利用分离的胎盘细胞治疗中风的制作方法

专利名称：利用分离的胎盘细胞治疗中风的制作方法
技术领域：
本发明提供利用分离的胎盘细胞，例如胎盘多能细胞、所述分离的胎盘细胞群、和 /或包含所述细胞的组合物治疗具有低氧性损伤、或脑内或脑周围血流破坏的个体的方法， 所述个体具有例如归因于脑内或脑周围血流破坏的神经性缺损的症状或缺陷。
背景技术：
中风亦称“脑中风”、脑血管损伤(CVA)或急性局部缺血脑血管综合症，为大脑功能的丧失，通常发展迅速，其病因是供给血液至脑或脑干的血管紊乱。所述紊乱可以是由例如血栓或栓塞形成引起的局部缺血(缺乏血液)或由于溢血。根据世界卫生组织，中风为持续超过M小时或在M小时内死亡而中断的脑血管神经性缺损病因。症状持续超过M 小时将中风和瞬时的局部缺血损伤(TIA)区分开，后者症状持续少于M小时。目前，局部缺血性中风的治疗通常包括抗血小板药物例如阿斯匹林、氯吡格雷、双嘧达莫或抗凝剂药物，例如丙酮苄羟香豆素，以降低或减轻引起局部缺血的障碍。此外，尽量保持正常的血糖水平，并且提供给中风患者充足的氧气和静脉注射液。出血性中风的治疗通常包括给予一种或多种降压药、除了非留体类抗炎药(NSAID)外的疼痛药、钙离子通道阻断剂(例如尼莫地平)、以及如果需要，进行手术以修复导致出血的血管裂口。然而，所述治疗仅试图减轻进行性的神经损伤，而无助于恢复已丧失的功能。已检测了许多非细胞神经保护剂治疗中风的功效，但都失败了，包括N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂、纳美芬、芦贝鲁唑、氯美噻唑、钙离子通道阻断剂(包括α-氨基-3-羟基-5-甲基异唑-4-丙酸拮抗剂、5-羟色胺激动剂(例如瑞匹洛坦)，以及跨膜钾通道调节剂)、替拉扎特、抗-ICAM-I抗体、人抗白细胞抗体(Hu23F2G)、抗血小板抗体(例如阿昔单抗)、胞磷胆碱(胞苷-5' - 二磷酸胆碱的外源形式)和碱性成纤维细胞生长因子。对于中风没有有效的疗法。因此，需要不仅能减轻任何原因导致的神经损伤，且能改善神经功能和预后的疗法。发明概述一方面，本发明提供了利用分离的胎盘细胞、分离的胎盘细胞群、包含分离的胎盘干细胞的细胞群和包含分离的胎盘细胞的组合物在用于治疗个体中枢神经系统(CNS)例如脑内或脊髓内或者脑和脊髓周围血流破坏的个体的方法。所述方法包括，例如治疗个体由于脑内或脑周围血流破坏而导致的神经性缺损症状的治疗，例如低氧损伤、缺氧损伤、中风(例如局部缺血或出血性中风)、非中风性出血或ΤΙΑ。如此处考虑的，治疗个体脑内或脑周围血流破坏导致的神经性缺损症状包括治疗个体脑内或脑周围血流破坏所伴随的再灌注损伤导致的神经性缺损症状。本发明对缺血性中风(例如，缺氧损伤或低氧损伤)的成功治疗已在被接收的动物中风模型中被验证。参见实施例1和实施例2。在一个方面，本发明提供了治疗脑内或脑周围血流破坏的个体的方法，例如个体脑或中枢神经系统(CNQ内或周围血流破坏导致的神经性缺损症状，所述方法包括将治疗有效量的分离的塑料贴壁组织培养人胎盘细胞给予所述个体，其中所述分离的胎盘细胞具有多能细胞或干细胞的特性。在某些实施方案中，血流破坏导致个体脑或CNS的缺氧损伤或低氧损伤。 在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘干细胞。在某些其它的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘多能细胞。在一个具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的胎盘细胞为CD34_、CD10+和CD105+的。在更具体的实施方案中， 所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞为胎盘干细胞。在另外更具体的实施方案中，所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞为多能胎盘细胞。在另外的具体实施方案中，所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞具有分化为成骨表型细胞或成软骨表型细胞的潜能。 在另一个实施方案中，所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞具有分化为神经表型细胞的潜能。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶;34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶200+。 在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞还为CD90+或CD45_&。在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的 ⑶34—、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶90+或⑶45—的。在更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述⑶;34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶90+或⑶45—的。在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的⑶;34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+细胞还为 CD90+和CD45_的。在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的CD34_、 CD10+、CD105+、CD200+、CD90+、CD45"细胞还为 CD8(T 和 CD86-的。在更具体的实施方案中，所述⑶;Μ—、⑶10+、⑶105+细胞还为⑶四+、⑶38\⑶44+、 ⑶M+、⑶80_、⑶86_、SH3+或SH4+中的一种或多种。在更具体的实施方案中，所述分离的 ⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶44+。