含有肾素抑制剂、利尿剂和叶酸的药物组合物及其用途的制作方法

专利名称：：含有肾素抑制剂、利尿剂和叶酸的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种含有肾素抑制剂、利尿剂和叶酸的药物组合物，以及该药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压以及高血压引起的靶器官损害的药物中的用途，本发明还涉及该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。属于药学领域。技术背景作为危害人们健康的常见病之一，原发性高血压是引起严重的心脑血管疾病如心肌梗塞、脑卒中、以及肾脏疾病等的主要原因。治疗高血压的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病残的总危险，药物降低血压可以有效地降低心血管并发症的发病率和死亡率，防止脑卒中、冠心病、心力衰竭和肾脏疾病的发生和发展。WHO和我国高血压治疗指南推荐的一线抗高血压药物分别是利尿剂、e-肾上腺素受体拮抗剂、钙拮抗剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素n受体拮抗剂，或者山上述药物组成的固定剂量的复方降压制剂。多数高血压患者需要两种或两种以上的抗高血压药物来达到控制血压目标，两种药物可单独处方或为固定剂量的复方制剂。国际大规模临床试验证明合并用药有其需要和价值，每种药物的剂量不大，药物的治疗作用应有协同或至少相加作用，其不良作用可以相互抵消或至少不重叠或相加。在美国高血压预防、检测、评估和治疗全国联合委员会第七次报告(JNC-7)、欧洲心脏学会/欧洲高血压学会(ESC/ESH)及中国的高血压指南推荐的高血压联合用药中，半数以上的联合用药配伍中使用了利尿剂，其中主要是噻嗪类利尿剂氢氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)。已经上市的有喹那普利/氢氯噻嗪、莫西普利/氢氯噻嗪、奥美沙坦/氢氯噻嗪、厄贝沙坦/氢氯噻嗪、替米沙坦/氢氯噻嗪、美托洛尔/氢氯噻嗪等。除此之外，2008年1月美国FDA批准了诺华的阿利吉仑/氢氯噻嗪复方药物，用于治疗高血压。半个世纪以来，人们对利尿剂的使用较为波折。自50年代起，利尿剂就作为常见的抗高血压药应用于临床。1978年噻嗪类利尿剂即被世界卫生组织列为一线降压药，常单独应用于治疗轻、中度高血压。但临床应用发现，长期使用噻嗪类利尿剂可引起低血钠、低血钾和低血氯，约30%发生糖耐量异常。另外由于抑制碳酸酐酶，减少H+分泌使NH3排出减少，引起血氨升高。氢氯噻嗪长期使用可影响脂肪酶的活性，使甘油三脂分解代谢减少，甘油三脂升高，而导致脂肪代谢紊乱，或引起轻度胆固醇增加。因此，随着钙离子拮抗剂、血管紧张素转化酶抑制剂等新型抗高血压药的出现，利尿剂临床使用量显著减少。然而近十年来，人们重新发现以小剂量利尿剂作为基础降压药物，能显著降低老年高血压患者的心血管疾病的患病率和死亡率；小剂量利尿剂同以前的剂量相比，降压效果相似而不良反应减少；利尿剂引起的有效血容量的减少是对高血压必要的治疗，可能是其他降压药物治疗的基础；于是又开始重视利尿剂的使用。并且认为利尿剂和e-受体拮抗剂是目前唯一明确的能够显著降低心血管疾病(尤其对老年患者)患病率和致死率的药物。如果无使用禁忌证，无使用其他降压药物的强烈指征，应首选这两类药物。2005年欧洲心脏病学学会(ESC)学术大会公布ASCOT(Anglo-ScandinavianCardiocOutcomesTrial)的结果，ASCOT的研究对象为19257例高血压(未治疗者血压》160/lOOmmHg;已接受治疗者血压》140/90mmHg)患者，至少有其他3个或以上的心血管危险因素，而无明确诊断的冠心病，ASCOT可作为针对临床上常见的心血管中度危险高血压患者心血管一级预防的研究，主要终点为非致命性心肌梗死(MI)或致命性冠心病(CHD)。结果与阿替洛尔或联用利尿剂(P-受体阻断剂和噻嗪类利尿剂配伍)对比，氨氯地平(或联用培哚普利)组总死亡率下降11%(P=0.0247);同时，新药组的心血管死亡减少24%(P=0.001)，脑卒中减少23%(P=0.0003)，冠心病事件减少16%(PO.Ol)，新发生糖尿病减少30%(PO.Ol)。因此，具有心血管疾病中度危险的高血压患者采用以钙拮抗剂(CCB)为基础必要时加用血管紧张素转换酶抑制剂的治疗方案，其疗效优于以阿替洛尔为基础或加用噻嗪类利尿剂的疗效，这一优势尤其在患者治疗早期达标时最为显著。可见，e-受体阻断剂联用噻嗪类利尿剂不再是所有高血压患者的一线治疗药物。ASCOT研究引起人们重新审视利尿剂在高血压治疗中的地位，使用噻嗪类利尿剂的利弊都十分突出。美国高血压防治指南JNC-7中，强化了噻嗪类利尿剂作为抗高血压一线治疗药物的重要地位，在6项强适应症中有4项(心力衰竭、冠心病高危、糖尿病和预防脑卒中复发)列有噻嗪类利尿剂；并且从成本一效益角度分析，噻嗪类利尿剂列为最值得选择的抗高血压药物。同时噻嗪类利尿剂的不良反应多也是被人们所公认的。肾素抑制剂(renininhibitor,RI)被认为是一类新的抗高血压药物。自1898年Tigerstedt和Bergmann首次证实肾素的作用以来，肾素一血管紧张素系统(Ras)已得到了广泛研究，肾素为RAS链中一级频率限制酶，仅对底物血管紧张素原(AngG)有显著的特异性，其主要作用为控制血压(BP)和血容量，生理功能为分裂AngGN端释放10肽氨酸一血管紧张素I(Angl)，再经血管紧张素转换酶(ACE)作用而生成血管紧张素II(AngII)ScottBB，etal.Developmentofinhibitorsoftheaspartylproteasereninforthetreatmentofhypertension[J].CurrProteinPeptSci.2006,7:241~254。肾素抑制剂与ACEI或ARBs的主要生化差别为前者显著抑制肾素活性而不改变AngG表达，使AngI和AngII均明显减少。肾素抑制剂的不足之处是生物利用度低。阿利吉仑(Aliskiren，SPP100)是第一种用于抗高血压口服的非肽类低分子量肾素抑制剂，能有效降低血压和治疗相关心血管疾病。阿利吉仑与内源性肾素竞争性地紧密结合，作用机制主要为阿利吉仑呈剂量依赖性地降低肾素活性，阻止AngI和AngII的生成，不会引起血管紧张肽原水平的增高；降低血浆和尿中的醛固酮水平；促进尿钠排泄，而尿钾排泄不变。阿利吉仑在治疗高血压及其相关疾病中还存在不足之处，阿利吉仑单用治疗会刺激一种代偿性反射，部分抵消血压降低，从而阻碍血压降低到理想值。阿利吉仑最常见的不良反应为乏力、胃肠道反应或头痛。阿利吉仑对耙器官保护方面的疗效也有待提高。美国FDA已经批准了诺华公司的阿利吉仑/氢氯噻嗪复方药物(TektumaHCT)，用于治疗高血压。研究数据显示，阿利吉仑与氢氯噻嗪结合使用较单独使用其中任一种药物降压具有显著的相加作用。美国批准TekturnaHCT上市是基于2700例患者接受阿利吉仑+氢氯噻嗪治疗的临床研究结果。但到目前为止，还不知道阿利吉仑/氢氯噻嗪复方药物对靶器官的疗效以及长期使用带来的副作用。由于治疗高血压病人的主要目的是最大限度地降低心血管病的死亡和病残的总危险，因此，开发一种具有靶器官保护作用和降低心脑血管事件危险性的降压药物组合物对于心血管疾病的治疗具有重大的临床意义。
