专利名称：：一种治疗青光眼的药物组合物及其用途的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于治疗青光眼的药物组合物，是由胶原蛋白和縮瞳、降压类药物组成的，属于药学领域。
背景技术：
：青光眼是眼科一种常见病，危害视力功能极大，也是最常见的致盲眼病之一，由于种种原因会给患者带来失明的痛苦。青光眼常见眼内压增高且伴有角膜周围充血，瞳孔散大、视力急剧减退、头痛、恶心呕吐等症状。青光眼的眼压超过了眼球内组织，尤其是视网膜所能承受的限度时，则会带来眼睛功能性的病变，给广大患者带来极大的痛苦。西药在治疗这些疾病时，具有显著的效果。胶原蛋白是由动物的皮、骨或跟腱经水解或酶解方式制得的含肽类物质，是组成动物结缔组织重要的蛋白质，结缔组织除了含6070%的水分外，胶原蛋白占了约2030%，是人体重要的细胞外基质成分，具有优良的成纤性能、止血性能、细胞间相互作用性能、促进伤口愈合与组织修复等良好的生物学特性；对细胞、组织乃至器官行使正常功能并对外伤修复有重大影响，可引导上皮细胞迁入缺损区，在细胞迁移时起润滑作用；是新生细胞合成利用的基质，同时有粘连细胞作用，增强新生细胞粘附作用；充填新生细胞之间的胶原能减少生长细胞接触抑制。作为理想的组织工程生物材料，胶原蛋白一直应用于化妆品和止血类医疗器械中，具有广阔的发展前景。在胶原蛋白滴眼液的专利申请中(公开号CN1927391A)中，其所应用的胶原蛋白未明确有效成分群，在制备胶原蛋白时工艺参数不明确，导致了所制得的的有效部位不明确；该专利申请中采用了胃蛋白酶或木瓜蛋白酶进行酶解，由于胃蛋白酶的酶解专属性限制，其不能酶解胶原中的脯氨酸肽键，即是说胃蛋白酶无法将胶原酶解成胶原蛋白，故该专利申请中所述的胶原蛋白并非实际意义上的胶原蛋白(相对分子量不高于100kD),故该专利申请不具有可行性；在复合胶原蛋白滴眼液的专利申请中(公开号CN1927392A)中加入了化药抗生素来和胶原蛋白联合应用，但同样未明确胶原蛋白的有效成分群，混淆了胶原和胶原蛋白的概念。可见现有技术并没有真正解决胶原蛋白在眼科用药中的技术问题。故现在迫切需要进一步明确胶原蛋白在眼用制剂中应用的有效部位群，以保证应用时的安全性和有效性，并通过与縮瞳、降压类化学药物的结合应用来进一步提高疗效。
发明内容本发明的第一目的在于提供一种治疗青光眼的药物组合物，该药物组合物是由胶原蛋白3和縮瞳、降压类药物组成的。第二目的是提供该药物组合物在治疗各种先天性青光眼、原发性青光眼、继发性青光眼和混合型青光眼方面的应用。具体的说本发明提供了一种治疗青光眼的药物组合物，该药物组合物有效成分的原料药为胶原蛋白和以下眼科常用縮瞳、降压类药物中的至少一种盐酸可乐定、水杨酸毒扁豆碱、硝酸毛果芸香碱、拉坦前列素、曲沃前列素、比马前列素、噻吗心胺、酒石酸溴莫尼定、盐酸倍他洛尔、盐酸卡替洛尔、美替洛尔、溴莫尼定、布林佐胺、盐酸左旋布诺洛尔、布那唑嗪、马来酸塞马洛尔、左沙托垸。本发明药物组合物有效成分中胶原蛋白与药物成分的重量配比为1:0.11:20，更优选的重量配比为1:0.31:10。该比例系指上述抗炎类药物与胶原蛋白在最终产品中固形物的重量之比。而且，本发明所得药物组合物中所述胶原蛋白可以是胶原蛋白或胶原单独投料，还可以是胶原蛋白与胶原的混合投料，主要在于二者性质相似，只是分子量存在一定差异。胶原是指是由三条肽链拧成的螺旋形纤维状蛋白质，是组成动物结缔组织重要的蛋白质，其主要从猪皮、牛皮、牛跟腱、猪跟腱、猪骨、牛骨等原料中简单水解得到，酶解时一般采用胃蛋白酶、木瓜蛋白酶或无花果酶等单酶酶解，多在低温下(IO'C以下)进行，防止蛋白变性，不破坏独特的右手螺旋结构主体，仅切除非胶原性尾肽部位，其相对分子量为250300kD，具有完整三螺旋结构；胶原进一步水解得明胶，其相对分子量为100200kD，三螺旋结构已被破坏；胶原蛋白为明胶的更进一步酶解产物，其相对分子量在100kD以下，其中绝大部分以胶原蛋白寡肽的形式存在，相对分子量在40kD以下。胶原蛋白还可以直接从明胶、阿胶、新阿胶等原料中酶解得到。