专利名称：敬钊缨毛蜘蛛毒素提取物敬钊毒素-v在制备戒毒药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种多肽活性物质在医用配制品中的用途，尤其是敬钊缨毛蜘
蛛毒素提取物一敬钊毒素一v在制备戒毒药物中的用途。
背景技术：
中国专利文献cn1872878 (zl 200610031864.5)公开了从敬钊缨毛蜘蛛粗 毒中提取分离出新型神经毒素一敬钊毒素一v (以下简写为jztx-v)的方法。 jztx- v是一种新型哺乳动物神经毒素，其化学结构为由29个氨基酸残基以特 定的顺序组成的多肽，含有三对链内二硫键，其化学结构如下式
j-S-S-j
nh2-y-c-q-k:-w-m-w-t-c-d-s-k:-r-a-c-c:-e:-g-l-r-c-k:-l-w-c-r-k-i-i-nh2
1-s-s-
发明内容
本发明的目的旨在提供敬钊缨毛蜘蛛毒素提取物一jztx-v在制备戒毒药 物中的应用，这种毒素能够明显减轻吗啡成瘾小鼠的戒断症状，另外，此毒素 还具有良好的镇痛效果且无类似阿片类药物成瘾等毒副作用，安全窗口大。
本发明所指的jztx-v的化学结构式如附图1所示，其中y为酪氨酸，c为 半胱氨酸，Q为谷氨酸，K为赖氨酸，W为色氨酸，M为甲硫氨酸，T为苏氨 酸，D为天门冬氨酸，S为丝氨酸，R为精氨酸，A为丙氨酸，E为谷氨酸，G 为甘氨酸，l为亮氨酸，i为异亮氨酸。jztx-v可作为单一有效活性组份用于 制备戒除阿片成瘾的药物。
阿片成瘾是指反复多次使用阿片类药物后，可形成精神依赖性和躯体依赖 性，急性停药后会产生一系列的戒断症状群，停用药物后相当长的一段时间内 存在稽延性戒断症状和药物渴求，是一种慢性复发性脑病。目前，戒毒药物主 要有几类，阿片受体激动剂，如美沙酮，实为阿片类药物替代疗法；非阿片受体激动剂，如可乐定，缓解戒断症状；阿片受体拮抗剂，如纳曲酮，用于脱毒 后防止复吸；中药类戒毒药。但是这些药物虽然对阿片成瘾戒断有不同的治疗 作用，但本身都有一定程度的副作用，戒毒效果不很理想。
JZTX- V可与特异性分布于外周神经元上的河豚毒素不敏感型钠离子通道 亚型(Navl.8、 Navl.9)以及河豚毒素敏感型钠离子通道亚型Navl.7结合，抑 制相关的电压门控钠离子通道电流而阻断神经信号的传导。JZTX-V具有明显的 抑制吗啡成瘾小鼠的戒断反应的作用，且没有明显的毒副作用。这已经被JZTX-V的药理、药效实验所证实。
图1是ZJTX-V的化学结构。
图2是JZTX-V对6天吗啡成瘾小鼠跳跃次数的影响。
图3是JZTX-V对6天吗啡成瘾小鼠体重丢失的影响。
图4是JZTX-V对一次注射吗啡成瘾小鼠跳跃次数影响。
图5是JZTX-V对一次注射吗啡成瘾小鼠体重丢失的影响。
图6是脑室注射JZTX-V对6天吗啡成瘾小鼠跳跃次数的影响。
图7是脑室注射JZTX-V对6天吗啡成瘾小鼠体重丢失的影响。
为了更好的理解和更充分的公开本发明，下面将结合附图与动物药理实验
对本发明作进一步的详细说明。
本发明将通过两种吗啡成瘾小鼠模型以及皮下注射与脑室注射两种用药途
径，说明JZTX- V的戒毒作用。图中*表示与模型组相比差异显著P<0.05，
***表示与模型组相比差异显著P〈0.001。
具体实施例方式
实施例l:皮下注射JZTX-V (其结构式如图l所示，下同)对6天吗啡成 瘾小鼠的治疗作用
1)实验用主要原料实验用JZTX-V是利用多肽合成仪进行芴甲氧羰基固 相化学合成后经反相HPLC分离纯化而得到，同时通过HPLC和MALDI-TOF 质谱仪鉴定，其纯度为98%以上；昆明小鼠由军事医学科学院动物房提供，体 重18-22 g之间，生理盐水与吗啡均由军事医学科学院毒物药物研究所提供。2) 6天吗啡成瘾小鼠模型的建立连续6天(3次/天)小鼠皮下注射吗啡， 每天每次吗啡注射剂量依次为10、 20、 30、 40、 50、 60 mg/kg。第七天注射一 次(吗啡浓度70mg/kg )， 5h后腹腔注射6 mg/kg纳洛酮催促戒断症状。阴性 对照每天皮下注射生理盐水(0.2ml/只)，注射时间、次数、纳洛酮催促与模型 组相同。
3) 药物剂量设置纳络酮催促前50min给予皮下注射药物治疗，被试药物 JZTX- V剂量为25 (ig/kg体重；阳性对照药物可乐定的剂量为250吗/kg体重， 阴性对照和吗啡模型组注射生理盐水，注射容量同以上测试药物。
4) 治疗效果评价跳跃次数(注射纳洛酮5min后记录15min内老鼠跳跃 的次数)；纳洛酮催促前后lh体重丢失。
5) 实验结果与分析
① 跳跃次数
模型组和各给药组的跳跃次数均显著多于对照，且具有统计学意义 (PO.OOl)。与模型组相比，可乐定组和JZTX-V (25|tig/kg)组跳跃次数显著减 少(P<0.05)，但可乐定和JZTX-V组间无差别(图2)。
