专利名称：益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及益母草提取物的用途，具体涉及益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂在制药领域中的用途。
背景技术：
益母草(Leonurus)为唇形科植物，原名茺蔚，传统认识与主治月经不调、痛经、闭经、产后瘀血腹痛、水种、尿血、目赤肿痛、头晕胀痛等症。茺蔚子为益母草之成熟果实，性味辛、甘，微寒，入肝经，其活血调经功能同益母草，有清肝明目，活血行气作用，临床多用于目赤肿痛或云翳等眼疾。益母草提取物包括市场上现有的益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、益母草注射液，人们对上述益母草提取物治疗认识主要还仅限于益母草传统治疗范围。现代医学研究益母草主要活性成分是生物碱，如益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲和水苏碱。其中益母草碱(C13H21O5N3)、益母草总碱、水苏碱在现有文献上记载有对多种动物在体子宫均有直接兴奋作用，可使子宫收缩频率、幅度、及张力增加，以及具有活血化瘀、止血的功效。茺蔚子即益母草子主要成分为益母草宁碱(茺蔚宁Leonurinine，C10H14O3N2)、水苏碱及油酸，油酸主要成分为亚油酸(42.62％)、亚麻酸(29.93％)、油酸(20.23％)、棕榈酸(5.40％)、硬脂酸(1.57％)等，此外还含有17种氨基酸和24种矿质元素，及维生素A样物质，茺蔚油为茺蔚子压榨出的提取物，其内含有益母草宁碱、水苏碱和油酸，对于茺蔚油作为药物的治疗作用还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供益母草提取物的新用途，具体涉及益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂在制药领域中的用途。
实际上，本发明涉及益母草提取物益母草膏、益母草糖浆剂、益母草冲剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
本发明涉及益母草提取物中主要活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其药物可接受的盐作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
涉及益母草提取物中主要活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱的混合物或其药物可接受盐的混合物或该二者的混合物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
涉及益母草子提取物茺蔚油中主要活性成分益母草宁碱、水苏碱或其药物可接受的盐作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
所述益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药在制备治疗和预防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肌无力、进行性肌萎缩、下肢静脉曲张、血栓闭塞性脉管炎、臁疮、银屑病、白癜风、鹅掌风、高血压、冠心病、高血脂、心脑血管病、再生障碍性贫血、紫癜、弥散性血管内凝血、月经不调病、肿瘤、白血病、乙型肝炎、黄胆性肝炎、肝硬化、青光眼、白内障、耳鸣、耳聋、脱发、肾炎、尿毒症、前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大、尿崩症、糖尿病、胃下垂、子宫脱垂、眼睑下垂、甲亢、脾亢疾病的药中的应用。
所述的用途在治疗和预防疾病的药的方法，包括对患者进行有效治疗剂量的活性成分给药，所述活性成分选自益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其混合物或其药物可接受盐的混合物或该二者的混合物。
所述用途的提取物活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其混合物或其制药可接受盐的混合物或该二者的混合物同辅助剂制成片剂、胶囊、针剂、口服液、糖浆剂、散剂、膏剂、油剂。
所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，有效治疗剂量为所述的活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的剂量给药。
所述益母草提取物茺蔚油作为食用油添加剂加入到食用油中，茺蔚油与食用油的比例为1/5000～1/10。
为了更好地理解本发明的实质，下面将分别单独使用益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液的药理试验及其结果来说明其在制药领域中的新用途。上述的五种物质具有同样的药理效果，区别仅在使用的量和显效时间上的不同。
