅胶拌样，烘干，研细，用氯仿湿法装入硅胶柱(100-140目硅胶)，氯仿∶丙桐/9∶1洗脱，得5-10流分，TCL检查(条件同上)后斑点Rf值相同，合并，浓缩至小体积，放置得菊花状结晶(Rf值0.62)经乙醇多次重结晶得无色棱形结晶，用银杏内酯B为对照品，经TCL检查与银杏内酯B的Rf值相同，初步确定为银杏内酯B(GB)。柱层析继续洗脱至15-22流分，TCL检查斑点相同，合并，浓缩，放置得白色针状结晶，经TLC用银杏内酯C对照品检查，Rf值相同，初步确定为银杏内酯C(GC)。
银杏内酯K的确证白色针晶(MeoH)，mp＞300℃(分解)，易溶于醇、丙酮、微溶于水。略显淡黄色(空气中放置渐变为白色)。
IRVkBrmax(cm-1)3500，3385，3130，2960，2915，2857，1783，1757，1700，1600，1465，1437，1400，1376，1368，1356，1340，1305，1280，1260，1243，1231，1215，1183，1174，1150，1124，1110，1087，1063，1037，1021，957，750；ECI-MS(m/z)405[M-H]-。
该化合物通过理化分析和近代波谱技术(C-H相关、H-H相关、HMQC和HMBC谱)对化合物的碳氢信号进行全归属，结果如下。
银杏内酯K的碳氢信号归属及其相关质子信号(DMSO-d6)
注13C-NMR、1H-NMR、HMBC分别指核磁共振碳谱、核磁共振氢谱、二维C-H远程相关谱。根据上述波谱特征确定其化学结构式如下 本发明银杏内酯K的化学名称为1，10-二羟基-3，14-二去氢银杏内酯(1，10-Dihydroxy-3，14-didehydroginkgolide)。分子式C20H22O9，分子量为406。
本发明的银杏内酯注射剂具有很好的药理活性，其药理实验研究结果如下1、银杏内酯的一般药理学研究(1)、银杏内酯注射液25、50、100mg/kg尾静脉注射对小鼠行为和协调运动均无明显影响，对阈下剂量的戊巴比妥钠亦无协同作用，表明该药三个剂量对小鼠精神神经系统无明显副作用。
(2)、银杏内酯注射液5、10、20mg/kg静注给药对麻醉犬的血压、心率、心电、呼吸频率和幅度均无明显影响，表明该药三个剂量对麻醉犬心血管系统和呼吸系统无明显副作用。
2、银杏内酯的药效学研究(1)、银杏内酯注射液7.5、15.0、30.0mg/kg iV能使MCAO大鼠的脑卒中评分降低，MCAO梗塞范围缩小，脑组织含水量减少(P＜0.01)，其作用强度与金钠多注射液比较无明显差异。
(2)、银杏内酯注射液7.5、15.0、30.0mg/kg iV可使局灶性脑缺血大鼠再灌注损伤的脑组织内的MDA，LA等含量降低(P＜0.01)，表明脑组织缺血缺氧和过氧化程度受到明显抑制；同时SOD和GSH含量增加(P＜0.01)，反映了药物对机体抗氧化能力和清除自由基的能力有提高。
(3)、银杏内酯注射液7.5、15.0、30.0mg/kg iV可明显保护局灶性脑缺血大鼠再灌注损伤的脑组织结构，大脑皮质锥体细胞和脑实质神经细胞的核固缩、核溶解程度比缺血对照组明显减轻，软化灶减少。
(4)、银杏内酯注射液7.5、15.0、30.0mg/kg iV与模型组相比可使弥漫性全脑缺血大鼠的EEG恢复正常时间和翻正反射恢复时间明显缩短(P＜0.01)，使伊文思蓝通透性显著降低(P＜0.01)，其作用与金钠多注射液比较无统计学显著性差异。
(5)、银杏内酯注射液能够明显增加急性不完全性脑缺血小鼠的存活数。按Bliss法计算银杏内酯注射液iV的ED50为21.3(17.6-25.6)mg/kg；银杏内酯ig的ED50为29.2(16.5-51.7)mg/kg；金纳多iV的ED50以银杏提取物计为12.2(6.3-23.3)mg/kg，ED50值经t检验组间比较无差异。