② 催促前后lh体重丢失
从催促前后lh体重丢失可以看出，模型组体重丢失明显高于对照，且具有 统计学意义(PO.OOl)，证明模型成功。与模型组相比，可乐定组和JZTX-V(25 )Lig/kg)组体重丢失均显著降低(P<0.05)，但可乐定和JZTX-V组间无差别(图 3)。
总之，25pg/kg的JZTX-V表现出与可乐定相当的治疗效果。
实施例2:皮下注射JZTX-V对一次注射吗啡成瘾小鼠的治疗作用
1) 实验用主要原料JZTX-V合成见实验1;SD实验大鼠由北京大学医学
部动物中心提供，体重18-22g之间，生理盐水与吗啡均由北京大学医学部药物 依赖所提供。
2) l次吗啡注射小鼠模型的建立小鼠皮下注射吗啡，剂量为50mg/kg。 对照注射生理盐水(0.2ml/只)。4.5h后腹腔注射4mg/kg纳洛酮催促戒断症状。
3) 药物剂量设置纳络酮催促前50min给予皮下注射药物治疗，被试药物 JZTX-V设置四个剂量组，分别为17.5 mg/kg、 5.0吗/kg、 1.75吗/kg和0.5 |xg/kg 体重；对照和吗啡模型组注射生理盐水，注射容量同以上测试药物。
4) 治疗效果评价同实验l。
5) 实验结果与分析① 跳跃次数
模型组和各JZTX-V给药组的跳跃次数均显著多于对照，且具有统计学意义 (PO.Ol)。与模型组相比，JZTX-V的5和1.75pg/kg剂量组跳跃次数显著减少， (P<0.05)，但两个剂量之间无显著差异。其他两个17.5和0.5 pg/kg剂量组低于 模型组但差异不显著(图4)。
② 催促前后lh体重丢失
从催促后lh体重丢失结果得出，模型组体重丢失明显高于对照，且具有 统计学意义(PO.05),证明模型成功。与模型组相比，JZTX-V的5、 1.75和 0.5 pg/kg剂量组体重丢失均显著降低(P<0.05),但三者之间差异不显著。17.5 pg/kg剂量组低于模型组但差异不显著(图5 )。
总之，在低剂量(25 pg/kg)范围内JZTX-V都显示治疗效果，从所设4 个浓度实验结果得出，5和1.75 pg/kg两剂量治疗效果较好，此结果与JZTX-V 对6天吗啡成瘾小鼠的实验结果一致。
实施例3:小鼠脑室注射JZTX- V对6天吗啡成瘾小鼠的治疗作用
1) 实验用主要原料同实验2。
2) 6天吗啡成瘾小鼠模型的建立同实验1。
3) 药物剂量设置纳络酮催促前50min给予小鼠右侧脑室注射药物治疗， 被试药物JZTX-V为0.5 pg/kg体重；对照吗啡模型组注射生理盐水，注射容量 同以上测试药物。
4) 治疗效果评价同实验l。
5) 实验结果与分析
① 跳跃次数
模型组的跳跃次数均显著多于对照，且具有统计学意义(PO.OOl)，证明模 型建立方法有效。与模型组比，JZTX-V治疗组跳跃次数显著减少(P<0.001)， 且与对照相当(图6)。
② 催促前后lh体重丢失
从催促后lh体重丢失结果得出，模型组体重丢失明显高于对照组 (PO.OOl)，证明模型成功。与模型组相比，JZTX-V治疗组体重丢失显著降低 (PO.001)(图7)。
从实验2和3结果看，脑室给药效果约为实验2皮下注射的50倍，说明脑 室注射治疗JZTX-V直接作用于中枢神经系统，其戒毒的治疗效果更为显著。
权利要求
敬钊缨毛蜘蛛毒素提取物—敬钊毒素—V(简写为JZTX-V)在制备戒毒药物中的应用，所说的JZTX-V的化学结构式为其中Y为酪氨酸，C为半胱氨酸，Q为谷氨酸，K为赖氨酸，W为色氨酸，M为甲硫氨酸，T为苏氨酸，D为天门冬氨酸，S为丝氨酸，R为精氨酸，A为丙氨酸，E为谷氨酸，G为甘氨酸，L为亮氨酸，I为异亮氨酸，其特征在于JZTX-V作为单一有效活性组份用于制备戒毒药物。
全文摘要
本发明涉及一种多肽物质在医用配制品中的用途，尤其是用化学法制备的敬钊缨毛蜘蛛毒素提取物——敬钊毒素-V(简写为JZTX-V)在戒毒药物中的用途。JZTX-V可作为单一有效活性组份用于制备戒毒(阿片类毒品)药物。由于JZTX-V可以通过与分布于外周神经元上的河豚毒素不敏感型钠离子通道亚型(Nav1.8、Nav1.9)以及河豚毒素敏感型钠离子通道亚型Nav1.7结合，抑制相关的电压门控钠离子通道电流而阻断神经信号的传导，因此具有一定的戒除阿片成瘾的作用，且没有明显的毒副作用。可用于制备治疗阿片类毒品成瘾的戒毒药。
文档编号A61P25/00GK101543624SQ200910130169
公开日2009年9月30日 申请日期2009年3月20日 优先权日2009年3月20日
发明者刘中华, 曾雄智, 梁宋平, 鹏 陈 申请人:深圳金蜘蛛生物科技有限公司