发明内容本发明的目的是提供一种具有靶器官保护作用和降低心脑血管事件危险性的降压药物组合物。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种药物组合物，包括(1)药用剂量的肾素抑制剂；(2)药用剂量的利尿剂；(3)药用剂量的叶酸类化合物；及(4)药剂学上可接受的载体。上述药用剂量的肾素抑制剂选自阿利吉仑、地特吉仑、特拉吉仑、占吉仑、SPP600、或SPP800中的一种，含量为100600mg。上述药用剂量的利尿剂选自氢氯噻嗪、吲哒帕胺、依普利酮、或螺内酯中的一种，含量为2.550mg。上述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸、亚叶酸钙或左旋亚叶酸朽，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为阿利吉仑，含量为100600mg，优选150300mg;所述药用剂量的利尿剂为吲哒帕胺，含量为2.55mg;所述叶酸类化合物为叶酸、亚叶酸钙或左旋亚叶酸钙，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为特拉吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为吲哒帕胺，含量为2.55mg:所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为占吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为吲哒帕胺，含量为2.55mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为地特吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为吲哒帕胺，含量为2.55mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为阿利吉仑，含量为100600mg，优选150300mg;所述药用剂量的利尿剂为螺内酯，含量为2550mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为特拉吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为螺内酯，含量为2550mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为占吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为螺内酯，含量为2550mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为地特吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为螺内酯，含量为2550mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg,优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为特拉吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为氢氯噻嗪，含量为12.525mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为占吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为氢氯噻嗪，含量为12.525mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。根据本发明，所述药用剂量的肾素抑制剂为地特吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为氢氯噻嗪，含量为12.525mg;所述叶酸类化合物为叶酸，含量为0.21.6mg，优选0.41.0mg。我们运用本发明药物对高血压治疗的研究过程中，着重针对靶器官保护和降低心脑血管事件危险性方面。这是因为若高血压不进行有效控制，持续几年后可引起全身细小动脉硬化，变得僵硬且缺乏弹性，管腔变窄，输送至组织的血流速度减慢，造成心、脑、肾、眼等重要脏器损害而不能正常工作。高血压引起的靶器官损害，包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。当上述这些靶器官损害仍不能给予有效控制，则发展成为更严重的后果，即心脑血管事件的发生，心脑血管事件包括心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、脑梗塞、或脑出血，其中脑梗塞和脑出血合称脑卒中。因此，治疗高血压病人的主要目的是最大限度地降低心脑血管病的死亡和病残的总危险，耙器官保护与降压并举，是高血压治疗的核心。研究发现，本发明提供的药物组合物不仅具有降压作用还具有靶器官保护作用；当将肾素抑制剂、利尿剂与叶酸类化合物合用时，能协同降压，且其协同作用不仅强于肾素抑制剂与利尿剂合用，也强于单用肾素抑制剂和单用利尿剂，差异均具有统计学意义。当将肾素抑制剂、利尿剂与叶酸类化合物合用时，还能协同增强靶器官保护作用，且其协同作用强于仅应用肾素抑制剂/利尿剂二联复方降压药，也强于单用叶酸类化合物，差异均具有统计学意义。进一步，在实验中，我们发现，当将肾素抑制剂、利尿剂与叶酸类化合物合用时，能协同降低心脑血管事件危险性，且作用强于仅应用肾素抑制剂，也强于肾素抑制剂与叶酸类化合物合用，差异均具有统计学意义。因此，本发明提供了上述药用剂量的肾素抑制剂、药用剂量的利尿剂和药用剂量的叶酸类化合物组成的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压的药物中的用途；本发明还提供该药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途。高血压引起的耙器官损害，包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。本发明还提供该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途；其中降低心脑血管事件危险性是指降低心绞痛、心肌梗死、心力衰竭、脑梗塞、或脑出血的发生率，降低心脑血管事件危险性还指降低脑卒中的发生率。本发明提供的药物组合物中还含有药剂学可接受的载体，可制成普通口服制剂，包括普通片剂、胶囊、颗粒剂等，制成片剂时所述药学上可接受的载体包括有助于将活性化合物配制成药用制剂的赋形剂和辅药，如淀粉、微晶纤维素、无机盐类、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、7葡萄糖、氯化钠、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠等的一种或几种物质的组合物，属于本领域常识。