专利名称：地黄总苷提取物的医药用途及制备方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，地黄总苷提取物有效地预防和治疗哮喘病、过敏病症的的医药用途。本发明特别适用于治疗和预防哮喘。也可用于治疗和预防过敏性鼻炎和过敏性皮肤病。
背景技术：
支气管哮喘是世界范围内最为常见的慢性呼吸道疾病，保守估计全世界至少有一亿以上的人患哮喘病，近年来，因其患病率和死亡率均呈上升的趁势。哮喘已成为严重的公共卫生问题而受到世界各国的极大关注。因此需要提供有效地治疗哮喘病的药物和方法。
近三十年来，全世界对治疗哮喘病的药物进行了大量的开发研究工作。已经开发出来的治疗哮喘病的药物有β2-肾上腺素能受体激动剂类、α-肾上腺素能受体拮抗剂类、氨茶碱类、胆碱能受体拮抗剂类、钙离子拮抗剂类、钾离子通道激动剂、糖皮质激素、细胞膜稳定剂(色甘酸钠、尼多考米钠)、抗组胺药物、白三烯受体拮抗剂、血小板活化因子(PAF)拮抗剂、特异性免疫治疗剂、非特异性免疫治疗剂等。哮喘是一种机理极为复杂的多因素疾病，是多细胞多介质参与的炎症性疾病。上述这些药物(或者治疗方法)作用机理单一(对一种或二、三种介质、因子、受体或通道起作用)，这些药物或者治疗效果不明显、或者口服无效须特殊途径给药、或者副作用大无法长期使用。目前临床上普遍采用的也是最有效的治疗方法是长期吸入糖皮质激素(轻中度吸入色甘酸钠、尼多考米钠)抗炎治疗，哮喘发作时吸入β2-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂等支气管扩张剂。这些治疗方法对缓解哮喘症状，改善哮喘病人的生活质量有一定的效果，但没有使哮喘病的发病率和死亡率有所降低。降低哮喘病的发病率和死亡率、改善哮喘病的预后仍然缺乏有效手段(李明华等，哮喘病学，人民卫生出版社，1998，p2)。治疗哮喘病需要更有效的和更安全的药物。
地黄是玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libsch.的新鲜块茎或干燥块茎，多年生草本，主要为栽培品，亦野生于海拔50-1100米的山坡及路旁荒地。
地黄有鲜地黄、生地黄、熟地黄之分。提取地黄总苷提取物使用的地黄是鲜地黄、生地黄以及鲜地黄自然干燥品(晒干或风干)或者鲜地黄用沸水煮5-10分钟(杀酶)后，晒干或风干的干燥品。
地黄水及稀醇提取后直接浓缩，梓醇和环烯醚萜苷类成分含量很低，梓醇含量小于1％，总苷含量小于10％。
发明内容
本发明涉及治疗哮喘病和其它过敏性疾病的中药药物组合物，特别涉及以中药地黄为原料制备的环烯醚萜苷为有效成分的地黄总苷提取物，在制备治疗哮喘病和其它过敏性疾病的中药药物组合物中的应用。本发明提供了地黄总苷提取物的提取、分离、纯化的方法。
用于制备治疗哮喘病、治疗慢性阻塞性肺病、过敏性疾病的地黄提取物的地黄，是鲜地黄、生地黄以及鲜地黄自然干燥品(晒干或风干)或者鲜地黄用沸水煮5-10分钟(杀酶)后，晒干或风干的干燥品。用于制备治疗哮喘病、治疗慢性阻塞性肺病、过敏性疾病的地黄总苷提取物使用的地黄，是鲜地黄、生地黄以及鲜地黄自然干燥品(晒干或风干)或者鲜地黄用沸水煮5-10分钟(杀酶)后，晒干或风干的干燥品。
本发明的目的是提供地黄提取物在制备治疗哮喘病、治疗慢性阻塞性肺病、过敏性疾病和炎症性疾病的药物制剂中的应用。地黄提取物是从中药地黄中提取的，包括地黄的水提取物、醇提取物、水醇提取物，以及用其它溶剂从地黄中提取出来的物质。特别地，是指从地黄中提取出来的含地黄环烯醚萜类化学成分为有效成分的地黄总苷提取物，地黄总苷提取物主要由以下化学成分组成梓醇(catalpol)1.0-40％、地黄苷D(rehmanniosideD)0.5-10％。地黄总苷含量以梓醇计为10-80％。特别地，梓醇(catalpol)2.0-40％、地黄苷D(rehmannioside D)2.0-10.0％。地黄总苷含量以梓醇计为50-80％。
地黄总苷提取物，用Wistar健康小鼠做急性毒性试验，口服最大给药量为70.0-85.0g/kg，未见动物死亡；腹腔注射给药LD50为15.5～35.8g/kg，静脉注射给药LD50为1.55～4.67g/kg。
本发明提供的地黄总苷提取物，可以与一种或多种药学上可接受的铺料成分混合，以及含地黄总苷的组合物中进一步含有β2-肾上腺素能受体激动剂。
本发明提供了地黄总苷提取物治疗哺乳动物呼吸道免疫介导的炎性疾病的方法，所述方法包括给所述的哺乳动物施用治疗有效量的地黄总苷提取物，或施用含有地黄总苷提取物的药物组合物，或进一步含有β2-肾上腺素能受体激动剂的所述组合物。
地黄总苷提取物的药物组合物可以是各种形式，包括口服剂型，吸入形式以及可注射和输注的溶液。当以吸入剂或气雾剂形式使用时，地黄总苷提取物与药学上可接受的载体溶液或可转化成气雾剂的形式的干粉结合使用。与此类似，当以口服给药使用时，地黄总苷提取物与使用于口服给药的药学上可接受的载体结合使用。当用于治疗免疫介导的炎性皮肤病时，地黄总苷提取物可以与无毒的、药学上可接受的局部用载体结合使用。地黄总苷提取物可以与哮喘治疗剂，如β2-肾上腺素能受体激动剂、胆碱能受体拮抗剂、氨茶碱类、糖皮质激素、抗组胺药物等结合使用。