在另外的具体实施方案中，所述⑶34—、CD10+、 CD105+ 胎盘细胞还为 CD13+、CD29+、CD33+、CD38\ CD44+、CD45\ CD54+、CD62E\ CD62L\ CD62P\ SH3+ (CD73+)、SH4+ (CD73+)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+ (CD105+)、CD106/VCAM+、CD117\ CD144/VE-钙粘蛋白 lOT、CD184/CXCR4\ CD200+、CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ ABC-p\ KDR"(VEGFR20、HLA-A、B、C+、HLA-DP、DQ、DIT、HLA-G+ 或程序性死亡 _1 配体(PDLl)+ 中的一种或多种，或它们的任何组合。在更具体实施方案中，所述⑶；34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为 CD13+、CD29+、CD33+、CD38_、CD44+、CD45_、CD54/ICAM+、CD62E_、CD62L_、CD62P_、SH3+ (CD73+)、 SH4+(CD73+)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+(CD105+)、CD 106/VCAM+、CD117\ CD 144/VE-钙粘蛋白 1<w、CD184/CXCR4\ CD200+、CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ ABC_p+、KDIT (VEGFR2。、HLA-A, B、C+、HLA-DP, DQ、DR\ HLA-G+ 和程序性死亡 _1 配体(PDLl) +。在其它的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶200+和HLA-G+ ；⑶73+、⑶105+和 CD200+ ；CD200+ 和 0CT-4+ ；CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ ；CD73+ 和 CD105+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一种或多种胚样体；或0CT-4+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一种或多种胚样体；或它们的任何组合。其它的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶⑶10+、⑶105+，且还为⑶200+和HLA-G+ ；⑶73+、⑶105+ 和 CD200+ ；CD200+ 和 0CT-4+ ；CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ ；CD73+ 和 CD105+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一种或多种胚样体；或0CT-4+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一种或多种胚样体；或它们的任何组合。在一个具体的实施方案中，所述⑶200+、HLA-G+胎盘细胞为⑶34_、⑶38_、⑶45_、 ⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盘细胞为⑶;34-、⑶38\⑶45-、CD73+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述⑶200+、0CT-4+干细胞为⑶拟-、⑶38\⑶45-、⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+和HLA-G+胎盘细胞为⑶汹-、CD45-、0CT-4+和CD200+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+和⑶105+胎盘细胞为0CT-4+、⑶34_、⑶38—和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述细胞为CD73+、CD105+、CD200+、CD;M\CD38-和CD45\在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶四+、⑶34_、⑶38_、⑶44+、 CD45\ CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3\ SSEA4\ OCT-4+、MHC-I+ 或 ABC-p+ 中的一种或多种，其中ABC-p为胎盘-特异性ABC转运蛋白(亦称乳腺癌耐受性蛋白(BCRP)和米托蒽醌耐受性蛋白(MXR))。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为CD10+、CD^T、 CD34\ CD38\ CD44+、CD45\ CD54\ CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3\ SSEA4"和 OCT-4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+，⑶四+、⑶;⑶38\⑶45\⑶M+、SH2+、SH3+ 和SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+，⑶四+、⑶34_、⑶38_、⑶45_、 ⑶M+、SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为CD10+， CD29+、CD34\ CD38\ CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、HLA_I+、SH2\ SH3\ SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和ABC-p+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+、CD34_、 SSEA3-和SSEA4-。