本发明提供的药物组合物的剂型包括但不限于普通片剂、双层片剂、多层片剂、缓释片剂、单室控释片剂、双室控释片剂、微孔型控释片剂、舌下含片、口腔速崩片、分散片、肠溶片、颗粒剂、丸剂、肠溶胶囊、延迟释放片、定时/位释放片、普通胶囊、缓释胶囊、控释胶囊、含有微丸或小片的胶囊、含有微丸或小片的pH依赖型胶囊、颗粒剂、口服液、膜剂或贴剂等剂型，其中优选片剂、胶囊或颗粒剂。根据本发明，药物组合物也可以是指含有两个或三个独立药物的药盒。当"药物组合物"是指含有两个独立药物的药盒时，上述"组合药盒"是一种盒状容器，内置多种剂量形式的药物组合，及其服用说明书。"组合药盒"更适用于个体化用药；第一个药物中含有肾素抑制剂和利尿剂，第二个药物中含有叶酸类化合物。当"药物组合物"是指含有三个独立药物的药盒时，上述"组合药盒"是一种盒状容器，内置多种剂量形式的药物组合，及其服用说明书；第一个药物中含有肾素抑制剂，第二个药物中含有利尿剂，第三个药物中含有叶酸类化合物。该药盒中的两个或三个独立的药物可以伴随给药，也可以在同一种药物制剂中或者在不同的药物制剂中按顺序给药。本发明的有益效果是本发明提供的药物组合物具有明显协同作用，其协同作用在于能协同保护高血压引起的靶器官损害，协同降低髙血压引起的心脑血管事件危险性。因此，本发明提供了上述药用剂量的肾素抑制剂、药用剂量的利尿剂和药用剂量的叶酸类化合物组成的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压、高血压引起的靶器官损害或高血压相关疾病的药物中的用途；进一步，本发明提供了上述药物组合物在制备用降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物可以提高患者依从性，使患者服药方便，降低医疗费用，具有较好市场前景。下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明，实验支持详见以下具体实施方式。具体实施方式实施例1:阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸对自发性高血压大鼠降压及靶器官损害的保护作用SHR大鼠，体重150180g，平均分为6组，每组20只，分别为模型组、阿利吉仑(15mg/kg)组、吲哒帕胺(0.25mg/kg)组、阿利吉仑+吲哒帕胺(15+0.25mg/kg)组、阿利吉仑+叶酸(15+0.04mg/kg)组、阿利吉仑+刚哒帕胺+叶酸(15+0.25+0.04mg/kg)组，另取20只正常大鼠作为正常对照组。给予等容量0.5%CMC溶液，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药20周。检测指标(1)分别测定给药前和给药后不同时间鼠尾收缩压，比较各组间血压差别。(2)收集尿液，用比浊法测定尿蛋白、放免法测定24h尿al微球蛋白；取血，测定血肌酐、计算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羟脯氨酸测定取左心室游离壁心肌组织，制备成10%的心肌组织匀浆，按羟脯氨酸测试盒说明书，消化法测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量-羟脯氨酸含量x7.46，换算成胶原蛋白含量。(4)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取其均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取其均值。(5)肾内小动脉观察经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分离左肾，自肾门处剪下肾脏，置于4%甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50100um的肾内小动脉，测量肾内小动脉内径、壁厚，计算壁厚内径比。每个标本测量4支呈横切面的壁内小动脉，取其平均值。计量资料用i土s表示，数据统计学处理采用SAS统计软件，组间比较采用方差分析。结果(1)对SHR高血压大鼠血压的影响与正常对照组比较，模型组大鼠收縮压持续显著升高(PO.01);给药前除正常对照组外，其他各组血压水平无差异；给药后各给药组与模型组比较，收缩压均下降，阿利吉仑+吲哒帕胺组降压作用较单方组作用更为明显；阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸组降压作用不仅优于单方组，还优于阿利吉仑+卩引哒帕胺组(p<0.05或O.Ol)。详见表l。(2)对SHR高血压大鼠肾功能的影响与正常对照组比较，模型组大鼠尿24hal-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与模型组比较，吲哒帕胺(0.25mg/kg)组大鼠尿24hod-微球蛋白降低，尿蛋白、Ccr与模型组比较无差别；与模型组比较，阿利吉仑U5mg/kg)组、阿利吉仑+吲哒帕胺(15+0.25mg/kg)组及阿利吉仑+叶酸(15+0.04mg/kg)组大鼠尿24hal-微球蛋白、尿蛋白显著降低，Ccr显著升高。阿利吉仑+B引魅帕胺+叶酸(15+0.25+0.04mg/kg)组大鼠Ccr进一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白进一步降低。表明阿利吉仑及阿利吉仑+叶酸对SHR高血压大鼠出现的早期肾功能损害具有保护作用，n引哒帕胺自身对SHR大鼠肾功能保护作用不明显，但与叶酸及阿利吉仑合用后，对SHR高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强〔p<0.01)。详见表2。表l阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR大鼠收縮压〔國Hg)的影响(S土SDn)组别'系f给药前4周8周16周20周对照组一109.0±21.3114.9±27.1104.9±26.6112.3±20.7亂4±23.7(20)(20)(20)(20)(20)模型组一170.2±24.1"178.2±19.3'*179.8±24.4"178.0士20.5"176.8±21.0"(20)(19)(18)(16)(15)阿利吉仑15171.6士22.7"136.1±25.3AA146.1±20.0A'A145.5±18.7AA]40.2±20.1"(20)(20)(20)(19)(18)口引哒帕胺0.25168.1±21.5*'137.8±25.2AA144.3土23.9扇A142.3±24.2"(20)(19)(19)(18)(16)阿利吉仑+15+169.7士23.5"118.1±21.7A▲@$124.3土17.9扇i3o.8±25.2A▲@$124.3±25.3"s吲哒帕胺0.25(20)(19)(19)(18)(16)阿利吉仑+15+168.1±22.8'*137.4±24.1AA133.5±24.4*'A130.2±20.3AA33.2±20.6AA叶酸0.04(20)(19)(19)(18)(18)阿利吉仑+15+172.9±21.4**106.2±29.3AA@M104.3±20.r"@@$110.5±19.1A▲@$109.9±18.0"@$&吲哒帕胺+0.25+(20)(20)(19)(19)叶酸0.04(20)注与对照组比较，"P<0.0l;与模型组比较，"P<0.01:与阿利吉仑组比较，@P<0.05,@@P<0.01;与吲哒帕胺组比较，SPO.05;与阿利吉仑吲哒帕胺组比较，SP<0.05;与阿利吉仑叶酸组比较，&P<0.05。