地黄总苷提取物用于预防和治疗免疫介导的炎性疾病，特别是包括哮喘在内的与呼吸道相关的疾病，以及特别是与慢性哮喘相关的应答过强和变应性鼻炎。因此本发明也提供了治疗免疫介导的炎性疾病的方法，该方法包括给有免疫介导的炎性疾病患者用治疗有效剂型和剂量的地黄总苷提取物。
本发明的地黄提取物的给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药，以地黄生药计算0.20mg-2000mg/kg.日，优选2.0mg-200mg/kg.日，口服情况下以地黄生药计算2.0-20g/kg.日，优选20-2000mg/kg.日。
本发明的地黄总苷提取物梓醇(catalpol)2.0-40％、地黄苷D(rehmannioside D)2.0-10.0％。地黄总苷含量以梓醇计为50-80％。其给药量，因患者的状态、体重、给药方式等不同而异。比如在非口服情况下、肌内、静脉、肠内给药0.01mg-100mg/kg.日，优选0.1mg-10mg/kg.日，口服情况下0.1-1000mg/kg.日，优选1-100mg/kg.日。
本发明的目的是提供地黄总苷提取物的制备方法。地黄总苷提取物是从中药地黄中提取的，地黄总苷提取物主要由以下化学成分组成梓醇(catalpol)1.0-40％、地黄苷D(rehmannioside D)0.5-10％。地黄总苷含量以梓醇计为10-80％。特别地，梓醇2.0-40％、地黄苷D 2.0-10.0％。地黄总苷含量以梓醇计为50-80％。
本发明提供了地黄总苷提取物的提取、分离、纯化的方法。该方法是1、取地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的根的切片，用水、或水与甲醇、乙醇、丙酮等溶剂组成的二种及多种混合溶剂提取，提取液在真空中70℃以下浓缩并蒸去有机溶剂(如无有机溶剂时也可以直接上柱)，加水至合适的体积，去除沉淀(如有沉淀)。
2、上述水溶液通过活性炭分离柱(采用活性炭粒度大于40目，液体易于通过分离柱)。
3、用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，为了提高地黄总苷的含量，可以再用3-10％的稀乙醇，或5-15％的稀甲醇或3-10％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)。
4、用10％以上的乙醇水溶液，或甲醇或者15％以上的甲醇水溶液，或者10％以上的丙酮水溶液洗脱。收集洗脱液并且浓缩至干，即得地黄环烯醚萜苷总苷提取物。
对上述提取物进行TLC分析，点上相应的对照品，能很容易检测出梓醇和地黄苷D。检测条件是用烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂生产的高效硅胶板HSGF254板。展开剂用以下系统，1、乙酸乙酯-甲乙酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)；2、氯仿-甲醇-水(15∶10∶1)；3、氯仿∶甲醇∶水∶甲酸(30∶10∶1∶1)。显色剂用碘蒸汽显色，也可以用2％的硫酸香草醛溶液喷雾显色。
本发明的创造性在于通过科学可行的方法从地黄中提取分离出了用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的地黄环烯醚萜苷总苷提取物。如前所述，本发明提供的用于治疗哮喘病和其它过敏性疾病的药物的有效成分是包括含有梓醇、地黄苷D的地黄总苷提取物。
为保证地黄总苷的质量，在生产过程中需要对洗脱液和最终提取物中的有效成分的含量进行检测，用于检测梓醇、地黄苷D和环烯醚萜苷总苷含量的方法可以借助任何可行的检测手段和公知的方法，本发明参照有关文献在此提出一套可行的检测方法。
(一)地黄总苷提取物梓醇的含量测定梓醇的含量测定方法用高压液相色谱法(HPLC)，色铺柱KYWG-C18，10μm，25cm×4.6mm ID，流动相0.8％的乙腈，柱温30℃，流速1毫升/分钟，测定波长210nm。
标准曲线精密称取梓醇对照品10mg，置于10ml的容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml置于1ml的容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，备用。分别进样10μl，进行测定，以峰面积值(X)对含量(Y)作标准曲线。
回归方程Y＝5.15×10-5X+6.33×10-4相关系数R＝0.9997线形范围2.0μg-10.0μg。
(二)地黄总苷提取物地黄苷D的含量测定地黄苷D的含量测定方法用高压液相色谱法(HPLC)，色铺柱KYWG-C18，5μm，250cm×4.6mm ID，流动相4.0％的乙腈，流速1毫升/分钟，测定波长205nm。
