专利名称：：Xage-1基因及其表达产物在肿瘤治疗和诊断中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于基因治疗和诊断
技术领域：
，具体涉及一种新的肿瘤抗原——XAGE-1及其表达产物在肿瘤治疗和诊断中的应用。技术背景肿瘤-睾丸抗原(CT抗原)是一类主要表达于正常的种系生殖组织(特别是免疫赦免的睾丸组织)与癌变组织，在其他正常组织中完全不表达或仅有少量表达的肿瘤抗原，一些著名的肿瘤抗原，如MAGE，BAGE，GAGE等均属于CT抗原。CT抗原这种精确的限制性分布使其成为了当前肿瘤免疫治疗研究中的热点。XAGE/CT12是利用生物信息学方法发现的一类新基因，包括XAGE-1，XAGE-2和XAGE-3。其中，XAGE-2与XAGE-3的肿瘤表达谱很窄，研究也很少，XAGE-1除了在正常的睾丸组织中表达外，在前列腺癌、黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、涎腺腺样囊性癌等多种肿瘤组织中均有较高的检出率。XAGE-l有4种表达亚型XAGE-la,XAGE-lb，XAGE-lc和XAGE-ld,主要表达亚型是XAGE-lb。目前XAGE-l的功能尚未见报道，本文以XAGE-lb为例首次阐述了XAGE-1的功能及其应用价值。涎腺腺样囊性癌(ACC)是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，较易发生远地尤其是肺转移。ACC-2是涎腺腺样囊性癌细胞系，ACC-M是经裸鼠体内连续传代培养，从低转移细胞系ACC-2中分离出的高转移细胞系。涎腺腺样囊性癌高低转移细胞系基因表达谱差异性研究发现高转移细胞系中XAGE-lb呈高表达状态。利用基因工程方法，应用真核表达质粒与腺病毒表达系统介导基因过表达及RNA干扰是研究基因功能的有效方法。将XAGE-lbcDNA序列构建到真核表达载体上，同时构建该基因的腺病毒表达载体，利用载体介导该基因在ACC细胞或其他细胞中的过表达，通过细胞增殖、克隆形成、体外穿膜、软琼脂集落形成、裸鼠皮下成瘤及尾静脉注射肺部成瘤实验就可以研究该基因在肿瘤细胞增殖、浸润、转移中的作用；以真核质粒或腺病毒载体系统介导靶向XAGE-lb表达的RNA干扰，利用细胞及裸鼠模型实验同样可以研究该基因的功能及其在肿瘤治疗上的应用。针对肝癌，临床上迫切需要解决的问题是寻找既敏感又特异的诊断指标。目前首选指标是甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)，但其特异性及敏感性均有许多不足。采用Taq-Man荧光定量PCR方法，分析一定数量肝细胞癌患者及部分健康志愿者血液样本中XAGE-lb的表达水平及其与AFP的相关性，从而可以探讨XAGE-1作为肿瘤分子诊断标识的可行性。另外，扩增XAGE-la，lb两种转录本的转录起始点上游序列，分别构建入报告基因载体，采用双荧光素酶报告系统可以研究比较各片段的转录活性，可以推测XAGE-1基因核心启动子和其它一些调控元件所在区域，从而可以探讨XAGE—1基因调控序列在肿瘤治疗等方面的应用。