表2阿利吉仑十吲哒帕胺十叶酸对SHR大鼠肾功能的影响(I±SD)组别剂量N尿蛋白24har微球蛋白Ccr(mg/kg)(mg/24h)(吗)(ml/min)对照组—208.79±4.8125.4±5.30.42±0.19模型组—536.20土8.41"108.1±31.6"0.18士0.05"々富151815.25±7.42A80.4±12.7"0.22±0.03iA口引柩帕胺0.251628.16±11.5393.8±14.6A0.19±0.04阿利吉仑+喂"达帕胺15+0.251613.25±7.47,78,4±17.8"$0.28±0.06"@$阿利吉仑+叶酸15+0.041813.77±8.25"@63.2±10.1"@0,23土0.02"阿利吉仑+15+1910.62±4.46"@s#&43.3+10.4",帖0,35±0.04〃@,吲哒帕胺+叶酸0.25+0.04注与对照组比较，"PO.01;与模型组比较，ip<0.05,"P<0.01;与阿利吉仑组比较，@P<0.05，与B引秘帕胺组比较，$P<0.05,s$P<a01;与阿利吉仑吲哒帕胺组比较，#P<0.05,与阿利吉仑叶酸给比较，&P<0.05。(3)对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响与正常对照组比较，模型组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，阿利吉仑组、阿利吉仑+吲哒帕胺组及阿利吉仑+叶酸组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均显著降低。刚哒帕胺对照组未见明显降低作用，但与阿利吉仑及叶酸合用后，心肌胶原蛋白含量及心肌CVF、PVCA可明显降低，且较单用阿利吉仑及单用吲哒帕胺、阿利吉仑+吲哒帕胺组及阿利吉仑+叶酸比较均有显著性差异。表明阿利吉仑、叶酸与吲哒帕胺合用，对高血压大鼠心肌保护作用增强(p<0.01)。详见表3。表3阿利吉仑+U引哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响(叉土SD)组别剂量(mg/kg)N胶原蛋A(mg/g)CVF(%)PVCA(%)对照组———202.97±0.652.14±0.561.23±0.36模型组—158.23±1.32.*6.25土1.14"5.08±1.42**阿利吉仑15186.12土0.56'4.93±1.01A4.18±0.41A吲哒帕胺0.25167.73±0.576.35±0.874.73±0.51阿利吉仑+，达帕胺15+0.25165.32±0.83A@S4.18土1.06一4.12±0.51A$阿利吉仑+叶酸15+0.04185.11±0.55,3.92±0.73"@4.01±0.66A@阿利吉仑+15+194.23士0.42"砂"3.47±0.52"@s#吲哒帕胺+叶酸0.25+0.04注与对照组比较，"PO.01;与模型组比较，^0.05,"P<0.01;与阿利吉仑组比较，@P<0.05;与n弓啦帕胺组比较，$P<0.05;与阿利吉仑吲哒帕胺组比较，#P<0.05;与阿利吉仑叶酸组比较，&PO.05。(4)对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响高血压大鼠的血管改变，主要表现为血管壁外膜的纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、肥厚和细胞间质增多所致)；内膜玻璃样变，内皮细胞增生，上述变化使血管壁厚度/管腔比值减小。与JH常对照组比较，模型组大鼠肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，B引魅帕胺组对SHR高血压大鼠肾小动脉影响不明显，阿利吉仑组、阿利吉仑+喷哒帕胺组及阿利吉仑+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚降低、内径增加、壁厚/内径比降低，阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚进一步降低、内径进一步增加、壁厚/内径比进一步降低，与各单方组及各复方组比较有显著性差异(p<0.05或0.01)。见表4。表4阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响(I土SD)组别剂量(mg/kg)N壁厚(um)内径(um)壁厚/内径(％)对照组—204.67±0.8265.44±10.68.12±1.49模型组—1515.22±3.3广48.25±8.13**31.92土6.38"阿利吉仑151812.14±2.41A56.86±9.36A22.21±3.52"刚柩帕胺0.251614.72±1.5350.51±5.7428.34±4.14阿利吉仑+吲哒帕胺15+0.25169.73±1.65"@s59.34±7.52A@S15.89±3.20A@S阿利吉仑+叶酸15+0.041810.73±1.65,58.62±7.52A$18.12±3.7"$阿利吉仑+n引哒帕胺+叶酸15+0.25+0,04198.51±2.43"@$*61.85±7.97A@$&12.43±3.88",注与对照组比较，"PO.01:与模型组比较，AP<0.05,"PO.01;与阿利吉仑组比较，@P<0.05;与吲哒帕胺组比较，SP<0.05;与阿利吉仑n引哒帕胺组比较，*<0.05;与阿利吉仑叶酸给比较，&P<0.05。实施例2:阿利吉仑+n引哒帕胺+叶酸对卒中易感型自发性高血压大鼠耙器官损害的保护作用8周龄左右雄性SHR-SP大鼠共80只，结合血压数值，分为模型组、阿利吉仑+B引哒帕胺+叶酸(30+0.25+0.08mg/kg)组、阿利吉仑+叶酸(30+0.08mg/kg)组、阿利吉仑(30mg/kg)组。饲养条件室温22土2'C;相对湿度50%;固形饲料和垫料均由中国医学科学院实验动物繁育场提供；饮用水为纯净水。另设WKY对照组，每组20只。灌胃给药，每天1次，每周称重一次，根据体重调整药量，连续8周。观察指标(1)每日观察动物饮食、存活情况及行为活动，于8周记录各组动物脑卒中发生情况。(2)神经功能分级参照Bederson的神经功能分级标准，分为如下5级，每周观察一次。0级(正常)无神经功能缺损症状。l级(轻微)前肢蜷缩或屈曲，主要是持续性腕屈曲或肩内收伴肘部伸展。2级(中度)前肢持续性蜷缩或屈曲,可见腕、肘全部屈曲、肩部内收或内旋。3级(严重)持续性肢体蜷缩或屈曲,一侧肢体推力体抗持续性减弱,自主活动时不伴肢体划圈行为。