胶原和明胶的相对分子量大，水溶性差，粘稠度高，机械强度大，辅助药物成型性好，还可以作为眼用制剂药物的载体，使药物在结膜囊内逐渐释放，从而在短时间内使眼内药物达到较高浓度，并保持较长时间，减少药物的全身毒性，而且在胶原酶的作用下，可酶解成寡肽或氨基酸参与组织生长；而胶原蛋白的相对分子量较小，其在眼部应用时具有较好的修复角膜损伤、促进伤口愈合、增加眼部营养、缓解视疲劳等多种功效。本发明所用胶原蛋白是由明胶、阿胶、新阿胶、猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟腱经酶解法制得，其相对分子量不高于100kD。本发明所用胶原蛋白主要制备方法为取胶原原料，清水或盐溶液洗净，并除去脂肪、残肉等杂质，加酸或碱调节适当pH值，低温(010°C)酶解2472小时，离心，取上清液，调节适当pH值，加入所需蛋白酶进行充分酶解，取上清液，加中性盐盐析，透析除杂，进一步纯化，即得。更确切地说，本发明所用胶原蛋白的主要原料来源于明胶、阿胶、新阿胶、猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟中的任意一种或几种，经过彻底酶解制得，其相对分子量优选为10kD以下，进一步优选为5kD，所述酶解方法可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意一种的单酶酶解，也可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意几种酶的组合酶解，还可以是完全仿照人体消化吸收过程的仿生酶解法(即首先采用模拟人体胃部消化过程及理化参数的胃蛋白酶酶解法，然后进行模拟人体肠道消化吸收过程及理化参数的胰(蛋白)酶酶解法，从而得到可供人体直接吸收的低分子寡肽物质)。本发明所用胶原是由猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟腱经酶解制得，其相对分子量为250300kD。本发明所用胶原主要采用如下制备方法制得取胶原原料，清水或盐溶液洗净，并除去脂肪、残肉等杂质，加酸或碱调节适当pH值，低温(010°C)酶解2472小时，离心，取上清液，加中性盐盐析，透析除杂，进一步纯化，即得。更确切地讲，本发明所用胶原的主要原料来源于猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟腱中的任意一种或几种，经过适当酶解法制得，其相对分子量为250300kD，所述酶解方法可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意一种的单酶酶解，也可以是胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶或木瓜蛋白酶中任意几种酶的组合酶解。上述胶原蛋白或胶原的制备工艺中，所用的喷为酒石酸、苹果酸、乙酸、拧檬酸、甘氨酸、或盐酸中的任意一种或几种，所用的碱为氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠中的任意一种或几种。上述胶原蛋白或胶原的制备工艺中，盐析所用的盐可以是硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠或磷酸钠中的任意一种或几种。本发明药物组合物主要采用如下制备方法制得a、取所选用的药物，采用直接溶解或加入助溶剂溶解制得药物的溶液，或直接原粉入药；b、取制得的胶原蛋白溶液或细粉，加入上述药物溶液或原粉，加入适当眼科药用辅料，按照药剂学常规技术制得所需剂型，如滴眼液、眼用凝胶、眼用即型凝胶、眼膏、眼贴膜、眼用散剂及膜剂等眼用制剂。人角膜主要是由胶原蛋白组成的，将胶原蛋白与縮瞳、降压类药物配合使用，一方面可5使胶原蛋白直接发挥组织修复作用，并起到提供营养和延长滞留时间的效果；另一方面，縮瞳、降压类药物的降低眼内压作用从根本上对青光眼症状进行改善。两者配合使用，能起到更好的治疗效果。另外，为提高制剂疗效，更好的发挥药物和胶原蛋白的结合作用，本发明药物组合物还可以加入除所述縮瞳、降压类药物以外的药物成分，如加入透明质酸钠来延长药物的释放度，加入活血类药物来协助降低眼内压等。