(6)、银杏内酯注射液iV10min即开始起效，达峰时间20min左右，持续时间可达90min以上；而该药ig起效时间20-30min，达峰时间45min左右，持续时间可达120min以上。同一剂量组iV的效应强于ig。
(7)、银杏内酯注射液12.0、24.0、48.0mg/kg iV可显著延长小鼠在缺氧状态下的存活时间(P＜0.01)。
(8)、银杏内酯注射液2.5、5.0、10.0mg/kg iV对麻醉犬CBF、CVR、SBP、DBP、MBP和HR均无明显影响(P＞0.05)，表明该药三个剂量不影响麻醉犬的脑血流量、脑血管阻力、血压和心率。
(9)、银杏内酯注射液0.99、1.96、3.80μg/ml对PAF诱导家兔体外血小板聚集均有明显抑制作用(P＜0.01)，并有明显解聚作用(P＜0.01)。对ADP诱导血小板聚集作用较弱(P＜0.05或P＜0.01)，无明显解聚作用(P＞0.05)。该药iV0.75、1.50、3.0mg/kg对PAF诱导的家兔体内血小板聚集均有明显抑制作用(P＜0.01)，中、高剂量组还有明显解聚作用(P＜0.01)。对兔血小板数无明显作用(P＞0.05)。
(10)、银杏内酯注射液iV1.50、3.0mg/kg可明显降低兔红细胞压积(P＜0.01)和全血粘度(比)尤其对高切变速率的全血粘度(比)作用更明显(P＜0.01)。
(11)、银杏内酯注射液iv 0.75、1.50、3.0mg/kg能明显抑制兔动——静脉旁路的血栓形成(P＜0.01)。
(12)、银杏内酯注射液iv 3、6、12mg/kg对大鼠动——静脉旁路血栓有明显溶栓作用(P＜0.01)。
(13)、银杏内酯注射液iv6、12、24mg/kg能明显延长小鼠凝血时间(P＜0.01)。
(14)、银杏内酯注射液iv6mg/kg后10min-20min时可明显延长大鼠凝血时间，峰时12min左右，可使大鼠凝血时间延长32％左右，ig50mg/kg后45min有效，持续120mm，峰时69min左右，大鼠凝血时间延长34％左右。
(15)、银杏内酯注射液iv 1.5mg/kg药后立即就可明显抑制PAF诱导免体内血小板聚集并有明显解聚作用(P＜0.01)，作用持续30min，其峰时为5min，血小板聚集抑制率可达80％左右，1分钟解聚为81％左右。银杏内酯ig25mg/kg药后30min可明显抑制PAF诱导兔体内血小板聚集并有明显解聚作用(P＜0.01)，持续60min，其峰时为42min左右，血小板最大聚集抑制率为38％左右，1分钟解聚率为32％左右。
(16)、银杏内酯注射液iV延长小鼠凝血时间的IC50为6.42mg/kg，银杏内酯ig延长小鼠凝血时间的IC50为29.41mg/kg。银杏内酯注射液iv对家兔血小板和PAF诱导体内血小板聚集的IC50为2.32mg/kg，银杏内酯ig对家兔血小板和PAF诱导体内血小板聚集的IC50为87.72mg/kg。
上述实验表明，本发明的银杏内酯注射液安全有效，可用于缺血性中风的预防和临床治疗。
本发明银杏内酯注射液的优点是产品质量稳定可控，根据注射剂产品的指纹图谱，能够控制产品的组成，特别是增加了银杏内酯K这一控制指标，配合其他银杏内酯A、B、C等指标，使得产品的稳定更加可控。
本发明银杏内酯注射剂具有较好的稳定性和很好的疗效，还因为本发明银杏内酯注射剂的制备工艺过程，助溶剂的选择对制剂的制备和稳定性有重要的影响，本发明研究过程中，系统的考察了(1)丙二醇、PEG400、乙醇，(2)丙二醇、PVP、乙醇，(3)丙二醇、山梨醇、乙醇，(4)葡甲胺，(5)葡甲胺、葡萄糖，(6)尿素，(7)丙二醇、吐温-80、乙醇，(8)丙二醇、乙醇，(9)氢氧化钠，(10)Pluronic F-68，(11)Pluronic F-68、丙二醇，(12)豆磷脂、Pluronic F-68、丙二醇、甘油、PEG400、乙醇，(13)HP-CD，(14)丙二醇、PEG400、磷酸盐缓冲液，(15)丙二醇、PEG400、磷酸盐溶液等多种助溶剂。通过大量的试验，发现上述药用辅料均有助溶作用，其中以葡甲胺效果最佳。本助溶剂对银杏内酯其他组分的组合(例如银杏内酯A、B，银杏内酯A、B、C，银杏内酯B、K，银杏内酯A、B、C、K，银杏内酯B、C、K、银杏内酯A、C等)均具有良好的助溶作用。