4级(甚重)双侧肢体持续性蜷縮或屈曲,一侧肢体推力体抗持续性减弱,自主活动时出现肢体划圈行为。(3)病理学观察所有存活动物及死亡后可取得病理组织的大鼠均取脑组织，切片、HE染色，观察脑出血、脑梗塞或混合性脑卒中，计算各组大鼠脑卒中发生率。模型组有2只，阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸组有1只，阿利吉仑+叶酸组有l只、阿利吉仑组中有l只动物死亡后被其他动物食掉，未能取得脑组织进行病理检査。12结果-本实验过程中，模型组大鼠卒中后出现明显精神萎靡，嗜睡，毛发蓬松、干枯或脱落、无光泽，体重下降，主动活动明显减少，行动迟缓，肢体呈不同程度瘫痪，部分大鼠发病同时伴有抽搐、腹泻、小便失禁、眼球出血等症状，病情严重者数小时内死亡。治疗组的大部分动物神经功能缺损较模型组轻微，精神状态明显优于模型组，自主活动增加，主动觅食、饮水，体重下降不明显，毛发也较模型组顺滑有光泽。模型组20只大鼠中有16只发生脑卒中，其中死亡5只，除2只动物于夜间死亡后未能及时取得组织外，其他18只动物均进行了病理组织学观察，共16只有脑卒中病理表现发生，其中脑出血5只，脑梗死6只，混合性中风5只。脑卒中灶及周围均可见小动脉透明变性或纤维素样坏死，管壁增厚，管腔狭窄，有的管腔内可见微血栓形成，管周渗血。阿利吉仑组20只大鼠有14只发生脑卒中，其中死亡3只，1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，14只动物具有脑卒中病理表现，与模型组比较未见显著差异。阿利吉仑+叶酸组20只大鼠有12只发生脑卒中，于实验结束时死亡2只，其中l只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，9只有脑卒中病理表现，与模型组比较脑卒中发生率明显降低(P<0.05)。阿利吉仑+B引魅帕胺十叶酸组20只大鼠中有8只发生脑卒中，实验结束时死亡2只，其中1只动物未能取得病理组织，其他19只动物均进行了病理组织学观察，8只有脑卒中病理表现，其脑卒中发生率明显降低，与模型组比较及阿利吉仑组比较均具有显著差异性(P<0.05)。详见表5。4周及8周时观察，发现模型组动物卒中分级明显高于对照组，阿利吉仑组与模型组比较，未见明显改善。阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸组及阿利吉仑+叶酸组给药均可明显改善大鼠的神经功能分级(P<0.05)，且与阿利吉仑组比较具有显著性差异(P<0.05)。详见表6及表7。表5阿利吉仑+吲哒帕胺+叶酸连续给药8周对SHR-SP大鼠脑卒中的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注x2检验，与对照組比较，"P<0.01;与模型组比较，X).05;与阿利吉仑+叶酸组比较，&P<0.05。(模型组2只，阿利吉仑+喷哒帕胺+叶酸组1只，阿利吉仑+叶酸组及阿利吉仑组各有1只动物死亡后未能取得脑组织进行病理检査，统计中未计算入内)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(3)心肌羟脯氨酸测定取左心室游离壁心肌组织，制备成10%的心肌组织匀浆，按羟脯氨酸测试盒说明书，消化法测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量^羟脯氨酸含量X7.46，换算成胶原蛋白含量。(4)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取其均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取其均值。(5)肾内小动脉观察经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分离左肾，自肾门处剪下肾脏，置于4%甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50100ym的肾内小动脉，测量肾内小动脉内径、壁厚，计算壁厚内径比。毎个标本测量4支呈横切面的壁内小动脉，取其平均值。计量资料用X土s表示，数据统计学处理采用SAS统计软件，两组间比较方差分析。结果(1)对SHR高血压大鼠血压的影响与正常对照组比较，模型组大鼠收縮压持续显著升高(pO.01);给药前除正常对照组外，其他各组血压水平无差异；给药后各给药组与模型组比较，收缩压均下降，特拉吉仑+螺内酯组降压作用较单方组作用更明显；特拉吉仑+螺内酯+叶酸(30+2.5+0.04mg/kg)组降压作用不仅优于特拉吉仑组、螺内酯组，还优于特拉吉仑+螺内酯组(p〈0.05或p0.01)。见表8。表8特拉吉仑+螺内酯+叶酸对2KlC高血压大鼠收缩压(mmHg)的影响(f土SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注与对照组比较，"PO.01;弓模型组比较，AP<0.05，"1><0.01;与特拉吉仑组比较，磁PO.Q5，与螺内酯组比较，SP<0.05:与特拉吉仑螺内酯组比较，#P<0.05，与特拉吉仑叶酸给比较，&P<0.05。(2)对2K1C高血压大鼠肾功能的影响与正常对照组比较，模型组大鼠尿24hcd-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与模型组比较，特拉吉仑组、特拉吉仑+螺内酯组及特拉吉仑+叶酸组大鼠尿24hod-微球蛋白、尿蛋白显著降低，Ccr显著升高。特拉吉仑+螺内酯+叶酸组大鼠较特拉吉仑组及特拉吉仑组Ccr进一步升高，24hal-微球蛋白、尿蛋白进一步降低，表明特拉吉仑、螺内酯、叶酸合用对2K1C高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强。见表9。表9特拉吉仑+螺内酯+叶酸对2KlC高血压大鼠肾功能的影响(I士SD)组别剂量N尿蛋白24hcn-微球蛋白Ccr(mg/kg)Cmg/24h)(昭)(ml/min)对照组_208.6±3.219.8±4.90.44±0.11模型组一1536.2±8.广92.6土21.9"0.11±0.03"特拉吉仑301811.4±7.1"63.9士11.7"0.23±0.05AA螺内酯2.51718.3±9.9A71.2±14.4A0.21±0.03"特拉吉仑+螺内酯30+2.51893+32"砂53.1±13.2,0.27土0.06"砂特拉吉仑+叶酸30+0.04189.5±3.6AA@58.1±16.7"@0.25±0.06AA特拉吉仑+螺内酯+叶酸30+2.5+0.04198.4±29",44.7±14.8",0.32±0.04AA@&注与对照组比较，"PO.01;与模型组比较，AP<0.05,"PO.01:与特拉吉仑组比较，P<0.05,与螺内酯组比较，SP<0.05;与特拉吉仑螺内酯组比较，#P<0.05，与特拉吉仑叶酸给比较，&P<0.05。