1、小白鼠的急性毒性试验口服给药健康雄性小鼠10只，体重17～24g，灌胃给予小鼠益母草的提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液LD50(ip)＝2452.8±5.42mg/kg(按照益母草碱计算)。注射给药雄性小白鼠10只，体重17～24g，按益母草碱简化机率单位法计算，测得LD50(iv)＝601.2±45.1mg/kg，观察服后4～6小时突然全身无力，下肢不能活动或痉挛症状，但神志清楚，对体温、呼吸、心率皆无影响，四小时左右其症状可恢复正常，观察三天无一只死亡。
2、生物活性实验Ellman分析采用Ellman分析方法对适合的乙酰胆碱酯酶抑制剂进行筛选。将缓冲液中的人乙酰胆碱酯酶(hAchE)加入到检测化学药品/TCM提取物中，然后再加入Acetylthiocholine(ATCI)底物和Ellman氏试剂(5′5-二硫-双-(2-硝基苯甲酸盐)，DTNB)。通过释放的thiocholine对AchE抑制性活性进行监测，该thiocholine随后与DTNB反应形成亮黄色产物。使用分光光度计来检测所得显色产物的光密度。
将从益母草的水提取物溶于20mg/ml 50％DMSO，随后稀释成为10、20、50、80、100μg/ml以进行Ellman分析。
如下所述在96孔板上进行Ellman分析将分析缓冲液中(100mM磷酸钠缓冲液，pH7.4)的预设定量的益母草水提取物与0.1单位hAChE(购买于Sigma)混合。在经过短暂的预孵育后(即10分钟)，将相同量的12.5mM Acetylthiocholine(ATCl)与10mM(5′5-二硫-双-(2-硝基苯甲酸盐)，DTNB)相混合，再将混合物加入到小孔中。10分钟后，在415nm对96孔板进行光密度检测。光密度与抑制活性呈反比。
检测结果如图1所示，50μg/ml的益母草水提取物对hAChE活性的抑制高于80％。
同样也对所选择的益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液的活性成分的抗乙酰胆碱酯酶活性进行了检测，它们是益母草宁碱(C10H14O3N2)、益母草碱(C13H21O5N3，分子量311.33)、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱(C7H13NO2，分子量143.0)。上述这些都来自于中国药监局中国药品生物制品检定所。
下面将选择的活性成分溶于50％DMSO，在本分析中不推荐使用100％DMSO，因为那会降低酶活性。
对选择的活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱进行Ellman分析，进行最高浓度达到40μM(如图2)的10倍稀释。
在所有被测化学药品中，益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱均表现出强烈的AChE抑制作用，其IC50分别为约5-8μM(图2)。
为了检测益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱对于AChE的特异性，在Ellman分析中采用丁酰乙酰胆碱酯酶(hBchE)来替代AchE。hBchE可在红细胞中富集，被命名为假酯酶，与AChE具有极高的同源性。与hBchE的非特异性结合会给出严重的胆碱能副作用。
除了采用hBchE(购自于sigma)外，如上所述进行Ellman分析。同时也采用AChE平行进行Ellman分析以进行比较。与BchE比较，都显示出益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱对AchE更高的选择性(图3、4、5、6、7)。
MTT分析利用MTT分析对选择的主要hAchE抑制剂的毒性进行检测。考虑到只有具有代谢活性的细胞才可以清除四唑盐MTT形成formazen染料，在540nm处的OD检测值直接与活细胞数呈正比。
在神经细胞系SHSYSY和小鼠神经细胞系NIE-511中，没有检测到1-50μM的益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱产生的显著的细胞毒性(图8、图9)。
在本发明中，术语“制药上可接受的盐”定义为那些诸如益母草碱硫酸盐、益母草碱醋酸盐、盐酸水苏碱等无机酸或有机酸的可溶性盐。本发明中所使用的术语“活性成分”定义为以上所述的益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液或益母草生物碱益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其药物可接受的盐或该二者的混合物。本发明所涉及的益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸均为现有商品，所述普通技术领域的技术人员通过现有制作工艺即可制得。以下益母草提取物的剂型茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液，与现有对应剂型工艺相同。其内的活性成分生物碱及其在制药上可接受的盐的提取已是现有技术。
本发明中的植物优选的选自益母草全草，本发明使用的益母草提取物茺蔚油选自茺蔚子(益母草子)压榨而成。
