专利名称：：一种提高银杏叶提取物中白果内酯含量的提取方法
技术领域：
：本发明涉及中药，具体涉及一种提高银杏提取物中白果内酯含量的提取方法。
背景技术：
：银杏叶具有多种药理作用，在银杏叶中主要含有黄酮醇苷类、萜类内酯类、酚类、氨基酸类等多种化学成分。银杏叶提取物是将银杏叶的有效成分加以分离、富集后制成的一种制剂。银杏叶提取物具有改善心脑血管循环、保护肝脏、抗炎、抗过敏、提高机体免疫功能等作用,由于其疗效显著、副作用低,现已成为欧美及世界各地治疗老年疾病的畅销产品。近年来，通过研究发现银杏叶提取物对治疗阿茨海默氏症有确切疗效，这与银杏叶提取物中的一种主要有效成份萜类内酯有关。这是因为萜类内酯化合物可再分为银杏内酯和白果内酯，而其中的白果内酯有保护神经元之功效，故银杏叶提取物对治疗阿兹海默氏症有效，而白果内酯含量的高低对治疗阿茨海默氏症有直接的影响作用。但中华人民共和国2005年版药典规定银杏叶提取物主要有效成分为黄酮醇苷类》24%和萜类内酯类>6%。由于对萜类内酯中的银杏内酯含量和白果内酯具体比例没有明确的要求，因此出现了市场上所售的银杏叶制剂中所含白果内酯含量不确定的状况，但是，在实际应用时，结果表明只有含白果内酯较高的银杏叶制剂才对治疗阿茨海默氏症有良好的疗效。因此如何在银杏叶的提取过程中提高白果内酯的含量具有非常重要的意义。现有提取银杏叶提取物的方法包括下列步骤1、原辅料的预处理2、提取3、减压浓縮4、水沉5、第一次吸附及洗脱6、减压浓縮7、第二次吸附及洗脱8、减压浓縮9、醇沉10、压滤11、减压浓縮12、真空干燥13、粉碎14、混合、15、包装由于白果内酯对酸碱度值的要求较高，而上述方法在第一次吸附及洗脱时用15%的盐酸进行冲洗的步骤中，未对酸碱度值进行调控，就会产生影响白果内酯的含量的结果，即白果内酯在第一次吸附洗脱用15%的盐酸冲洗的过程中不能被很好的洗脱，从而导致白果内酯含量过低。如果在提取银杏叶提取物的方法中，对第一次吸附及洗脱的酸碱度值进行了调控，那么，白果内酯能够在此过程中被较充分的洗脱，从而得到银杏叶的提取物所含的白果内酯相对较高。
发明内容本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，提供改进的银杏叶提取方法，使提取物中的白果内酯含量提高。本发明提供了一种提高银杏提取物中白果内酯含量的提取方法。本发明方法包括下列步骤(-)原辅料的预处理银杏叶用粉碎机粉碎成1±0.3C『大小的碎片；(3提取①加入银杏叶重量4-5倍量w/v的90%-95%酒精，浸泡过夜；②次日上午加热至7(TC士2。C，回流提取2.5-3小时，放出第一次提取液；③再加入步骤②的提取后残渣重量3-4倍量w/v的饮用水加热至70°C±2'C，回流提取2-2.5小时，放出第二次提取液；加入银杏叶提取后残渣重量0.8-1倍量w/v的饮用水淋洗，放出水液；〇减压浓縮5合并上述提取液及水液，进行减压浓縮至无醇味，浓縮的真空度为-0.085Mpa，平衡温度50-55°C;卿水沉①加入浓縮液1倍量v/v的35-4(TC的热水稀释，并搅拌均匀；②加浓縮液原体积的3-3.5倍量v/v的水稀释，每隔半小时搅拌一次，冷却至8-12°C，继续静止沉淀10-12小时；(i)第一次吸附及洗脱①步骤(N)水沉液稀释至密度为1-1.1g/ml，然后以3.0L/min(18-20°C)流速缓慢加入树脂柱内，同时打开树脂柱底阀，流出液弃之；②用饮用水水洗，其间用压縮空气翻吹56次，流出液弃之；③用无盐水冲洗，流出液弃之；④用步骤卿水沉液2-2.5倍量v/v的15%乙醇冲洗，先用1摩尔/升的盐酸调节15%乙醇的酸碱度为6.5-7.5，冲洗流速6L/min，当流出液中乙醇含量为5_6%时回收酒精；用60%乙醇洗脱，流速3.3L/min，待色带下移至出口，流出液颜色变深，收集流出料液；用95%的热乙醇(65°C)压柱，继续收集料液至流出液色淡，乙醇含量升至60%为停止收集，树脂用95%热乙醇(65°C)洗涤再生，流速6L/