发明内容本发明的目的是提供一种新型的肿瘤治疗药物靶点和诊断标志物，该靶点或标志物是肿瘤抗原基因XAGE-1(包括XAGE-la，XAGE-lb，XAGE-lc和XAGE-ld)及其表达产物。本发明还提供基于XAGE-1及其表达产物的应用。本发明的目的是这样实现的1.XAGE-1对肿瘤细胞体外增殖能力的影响分别将表达及干扰XAGE-lb的稳定细胞株ACC2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a接种于96孔板，1X104细胞/孔，分别在之后的24h、48h、72h、96h，利用MTT法检测细胞数量，结果发现ACC2-Xb-19与ACC2-Xb-M组细胞增殖能力显著强于对照组细胞，ACCM-pG-Sh-a细胞增殖能力显著弱于对照组细胞；分别将ACC-2与ACC-M细胞接种于96孔板，3乂103细胞/匕10h后感染Adv-lb，在此之后每隔12h利用MTT法检测一次细胞数量，共6次，结果发现感染Adv-lb后的细胞增殖能力显著强于对照组细胞;分别将ACC2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a细胞接种于6孔板，500细胞/孔，14d后结晶紫染色观察记录:ACC2-Xb-19组形成的集落数量显著多于对照组，ACCM-pG-Sh-a组形成的集落数量显著少于对照组；分别将感染病毒后的ACC-2与ACC-M细胞接种于6孔板，500细胞/L，10d后结晶紫染色观察记录Adv-lb感染后的细胞形成的细胞单克隆集落要显著大于对照组。上述结果说明XAGE-l可以显著地促进ACC-2及ACC-M细胞的体外增殖能力。2.XAGE-1对肿瘤细胞体外浸润能力的影响使用QCMTM24-WellCellInvasionAssay,在上室孔中准确接种ACC2-Xb-19细胞，2Xl()S细胞/孔，48h后在下室中加入裂解及染色试剂，测量荧光强度并与标准曲线对照计算细胞数量，统计结果显示穿膜的ACC2-Xb-19与ACC2-Xb-M组细胞数量显著多于对照组；在每个Boyden小室中准确接入2X105^ACCM-pU-Sh-c细胞，24h后固定、染色、计数发现穿膜的ACCM-pU-sh-c组细胞数量显著少于对照组；在6孔板中的0.6%的下层琼脂之上，分别将腺病毒感染后的ACC-M细胞准确接种于0.3%的上层琼脂中，500细胞/L，18d后计数上层平板内所有肉眼可见的细胞克隆，统计显示Adv-lb感染后的ACC-M细胞的集落形成率显著大于对照组。上述结果说明XAGE-1可以显著地促进ACC-M细胞的体外浸润能力。3.XAGE-1对肿瘤细胞体内增殖能力的影响选择4-6周的雌性裸鼠，皮下注射细胞，2X105细胞/只，待成瘤体积至0.2-0.5cm3时，每隔3-4d测量一次肿瘤体积。接种4j吉r后处死小鼠，剥离肿瘤称重，结果统计显示接种ACC2-Xb-19与ACC2-Xb-M细胞的实验组小鼠成瘤体积与重量均显著大于对照组，接种ACCM-pG-Sh-a细胞的实验组小鼠成瘤体积与重量均显著小于ACCM组。由结果可知XAGE-1可以显著地促进ACC细胞的体内增殖能力。4.XAGE-1对肿瘤细胞体内转移能力的影响将上述裸鼠分组，尾静脉注射细胞，7-8周后处死细胞。提取肺组织基因组，建立定量PCR方法，检测组织中人与小鼠e2-微球蛋白分子拷贝数之比，以此计为肿瘤细胞的肺转移率。统计结果显示接种ACC2-Xb-19细胞的实验组小鼠转移率显著大于对照组，接种ACCM-pU-Sh-c细胞的实验组小鼠转移率显著低于对照组。由此可知XAGE-1可以显著地促进ACC细胞的体内转移能力。5.收集一定数量的肝细胞癌患者及正常人血液样本，抽提RNA并反转录为cDNA。设计荧光定量PCR方法分析XAGE-lb的表达水平，统计后发现XAGE-lb单独可以提高14.0%的诊断灵敏度，与AFP双检测指标可以提高33.3X。并可以辅助良性肝病的诊断，降低误诊率。6.采用双荧光素酶报告系统，扩增XAGE-la，lb两种转录本的转录起始点上游序列，分别构建入报告基因载体，与对照质粒共转染293T细胞，24h后检测报告荧光强弱，用两种荧光素酶的荧光强度比值表征DNA序列的转录活性。