所述益母草的提取物包括水提取物、乙醇提取物、压榨提取物。
将益母草的提取物或上述益母草的生物碱、碱盐或其混合物制作成药物可接受载体，“药物可接受载体”指在制药上使用的促进该活性成分加工成制剂的赋型剂或辅助剂。该制剂可通过口服、肌肉内、腹腔内、皮下或静脉内给药。优选的所述制剂，特别是那些诸如片剂、膏剂、冲剂、糖浆剂、胶囊和注射剂的制剂以及适合的溶液。
本发明使用的适合的赋性剂包括诸如多糖的填料，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇、纤维素衍生物、硫酸镁、诸如磷酸三钙或磷酸氢钙的磷酸钙，以及诸如玉米淀粉、小麦淀粉等淀粉糊的结合剂。使用的适合的辅助剂包括流体调节剂和润滑剂，例如滑石、硅石、硬脂酸。本发明中的提取物可以制成诸如静脉内、皮下和肌肉内注射的注射方式，口服剂、栓剂或舌下片剂的形式。采用本领域中普遍接受的方法来制备。例如注射剂、舌下片剂、片剂、糖浆剂和胶囊的剂型的药物制剂。在制备中根据需要可加入稳定剂和防腐剂。在本发明中，当活性成分或组合物口服给药时，可以采用片剂或胶囊、或水溶液或悬浮液的形式。当采用片剂的时候，通常使用的载体包括乳糖、甘露醇和玉米淀粉，且通常加入诸如硬脂酸镁的润滑剂。如果是采用胶囊形式，活性化合物在硬明胶胶囊中以干燥的形式给药，或在适合的凝胶或液态载体，例如液体聚乙二醇或交叉胶中，在软明胶胶囊中的形式给药。
将益母草生物碱益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物用于保健目的的应用，可将其按一定比例的上述生物碱或将茺蔚油加入到食用油中，添加物和食用油的加入比例为1/5000～1/10，优选加入比例为1/500～1/50。茺蔚油中含有生物碱益母草宁碱、水苏碱和维生素A样物质、24种矿质元素和多种氨基酸，将其加入到食用油中长期食用。其具有正向调节人体功能，提高免疫能力，补充营养物质及微量元素，达到保健功效。
益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱的制剂的有效剂量为通常情况下的给药剂量约为活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的剂量给药，优选为以每天0.01-0.3毫克/千克·天的剂量给药，每天早晚服用，连服三天后减半服用，七天为一疗程。服用稍微过量，一般不须药物处理，不良反应经过三至四小时可以自行消失，严重者M样反应重者用阿托品解救；N样反应重者可用少量筒箭毒碱对抗；休克者可用去甲肾上腺素解救。口服后小肠内消化吸收，靠简单扩散进入细胞膜，又易透过血脑屏障，故中枢作用强大，排泻过程中在肾部又得以重吸收，加之突触传递的后放效应，致使药效形成持久；注射给药，可使药物快速显效。
本发明使用的术语“有效治疗剂量”或“有效剂量”意指为要实现其预期目的的活性成分的有效剂量。该剂量应依据患者的症状、性别、年龄和体重、给药方法、给药时间与间隔、以及药物制剂的特性、调剂、种类、特殊有效组分等而发生变化。
临床治疗与分析药理从上述可知益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液均属于拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。具体为益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱均为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药，即乙酰胆碱酯酶抑制剂(AchEI)。其可长时间地抑制乙酰胆碱酯酶的活性，能减少神经递质乙酰胆碱的降解；乙酰胆碱酯酶抑制剂是通过抑制突触间隙内乙酰胆碱的降解，又能进入细胞发挥作用，还能兴奋胆碱能神经末梢，释放Ach，从而形成乙酰胆碱的浓度升高，呈现长久的M样和N样作用，对人体的功能活动起着以正常的、健康向上的生理效应为主的神经调节和体液调节，此调节具有双向性，可促进恢复人体内各项物理、化学因素的相对稳定平衡。另外，乙酰胆碱对毒蕈碱受体和烟碱受体的激动具有神经保护作用。
益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液中的活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱的M样作用(1)腺体分泌增加增强了体液调节，使体内激素间、神经递质间成正常健康比例的分泌增加或减少，从而形成其间的对立统一平衡机制，通过体液调节又使神经调节的功能恢复加强，进而形成了体液调节和神经调节的体内良性循环。激素、神经递质的相对增强和抑制，器官组织间的液体增多，促进了机体新陈代谢，增强了人体生长、发育和生殖功能及免疫功能。(2)泌尿道逼尿肌收缩、括约肌舒张，膀胱排空作用加强，呈现利尿消肿。临床可用于手术后的腹气胀和尿潴留(3)血管系统有血管的扩张加之利尿效应，可使血压下降，头部舒适，血不妄行，出血症休止。(4)眼瞳孔括约肌、睫状肌收缩，使瞳孔缩小，眼压下降，眼力恢复，调节痉挛(近视)，局部舒适。(5)胃肠道作用收缩幅度和张力增强、胃肠分泌提高，消化能力增强。N样作用(1)兴奋神经节的NN受体；(2)兴奋肾上腺髓质NM受体，肾上腺素、去甲肾上腺素释放；此效应可兴奋支气管平滑肌的β2受体，使支气管不致过于收缩，引起呼吸系统不良反应；(3)兴奋骨骼肌NM受体表现肌肉收缩。