min;d减压浓縮步骤(D洗脱液进行减压浓縮至含乙醇量37%(18-20°C)，温度50-55°C,真空度为-0.080—-0.085Mpa;的第二次吸附及洗脱①把经过第一次吸附及洗脱收集到的减压浓縮液第二次上柱，用60%乙醇继续洗脱，收集料液至流出液颜色变淡，乙醇含量为60%时停止收集，转入浓縮工序,树脂用95%热乙醇(65°C)再生，流速6L/min，用40%酒精平衡，流速6L/min;②减压浓縮经第二次吸附及洗脱的料液进行减压浓縮，温度55-55°C，真空度-0.080-0.085Mpa，浓縮液呈浆糊状，无水滴下，停止浓縮；(A)醇沉浓縮液加1倍量v/v的95%乙醇溶解，冷却至4'C，待温度下降至4-C时继续静置3.5-4小时，含醇量85-90%，压滤弃渣，滤液进行减压浓縮，浓縮温度50-55'C，真空度-O.065Mpa，浓縮成流浸膏；W真空干燥将流浸膏真空干燥，干燥温度75-80°C，真空度-0.085——0.09Mpa，干燥时间为3-3.5小时，(十)粉碎、包装干浸膏用粉碎机粉碎成80目细粉，包装。本发明方法中，所述第一次吸附和第二次吸附树脂柱，其中的树脂为大孔树脂，如DIOI、DA201或D-型SIP系列。本发明是基于下列试验1、乙醇浓度的变化(1)工艺试验题目第一次吸附及洗脱时乙醇浓度的变化对白果内酯含量的影响(2)工艺试验样品来源及数量样品来源FC-01-070902批水沉液样品数量共2400ml水沉液，分成3组样品质量状况分析土黄色，密度4.016g/ml(3)工艺试验过程综述工艺试验设计原理在不同的乙醇浓度洗涤下白果内酯的含量工艺试验过程综述水沉液——一次吸附及洗脱——减压浓縮——二次吸附及洗脱——减压浓縮一_醇沉——浓縮——干燥三份样品均按此流程操作，唯一的区别即第一次吸附及洗脱时所用乙醇的浓度不同，三者分别为10%,15%，18%工艺试验基本方法及流程7(1)第一次吸附及洗脱水沉液800ml以3.0L/min(20'C)流速缓慢加入树脂柱内，用饮用水水洗，按3.0L/min流速洗脱，其间用压縮空气翻吹6次。接着用无盐水冲洗，再分别用10%、15%、18%乙醇冲洗(要摸索酸碱度情况)，流速6L/min，当流出液中乙醇含量为5%时及时回收酒精(。用60%乙醇洗脱，流速3.3L/min,待色带下移至出口，流出液颜色变深，收集料液。用95%热乙醇(65°C)压柱，继续收集有效成份至流出液色淡，乙醇含量升至60%为停止收集，树脂用95%热乙醇(65°C)洗涤再生，流速6L/min。(2)减压浓縮料液打入700L甲进行减压浓縮，温度55。C，真空度为-O.085Mpa。(3)第二次吸附及洗脱料液经减压浓縮至含乙醇量37°C(20°C)时，进行第二次树脂吸附与洗脱，流速3L/min，待流出液呈浅黄色，开始收集第二次洗脱液。第二次柱连续上样一组提取的含乙醇量37%的一次洗脱液，收集洗脱液，用60%乙醇继续洗脱，收集料液至流出液颜色变淡，乙醇含量为60%时停止收集，转入浓缩工序，树脂用95%热乙醇(65°C)再生，流速6L/min，用40%酒精平衡，流速6L/min。上述所用不同溶剂交替洗脱时必须压柱层面3次。(4)减压浓縮料液经过输液管打入700L乙、700L丙进行减压浓缩，温度《55。C，真空度-0.085Mpa，浓縮液呈浆糊状，无水滴下，停止浓縮。(5)醇沉浓縮液加95%乙醇溶解放入冷却罐，搅拌均匀，开盐水阀门，使之冷却至4。C，待温度下降至4t:时继续静置4小时，含醇量为85%。(6)压滤醇沉液经板框压滤机压滤，每层板框中间用3层滤纸，真空抽滤。(7)减压浓縮滤液经真空抽至浓縮罐中，进行减压浓縮，浓縮温度55'C，真空度-0.065Mpa。同一组编号的料液最终在500L浓縮罐混匀浓縮成流浸膏。(8)真空干燥将流浸膏放入不锈钢盘，置真空干燥箱中进行干燥。干燥箱温度80°C，真空度-0.09Mpa，干燥时间为3小时，出料前停止加热继续用真空抽半小时。从不锈钢盘中产出干浸膏。(9)粉碎干浸膏用粉碎机粉碎成80目细粉，装入专用布袋，外套塑料袋，拢口。