结果显示(-654..+213)序列(以XAGE-la基因转录起始位点为原点)具有较高的转录调控活性。因此，XAGE-1具有促进体内外肿瘤细胞增殖及转移能力的作用，XAGE-1可以成为肿瘤治疗，尤其是抗转移治疗中的药物靶点；我们所构建的真核RNA干扰质粒系统，如pG-Sh-a，pG-Sh-b，pU-Sh-c;腺病毒载体系统，如Adv-Sh-a与Adv-Sh-b;相关稳定细胞株系统ACCM-pG-Sh-a，ACCM-pU-Sh-c,可以在以XAGE-1为靶点的肿瘤治疗中发挥有效作用。另外，XAGE-l可以成为一个具有较高灵敏度与准确度的肿瘤标识物，有效提髙肝癌及其它肿瘤的诊断水平。可以开发基因诊断用荧光定量PCR试剂盒(主要成分是基于该基因序列的特异性探针与引物等)，依次类推可以开发其他类型的诊断试剂与手段用于肿瘤、基因检测或细胞学研究，如分子生物学试剂RT-PCR、生物芯片等；基于XAGE-1的单克隆或多克隆抗体的试剂与手段ELISA、免疫磁珠、流式细胞技术、Western-Blot等；采用双荧光素酶报告系统对XAGE-1的转录调控机制分析表明(-654..+213)序列(以XAGE-la基因转录起始位点为原点)具有较高的转录调控活性，可以用于肿瘤生物治疗。说明附1为XAGE-lb表达的RNA干扰分析，其中(a)为真核质粒介导对ACCM细胞内源XAGE-lb表达的RNA干扰分析，Lipo为lipofectamine2000对照组，Blank为空白对照'组，N为干扰对照质粒组，Sh-b为转染pG-Sh-b的细胞，Sh-a为转染pG-Sh-a的细胞；(b)为质粒pU-Sh-c对XAGE-lb的干扰效果，Sh-c为转染pU-Sh-c的细胞组，N为干扰对照质粒组，ACCM为空白对照组。图2为真核质粒介导XAGE-lb过表达对ACC2细胞增殖能力的影响，ACC2-pE-Negative为转染pEGFP-Nl质粒的稳定细胞株，ACC2-Xb-19为转染pE-Xb的单克隆细胞株，ACC2-Xb-M为转染pE-Xb的多克隆细胞株，从第二天起ACC2-Xb-19组细胞数量显著大于ACC2-pE-Negative组(PO.Ol)，第四天起ACC2-Xb-M组细胞数量显著大于ACC2-pE-Negative组(PO.Ol)，所示数据为3次重复间平均值，本实验重复三次。图3为腺病毒载体介导XAGE-lb过表达对ACC细胞增殖能力的影响，其中(a)为ACC2细胞增殖实验结果示意图；(b)为ACCM细胞增殖实验结果示意图，细胞增殖实验所示数据为6个重复间平均值，实验重复三次，实验组与对照组差异显著，P<0.01。图4为干扰XAGE-lb表达对ACCM细胞增殖能力的影响，ACCM-pG-Negative为转染干扰对照质粒的稳定细胞株，ACCM-pG-Sh-a为转染pG-Sh-a的稳定细胞株，与对照相比ACCM-pG-Sh-a组细胞增殖能力显著降低(PO.Ol)，所示数据为3次重复间平均值，本实验重复三次。图5为改变XAGE-lb表达水平对ACC细胞穿膜的影响，其中(a)为过表达XAGE-lb对ACC2细胞穿膜的影响；(b)为干扰XAGE-lb表达对ACCM细胞穿膜的影响，ACCM-pU-Negative为转染干扰对照质粒的稳定细胞株，ACCM-pU-Sh-c为转染pU-Sh-c的稳定细胞株，ACC2-Xb-M与ACC2-Xb-19组细胞数目显著多于对照，ACCM-pU-Sh-c组细胞数目显著少于对照，P<0.01(n=3)。图6为XAGE-lb过表达对ACC肿瘤生长的影响，其中(a)为肿瘤生长曲线；(b)为实验结束时各组肿瘤的体积差异；(c)为实验结束时各组肿瘤的重量差异，Xb-M组与Xb-19组均和对照组差异显著(PO.Ol)。