临床毒理过量可致胆碱能危象(1)胃不适，俗语抓闹，一般不呕吐，不疼痛(胃平滑肌过于兴奋收缩引起)。(2)小腹发纵、屈腹、无力(腹内平滑肌、腹壁肌过于收缩引起)。(3)突然全身无力，下肢不能活动或痉挛(反射中枢过于兴奋，形成肌束颤动，肌无力加重、传导中枢上下神经通路兴奋阻滞，形成四小时左右的可逆性的椎体束综合征)。(4)手脚发凉(M样作用，心率减慢，心传导阻滞，心温不能扩布四肢末梢所致)。(5)大汗淋漓(交感神经的节后纤维过于兴奋所致汗腺的大量分泌引起)。(6)胸闷、胸压榨、腰疼、背疼，颈项强直或全身酸麻疼痛(以竖脊肌为主的背部骨骼肌过于收缩拉动激惹神经根部，形成根性疼痛)。(7)甚者呼吸麻痹(呼吸肌和导气部平滑肌过于收缩及呼吸中枢先过于兴奋而后抑制引起的)。(8)过量至孕妇流产(子宫平滑肌过于收缩引起的)。
服用治疗量十日后可出现以下效应(1)头部发箍(以枕额肌为主的头部骨骼肌过于收缩牵拉帽状腱膜引起头皮紧密度增强引起)；(2)左右两手以长劳作的，以中指中关节为先的指背部强性微痛和足趾部呈间断性微痛；(3)颈项后仰(以竖脊肌为主的背部肌兴奋收缩引起)(4)熟睡中可有一两口唾液咽下或从口角流出(唾液腺健康分泌所致)(5)小腿微皱(肾功能增强，膀胱平滑肌收缩，括约肌舒张引起的利尿效应)(6)上、下眼睑呈神经梢样有一时没一时的跳动(植物神经节兴奋引起神经末梢运动引起)。
益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液或其提取物中的活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱均属于乙酰胆碱酯酶抑制药，治疗如下病症治疗和预防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症。M样作用，增强包括下丘脑、垂体在内的腺体分泌，使体内激素水平达到对立统一平衡，抵制神经功能紊乱。N样作用，以枕额肌的收缩使头上部形成紧箍效应，可物理性的控制脑部异常活动，骨骼肌的持续不断收缩、抑制了病态的痉挛性收缩。乙酰胆碱酯酶抑制剂对保护多巴胺能神经元和改善PD运动障碍具有良好的生理功能。通过抑制乙酰胆碱酯酶达到阻止神经细胞凋亡的目的，从而保护了病人的多巴胺能神经元，提高了黑质纹状体多巴胺能神经系统的功能抑制乙酰胆碱酯酶同时也可提高内源性乙酰胆碱浓度，从而通过烟碱样胆碱能β2受体调控纹状体多巴胺的释放，达到对PD的标本兼治效果，特别对患有痴呆的PD患者更能提高疗效。临床用本发明药物治疗早老性痴呆10例、帕金森病6例、癔病3例、精神分裂症10例，均取得满意疗效。
治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肌无力、进行性肌萎缩、下肢静脉曲张、血栓闭塞性脉管炎、臁疮、银屑病、白癜风、鹅掌风。M样作用，通过神经调节和体液调节及自身调节功能加强，肌体激素水平平衡、组织液充沛，内毒素减少，血液鲜泽，免疫力恢复加强，诸证消减。
病理中枢支配于四肢的一些在同一节上或临近几节上的成对神经，长期缺失兴奋，导致左右两侧相对应的神经根、节、梢的激动反射减退或消失，使其对应部失去了神经的营养保护和支配控制。形成对称性的局部功能废用病变，加之外来风、寒、湿、热、毒及劳伤等因素而使症状加重。
药理M样作用，传出神经的兴奋，反射引起传入神经的运动，锻炼强壮了反射弧，使感受器和效应器所在的同一器官，形成持续不断的兴奋，使局部功能改善和恢复，抑制了器官组织的增生和萎缩，N2受体的激动，使手指、脚趾的背部肌及脊柱背部肌呈慢长的兴奋收缩，带动了所处部位的一系生理功能的恢复和加强，从而改善了症状，消减了畸形。由于有以竖脊肌为主的背部肌的兴奋收缩，此效应又可治疗颈椎病、腰间盘突出和强直性脊柱炎等脊柱疾病。临床治疗类风湿性关节炎33例，其中15例轻型患者关节症状解除，13例中度患者关节症状基本消失，5例重度患者的关节畸形有不同程度的改善；系统性红斑狼疮3例，其中1例治愈，2例缓解；治疗肌无力、进行性肌萎缩5例、下肢静脉曲张20例、血栓闭塞性脉管炎5例、臁疮5例、银屑病15例、白癜风15例、鹅掌风6例均取得满意疗效。
治疗高血压、冠心病、高血脂、心脑血管病。胆碱能神兴奋、M样作用，使腺体分泌增加，激素、神经递质相对增多或减少，包括淋巴在内的组织液体增多，形成了体内神经调节和体液调节的良性循环，肌体内有毒物质的降低可消失，血质得到了改善，瘀质得到了消融，加之体内液体的增加，使血液呈现润泽鲜新，又有血管的扩张，血液循环的顺畅，血不妄行，出血症停止，血液病得到缓解和控制，通过血质改善，血管扩张，利尿效应，可使血压下降。M效应使冠状动脉舒张，心率安抚在80次/min左右的水平上，减轻了心脏负荷，改善了心肌缺血、缺氧的症状。