故所有以本发明中药物组合物作为基础而加入其他药用成分来制备的眼用制剂都属于本发明的保护范围。本发明中的药物组合物主要用于在制备治疗各种青光眼药物中的应用，更确切地讲，是在制备治疗各种先天性青光眼、原发性青光眼、继发性青光眼和混合型青光眼等药物中的应用。有益效果为进一步验证本发明产物的治疗作用，发明人进行了如下实验。试验一、本发明滴眼液对家兔实验性高眼压的影响试验材料Schiotz眼压汁，苏州医疗器械厂生产。1%甲基纤维素取lg甲基纤维素(山东聊城阿华制药有限公司生产)加入煮沸的注射用林格氏液30ml中，冷却后再加入注射用林格氏液70ml，高压消毒灭菌备用。硝酸毛果芸香碱滴眼液取注射用水800ml，加入尼泊金乙酯0.6g，加热至70。C，搅拌至澄清，滤过，加入硝酸毛果芸香碱5g，再加入胶原蛋白提取液50ml(含胶原蛋白5g)、胶原提取液20ml(含胶原2g)，搅拌均匀，加注射用水至1000g，过微孔滤膜，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为猪骨和牛骨经过胃蛋白酶和胰蛋白酶仿生酶解得到，经过10kD的的超滤膜超滤；胶原以猪皮和牛皮为原料，加乙酸调节pH为2.0，经胃蛋白酶酶解制得，相对分子量在250285kD)试验动物新西兰兔，雌雄兼用，2.22.5kg，共50只，购自北京大学实验动物科学部。试验方法1、青光眼模型建立将18只家兔随机分为三组，每组6只，分别为空白对照组、模型对照组和硝酸毛果芸香碱滴眼液组。取模型对照组和硝酸毛果芸香碱滴眼液组用1%甲基纤维素少量多次注入家兔前房建立高眼压模型，分别单笼词养。2、给药方法空白对照组、模型对照组给予注射用水，硝酸毛果芸香碱滴眼液组给予硝酸毛果芸香碱滴眼液。给药4次/d，l滴/次，以造模后12h开始用药，为期9d，每天进行观测。试验结果见表l。表1对家兔实验性高眼压的试验结果表(Jf±s)组别\时间<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>结果表明，用药后的第l、3、5、7、9天，硝酸毛果芸香碱滴眼液组的家兔眼压值降低均较显著，在用药9天后兔眼内压恢复正常，提示硝酸毛果芸香碱滴眼液组对实验性家兔高眼压具有较好的治疗效果。实验二本发明滴眼液体外释放度考察试验材料硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)同试验一；硝酸毛果芸香碱滴眼液(普通)取注射用水800ml，加入尼泊金乙酯0.6g，加热至70°C，搅拌至澄清，滤过，加入硝酸毛果芸香碱5g，搅拌均匀，加注射用水至1000g，过微孔滤膜，无菌分装，即得。岛津LC-2010A高效液相色谱仪，岛津CLASS-VP工作站；等渗磷酸盐缓冲液(1000m]溶液中含NaH2POJ.60g，Na異7.58g，NaCl4.32g，调pH至7.40)试验方法取硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)和硝酸毛果芸香碱滴眼液(普通)各10ml,分别置于透析袋中，袋两头用尼龙线扎紧(袋内除去气泡)，固定于250ml烧杯中，释放介质为等渗磷酸盐缓冲液lOOml，袋上沿距离液面lcm，烧杯置于电磁搅拌器上，搅拌子长约2.5cm，温度控制(34±1)°C，每隔一定时间取样5ml，同时补加同体积新鲜的磷酸盐缓冲液。分别测定所取各样品中硝酸毛果芸香碱的含量，以峰面积表示。按以下公式计算累加扩散释药量C产f(Ai)，Qn:100Cn+5ECi(Q卜100di,n=l,2,3...)(Ci为药物浓度，A为测得峰面积，Q为药物累积释放量，i,n分别为取样次数。)试验结果根据采集的数据绘制硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)和硝酸毛果芸香碱滴眼液(普通)的体外释放曲线，并将该累积释放曲线进行释放方程拟合，结果其具有一级释放规律，回归方程具有良好的相关性。一级释药拟合方程为Log(Yk—Y)=—KrXt/2.303+M。本发明药物组合物制成的硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)的释放方程为Log(Y_Y)=-0.1826x+1.3464，相关系数为0.9936。