图7为干扰XAGE-lb表达对ACC肿瘤生长的影响，其中(a)为肿瘤生长曲线，(b)为实验结束时各组肿瘤的体积差异，(c)为实验结束时各组肿瘤的重量差异，ACCM-pG-Sh-a组与ACCM组差异显著P<0.01。具体实施方式1.表达该基因的真核质粒及腺病毒载体的构建利用RT-PCR方法从ACC-McDNA中扩增得到XAGE-lbcDNA序列，插入pEGFP-Nl质粒(Clontech，MountainView,USA)得到XAGE-lb的真核表达载体pE-Xb。并且转染ACC-2细胞(上海市第九人民医院口外肿瘤实验室)，利用G418抗性筛选该载体的稳定细胞株ACC2-Xb-19〖単克隆"抹)，ACC2-Xb-M(多克隆株)。PCR扩增XAGE-lbcDNA序列并插入pAdTrack-CMV(Stragene，USA)质粒，穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-l(Stragene，USA)在BJ5183菌株(Stragene,USA)同源重组后得到重组质粒，重组质粒转染293T细胞(ATCC，USA)后包装得到成熟病毒粒子:Adv-lb。RT-PCR与Wetem-Blot均证明ACC-2-Xb-19及Adv-lb感染后的ACC-2细胞具有较高的XAGE-lb表达水平。2.表达siRNA(smallinterferingRNA)的真核质粒及腺病毒载体的构建选择XAGE-lb开放阅读框(ORF)的20-38与125-143序列为作用位点，分别将含有siRNA编码序列的正反向shRNA编码序列黏合后插入载体pGCsi-U6/Neo/RFP(Jikai，Shanghai)，得到两种表达靶向XAGE-lb的siRNA的真核表达载体pG-Sh-a与pG-Sh-b;选择XAGE-lb开放阅读框(ORF)210-230序列为作用位点，将含有siRNA编码序列的正反向shRNA编码序列黏合后插入pcDNA3.1(U6)构建干扰质粒pU-sh-c。利用PCR将U6启动子及shRNA序列由载体pG-Sh-a与pG-Sh-b上扩增下来，插入穿梭质粒pAdTrack-CMV。以同样方法构建两种表达靶向XAGE-lb的siRNA的腺病毒载体Adv-Sh-a与Adv-Sh-b。利用荧光报告基因及RT-PCR均证实pG-Sh-b与Adv-Sh-b的干扰效果较弱，pG-Sh-a，pU-sh-c与Adv-Sh-a的千扰效果较强，(图1)。同时将质粒pG-Sh-a与pU-sh-c转染ACC-M细胞(来自上海市第九人民医院口外肿瘤实验室)，利用G418抗性筛选得到该载体的稳定表达细胞株ACCM-pG-Sh-a与ACCM-pU-sh-c。3应用举例(l).XAGE-l对肿瘤细胞体外增殖能力的影响1-1细胞增殖实验分别将表达及干扰XAGE-lb的稳定细胞株ACC-2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a及对照组细胞接种于96孔板，lX10"细胞/孔。分别在之后的24h、48h、72h、96h，利用MTT法检测细胞数量。SPSS15.0软件统计实验组与对照组的细胞数量差异发现过表达XAGE-lb后的细胞增殖能力显著强于对照组细胞，干扰XAGE-lb表达后的细胞增殖能力显著弱于对照组细胞，(图2，4)。分别将ACC-2与ACC-M细胞接种于%孔板，3X103细胞/孔。10h后感染Adv-lb，在此之后每隔12h利用MTT法检测一次细胞数量，共6次。