益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱能够改善心肌供血，降低高血压、降低血粘度、抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓、增强纤溶作用。心肌保护作用大量自由基的产生及其所引发的脂质过氧化反应是心肌缺血再灌注损伤的主要机制，通过结扎家兔冠状动脉造成心肌缺血，20min后开始静滴益母草活性成分注射液，治疗10min后与对照组比较，发现益母草可显著降低心肌组织丙二醛(MDA)含量，增强超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性，改善心电图的缺血表现。表明益母草提取物活性成分可以保护抗氧自由基酶系统的活性，抑制心肌缺血再灌注时的脂质反应，减轻过多氧自由基所致的心肌细胞损害。
临床使用益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱对高血压治疗，共治214例，其中一期高血压病134例、二期高血压病52例，三期高血压28例，结果各期显效分别为132例、40例、21例；有效分别为2例、10例、4例，无效分别为0例、2例、3例。有效率分别为100％，96％，89％。以上结果表明，该疗法对各期高血压均有较好疗效。并能缓解心绞痛，降低血粘度用益母草提取物活性成分治疗血液高血粘症患者105例，临床症状如头晕、头痛、失眠及肢体麻木感多数得到缓解。血液流变学指标如全血比粘度(高切及低切)、全血还原比粘度(低切)粘度指数，全血还原比粘度(高切)，红细胞变形能力TK值，血小板聚集率，纤维蛋白原含量及红细胞电泳时间均有明显改善，治疗前后差异显著(P＜0.05)。
抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓形成，在体外观察益母草提取物活性成分对抗血小板聚集作用实验结果表明，益母草提取物活性成分能维持烫伤大鼠血小板聚集比值于正常范围，而对照组比值明显减低；在冰敷应激实验中，预注益母草生物碱，大鼠心肌小血管血小板聚集物出现率明显减少。预注益母草生物碱后的大鼠再滴注二磷酸腺苷(ADP)，其血液中和肺泡壁毛细血管内血小板及其聚集物出现率明显减少。
另外益母草提取物活性成分还有增强纤溶作用，从而抑制血栓形成。用本发明益母草提取物活性成分制剂喂饲大鼠，然后从颈总动脉放血进行血液凝固性测定，结果表明上述制剂可抑制血小板功能，降低内、外凝血功能，促进纤溶活性3个环节抑制体外血栓的形成。在用尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)激活纤溶酶原的纤溶实验中，观察了20余味常用活血化瘀中药对纤溶的影响，结果显示益母草提取物的纤溶活性最强。
治疗再生障碍性贫血、紫癜及弥散性血管内凝血预防。本发明益母草提取物活性成分的M样作用，具有改善血质，血液循环，提高机体免疫能力，有效控制因其所致皮肤、粘膜及内脏出血症状。N样作用使以竖脊肌为主的背肌兴奋收缩，使脊柱、神经中枢和脊髓形成一系列的功能改善，使造血干细胞功能恢复和加强。M样的血质改善，减少紫癜的发生。在临床治疗应用中，用本发明药物共治疗再生障碍性贫血20例，有17例痊愈，2例明显好转，无效1例，有效率为95％，治愈率为85％。临床治疗紫癜60例，紫癜现象均消失。对弥散性血管内凝血(DIC)预防，通过3年内对1000余例节育外科手术临床应用，在手术前三天服用本发明药物，手术间未出现一例DIC症状。
治疗月经不调病益母草提取物作为乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用，具有较强兴奋子宫的作用，，能增强子宫收缩幅度、频率及张力。益母草提取物的活性成分可使大鼠动情前期的大鼠离体子宫，从小振幅不规则的自发性收缩变为大振幅的规律收缩，收缩可持续数小时，但冲洗后可恢复。胆碱能神经的兴奋可增强人体最大的腺体肝脏的分泌功能加强，使其生物转化率提高，促进体内有毒物质的毒性减弱及排泄速度，这样一来，血液中的毒素、杂质减少，加之包括血液在内的某些部位的液体增多，使血质改善，血液呈现鲜泽无瘀，加之血管扩张、血液循环顺畅，经期腹痛减轻或消失，子宫平滑肌的功能健康收缩，抑制了子宫内膜毛细血管的通透性，使离经之血呈现不多不少，形成量的适中。
治疗肿瘤、白血病在临床中有一例背部靠脊处长了十余年有鸡蛋大的瘤体，服用益母草提取物两周后，瘤体缩小三分之一左右并变软，服用二月后瘤体基本消失。一例老年男性右眉棱骨上长了七年多的有乒乓球大的瘤体，服用益母草提取物茺蔚油每日2次，每次2ml，5日后逐渐减量服用，二月后瘤体消失。临床应用于10例白血病的治疗，可有效控制出血，症状改善。通过采用益母草提取物茺蔚油、益母膏对30例恶性肿瘤临床治疗观察(其中胃癌10例、肺癌5例、肝癌5例、乳腺癌6例、子宫癌4例)，其结论如下(1)这种治疗肿瘤的药物制剂具有较强的抑瘤作用，本组病例多为晚期，有效率(PR+mR)达42.9％，说明了抑制了肿瘤的增长，如疗程延长，疗效可增加。
(2)可明显改善患者的自觉症状，乏力、纳差症状缓解率为73.5％对照组相比，有明显差异。
(3)有明显的免疫调节作用，增加患者自抗病瘤能力。
药理分析(1)乙酰胆碱浓度升高，同时M效应又使包括垂体、肾上腺髓质在内的所有腺体分泌的激素与Ach成正常比例的相应增加或减少，从而达到了激素、神经递质对细胞作用的对立统一平衡，加强了神经对细胞的保护及控制权，从而使细胞的变异和突变概率降低。(2)细胞受体的配体间的相对平衡，又可抑制癌细胞的分泌物对正常细胞的浸润，从而减弱癌的扩散速度。(3)腺体分泌活动的增强和平滑肌及骨骼肌的长期不断兴奋收缩，从物理角度也来减排了占位物的空间，抑制了肿瘤的发展。(4)通过神经调节和体液调节及自身调节的完善，使肌体内环境的稳态巩固和加强，使免疫力增强，体内毒素降低减少，从根本上抵制了肿瘤的发生。