结果表明，硝酸毛果芸香碱滴眼液(普通)的体外释药速度较快，lh时释药达到791之后进入平台期；而硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)在2.5h时释药达到75M，释药速度平缓，具有较好的缓释特性。可见，硝酸毛果芸香碱滴眼液(加胶原蛋白)具有较好的缓释特性，通过本发明的药物组合物来提高制剂在眼部的生物利用度具有可行性。具体实施例方式以下通过具体的实施例进一步说明本发明，但以下实施例仅用于说明本发明而对本发明没有限制。实施例一处方盐酸可乐定7.5g胶原蛋白提取液90ml(含胶原蛋白9g)制法取注射用水2700ml，加入尼泊金乙酯1.5g，加热至80'C搅拌使溶解，加入盐酸可乐定及胶原蛋白提取液，边搅拌边降温至60'C，再并加注射用水至3000ml，搅匀，过微孔滤膜(0.22ym)，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为阿胶经过胃蛋白酶和胰酶仿生酶解，再经过5kD的的超滤膜超滤得到)实施例二处方水杨酸毒扁豆碱5g透明质酸钠lg胶原蛋白提取液50ml(含胶原蛋白5g)制法取注射用水1500ml，加入三氯叔丁醇，置沸水浴中，搅拌至澄清，放冷，搅拌下加入水杨酸毒扁豆碱、胶原蛋白提取液，混匀，滤过，加注射用水至2000ml，加透明质酸钠，充分润胀使溶解，搅匀，过微孔滤膜(0.22ym)，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为猪皮经过胃蛋白酶和胰酶的仿生酶解，再经过10kD的的超滤膜超滤得到)实施例三-处方硝酸毛果芸香碱20g胶原蛋白提取液50ml(含胶原蛋白5g)制法取苯氧乙醇加入到lOOOml已加热至约80。C的注射用水中，搅匀，放冷，加入硝酸毛果芸香碱，搅拌至完全溶解，加入胶原蛋白提取液，并加注射用水至2000ml，过微孔滤膜(0.22wm)滤过，滤液再加热至5(TC，趁热加入羟丙甲纤维素(50k70kmpas)，搅拌至室温，加注射用水至2000g，搅匀，形成均匀的凝胶，滤过(0.80um)，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为猪皮和牛皮经过胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解，再经过100kD的的超滤膜超滤得到)实施例四处方拉坦前列素0.lg胶原蛋白3g胶原提取液30ml(含胶原3g)制法取注射用水1600ml，加入结冷胶，搅拌均匀，置沸水浴中，搅拌至澄清，加入苯扎溴铵lg及透明质酸钠2g，搅匀，加入拉坦前列素及胶原蛋白，搅拌使溶解，再加入胶原提取液，加注射用水至2000ml，混匀，过微孔滤膜(0.22iim)，放冷，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为猪骨和牛骨经过胰蛋白酶酶解，再经过5kD的的超滤膜超滤得到；胶原以猪皮为原料，加乙酸调节pH为2.0，经胃蛋白酶酶解制得，相对分子量在250280kD)实施例五处方噻吗心胺5g盐酸毛果芸香碱20g胶原蛋白提取液40ml(含胶原蛋白4g)制法取注射用水800ml，加入结冷胶6g，搅拌均匀，置沸水浴中，搅拌至澄清，加入硼酸、硼砂，加入苯扎溴铵0.6g，搅匀，加入胶原蛋白提取液，加入噻吗心胺、盐酸毛果芸香碱，搅拌使溶解，加注射用水至1000ml，过微孔滤膜，无菌分装，即得。(注所用胶原蛋白为猪骨、牛骨经过胰酶酶解，再经过5kD的的超滤膜超滤得到)实施例六处方马来酸塞马洛尔5g胶原蛋白2g制法取马来酸塞马洛尔及胶原蛋白，加入到经灭菌、滤过后放冷的液体石蜡20g中，搅匀，再加入到已干热灭菌、滤过并冷至约50。C的凡士林890g和羊毛脂40g中搅匀凝固，即得。(注所用胶原蛋白为明胶和新阿胶经菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶酶解，再经过3kD的的超滤膜超滤得到)实施例七处方布林佐胺20g胶原2g制法取布林佐胺和胶原，过九号筛，灭菌，即得。