SPSS15.0软件统计实验组与对照组的细胞数量差异发现感染Adv-lb后的细胞增殖能力显著强于对照组细胞，(图3)。1-2克隆形成实验分别将表达及干扰XAGE-lb的稳定细胞株ACC-2-Xb-19与ACCM-pG-Sh-a及对照组细胞接种于6孔板，500细胞/孔。Md后结晶紫染色观察ie:录ACC-2-Xb-19组形成的集落数量显著多于对照组，ACCM-pG-Sh-a组形成的集落数量显著少于对照组。1-3集落形成实验分别将感染病毒后的ACC-2与ACC-M细胞接种于6孔板，500细胞/L。10d后结晶紫染色观察记录Adv-lb感染后细胞形成的单克隆集落显著大于对照组。由以上可知XAGE-1可以显著地促进ACC细胞的体外增殖能力。(2).XAGE-1对肿瘤细胞体外浸润能力的影响2-1细胞穿膜实验使用QCMTM24-WellCellInvasionAssay,在上室孔中准确接种ACC-2-Xb-19及对照细胞，2><105细胞/孔。48h后在下室中加入裂解及染色试剂，测量荧光强度，与标准曲线对照计算细胞数量。统计结果显示ACC-2-Xb-19与ACC-2-Xb-M组细胞数量显著多于对照组；在每个Boyden小室中准确接入2X105个ACCM-pU-Sh-c及对照组细胞，24h后固定、染色、计数发现穿膜的ACCM-pU-Sh-c组细胞数量显著少于对照组，(图5)。2-2软琼脂集落形成实验在6孔板中的0.6n/。的下层琼脂(含lX完全培养基)之上，分别将腺病毒感染后的ACC-M细胞准确接种于0，/。的上层琼脂(含1X完全培养基)中，500细胞/孔。18d后计数上层平板内所有肉眼可见的细胞克隆。统计显示Adv-lb感染后的ACC-M细胞的集落形成率显著大于对照组，(表l)。由以上可知XAGE-1可以显著地促进ACC-M细胞的体外浸润能力。表1ACCM细胞软琼脂集落形成实验实验分组细胞集落数/个集落形成率/%Adv-zero组140±728.0空白对照组136±1427.2Ack-lb组217±1543.4**p<0.01(3).XAGE-对肿瘤细胞体内增殖能力的影响选择4-6周的雌性裸鼠(BALb/cnu/nu〉(由第二军医大学动物实验中心提供)，皮下注射细胞，2Xl()S细胞/只。待成瘤体积至0.2-0.5cm3时，每隔3-4d测量一次肿瘤体积(V=l/2ab2，a:长径，b:短径)。接种4周后处死小鼠，剥离肿瘤称重。结果统计显示接种ACC-2-Xb-19与ACC-2-Xb-M细胞的实验组小鼠成瘤体积与重量均显著大于对照组，接种ACCM-pG-Sh-a细胞的实验组小鼠成瘤体积与重量均显著小于ACCM组。由此可知XAGE-1可以显著地.促进ACC-M细胞的体内增殖能力，(图6，7)。(4).XAGE-1对肿瘤细胞体内转移能力的影响将上述裸鼠分组，尾静脉注射细胞，7-8周后处死细胞。提取肺组织基因组，建立定量PCR方法，检测组织中人与小鼠P2-微球蛋白分子拷贝数之比，以此计为肿瘤细胞的肺转移率。统计结果显示接种ACC-2-Xb-19细胞的实验组小鼠转移率显著大于对照组，接种ACCM-pU-Sh-c细胞的实验组小鼠转移率显著低于对照组。由此可知XAGE-1可以显著地促进ACC细胞的体内转移能力，(表2，3)。表2过表达XAGE-lb对ACC肿瘤肺转移的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实验期间每组小鼠存活数；*p<0.01表3过表达XAGE-lb对ACC肿瘤肺转移的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>a实验期间每组小鼠存活数；'p<0.01(5).