标准曲线精密称取地黄苷D对照品6.0mg，置于10ml的容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别取稀释液1ml，2ml，3ml，4ml，5ml置于10ml的容量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，制成系列对照品液备用。分别进样10μl，进行测定峰面积，以峰面积值(X)对含量(Y)作标准曲线。
回归方程Y＝1.054X+0.1292相关系数R＝0.9998线形范围0.60-3.00μg。
(三)地黄总苷提取物的环烯醚萜苷总苷的含量测定1、梓醇标准溶液精密称取梓醇0.05克，置于50ml容量瓶中，用85％的乙醇溶解并稀释至刻度。
2、显色剂0.5ml10％的三氯化铁水溶液加到100ml50％(V/V)的硫酸溶液中。
3、标准曲线的制备分别取梓醇的标准溶液10，20，30，40，50，60μl，置于具塞试管中，于水浴上蒸干后各加显色剂5ml，于85℃水浴加热三分钟，溶液呈棕黄色。于400nm波长测定吸收度，绘出标准曲线。线性范围10-60μg；回归方程Y＝64.54X+0.086；相关系数R＝0.99984、总苷的测定精密称取地黄总苷提取物0.100克，置于50ml容量瓶中，用85％的乙醇溶解并稀释至刻度。取30μl，置于具塞试管中，于水浴上蒸干后各加显色剂5ml，于85℃水浴加热三分钟，溶液呈棕黄色。于400nm波长测定吸收度，以吸收度计算含量。
具体实施例方式
用以下的实施例对本发明作具体说明，但本发明并不限于下列实施例包含的内容。
药理试验所用的样品样品1、梓醇1.0％，地黄苷D0.6％，地黄总苷含量以梓醇计为9.5％；样品2、梓醇2.5％，地黄苷D1.6％，地黄总苷含量以梓醇计为25.0％；样品3、梓醇2.3％，地黄苷D2.8％，地黄总苷含量以梓醇计为40.7％；样品4、梓醇5.2％，地黄苷D3.5％，地黄总苷含量以梓醇计为53.5％；样品5、梓醇10.5％，地黄苷D6.2％，地黄总苷含量以梓醇计为58.7％；
样品6、梓醇38.2％，地黄苷D7.9％，地黄总苷含量以梓醇计为78.9％。
卵白蛋白气雾吸入引喘试验取200-250g豚鼠70只，雌雄各半，先于右后腿外侧肌肉注射4％卵白蛋白生理盐水溶液0.2ml/只，同时腹腔注射4％氢氧化铝凝胶0.2ml致敏。从致敏第二天起，动物随机分为7组对照组、治疗组6组(样品1、2、3、4、5、6)。治疗组灌胃给药，共14天，末次药后，将动物放于密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动空气压缩机，以53kPa(400mmHg)的恒压喷入3.5％卵白蛋白生理盐水30秒钟，观察6分钟内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期与发生抽搐的动物数。(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1199页)。
表1、地黄总苷提取物对药物引豚鼠喘的影响
注与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果显示，地黄总苷提取物能显著延长卵白蛋白生理盐水溶液引喘豚鼠的潜伏期，与对照组相比有显著差异(P＜0.05)，表明地黄总苷提取物具有一定的平喘作用。
被动皮肤过敏试验(PCA)将大鼠体按重随机分为7组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼。分别为空白对照组、治疗组6组(样品1、2、3、4、5、6)。治疗组灌胃给药，在抗原攻击前连续给药14d。
抗血清制备将上述天花粉氢氧化铝悬液四只脚掌注射，每只脚掌注射0.1ml，共0.4ml。10-15d成熟，眼球放血约10ml，以3000转/min离心15min，取上层血清即得抗血清。
被动皮肤致敏将试验各组大鼠背部脱毛，脊柱两侧距中线1.5cm，各取两点，每点间隔2cm，面积约1×1cm2，共4点。分别在背部皮肤内注射抗血清的不同稀释度(1∶30 1∶40)。48h后进行定量的相应抗原攻击。尾静脉注射天花粉加依文思蓝溶液1mg/kg，30min后断头处死。
观察指标皮内注射抗血清的局部皮肤反应，并测量依文思蓝渗出的蓝斑直径大小。计算PCA抑制百分率(％)。PCA抑制百分率＝(空白对照组蓝斑直径-用药组蓝斑直径)/空白对照组蓝斑直径×100％(徐叔云，卞如濂，陈修主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年11月第二版，1197页)表2、地黄总苷提取物对大鼠被动皮肤过敏反应影响
注与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
试验结果见表2。从表中结果可以看出，试药地黄总苷提取物在抗血清稀释度1∶30，1∶40时，表现出显著性抑制蓝斑直径(P＜0.05)。表明地黄总苷提取物对被动皮肤过敏反应有一定的抑制作用。
迟发性足垫反应试验将小鼠按体重随机分组，10只/组，♀♂各半，分笼饲养，5只/笼，共7组，分别为空白对照组、地黄总苷组6组(样品1、2、3、4、5、6)。采用治疗性给药，致敏前给药5d至致敏后继续给药5d，共10d。