用吊牌标明编号、数量。(10)混合混合30分钟。混合浸膏粉用洁净尼龙袋装好，外面套一只塑料袋，放在不锈钢桶内，密闭，待检。所述第一次吸附和第二次吸附的树脂柱，其中的树脂为大孔树脂，如D101、DA201或D-型SIP系列工艺试验结果及分析不同浓度的乙醇10%的乙醇15%的乙醇18%的乙醇白果内酯含量0.8%0.8%0.9%由上述结果可以看到，在第一次吸附及洗脱时调整10%的盐酸的冲洗浓度，对提高白果内酯的含量没有影响。2、15%的乙醇酸碱度值的变化(1)工艺试验题目15%的乙醇酸碱度值的变化对白果内酯含量的影响(2)工艺试验样品来源及数量样品来源FC-01-070902批水沉液样品数量8000ml水沉液样品质量状况分析土黄色，密度4.016g/ml(3)工艺试验过程综述工艺试验设计原理采用不同酸碱度值的乙醇进行洗脱工艺试验过程综述水沉液--次吸附及洗脱——减压浓縮——二次吸附及洗脱——减压浓縮一一醇沉——浓縮——千燥5份样品均按此流程操作，唯一的区别即一次吸附及洗脱时所用15%的乙醇进行冲洗的的酸碱度值不同，5者未调节之前酸碱度值为4.70、5.72、5.65、6.38、6.15，调节之后的酸碱度值分别为6.76、6.95、7.02、7.35、7.5。工艺试验基本方法及流程第一次吸附及洗脱800ml的水沉液10份以3.0L/min(20°C)流速缓慢加入树脂柱内，用饮用水水洗，按3.OL/min流速洗脱，其间用压縮空气翻吹6次。接着用无盐水冲洗，再用15%乙醇冲洗(5者未调节之前酸碱度值为4.70、5.72、5.65、6.38、6.15，用盐酸调节之后的酸碱度值分别为6.76、6.95、7.02、7.35、7.5)，流速6L/min，当流出液中乙醇含量为5%时及时回收乙醇。用60%乙醇洗脱，流速3.3L/min，待色带下移至出口，流出液颜色变深，收集料液。用95%热乙醇(65°C)压柱，继续收集有效成份至流出液色淡，乙醇含量升至60%为停止收集，树脂用95%热乙醇(65°C)洗涤再生，流速6L/min。所述第一次吸附的树脂柱，其中的树脂为大孔树脂，如DIOI、DA201或D-型SIP系列工艺试验结果及分析<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>结论:本发明技术方案在第一次吸附及洗脱时，对乙醇酸碱度值进行了调控，因此白果内酯能够在此过程中被较充分的冲洗，从而得到银杏叶的提取物其所含的白果内酯相对较高。本发明的效果试验本发明在第一次吸附及洗脱的过程中，用盐酸调节酸碱度值范围在6.0-7.5之间，可以明显的看到白果内酯含量有显著的增加。表1:用未调节酸碱度值的15%的乙醇进行吸附洗脱时白果内酯的含量<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>(1)、通过做散点图，从散点图上，可以看出白果内酯的含量与15%乙醇原酸碱度值有一定的相关性。(2)、相关性分析相关系数<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>*在置信度(双测)为0.05时，相关性是显著的。从相关系数表上可以得出在置信度(双测)为0.05时，白果内酯的含量与15%乙醇原酸碱度值相关性是显著的(3)、独立样本的T-testT检验组统计量分<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>第一组酸碱度值高于第二组，第一组内酯含量高于第二组独立样本检验<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>sig=0.166>0.05说明两组的方差相同，此时sig(双侧)=0.00<0.005(01值)，水明两组白果内酯的含量是不同的，即酸碱度值大的组，内酯含量高。