抽提收集的肿瘤血液样本RNA并反转录为c隨A，利用Taq-Man定量PCR方法分析XAGE-lb的表达水平，以GAPDH为内参照，XAGE-lb正常值界定为正常人表达范围(P2.275-P97725)的上限，AFP正常值界定为20pg/L。结果发现肝细胞癌患者的XAGE-1。阳性率68.4。/。(n=57)，显著高于良性肝病患者的26.5%(n=34)与正常人的4%(n=50)(f5<0.01，卡方检验)，但与其他类型肿瘤患者的46.2%(n=13)无显著差异；XAGE-lb单独可以提高14.0%的诊断灵敏度，与AFP双检测指标可以提高33.3%，并可以辅助良性肝病的诊断，降低误诊率；21例双检测指标阳性的肝病患者中，肝细胞癌患者占95.2%，显著多于良性肝病患者，(表4，5)。由此可见XAGE-1可以成为肝癌尤其是肝细胞癌一较好的标识物，提高肝癌的诊断水平。(6)采用双荧光素酶报告系统(萤火虫荧光素酶报告载体pGL3-Basic与，海肾焚光素酶报告载体pRL-SV40,Promega公司)，分别扩增XAGE-la,lb两种转录本的转录起始点上游序列，(表6),构建入报告基因载体，与对照质粒共转染293T细胞，24h后检测报告荧光强弱，用两种荧光素酶的荧光强度比值表征DNA序列的转录活性。分析表明-A1,A2,A3的转录活性都很低，和阴性对照组接近；B1,B2,B3转录活性较高，B3>B2>B1,转录活性随着片段增长而增加。Bl、B2、B3片段分别相对应的A1、A2、A3在结构上的差异，仅仅是其3'端多出(+31..+213)长为181bp的一段，大致覆盖了基因组上XAGE-la和XAGE-lb的转录起点之间的区域。这一段区域是造成A、B两组片段转录活性巨大差异的主要原因，B1、B2、B3的转录活性均呈现近似线性的递增趋势，提示整个(-654..+213)范围内均为启动子区域，且在(-654..+31)区域存在正调控元件。表4XAGE-lbmRNA与AFP在肝细胞癌患者血液中的检测结果AFPXAGE陽lbmRNA+一合计+20(35.1)11(19.3)31(54.4)一19(33.3)7(12.3)26(45.6)合计39(68.4)18(31.6)57括号内为占样本总数的百分比表5XAGE-lbmRNA与AFP在良性肝病患者血液中的检测结果AFP-XAGE-lbmRNA+—合计+1(2.9)11(32.4)12(35.3)—8(23.6)14(41.1)22(64.7)合计9(26.5)25(73.5)34括号内为占样本总数的百分比4.具体应用免疫学手段是一种很有潜力的诊治恶性肿瘤的方法，也是近年来抗肿瘤研究热点之一，其首要目标在于确认肿瘤抗原，以有针对性地实施治疗。其中最为著名的是肿瘤-睾丸抗原(CT抗原)，其严格的限制性分布为精确的癌症免疫疗法提供了新的可能。以老鼠为模型的实验提示类似人CT抗原的鼠P815AB抗原在鼠睾丸、胎盘上的分布并不影响P815AB在其他部位的免疫原性；同时，诱导对P815AB的细胞毒反应后，小鼠生殖未受干扰。1999年进行的一项MAGE-A3疫苗人体研究中，25名完成疫苗治疗的III，IV期黑色素瘤病人中有7名出现显著改善，且所有病例均未出现明显的副作用。可见，CT抗原具有有效的免疫原性和潜在的临床表6扩增得到的DNA序列<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>表7荧光强度数据<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>Ml/M2比值，表征插入片段的转录活性，M1和M2分别为萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的荧光强度，单位是相对荧光强度单位(RLU)。