致敏5d后NIH小鼠颈部s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.05ml/只致敏。6d后右足垫s.c5％绵羊红细胞(SRBC)0.02ml，进行攻击。左足注射等量生理盐水作对照。24h后，末次给药50min后处死动物。从踝关节部位剪下两足称重。求出两足的重量差，计算足肿胀抑制率。足肿胀抑制率＝空白对照组足肿胀程度-用药组足肿胀程度)/空白对照组足肿胀程度×100％，试验结果见表4。(徐叔云等主编，药理实验方法学，人民卫生出版社，1991年第二版，1226页，1228页)表7、地黄总苷对绵羊红细胞引起的小鼠迟发性足垫反应的影响
注与空白对照组比较P＜0.05认为差异显著，(以*表示)。
从表中结果可以看出，地黄总苷提取物与空白对照组比较表现出显著性抑制足肿胀程度(P＜0.05)，抑制率为32％以上。表明地黄总苷提取物对抑制绵羊红细胞引起的小鼠迟发性免疫反应效果较明显。
取地黄的干燥根500g，用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的甲醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(1kg活性炭)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用70％的甲醇5000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物33.4克。将地黄总苷提取物进行检验，其化学成分梓醇2.0％，地黄苷D1.8％，地黄总苷含量以梓醇计为49.8％。
取地黄的干燥根1kg，用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的甲醇8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(500g活性炭，粒度28目)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用8％的稀甲醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的甲醇3000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物46.6克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇5.2％，地黄苷D3.5％，地黄总苷含量以梓醇计为53.5％。
取地黄的干燥根2kg，用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的甲醇16升ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在真空中70℃以下浓缩至1000ml，并且无甲醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(2kg活性炭，粒度40目，120℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用70％的甲醇10000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物98.4克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇10.5％，地黄苷D6.2％，地黄总苷含量以梓醇计为58.7％。
取地黄的干燥根500g，用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用60％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(5kg活性炭，粒度20目，140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用60％的丙酮25000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物29.4克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇11.0％，地黄苷D5.7％，地黄总苷含量以梓醇计为53.2％。
取鲜怀地黄1kg，用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用45％的丙酮8000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(20kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用7％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的丙酮50000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物43.9克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇15.1％，地黄苷6.1％，地黄总苷含量以梓醇计为58.3％。