在一个具体的实施方案中，所述0CT_4+、CD;M-、SSEA3-和SSEA4—细胞还为 CD10+、CD29+、CD34\ CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、SH2+、SH3+ 和 SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和⑶34_，并且SH3+或SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶;Μ、并且⑶10+、^四+、⑶44+、⑶M+、⑶90+、0CT-4+中任一种。在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶34—、⑶105+和⑶200+。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为CD10+、 CD29_、CD44+、CD45_、CD54/ICANT、CD62-E_、CD62-L_、CD62_P_、CD80_、CD86_、CD 103_、CD 104_、 CD105+、CD 106/VCAM+、CD144/VE-钙粘蛋白 low、CD184/CXCR4_、β 2-微球蛋白 low、HLA-Ilo\ HLA-ir、HLA-GlOT和/或PDL11 中的一种或多种。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为〔拟9_和CM4_。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为CD44+ 和CD106+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为CD^+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞以比等量骨髓来源的间充质干细胞可检测的更高水平表达一种或多种基因，其中所述一种或多种基因为ACTG2、ADARBl, AMIG02、ARTS-I、B4GALT6、BCHE、Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CP A4、DMD、DSC3、 DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl, IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、 IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、 SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A 中的一种或多种， 并且其中所述骨髓来源的间充质干细胞已经历与所述分离的胎盘细胞相同数量的传代培养。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在包含60% DMEM-LG(例如来自Gibco)和40%MCDB_201(例如来自Sigma) ；2%胎牛血清(例如来自Hyclone Labs. ) ；IX胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) ；IX亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ；KTi3M地塞米松(例如来自Sigma) ； IO4M抗坏血酸2-磷酸盐(例如来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL (例如来自 R&D Systems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB) 10ng/mL(例如来自R&D Systems)的培养基中培养约3至约35个群倍增时表达所述一种或多种基因。在更具体的实施方案中， 所述分离的胎盘细胞在包含60% DMEM-LG(例如来自Gibco)和40% MCDB-201 (例如来自 Sigma) ；2%胎牛血清(例如来自Hyclone Labs.) ；IX胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) ；IX 亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ； IO-9M地塞米松(例如来自Sigma) ； 1(Γ4Μ抗坏血酸2-磷酸盐(例如来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL(例如来自R&D Systems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB) lOng/mL (例如来自R&D Systems)的培养基中培养约3至约35个群倍增时表达所述一种或多种基因。在所述治疗方法的另外具体的实施方案中，所述胎盘干细胞表达神经营养性生长因子胶质细胞来源的神经营养因子(GDNF)、脑来源的神经营养因子(BDNF)、肝细胞生长因子(HGF)、胎盘生长因子(PGF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)。在另外具体的实施方案，所述分离的胎盘细胞包含在细胞群中，其中至少50%的细胞为所述分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞包含在细胞群中，其中至少70%的细胞为所述分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞包含在细胞群中，其中至少80%的细胞为所述分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞包含在细胞群中，其中至少90%的细胞为所述分离的胎盘细胞。在某些其它的实施方案中，所述细胞群中的胎盘细胞基本上不包括具有母系基因型的细胞；例如所述群中至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 90^^95^^98%或99%的胎盘细胞具有胎儿基因型，即为胎儿来源的。在某些其它的实施方案中，包含胎盘细胞的所述细胞群基本上不包括具有母系基因型的细胞；例如所述群中至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 的细胞具有胎儿基因型，即为胎儿来源的。在某些实施方案中，任何胎盘细胞，例如此处所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞对受者而言是自体同源的，例如受者为已患有中风或中风症状的个体。