相对值为除以PGL-3组后得到的相对转录活性。上述研究并未涉及XAGE-1，而该说明书阐述的正是该基因及其表达产物在肿瘤生长与转移方面的重要功能及其与肿瘤的相关性，显示了XAGE-1在肿瘤治疗与诊断应用方面重要的价值。首先，鉴于该基因在肿瘤生长与转移中的重要作用，该基—因及其编^产^I以"作为A及其他哺乳动物的抗肿瘤治疗，尤其是抗转移治疗的药物靶点，减少肿瘤转移率，提高肿瘤的治疗水平。其次，利用基因工程手段所构建的真核质粒基因功能干扰系统，如:pG-Sh-a，pG-Sh-b，pU-sh-c;腺病毒载体基因功能干扰系统，如Adv-Sh-a与Adv-Sh-b，及相关稳定细胞株系统，如ACCM-pG-Sh-a,ACCM-pU-Sh-c可以在以XAGE-1为靶点的肿瘤治疗中发挥有效作用，并且XAGE-1特异性启动子也可用于肿瘤治疗。最后，XAGE-1可以成为一个具有较高灵敏度与准确度的肝癌尤其是肝细胞癌的分子标识物，有效地提高肝癌，尤其是早期肝癌的诊断水平，从而该基因可以用来开发各种试剂或手段用于肿瘤或基因诊断。虽然本说明书中的功能研究是以涎腺腺样囊性癌及其细胞株为例的，诊断标志研究是以肝癌为例的，但如上所述，XAGE-1的肿瘤表达谱是比较广泛的，从而XAGE-l可以用于各种具有该基因较高表达水平的肿瘤治疗及诊断。权利要求1、一种肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1及其表达产物作为人或其他哺乳动物的抗肿瘤治疗药物靶点的应用。2.利用基因工程手段构建的干扰肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1的质粒系统pG-Sh-a，pG-Sh-b，pU-Sh-c;腺病毒载体系统Adv-Sh-a，Adv-Sh-b;细胞株系统ACCM-pG-Sh-a，ACCM匿p(J-Sh-Co3.—种肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1的特异性启动子，该启动子为以XAGE-la基因转录起始位点为原点的-654..+213序列。4、一种肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1及其表达产物在制备肿瘤基因诊断试剂盒中的应用，该试剂盒主要成份包括肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1的特异性探针与引物。5、一种肿瘤睾丸抗原基因XAGE-1及其表达产物在制备肿瘤生物学试剂RT-PCR或生物芯片中的应用。全文摘要本发明属于基因治疗和诊断
技术领域：
，具体为一种肿瘤抗原——XAGE-1基因及其表达产物在肿瘤治疗和诊断中的应用。该发明首次发现XAGE-1基因在肿瘤生长和转移中具有重要作用，并且是肿瘤的重要标志物。研究结果证明XAGE-1可以促进涎腺腺样囊性癌细胞及其它各种肿瘤细胞的增殖、转移及浸润能力。所以该基因及其表达产物可以作为药物靶点，开发各种肿瘤治疗药物尤其是抗肿瘤生长和转移的药物；XAGE-1及其表达产物可作为肿瘤的标志物用于肿瘤诊断和病情分析，用来开发各种诊断试剂盒及方法，大大提高肿瘤，尤其是早期肿瘤的诊断水平；根据XAGE-1的转录调控机制，其特异性调控序列可以应用于肿瘤治疗等方面。文档编号A61K48/00GK101270360SQ20081003745公开日2008年9月24日申请日期2008年5月15日优先权日2008年5月15日发明者洋刘,宋玉亮,朱乃硕申请人:复旦大学