(3)对2K1C高血压大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠心肌胶原蛋白含量，心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，螺内酯组对2K1C高血压大鼠心肌保护作用不明显，特拉吉仑及特拉吉仑+叶酸组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均明显降低，特拉吉仑+螺内酯组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA均显著降低。特拉吉仑+螺内酯+叶酸组大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌CVF、PVCA进一步降低，表明特拉吉仑、螺内酯、叶酸三种药物合用，对高血压大鼠心肌保护作用增强。见表10。16表10特拉吉仑+螺内酯+叶酸对2KlC高血压大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响(i±SD)组别(mg/kg)N胶原蛋白(mg/g)CVF(%)PVCA(%)~2.87±0.28157.17土1.38"185.49±0.83A176.29±0.87184.12±0.81"$185.12±0.76A193.16±0.56"鄉&2.31±0.655.21±U2"4.73±0.71A4.03±0.853.66±0.52"@s4.16±0.67A@3.01±0.47"@$&0.98±0.314.03±0.84"3.76±0.52A4.12±0.663.04±0.74"@$3,34±0.84A2.12±0.69AA@$#&对照组模型组特拉吉仑螺内酯特拉吉仑+螺内酯特拉吉仑+叶酸302.530+2.530+0.04特拉吉仑+螺内酯+叶酸30+2.5+0.04注与对照组比较，"PO.01:与模型组比较，AP<0.05，"PO.01:与特拉吉仑组比较，@P<0.05,与螺内酯组比较，$P<0.05:与特拉吉仑螺内酯组比较，#P<0.05，与特拉吉仑叶酸给比较，SP<0.05。(4)对2K1C高血压大鼠肾内小动脉的影响与正常组比较，模型组大鼠血管壁外膜纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、肥厚和细胞间质增多所致)；内膜玻璃样变，内皮细胞增生，上述变化使肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，特拉吉仑+螺内酯组、特拉吉仑+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚明显降低、壁厚/内径比下降；特拉吉仑+螺内酯+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚进一步降低、壁厚/内径比进一步下降，与特拉吉仑组、螺内酯组及特拉吉仑+叶酸组比较均有显著性差异。见表11。表ll特拉吉仑+螺内酯+叶酸对2KlC高血压大鼠肾内小动脉的影响(灭土SD)组别剂量(mg/kg)N壁厚(um)内径(um)壁厚/内径(％)对照组—204.3±0.961.2±11.68.4±1.1模型组—1513.1±2.2"48.5±9.广30.7±7.广特拉吉仑30189.8±2.2A48.2±7.018.6±3.4螺内酯2.51711.4±2.850.9±8.524.2±5.6特拉吉仑+螺内酯30+2.5188.4±1.7"$55.2±9.1A@14.1±3.8A@$特拉吉仑+叶酸30+0.04188.6±2.8"54.2±8.5A16.1±3.2A特拉吉仑+螺内酯+叶酸30+2.5+0.041963.6±7.1"砂*&注与对照组比较，"P<0.01:与模型组比较,AP<0.05，"PO.Ol.,与特拉吉仑组比较，@P<0.05,与螺内酯组比较，$P<0.05;与特拉吉仑螺内酯组比较，#P<0.05，与特拉吉仑叶酸给比较，aP<0.05。实施例4:占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对自发性高血压大鼠耙器官损害的保护作用SHR大鼠，体重150180g，平均分为5组，每组20只，分别为模型组、占吉仑(25mg/kg)组、吲哒帕胺(0.25mg/kg)组，占吉仑+吲哒帕胺(25+0.25mg/kg)组、占吉仑+吲哒帕胺+叶酸(25+0.25+0.04mg/kg)组，另取20只正常大鼠作为正常对照组。给予等容量0.5%CMC溶液，每周称重一次，根据体重调整药量，连续给药20周。检测指标(1)分别测定给药前和给药后不同时间鼠尾收縮压，比较各组间血压差别。(2)收集尿液，用比浊法测定尿蛋白、放免法测定24h尿a1微球蛋白；取血，测定血肌酐、计算肌酐清除率(Ccr)。(3)心肌羟脯氨酸测定取左心室游离壁心肌组织，制备成10%的心肌组织匀浆，按羟脯氨酸测试盒说明书，消化法测定心肌羟脯氨酸含量，按胶原蛋白含量-羟脯氨酸含量X7.46，换算成胶原蛋白含量。(4)心肌组织常规切片，天狼星红-苦味酸染色，测量心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)。CVF为胶原面积与心肌总面积的比值，其中胶原面积不包括血管周围胶原面积，随机分析5个视野，取其均值。PVCA为每一标本测量4支呈横切面的壁内小动脉的周围面积与管腔面积的比值，取其均值。(5)肾内小动脉观察经腹主动脉插管，0.1mg/ml硝普钠充分扩张血管后，用10%的甲醛溶液在1012kPa下灌注固定，分离左肾，自肾门处剪下肾脏，置于4%甲醛中固定，常规脱水、石蜡包埋、横切片、HE染色。光学显微镜下选取外径为50100um的肾内小动脉，测量肾内小动脉内径、壁厚，计算壁厚内径比。每个标本测量4支呈横切面的壁内小动脉，取其平均值。计量资料用又土s表示，数据统计学处理采用SAS统计软件进行统计，两组间比较采用方差分析。结果(1)占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠血压的影响模型组与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠收缩压显著升高(pO.01);给药前除正常对照组外，其他各组血压水平无差异；给药后各给药组与模型组比较，收縮压均可有效下降，占吉仑+吲哒帕胺组降压作用较单方组作用更为明显；占吉仑+吲哒帕胺+叶酸组降压作用则不仅优于单方组，还优于占吉仑+喂魅帕胺组(p<0.05)。详见表12。表12占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠收縮压(mmHg)的影响(I土SD)组别剂量(mg/kg)给药前血压(n)8周血压(n)16周血压(n)20周血压(n)对照组一115.8±20.7121.8±17.7128.6±21.4119.2±19.3(20)(20)(20)(20)模型组—178.4士19.6"181.1±20.4"194.6±20.7"199.0土21.5"(20)(18)(16)(15)占吉仑25178.2±18.5153.7±21.2A158.9±17.6A163.0±23.4A(20)(18)(18)(18)吲哒帕胺0.25179.3±21.9156.8±23.4A158.5±18.9AI58.2±25.4A(20)(19)(18)(17)占吉仑+吲哒帕胺25+0.25178.7±19.5143.7±21.2A@138.9土17.6一136.0±23.4,(20)(18)(18)(18)占吉仑+25+177.2±19.5134.6±22.4"@$*125.U21.3",122.5士17.9",d引柩帕胺+叶酸0.25+0.04(20)(20)(19)(18)注与对照组比较，"PO.01;与模型组比较,AP<0.05，"P<0.01;与占吉仑组比较，@P<0.05，与吲哒帕胺组比较，$P<0.05;与占吉仑吲哒帕胺组比较，#P<0.05。