取鲜怀地黄2500g，用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的丙酮4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液70℃以下浓缩至1000ml，并且无丙酮味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(500g活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀丙酮洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用70％的丙酮3000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物26.2克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇20.3％，地黄苷D6.8％，地黄总苷含量以梓醇计为60.1％。
取地黄的干燥根500g，用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用70％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(3kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用50％的乙醇15000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物36.4克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇15.1％，地黄苷D5.8％，地黄总苷含量以梓醇计为58.2％。
取鲜怀地黄2500g，用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用50％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(6kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用50％的乙醇30000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物27.5克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇25.0％，地黄苷D7.7％，地黄总苷含量以梓醇计为53.2％。
取鲜怀地黄2500g，用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，药渣再用30％的乙醇4000ml加热回流提取1小时，倾取提取液，合并三次提取液，提取液在70℃以下浓缩至1000ml，并且无乙醇味，加水1000ml，去除沉淀，上已处理好的活性炭(8kg活性炭140℃加热烘烤4.5小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇40000ml洗脱。洗脱液真空浓缩至干，即得地黄总苷提取物36.5克。将地黄总苷提取物进行检验，梓醇38.2％，地黄苷D7.9％，地黄总苷含量以梓醇计为78.9％。
取鲜怀地黄2500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭105℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用4％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用40％的乙醇5000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物33.3克。梓醇25.1％，地黄苷D5.5％，地黄总苷含量以梓醇计为66.7％。
取地黄的干燥根1kg，用水6000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水4000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭110℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用8％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物47.4克。将地黄总苷提取物进行检验，其化学成分梓醇15.4％，地黄苷D5.7％，地黄总苷含量以梓醇计为54.3％。