治疗乙型肝炎、黄胆性肝炎、肝硬化。临床上本发明药物具有对人体机体调节的作用，通过用3H-胸腺嘧啶掺入法表明，益母草提取物活性成分对由刀豆球蛋白A(conA)活化的小鼠T淋巴细胞有较强的促进增殖作用，其作用是单独使用conA的5～8倍，表明能够增强肌体的细胞免疫功能。加之本发明药物的M样作用，使肝腺体分泌增多，肝功能得到改善和加强，促进了其排毒、代谢、生物转化速度和强度，改善了血质、血液循环，降低了门静脉高压、肝胰壶腹括约肌的舒张、减少胆汁瘀阻，便于胆汁排出；肝功能改善，促使乙肝的e抗体较早出现，转阴率上升，同时胆碱物质又能抵制肝脂肪变性，利尿作用又可消除肝硬化腹水，因此具有治疗和预防乙型肝炎、肝硬化疾病。临床治疗乙型肝炎50例、黄胆性肝炎73例、肝硬化21例，均取得较好疗效。
治疗青光眼、白内障、眼底出血症、耳鸣、耳聋、脱发。对青光眼患者36例进行治疗，口服本发明药物疗程15天，显效的有33例，有效的3例，无降压的0例，有效率达100％。白内障30例，11例痊愈，16例症状改善，3例无效。对13例眼底出血患者的治疗观察，均能在20天左右基本消除症状。本发明药物的神经调节作用可对功能性耳鸣、耳聋具有显著治疗作用，在临床中治疗53例，其自觉症状均基本消失。对脂溶性脱发、神经性脱发、营养性脱发有明显的抑制作用，其机理为以枕额肌为主的头部骨骼肌收缩牵拉帽状腱膜引起头皮紧密度增强，增强局部营养物质利用，以及脾的功能改善加强，与所处脾内的生发中心的功能发挥增强有关。通过对眼的M样作用及维生素A类物质的作用可使眼压降低，加快眼的新陈代谢，促进眼底瘀血吸收，达到视力恢复和加强。
治疗肾炎、尿毒症。M样作用，血管扩张使肾毛细血管畅通，肾小球滤过率加大，加之膀胱的利尿作用，而使尿液排泄顺畅，水肿消退。腺体分泌致肝功能旺盛，肝血改善，促使进入肾脏的血液毒素降低，从而减少毒性物质对肾脏的刺激和破坏，同时交感神经的节后纤维兴奋、激发恢复肾功能，抵制了尿毒症。益母草提取物对初发期急性肾小管坏死(ATN)有一定的防治作用；在庆大霉素所致急性肾功能衰竭发生、发展中对肾脏具有保护作用；对甘油生理盐水引起的家兔急性肾功能衰竭有明显增加肾皮质血流量作用，改善肾脏功能，减轻或恢复肾小管细胞的变性、浑浊肿胀等病理改变，以肌酐(cr)、尿素氮(BCIN)、滤过钠排泄分数(EFNC)肾血流量(RBF)及动物存活情况作为观察指标，证明益母草提取物活性成分治疗肾炎、尿毒症及肾功能衰竭具有显著效果。临床用本发明药物共治疗72例，其中男性39例，女性33例，年龄为6-81岁，年龄在50岁以上者47例，效果如下慢性肾炎43例，其中男25例，女18例，有效及显效42例，无效1例；急性肾炎23例，其中男15例，女8例，一个疗程(15天)治愈8例，二个疗程治愈11例，三个疗程治愈4例；尿毒症7例，其中男5例，女2例，治愈3例，好转2例，效果不明2例。以上数据说明本发明益母草提取物治疗急慢性肾炎和尿毒症的总有效率为95.83％。
治疗前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大。本发明药物的M样作用，可使前列腺功能分泌加强，腺体平滑肌的兴奋收缩，抑制了前列腺增生，肥大，改善和消除因此而引起的一系列排尿异常等症状。
用上述药物对前列腺炎和前列腺增生进行一个疗程治疗后，56例中近期痊愈19例，显效29例，有效7例，无效2例，总有效率96.43％。期间所有病例在治疗前后均进行了B超检查，以确定前列腺大小(cm3)、残余尿量(ml)的变化情况。结果显示，前列腺体积的缩小与残余尿量的减少与治疗前对比有明显差异(P＜0.01)。具体结果见下表
从临床治疗表明益母草提取物对前列腺炎和前列腺增生、肥大均具有显著的疗效，可以减轻炎症反应，抑制纤维组织增生，增加局部血液流量，明显改善患者的临床症状，并具有缩小前列腺体积，改善排尿一系列症状。
治疗尿崩症、糖尿病。病例尿崩症药理M样作用，以唾液腺为主的上部腺体分泌增多、口不渴。胃肠平滑肌的持续不断兴奋收缩，致胃肠空间缩小，物理性抑制进食量，肾髓质分泌功能恢复和加强，可使肾小管浓缩功能恢复和改善，加之垂体的激素分泌的平衡调节，均可使尿崩症及糖尿病的尿量减少；植物神经节兴奋，恢复提高胰岛素所作用的靶细胞的效应功能，副交感神经的节后纤维兴奋、促进胰岛素的分泌，提高糖吸收利用率；N2受体兴奋，糖尿病所致的肌肉麻痹消退，肢体感觉恢复；M样作用可使糖尿病所致的眼力恢复。
典型病例一中年女性在下楼时，不慎踩空并翻转悬挂在楼梯护栏的外面，几分钟后自行解救，一周后出现大渴大饮，白天喝四、五茶瓶水，夜间喝三、四茶瓶水，精神萎靡不振，舌苔逐渐变黑变厚，每顿吃流质饭一小碗，几个月不吃咸饭，但每天需吃大量水果，经多种检查无结果，跑多家医院治疗无效，延至半年多，服此药十余日，病情基本痊愈。临床中用本发明药治疗尿崩症7例，治愈3例，显效3例，效果不确切1例。
服用本发明药物在临床上治疗糖尿病的中试验结果
试验统计表明用本发明的药剂对100名糖尿病患者作治疗试验，取得显著疗效的占74％，基本有效的占23％，无效的占3％，总有效率97％。