图1银杏内酯指纹图谱图2银杏内酯记录2小时指纹图谱图3银杏内酯指纹图谱空白图4是银杏内酯注射液指纹图谱图5银杏内酯注射液记录2小时指纹图谱图6银杏内酯注射液指纹图谱空白具体实施方式
处方银杏内酯5.0g葡甲胺 5.0gNaCl 8.0g10％柠檬酸溶液 适量制法取葡甲胺加新鲜注射用水1000ml溶解，于120℃高压灭菌30min，取出后于一万级配料室加热至80℃，加入研细过80目筛的银杏内酯(银杏内酯符合本发明所述的质量标准)，加热至溶解，冷却至室温后用10％的柠檬酸水溶液调pH至8.0，加入NaCl 8.0g，针用活性炭2.0g，室温搅拌吸附30min，过滤除炭，加新鲜注射用水至总量1000ml，于100级无菌车间用无菌滤板下衬0.22μm微孔滤膜过滤，分装于10ml安瓿熔封，质检，印字，包装。
本产品为银杏内酯的灭菌水溶液。每ml含银杏内酯A、B、K总量不得低于4.0mg。
权利要求
1.一种含有银杏内酯A、B、C、K的银杏内酯原料的指纹图谱检测方法，其特征在于该方法为供试品溶液制备精密称取于105℃干燥至恒重的银杏内酯样品30.0mg置10.0mL量瓶中，以50％丙酮溶液溶解并稀释至刻度，混匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得；参照物溶液制备以银杏内酯B对照品适量，加50％丙酮溶液制成每1mL含1mg的溶液，即得；色谱条件与系统适应性试验以十八烷基键合硅胶为填充剂；柱温30℃；流动相A为水-甲醇-四氢呋喃85∶10∶5，流动相B为水-甲醇-四氢呋喃35∶60∶5；梯度0～5min，5％B；5～55min，5％B～55％B；55～56min，55％～100％B，100％B保持10min；流速1.0mL/min；检测波长220nm，理论塔板数以内酯B计应不低于7000；测定方法吸取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，即得；银杏内酯采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，记录时间为60分钟，得4个共有峰，以银杏内酯B的保留时间1为自身参照物，此4个共有峰的相对保留时间为0.56、0.87、1、1.71，以银杏内酯B的峰面积为1，此4个共有峰的峰面积比值是0.02、0.56±20％、1、1.0±20％；4个共有峰当中，共有峰1是银杏内酯C，共有峰2是银杏内酯A，共有峰3是银杏内酯B，共有峰4是银杏内酯K；非共有峰面积供试品的测定结果，非共有峰面积不得大于5％。
2.如权利要求1所述的银杏内酯的指纹图谱检测方法，其特征在于总银杏内酯采用高效液相色谱法测定其指纹图谱，记录时间为60分钟，得4个共有峰，以银杏内酯B的保留时间1为自身参照物，此4个共有峰的相对保留时间为0.56、0.87、1、1.71，以银杏内酯B的峰面积为1，此4个共有峰的峰面积分别是0.02、0.56、1、1.0。
全文摘要
本发明公开了一种银杏内酯原料的指纹图谱检测方法，该银杏内酯原料指纹图谱有四个共有峰，非共有峰面积不得大于5％，符合指纹图谱的银杏内酯原料的质量可控，稳定性好。
文档编号A61P9/00GK1869683SQ20061008642
公开日2006年11月29日 申请日期2002年8月23日 优先权日2002年8月23日
发明者楼凤昌, 萧伟, 戴翔翎, 王颖, 凌娅, 李明慧, 毕宇安 申请人:江苏康缘药业股份有限公司