表2、用调节酸碱度值范围在6.0-7.5的15%的乙醇进行吸附洗脱时白果内酯的含量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>成对样本统计量<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>成对样本检验成对差分dfSig.(双侧)均值标准差均值的标准误差差分的95。/o置信区间下限上限对l原酸碱度值&调解后酸碱度值1.3960040396.18065-.189758,89442-7.7274.002对2原酸碱度值下白果内脂(％)&调解后酸碱度值下白果内脂(%)-.72000.19235.08602-.95884-.48116-8.3704.001sig=0.001<<0.05说明随着酸碱度值的增加，白果内酯含量变化显著从以上结论看来，通过调节第一次吸附及洗脱时的酸碱度值来达到白果内酯含量的增加这种方法是可行的。具体实施例方式实施例1(-)银杏叶的处理将50g银杏叶用粉碎机粉碎成1CM2大小的银杏叶碎片，(3提取①加入250ml的90%酒精，以浸没叶子为宜，浸泡过夜；②次日上午加热至7(TC，回流提取3小时，得到第一次提取液126ml;③再加入150ml的饮用水加热至70°C，回流提取2小时，得到第二次提取液95ml，④加入50ml的饮用水淋洗叶渣，得到水液46ml;(3减压浓縮合并上述提取液及水液，进行减压浓缩至无醇味，浓缩的真空度为-0.085Mpa，平衡温度为55°C,得到浓縮液75ml;卿水沉①将得到的浓縮液75ml加入120ml的35'C的热水进行稀释，并搅拌均匀;②加水800ml稀释，每隔半小时搅拌一次，并开盐水阀，进行冷却至『C，继续静止沉淀12小时；第一次吸附及洗脱①水沉液稀释至密度1-1.lg/ml，然后以3.0L/min(18-2(TC)流速缓慢加入D101树脂柱内，同时打开D101树脂柱底阀，流出液弃之；②用饮用水1000ml水洗，其间用压縮空气翻吹6次，流出液弃之；(D用无盐水1000ml冲洗，流速开至最大，流出液弃之；1600ml的15%乙醇(用1摩尔/升盐酸调节酸碱度为4.73)冲洗，流速6L/min,当流出液中乙醇含量为5%时回收酒精；⑤用60%乙醇1600ml洗脱，流速3.3L/min，待色带下移至出口，流出液颜色变深，收集流出料液1545ml;⑥用95%的热乙醇1600ml(65°C)压D101树脂柱，继续收集料液至流出液色淡1538ml，乙醇含量升至60%为停止收集，树脂用95%热乙醇(65°C)洗涤再生，流速6L/min;W减压浓縮上述洗脱液进行减压浓縮至含乙醇量37%,温度20'C，真空度为-O.085Mpa;(七)第二次吸附及洗脱①把经过第一次吸附及洗脱收集到的减压浓縮液第二次上D101树脂柱，用60%乙醇继续洗脱，收集料液至流出液颜色变淡，乙醇含量为60%时停止收集，转入浓縮工序，D101树脂用95%热乙醇(65°C)再生，流速6L/min,用40%酒精平衡，流速6L/min;②减压浓縮经二次吸附及洗脱的料液进行减压浓縮，温度55。C，真空度-0.085Mpa，浓縮液呈浆糊状，无水滴下，停止浓縮，浓縮液为15ml，(A)醇沉浓縮液用100ml的95%乙醇溶解，冷却至4'C，待温度下降至4。C时继续静置4小时，含醇量85%，压滤弃渣，滤液进行减压浓縮，浓縮温度55'C，真空度-0.065Mpa，浓缩成流浸膏3.8g;14加真空干燥将流浸膏真空干燥，干燥温度8(TC，真空度-0.09Mpa，干燥时间为3小时，得到干浸膏lg(十)粉碎、包装干浸膏用粉碎机粉碎成80目细粉，包装。根据2005版中华人民共和国药典方法检测，所含白果内酯含量为1.5%。实施例2按照实施例1的方法，区别在于即调节第一次吸附及洗脱时15%的乙醇酸碱度值，调节为6.5(所用15%的盐酸原酸碱度为4.73，用1摩尔/升的盐酸调节15%乙醇的酸碱度)，所述树脂柱为DA201树脂柱。根据2005版中华人民共和国药典检测，所含白果内酯含量为1.4%。