(注胶原以猪骨和牛骨为原料，加乙酸调节pH为2.0，经胃蛋白酶酶解制得，相对分子量在260280kD)实施例八处方盐酸卡替洛尔20g胶原蛋白2g制法取聚乙烯醇30g、甘油5g，加入50ml注射用水中，浸泡至完全润透，至水浴上加热至80'C溶解，即得成膜材料原液；另取盐酸卡替洛尔及胶原蛋白，加注射用水20ml使溶解，加入上述成膜材料原液中，搅匀，置8(TC水浴保温30min，再倒入玻璃板(预先以液体石蜡涂抹)上，手工制膜约2000cm2，80。C鼓风干燥，立即脱膜，取出在紫外灯下灭菌45min，9切小块，无菌包装即得。(注所用胶原蛋白为猪骨经仿生酶解，再经过3kD的的超滤膜超滤得到)实施例九处方酒石酸溴莫尼定2g胶原蛋白提取液20ml(含胶原蛋白5g)制法将胶原蛋白提取液中加入酒石酸溴莫尼定，加入甲基丙烯酸羟乙酯、乙二醇，研匀，再加入12%过硫酸铵溶液和24%偏亚硫酸钠溶液，充分研匀，分别取5ml混合液于蒸发皿中，置于37。C超级恒温水浴锅中3h。取出，水洗后置于4。C备用。(注所用胶原蛋白为猪皮和猪骨经仿生酶解，再经过100kD的的超滤膜超滤得到)实施例十-取实施例四所得眼用即型凝胶治疗急性青光眼患者28例，共50只眼，其中男性17例，女性11例，年龄为4468岁。给药4次/d，12滴/次，7天为一疗程，2个疗程后观察。结果，有效18例，有效率为64%;显效8例，显效率为29°/。；无效2例，无效率为7%;总有效率达到93%。权利要求1、一种用于治疗青光眼的药物组合物，其特征在于该药物组合物有效成分的原料药为胶原蛋白和以下缩瞳、降压类药物中的任一种或多种盐酸可乐定、水杨酸毒扁豆碱、硝酸毛果芸香碱、拉坦前列素、曲沃前列素、比马前列素、噻吗心胺、酒石酸溴莫尼定、盐酸倍他洛尔、盐酸卡替洛尔、美替洛尔、溴莫尼定、布林佐胺、盐酸左旋布诺洛尔、布那唑嗪、马来酸塞马洛尔、左沙托烷。2、根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物有效成分中胶原蛋白与药物成分的比例为1:0.11:20。3、根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物有效成分中胶原蛋白与药物成分的比例为1:0.31:10。4、根据权利要求l、2或3所述的药物组合物，其特征在于其中的胶原蛋白以胶原代替，或以胶原与胶原蛋白的混合物代替。5、根据权利要求l、2或3所述的药物组合物，其特征在于所用胶原蛋白是由明胶、阿胶、新阿胶、猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟腱经酶解制得，其相对分子量不高于100kD。6、根据权利要求5所述的药物组合物，其特征在于所用胶原蛋白的相对分子量不高于10kD。7、根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于所用胶原蛋白的相对分子量不高于5kD。8、根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于所用胶原是由猪皮、牛皮、猪骨、牛骨、猪跟腱或牛跟腱制得，其相对分子量为250300kD。9、权利要求1至8中任一项所述药物组合物在制备用于治疗青光眼药物中的应用。10、如权利要求9所述药物组合物的用途，其特征在于所述青光眼包括先天性青光眼、原发性青光眼、继发性青光眼或混合型青光眼。全文摘要本发明公开了一种用于治疗青光眼的药物组合物，是由胶原蛋白和缩瞳、降压类药物组成的，属药学领域。该药物组合物有效成分的原料药为胶原蛋白和盐酸可乐定、水杨酸毒扁豆碱、硝酸毛果芸香碱等缩瞳、降压类药物，并组合现有技术制成各种眼用制剂。该技术方案创造性的将胶原蛋白和药物有效成分结合来应用于眼用制剂中，扩大了胶原蛋白的应用范围，在治疗多种青光眼方面取得了较好的效果。文档编号A61K38/39GK101648006SQ200810118308公开日2010年2月17日申请日期2008年8月13日优先权日2008年8月13日发明者朴美善,王广录申请人:北京和润创新医药科技发展有限公司