在某些其它的实施方案中，任何胎盘细胞，例如此处所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞对受者而言是异源的， 例如受者为已患有中风或中风症状的个体。在所述治疗方法的另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在给予之前冷藏。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞获自胎盘干细胞库。在任何上述分离的胎盘细胞的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在生长培养基 (即配制成促进增殖的培养基，例如在生长培养基中增殖期间促进增殖)中培养期间通常不分化。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞不需要饲养层来增殖。在另外具体的实施方案中，由于在不存在饲养细胞层时培养，所述分离的胎盘细胞在培养时不分化。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过灌注产后胎盘获得，其中所述胎盘已被排干血并被灌注以除去残余血液；或者所述胎盘已被排干血但未经灌注以除去残余血液；或者所述胎盘既不没有被排干血也未经灌注以除去残余血液。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过物理和/或酶促破坏胎盘组织获得。用于此处提供的方法的胎盘细胞的细胞表面、分子和遗传标记在以下5. 4. 2章节详细描述。在另外具体的实施方案中，所述血流破坏为中风。在更具体的实施方案中，所述中风为局部缺血性中风。在另外更具体的实施方案中，所述中风为出血性中风，例如颅内脑溢血或自发蛛网膜下出血。在另外具体的实施方案中，所述破坏为血肿。在更具体的实施方案中，所述血肿为硬脑膜血肿、硬膜下血肿或蛛网膜下血肿。在另外具体的实施方案中，所述血肿由对头骨的外部力量引起，例如头损伤。在另外具体的实施方案中，所述破坏为瞬时的局部缺血损伤(TIA)，例如周期性TIA。在另外具体的实施方案中，所述破坏为血管痉挛， 例如伴随出血性中风的血管痉挛。在所述方法另外具体的实施方案中，所述治疗有效量为使得所述个体由于脑或 CNS内或周围血流破坏的一种或多种症状或血流破坏所引起的神经性缺损(例如缺氧损伤或低氧损伤)消除、可检测的改善、严重程度的减轻、或者发展变缓的分离的胎盘细胞的量。在另外具体的实施方案中，所述治疗有效量的分离的胎盘细胞被预防性地给予个体，例如以降低或消除由血流破坏后第二或后续的脑或CNS内或周围血流破坏引起的神经性损伤。在另外具体的实施方案中，所述脑内或脑周围血流破坏的症状例如中风、缺氧损伤或低氧性损伤为以下病症中的一种或多种偏瘫(身体一侧麻痹)；轻偏瘫(身体一侧虚弱)；面部肌肉虚弱；麻木；感觉下降；嗅觉、味觉、听力或视力改变；嗅觉、味觉、听力或视力丧失；眼皮耷拉(下垂症)；可检测的眼肌肉虚弱；呕吐反射降低；吞咽能力降低；瞳孔光反应性降低；面部知觉降低；平衡降低；眼震症；呼吸速率改变；心率改变；锁骨乳突肌虚弱，转动头至一侧的能力降低或不能；舌虚弱；失语症(不能说或理解语言)；失用症(改变的自觉运动)；视野缺陷；记忆力缺损；半侧忽视或半侧空间忽视(对病变相对的视野另一侧空间的关注缺乏)；思维混乱；意识模糊；纵欲姿态的发展；疾病失认症(持续否认缺陷的存在)；难以行走；运动协同作用改变；目玄晕；不平衡；意识丧失；头痛或呕吐。在如上所述治疗方法的另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过弹丸注射给予。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过静脉注射注入给予。在一个具体的实施方案中，所述静脉注射注入超过约1至约8个小时。在另外具体的实施方案中， 所述分离的胎盘细胞头颅内给予。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞经腹膜给予。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞动脉内给予。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在局部缺血区域内给予。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在局部缺血外周区域内给予。在所述治疗方法另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为肌内、真皮内、皮下或眼内给予。在如上所述治疗方法的另一实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过包含所述分离胎盘细胞的组合物物质手术移植入所述个体而给予。在更具体的实施方案中，所述物质组合物为基质或支架。在另外更具体的实施方案中，所述基质或支架为水凝胶。在另外更具体的实施方案中，所述基质或支架为脱细胞组织。在另外更具体的实施方案中，所述基质或支架为合成的生物可降解组合物。在另外更具体的实施方案中，所述基质或支架为泡沫。在如上所述治疗方法的另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞一次性给予所述个体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞分两次或两次以上单独给予所述个体。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予每千克所述个体约IX IO4至IXlO5 个分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予每千克所述个体约IXIO5至IXIO6个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予每千克所述个体约1 XIO6至1 X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予每千克所述个体约1 XIO7至1 X IO8个分离的胎盘细胞。