(2)对SHR高血压大鼠肾功能的影响与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠尿2411011-微球蛋白、尿蛋白显著升高，Ccr明显降低。与模型组比较，吲哒帕胺组大鼠肾功能基本无差别，占吉仑组及占吉仑+吲哒帕胺组大鼠尿24hod-微球蛋白、尿蛋白明显降低，Ccr有所升高。占吉仑+喷岐帕胺+叶酸组大鼠24hoil-微球蛋白降低程度与占吉仑组、B引哒帕胺组及占吉仑+吲哒帕胺组比较均具有显著性差异(p<0.05)，24hoi卜微球蛋白、尿蛋白进一步降低，Ccr进一步升高。表明占吉仑+喷哒帕胺+叶酸合用对SHR高血压大鼠的肾功能保护作用显著增强。见表13。表13占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠肾功能的影响d土SD)组别剂量N尿蛋白24ha广微球蛋白Ccr(mg/kg)(mg/24h)(吗)(ml/min)对照组—208.6±3.219.8±4.90.44±0.11模型组一1536.2土8.r'92.6±21.9"0.11±0.03"占吉仑251816.4±7.8A73.9±18.9A0.21±0.05A吲哒帕胺0.251731.4±9.189.4±15.70.18±0.03占吉仑+吲哒帕胺25+0.251811.4±5,1"@$63.9±11.7"$0.23±0.03A占吉仑+吲哒帕胺+叶酸25+0.25+0.04188.4±2.9AA@$$#47.7+14.8"@$$#0.29土0.04"注与对照组比较，"P<0.01;与模型组比较，4P<0.05,AiP<0.01:与占吉仑组比较，@P<0.05，与喷哒帕胺组比较，*P<0.05,"P<0.01;与占吉仑喷喷帕胺组比较，#P<0.05。(3)对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周19围胶原面积(PVCA)的影响与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠心肌胶原蛋白含量，心肌间质纤维化指标CVF、心肌血管周围纤维化指标PVCA均显著增加，CVF与PVCA升高几乎同步，表明心肌间质纤维化参与了高血压大鼠心脏重构的病理过程。与模型组比较，占吉仑组、占吉仑+H引魅帕胺组大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌CVF、PVCA可见一定程度降低;吲哒帕胺对照组未见明显降低作用；占吉仑+吲哒帕胺+叶酸组大鼠心肌胶原蛋白含量及心肌CVF、PVCA进一步降低，较单用占吉仑、单用吲哒帕胺及占吉仑+吲哒帕胺组均有显著性差异。表明占吉仑、吲哒帕胺与叶酸合用，对高血压大鼠心肌保护作用增强。见表14。表14占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠心肌胶原蛋白含量、心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)的影响(I土SD)组别剂量胶原蛋白CVFPVCAN(mg/kg)(mg/g)(%)(%)对照组—202.87±0.282.31±0.650邻±0.31模型组一157.17±1.38**5.21士U2"4.03±1.84"占吉仑25185,49±0.83A4.73±0.71A3.76±1.52刚哒帕胺0.25176.29±0.875.03±0.854.12±1.66占吉仑+吲哒帕胺25+0.25184.31±1.02,4.03±0.82,2.76士1.02砂占吉仑+吲哒帕胺+叶酸25+0.25+0.04183.12±0.81"@$#3.01±0.47"柳*1.82±0.68$*注；与对照组比较，"PO.01;与模型组比较，4P<0.05，"P<0.01;与占吉仑组比较，@P<0.05，与丐l哒帕胺组比较，SP<0.05;与占吉仑吲哒帕胺组比较，*<0.05。(4)对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响高血压大鼠的血管改变，主要表现为血管壁外膜的纤维化，管壁中层增厚(由平滑肌细胞增生、肥厚和细胞间质增多所致)；内膜玻璃样变，内皮细胞增生，上述变化使血管壁厚度/管腔比值减小。与正常对照组大鼠比较，模型组大鼠肾小动脉壁厚增加，内径减小，壁厚/内径比增加。与模型组比较，fl引喷帕胺组对SHR高血压大鼠肾内小动脉无明显改善作用；占吉仑组及占吉仑+n引哒帕胺组肾小动脉壁厚降低、壁厚/内径比显著降低；占吉仑+吲哒帕胺+叶酸组大鼠肾小动脉壁厚进一步降低、壁厚/内径比进一步降低，与各单方组及占吉仑+吲哒帕胺组比较有显著性差异(p<0.05)。见表15。表15占吉仑+吲哒帕胺+叶酸对SHR高血压大鼠肾内小动脉的影响(S士SD)剂量壁厚内径壁厚/内径组别N(mg/kg)(um)(nm)(%)对照组—204.3±0.962.2±11.67.4±1.1模型组—1513.1±2.2**48.5±9.1'29.7±7.1"占吉仑251810.8±2.2A51.2±7.0吲哒帕胺0.251711.4±2.850.9±8.524.2±5.6占吉仑+吲哒帕胺25+0.25189.2±2.4,58.2±7.8@s16.6±3.3"s占吉仑+n引哒帕胺+叶酸25+0.25+0.04186.7±2.3Ai@s*63.6±7.1@$11.5±3.7"@胖注与对照组比较，"PO.01;与模型组比较，"<0.05，"P<0.01;与占吉仑组比较，P<0.05,与吲哒帕胺组比较，$P<0.05;弓占吉仑吲哒帕胺组比较，#P<0.05。实施例5:阿利吉仑150rag/吲哒帕胺2.5mg/叶酸0.2mg片的制备处方阿利吉仑150.0g吲哒帕胺2.5g叶酸0.2g淀粉20.0g微晶纤维素50.0g羧甲基淀粉钠20.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量硬脂酸镁适量制成1000片制备工艺叶酸过80目筛，其他辅料分别过IOO目筛后75。C干燥2小时，备用；精密称定处方量的阿利吉仑、吲哒帕胺、乳糖、交联羧甲基纤维素钠和微晶纤维素过筛混匀，备用；取处方量的叶酸和泊洛萨姆F68加入少量水，充分混合均匀后等量递增加入预混好的厄贝沙坦、乳糖、交联羧甲基纤维素钠和微晶纤维素，加入粘合剂制软材，30目筛制粒，60°C干燥3h;30目整粒，加入适量硬脂酸镁混匀，含量测定后压片，包装。实施例6:阿利吉仑150mg/吲哒帕胺2.5mg/叶酸0.4mg片的制备处方阿利吉仑150.0g吲哒帕胺2.5g叶酸0.4g淀粉20.0g2微晶纤维素50.0g羧甲基淀粉钠20.