取地黄的干燥根2kg，用水12升加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水8升加热煎煮小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭120℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，续用10％的稀乙醇洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)后，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物93.5克。将地黄总苷提取物进行检验，其化学成分梓醇14.5％，地黄苷D8.5％，地黄总苷含量以梓醇计为63.4％。
取地黄的干燥根500g，用水4000ml加热煎煮0.5小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水3000ml加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀(如有沉淀)，通过活性炭(1kg活性炭130℃活化4小时)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，用60％的乙醇4000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物51.3克。将地黄总苷提取物进行检验，其化学成分梓醇2.3％，地黄苷D2.8％，地黄总苷含量以梓醇计为40.7％。
取地黄的干燥根10kg，用水60升加热煎煮30小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，药渣再用水50升加热煎煮1小时，倾取提取液，合并三次提取液，去除沉淀，上已处理好的活性炭(10kg)分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性(molish反应阴性)，，用70％的乙醇50000ml洗脱。洗脱液70℃以下浓缩至干，即得地黄总苷提取物1250克。将地黄总苷提取物进行检验，其化学成分梓醇1.3％，地黄苷D0.7％，地黄总苷含量以梓醇计为15.5％。
权利要求
1.地黄总苷提取物在用于制备治疗过敏性哮喘、过敏性鼻炎和/或其它过敏性疾病药物组合物的应用，其特征是地黄总苷提取物以地黄为原料制备，梓醇含量1.0-40％，地黄苷D含量0.5-10％，地黄总苷含量以梓醇计为10-80％。
2.按照权利要求1中所述的应用，其中，地黄总苷提取物梓醇2.0-40％，地黄苷D 2.0-10.0％，地黄总苷含量以梓醇计为50-80％。
3.按照权利要求1或2中所述的应用，地黄总苷提取物在治疗过敏性疾病中的应用。
4.按照权利要求1或2中所述的应用，地黄总苷提取物在治疗过敏性哮喘病中的应用。
5.按照权利要求1或2中所述的应用，其中地黄总苷提取物是通过活性炭吸附分离制备。
6.按照权利要求1、2或5所述应用，其中地黄总苷提取物是通过活性炭吸附分离制备，中药地黄与活性炭的重量之比为1∶0.5～1∶20。
7.按照权利要求1、2、5或6中所述的应用，其中地黄总苷提取物是通过活性炭吸附分离制备，所用的活性炭是粒度大于40目的活性炭颗粒。
8.按照权利要求1、2、5、6或7中所述的应用，其中地黄总苷提取物的提取方法是，(1)地黄用水或者水与甲醇、乙醇、丙酮配制成的混合溶剂提取；(2)必要时浓缩，并除去有机溶剂，滤除沉淀；(3)地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性；(4)用10％以上的乙醇水溶液，或甲醇或者15％以上的甲醇水溶液，或10％以上的丙酮水溶液洗脱；(5)收集含有机溶剂的洗脱液，浓缩至干，即得地黄总苷提取物。
9.按照权利要求1、2、5、6、7或8中所述的应用，其中地黄总苷提取物的提取方法是，(1)地黄用水或者水与甲醇、乙醇、丙酮配制成的混合溶剂提取；(2)必要时浓缩，并除去有机溶剂，滤除沉淀；(3)地黄提取水溶液通过活性炭分离柱，用水常规洗去杂质，至近无色，并且糖反应试验阴性；(4)用低于10％的乙醇水溶液，或者低于15％的甲醇水溶液，或者低于10％的丙酮水溶液洗至洗脱液近无色，并且糖反应试验阴性；(5)用10％以上的乙醇水溶液，或甲醇或者15％以上的甲醇水溶液，或者10％以上的丙酮水溶液洗脱；(6)收集有机溶剂浓度较高洗脱液，浓缩至干，即得地黄总苷提取物。
全文摘要
本发明涉及地黄总苷提取物在制备治疗和预防哮喘病、过敏病症的药物组合物的应用，地黄总苷提取物具有明显的抗炎、抗过敏活性，毒副作用小。本发明还涉及地黄总苷提取物的制备方法，该方法是将地黄的提取物的水溶液用活性炭吸附处理后，用水，或者水与低浓度有机溶剂的混合溶剂洗脱糖和其它杂质，再用有机溶剂浓度较高的水混合溶剂进行洗脱，洗脱液浓缩至干，即得地黄总苷提取物。
文档编号A61P11/00GK101015622SQ20071006409
公开日2007年8月15日 申请日期2007年2月28日 优先权日2007年2月28日
发明者罗河生 申请人:罗河生