实施例3按照实施例1的方法，区别在于即调节第一次吸附及洗脱时15%的乙醇酸碱度值，调节为7.O(所用15%的盐酸原酸碱度为4.73，用1摩尔/升的盐酸调节15%乙醇的酸碱度)根据2005版中华人民共和国药典检测，所含白果内酯含量为1.4%。按照实施例1的方法，唯一的区别在于即调节第一次吸附及洗脱时15%的乙醇酸碱度值，调节为7.5(所用15%的盐酸原酸碱度为4.73,用1摩尔/升的盐酸调节15%乙醇的酸碱度)根据2005版中华人民共和国药典检测，所含白果内酯含量为1.5%。权利要求1、一种提高银杏提取物中白果内酯含量的提取方法，其特征在于该方法包括下列步骤(一)原辅料的预处理银杏叶用粉碎机粉碎成1±0.3CM2大小的碎片；(二)提取①加入银杏叶重量4-5倍量w/v的90％-95％酒精，浸泡过夜；②次日上午加热至70℃±2℃，回流提取2.5-3小时，放出第一次提取液；③再加入步骤②的提取后残渣重量3-4倍量w/v的饮用水加热至70℃±2℃，回流提取2-2.5小时，放出第二次提取液；④加入银杏叶提取后残渣重量w/v0.8-1倍的饮用水淋洗，放出水液；(三)减压浓缩合并上述提取液及水液，进行减压浓缩至无醇味，浓缩的真空度为-0.085Mpa，平衡温度50-55℃；(四)水沉①加入浓缩液1倍量v/v的35-40℃的热水稀释，搅拌均匀；②加水稀释浓缩液原体积的3-3.5倍量v/v，每隔半小时搅拌一次，冷却至8-12℃，继续静止沉淀10-12小时；(五)第一次吸附及洗脱①步骤(四)水沉液稀释至密度1-1.1g/ml，然后以3.0L/min18-20℃流速缓慢加入树脂柱内，同时打开树脂柱底阀，流出液弃之；②用饮用水水洗，其间用压缩空气翻吹5～6次，流出液弃之；③用无盐水冲洗，流出液弃之；④用步骤(四)水沉液2-2.5倍量v/v的15％乙醇冲洗，15％乙醇先用1摩尔/升的盐酸调节酸碱度为6.5-7.5，冲洗流速6L/min，当流出液中乙醇含量为5-6％时回收酒精；⑤用60％乙醇洗脱，流速3.3L/min，待色带下移至出口，流出液颜色变深，收集流出料液；⑥用95％的热乙醇65℃压柱，继续收集料液至流出液色淡，乙醇含量升至60％为停止收集，树脂用95％热乙醇65℃洗涤再生，流速6L/min；(六)减压浓缩步骤(五)洗脱液进行减压浓缩至含乙醇量37％18-20℃，浓缩时温度50-55℃，真空度为-0.080-0.085Mpa；(七)第二次吸附及洗脱①把经过第一次吸附及洗脱收集到的减压浓缩液第二次上柱，用60％乙醇继续洗脱，收集料液至流出液颜色变淡，乙醇含量为60％时停止收集，转入浓缩工序，树脂用95％热乙醇65℃再生，流速6L/min，用40％酒精平衡，流速6L/min；②减压浓缩经二次吸附及洗脱的料液进行减压浓缩，温度55-55℃，真空度-0.080-0.085Mpa，浓缩液呈浆糊状，无水滴下，停止浓缩；(八)醇沉浓缩液加1倍量v/v的95％乙醇溶解，冷却至4℃，待温度下降至4℃时继续静置3.5-4小时，含醇量85-90％，压滤弃渣，滤液进行减压浓缩，浓缩温度50-55℃，真空度-0.065Mpa，浓缩成流浸膏；(九)真空干燥将流浸膏真空干燥，干燥温度75-80℃，真空度-0.085-0.09Mpa，干燥时间为3-3.5小时；(十)粉碎、包装干浸膏用粉碎机粉碎成80目细粉，包装。2、根据权利要求l所述一种提高银杏提取物中白果内酯含量的提取方法，其特征在于所述第一次和第一次吸附用的树脂柱，其中的树脂为大孔树脂DlOl、DA201或D-型SIP系列。全文摘要本发明提供了一种提高银杏提取物中白果内酯含量的提取方法。本发明在提取银杏叶时的第一次吸附及洗脱过程中，用1摩尔/升的盐酸调节酸碱度值范围在6.0-7.5之间的乙醇冲洗，可以显著增加白果内酯含量。本发明方法简便易行，宜于工业化生产。文档编号A61P25/00GK101559085SQ200810036109公开日2009年10月21日申请日期2008年4月16日优先权日2008年4月16日发明者胡林森,谢跃进申请人:上海信谊百路达药业有限公司