治疗胃下垂、子宫脱垂、眼睑下垂下垂病症多因韧带松弛或肌肉张力降低造成的，中医认为，系中气不足，气虚下陷所致。本发明的药物的M样作用，可使胃平滑肌收缩，子宫平滑肌收缩及眶上、下神经兴奋、神经调节功能恢复正常，器官组织恢复原位。临床治疗33例胃下垂、27例子宫脱垂、9例眼睑下垂。均使下垂器官和组织完全或基本完全复位。
治疗甲亢、脾亢疾病本发明药物通过神经调节和体液调节，对甲状腺与甲状旁腺所分泌的激素和功能形成相互制约平衡，、抑制亢进，扶持低下，正向调节，作用双重，达到降低由甲状腺素引起的高代谢率及突眼症状，M样作用又使脾平滑肌兴奋收缩，抑制了脾脏肿大，通过体液调节，淋巴液生成增多，改善和恢复了脾的正常功能，提高脾的免疫应答能力，解除脾内血小板聚积及因此发生的自身免疫性的出血反应。临床治疗70例甲亢，11例脾亢，均取得显著效果。从上述结果，可以得出本发明的优点在于1、本发明对所述的益母草提取物茺蔚油、益母草膏、益母草糖浆、益母草冲剂、益母草口服液、益母草胶囊发掘出了新的医疗用途，开拓了一个新的应用领域。
2、益母草提取物的活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱均属于乙酰胆碱酯酶抑制药，安全无毒，药理作用强，预示着很好的药用前景。
3、本发明物质原料来源丰富、价廉，制备工艺简单，并可制成口服剂型、糖浆剂、针剂型、片剂、胶囊型、油剂等，使用方便。
4、本发明物质配制成的药物具有显著的拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，可以治疗和预防早老性痴呆、癔病、精神分裂症、类风湿性关节炎银屑病、白癜风、鹅掌风、系统性红斑狼疮、、高血压、心脑血管病等多种病症。
5、本发明物质作为食用油添加剂，能补充人体所需的多种微量元素和维生素类物质，与各种油脂能完全相溶，油内所含有效活性成分不易被高温破坏，具有味香、口感好，适于药食两用。具有明目、荣发、抑制耳鸣、缩小眼袋、逆转生理性驼背、抑制胃肠、子宫等器官的松弛，能正向调节人体功能，提高食物消化利用率、提高人的认知记忆能力，增强人体免疫能力，改善亚健康状态，延缓衰老，健美强壮，提高人类健康水平。
图1为益母草水提取物对hAChE表现出的抑制百分率图2为益母草活性成分对hAChE抑制作用的百分率图3为益母草宁碱对hAChE和hBChE的抑制百分率图4为益母草碱对AChE和BChE的抑制百分率图5为益母草总碱对AChE和BChE的抑制百分率图6为益母草碱甲对AChE和BChE的抑制百分率图7为水苏碱对AChE和BChE的抑制百分率图8益母草提取物活性成分对NIE-115的MTT细胞毒性检测图9益母草提取物活性成分对SHSY5Y的MTT细胞毒性检测
具体实施例方式实施例1益母草水提取物的制备从市场药店中购得益母草1000克，将益母草全草在3000ml蒸馏水中回流下煮45分钟，过滤煮好的提取物，随后将滤液进行冷冻干燥，将粉末形式的冷冻干燥物称重50克。
实施例2益母草水提取物的制备市场中药店中有销售的益母草膏，将益母草膏溶解在蒸馏水中，搅拌，过滤，将滤液进行冷冻干燥，即成益母草水提取物。
实施例3制备片剂使用益母草宁碱0.5g，玉米淀粉95.5g，硬脂酸镁4g，将所有组分混合均匀并制成100片。每片含有益母草宁碱成分5mg。
实施例4制备片剂使用益母草碱0.5g，玉米淀粉95.5g，硬脂酸镁4g，将所有组分混合均匀并制成100片。每片含有益母草碱成分5mg。
实施例5含有茺蔚油的胶囊的制备含有茺蔚油的胶囊制备，将益母草子(茺蔚子)压榨出油，经过滤得茺蔚油，每个软明胶胶囊内装入1ml茺蔚油，制成茺蔚油胶囊。
实施例6益母草碱硫酸盐口服液(剂量同片剂)各原辅料配比以5mg/片为例益母草碱硫酸盐(按益母草碱计算)5g，蔗糖100g，柠檬酸20g，香精适量，蒸馏水5000ml，制成1000支，取蒸馏水适量，将处方量的原辅料加入水中搅拌溶解，过滤，续滤液加蒸馏水到5000ml，加入香精，搅拌均匀，分装，每支5ml，压盖，100℃，消毒1小时，检查合格即得。
实施例7注射液(0.5、1、1.5、2.5、5、10、20mg/支)以下是以规格5mg/支为例益母草硫酸盐(按益母草碱计算)5g，注射用水5000ml，制成1000支。将处方量的益母草碱硫酸盐溶于注射用水中，加0.3％的针用活性炭，搅拌30分钟，脱炭，除菌过滤(0.22μm微孔滤膜)，在无菌条件下分装，熔封，每支5ml，100℃灭菌1小时，检查，即得。
实施例8干粉针(规格同注射液)各原辅料配比以5mg/支为例。益母草碱硫酸盐(按益母草碱计算)5g，甘露醇95g，冻干制成1000支。取处方量的益母草碱硫酸盐和甘露醇，加注射水适量溶解，控制pH值在4.0～6.5之间，加注射用水至1000ml，混匀，加0.3％的针用活性炭搅拌30分钟，脱炭，除菌过滤(0.22μm微孔滤膜)，在无菌条件下分装，每支1ml，冷冻干燥成白色块状或粉末，即得。
实施例9作为食用油添加剂制作各原辅料配比茺蔚油10ml，食用油5000ml，将茺蔚油加入到食用油中进行搅拌，即成保健型食用油。
实施例10作为食用油添加剂制作各原辅料配比茺蔚油10ml，食用油300ml，将茺蔚油加入到食用油中进行搅拌，即成保健型食用油。
实施例11作为食用油添加剂制作各原辅料配比茺蔚油10ml，食用油500ml，将茺蔚油加入到食用油中进行搅拌，即成保健型食用油。
权利要求