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量硬脂酸镁__制成1000片制备工艺同实施例5。实施例7:阿利吉仑150mg/吲哒帕胺2.5mg/叶酸0.8mg片的制备处方阿利吉仑150.0g口引哒帕胺2.5g叶酸0.8g淀粉20.0g微晶纤维素50.0g羧甲基淀粉钠20.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量硬脂酸镁适量制成1000片制备工艺同实施例5。实施例8:阿利吉仑300mg/吲哒帕胺5mg/叶酸0.4mg胶囊的制备处方阿利吉仑300.0g吲哒帕胺5.0g叶酸0.4g淀粉lO.Og微晶纤维素20.0g羧甲基淀粉钠lO.Og5%聚维酮k-30水溶液适量硬脂酸镁__制成1000粒制备工艺将阿利吉仑300g、吲哒帕胺5g、叶酸0.4g、微晶纤维素20g、淀粉10g、羧甲基淀粉钠10g粉碎、过筛后混合均匀，与适量的5%聚维酮k-30水溶液混合制成软材后制粒、干燥、加入约1°/。的硬脂酸镁混合均匀，按常规方法装胶囊1000粒即得。22实施例9:阿利吉仑100mg/吲哒帕胺2.5mg/亚叶酸钙0.4mg胶囊的制备处方阿利吉仑100.0g刚喷帕胺2.5g亚叶酸钙(按亚叶酸计)0.4g淀粉40.0g微晶纤维素30.0g羧甲基淀粉钠30.0g5%聚维酮k-30水溶液硬脂酸镁制成1000粒制备工艺同实施例8。实施例10:阿利吉仑150mg/吲哒帕胺2.Smg/左旋亚叶酸钙0.2mg片的制备处方阿利吉仑吲哒帕胺左旋亚叶酸钙(按左旋亚叶酸计)淀粉微晶纤维素羧甲基淀粉钠泊洛萨姆F68水硬脂酸镁150.0g2.5g0.2g20.0g50.0g20.0gl.Og制成1000粒制备工艺同实施例5。实施例11:特拉吉仑300mg/吲哒帕胺2.5mg/叶酸0.4mg片的制备处方特拉吉仑吲哒帕胺叶酸淀粉微晶纤维素羧甲基淀粉钠泊洛萨姆F68水300.0g2.5g0.4glO.Og阔15.0gl.Og硬脂酸镁__制成1000片制备工艺同实施例5。实施例12:占吉仑250mg/吲哒帕胺2.5mg/叶酸1.6mg片的制备处方占吉仑250.0g吲哒帕胺2.5g叶酸1.6g微晶纤维素30.0g乳糖20.0g羧甲基淀粉钠10.0g水适量硬脂酸镁_51_制成1000片制备工艺取处方量的占吉仑、吲哒帕胺、叶酸过100目筛后按等量递增法混合均匀备用；其他辅料分别过100目筛后75'C干燥2小时；按处方量的低取代羟丙基纤维素、乳糖、CMS'Na混匀后再与混好的原料药等量递增法混合均匀；加入粘合剂适量制软材，24目筛制粒、20目筛整粒，4045"C干燥；干颗粒加入适量硬脂酸镁混匀，含量测定后压片。实施例13:特拉吉仑300mg/氨氯噻嗪12.5mg/叶酸0.4mg片的制备处方特拉吉仑300.0g氢氯噻嗪12.5g叶酸0.4g淀粉5.0g微晶纤维素io.og羧甲基淀粉钠15.0g泊洛萨姆F68l.Og水适量10%聚维酮水溶液适量硬脂酸镁适量制成1000片制备工艺同实施例5。24实施例14:阿利吉仑150mg/螺内酯25mg/叶酸0.4mg胶囊的制备处方阿利吉仑150.0g螺内酯25.0g叶酸0.4g微晶纤维素30.0g交联聚维酮15.0g聚维酮10.0g十二烷基硫酸钠适量硬脂酸镁_55_制成1000粒制备工艺将阿利吉仑、叶酸、微晶纤维素、交联聚维酮、聚维酮粉碎、过筛后混合均匀，与适量的十二垸基硫酸钠混合制成软材后制粒、干燥、加入约1%的硬脂酸镁混合均匀,按常规方法装胶囊1000粒即得。实施例15:特拉吉仑300mg/螺内酯50mg/叶酸0.4mg胶囊的制备处方特拉吉仑300.0g螺内酯50.0g叶酸0.4g微晶纤维素15.0g交联聚维酮10.0g聚维酮5.0g十二烷基硫酸钠适量硬脂酸镁_2_制成1000粒制备工艺同实施例12。权利要求1.一种药物组合物，包括(1)药用剂量的肾素抑制剂；(2)药用剂量的利尿剂；(3)药用剂量的叶酸类化合物；及(4)药剂学上可接受的载体。其中，所述肾素抑制剂选自阿利吉仑、地特吉仑、特拉吉仑、占吉仑、SPP600、或SPP800中的一种；所述利尿剂选自氢氯噻嗪、吲哒帕胺、依普利酮、或螺内酯中的一种；所述药用剂量的叶酸类化合物选自叶酸、亚叶酸钙或左旋亚叶酸钙中的一种。2.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药用剂量的肾素抑制剂为阿利吉仑，含量为100600mg，优选150300mg;所述药用剂量的利尿剂为H引哒帕胺，含量为2.55mg;所述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸，含量为O.41.Omg。3.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药用剂量的肾素抑制剂为特拉吉仑，含量为100600mg;所述药用剂量的利尿剂为氢氯噻嗪，含量为12.525mg;所述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸，含量为0.41.0nig。4.权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药用剂量的肾素抑制剂为阿利吉仑，含量为100600mg，优选150300mg;所述药用剂量的利尿剂为螺内酯，含量为2550mg;所述药用剂量的叶酸类化合物为叶酸，含量为O.41.Omg。5.权利要求14中任一项所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的制药剂型为口服制剂，包括片剂、胶囊或颗粒剂。6.权利要求15中任一项所述的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压的药物中的用途。7.权利要求15中任一项所述的药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压引起的靶器官损害的药物中的用途。8.权利要求7所述的用途，其特征在于所述的耙器官损害包括左室肥厚、良性小动脉性肾硬化症、恶性小动脉性肾硬化症、肾功能衰竭、视网膜动脉硬化、或高血压眼底病变。9.权利要求15中任一项所述的药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。10.权利要求9所述的用途，其特征在于所述降低高血压引起的心脑血管事件危险性是指降低脑卒中的发生率。全文摘要本发明涉及一种含有肾素抑制剂、利尿剂和叶酸类化合物的药物组合物。该药物组合物包含药用剂量的肾素抑制剂、药用剂量的利尿剂、药用剂量的叶酸类化合物和药剂学上可接受的载体。本发明还涉及该药物组合物在制备用于预防、治疗或延缓高血压、高血压引起的靶器官损害的药物中的用途，本发明还涉及该药物组合物在制备用于降低高血压引起的心脑血管事件危险性的药物中的用途。属于药学领域。通过本发明的实施，提供给患者这种特定用途的药物组合物可以提高患者依从性，使患者服药方便，降低医疗费用，具有较好市场前景。文档编号A61K31/549GK101590230SQ200810113090公开日2009年12月2日申请日期2008年5月27日优先权日2008年5月27日发明者徐希平,王文艳,陈光亮,陈明侠申请人:北京奥萨医药研究中心有限公司;深圳奥萨医药有限公司