1.益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于益母草提取物益母草冲剂、益母草膏、益母草糖浆剂、益母草口服液、益母草胶囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚冲剂、茺蔚膏、茺蔚糖浆剂、茺蔚口服液、茺蔚胶囊、益母草注射液作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
2.根据权利要求1所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于所述益母草提取物中主要活性成分为益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其制药可接受的盐作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
3.根据权利要求1所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于益母草提取物中主要活性成分益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱的混合物或其制药可接受盐的混合物或该二者的混合物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
4.根据权利要求1所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于茺蔚子提取物茺蔚油中主要活性成分益母草宁碱、水苏碱或其制药可接受的盐作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药。
5.根据权利要求1-4任意一项权利要求所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于所述益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制药在制备治疗和预防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肌无力、进行性肌萎缩、下肢静脉曲张、血栓闭塞性脉管炎、臁疮、银屑病、白癜风、鹅掌风、高血压、冠心病、高血脂、心脑血管病、再生障碍性贫血、紫癜、弥散性血管内凝血、月经不调病、肿瘤、白血病、乙型肝炎、黄胆性肝炎、肝硬化、青光眼、白内障、眼底出血症、耳鸣、耳聋、脱发、肾炎、尿毒症、前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大、尿崩症、糖尿病、胃下垂、子宫脱垂、眼睑下垂、甲亢、脾亢疾病的药中的应用。
6.根据权利要求5所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于治疗和预防疾病的药的方法，包括对患者进行有效治疗剂量的活性成分给药，所述活性成分选自益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其混合物或其制药可接受盐的混合物或该二者的混合物。
7.根据权利要求6所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于所述活性成分为益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其混合物或其制药可接受盐的混合物或该二者的混合物同辅助剂制成片剂、胶囊、针剂、口服液、糖浆剂、散剂、膏剂、油剂。
8.根据权利要求6所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于有效治疗剂量为所述的活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的剂量给药。
9.根据权利要求6所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于益母草提取物茺蔚油或益母草提取物活性成分作为食用油添加剂加入到食用油中的应用。
10.根据权利要求9所述的益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的用途，其特征在于所述添加剂与食用油的比例为1/5000～1/10。
全文摘要
本发明公开了益母草提取物作为拟胆碱药之乙酰胆碱酯酶抑制剂药物的新用途，该提取物的活性成分为益母草宁碱、益母草碱、益母草总碱、益母草碱甲、水苏碱或其混合物或其制药可接受盐的混合物或该二者的混合物，具有对乙酰胆碱酯酶的抑制作用，用于治疗和预防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、肌无力、进行性肌萎缩、下肢静脉曲张、血栓闭塞性脉管炎、臁疮、银屑病、白癜风、鹅掌风、高血压、冠心病、高血脂、心脑血管病、再生障碍性贫血、紫癜、弥散性血管内凝血、月经不调病等疾病的药中的应用。
文档编号A61P25/18GK1915292SQ20061010704
公开日2007年2月21日 申请日期2006年9月10日 优先权日2006年9月10日
发明者郝书平, 郝辉, 肖书雨 申请人:郝书平