在其它具体的实施方案中，所述给予包括给予每千克所述个体约IX IO6至约2 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约2 X IO6至约3 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约3 X IO6至约4 X IO6 个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约4X IO6至约5X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约5 X IO6至约6 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约6 X IO6至约7 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约7X106至约8X106个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约8X IO6至约9X IO6个分离的胎盘细胞；每千克所述个体约9X IO6至约IX IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体约IX IO7至约2X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体约1. 3 X IO7至约1. 5 X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体上至约3X IO7个分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述给予包括给予个体约5X IO6至约2X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体约20毫升溶液中的150X 106个分离的胎盘细胞。
在一个具体的实施方案中，所述给予包括给予所述个体约5 X IO6至约2 X IO7个分离的胎盘细胞，其中所述细胞包含于包含10%葡聚糖(例如葡聚糖-40)、5%人血清白蛋白和任选的免疫抑制剂的溶液中。在另外具体的实施方案中，所述给予包括静脉内给予约5 X IO7至3 X IO9个分离的胎盘细胞。在更具体的实施方案中，所述给予包括静脉内给予约9X IO8个分离的胎盘细胞或约1.8X IO9个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括头颅内给予约 5X107至IXlO8个分离的胎盘细胞。在更具体的实施方案中，所述给予包括头颅内给予约 9 X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，如上所述的治疗方法包括给予第二种治疗剂至所述个体。在更具体的实施方案中，所述第二种治疗剂为神经保护剂。在更具体的实施方案中， 所述第二种治疗剂为NXY-059(苯基丁基硝酮的二磺酰基衍生物二钠4-((叔-丁基亚胺基)-甲基)苯-1，3- 二磺酸盐N-氧化物，或二钠4-((氧化-叔-丁基-二甲基亚氮鐺基) 甲基)苯-1，3-二磺酸盐；亦称二硫酚)。在另外更具体的实施方案中，第二种治疗剂为血栓溶解剂。在更具体的实施方案中，所述血栓溶解剂为组织纤溶酶原激活物(tPA)。在其中脑内或脑周围血流破坏为出血的实施方案中，第二种治疗剂可以为抗高血压药物，例如β 阻断剂或利尿药物，利尿药物和潴钾利尿药物的组合，β阻断剂和利尿药物的组合，血管紧张素-转化酶(ACE)抑制剂和利尿剂的组合，血管紧张素-II拮抗剂和利尿药物，和/或钙离子通道阻断剂和ACE抑制剂。在另外更具体的实施方案中，第二种治疗剂为钙离子通道阻断剂、谷氨酸拮抗剂、Y氨基丁酸(GABA)激动剂、抗氧化剂或自由基清除剂。在所述治疗方法另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的21-30天内，例如第21天，例如中风、缺氧损伤或低氧损伤症状形成的21-30天内，例如第21天，给予所述个体。在所述治疗方法另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的14天内给予所述个体。在所述治疗方法另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的7天内给予所述个体。在所述治疗方法另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的48小时内给予所述个体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的M小时内给予所述个体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的12小时内给予所述个体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在所述个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状形成的3小时内给予所述个体。3. 1 定义如此处所用的，术语“约”当涉及数值时，表示所述数值的士20%内的值。如此处所用的，术语“缺氧损伤”指损伤(例如由脑或CNS区域氧的整体缺乏)引起的神经学损伤或症状。如此处所用的，术语“低氧损伤”指损伤(例如由脑或CNS区域氧的部分缺乏)引起的神经学损伤或症状。如此处所用的，术语“SH2”指结合细胞标记⑶105上表位的抗体。因此，被称为 SH2+的细胞为CD105+。如此处所用的，术语“SH3和SH4”指结合呈现在细胞标记⑶73上的表位的抗体。 因此，被称为SH3+和/或SH4+的细胞为⑶73+。胎盘具有在其内发育的胎儿的基因型，但在妊娠期间其也与母系组织密切接触。 因而如此处所用的，相对于携带胎儿的母体的基因型，术语“胎儿基因型”指胎儿的基因型， 例如与胎盘有关的胎儿基因型，如此处所述，特定分离的胎盘细胞获自所述胎盘。如此处所用的，术语“母系基因型”指携带胎儿，例如与胎盘有关的胎儿的母体的基因型，如此处所述，特定分离的胎盘细胞获自所述胎盘。如此处所用的，术语“分离的细胞”，例如“分离的干细胞”指基本上与其它组织 (例如所述干细胞来源的胎盘)的不同细胞分开的细胞。如果至少50%,60^^70%、80%、 90 %、95%或至少99%与干细胞存在天然关联的细胞例如非-干细胞、或显示不同标记谱的干细胞在干细胞采集和/或培养期间从所述干细胞中除去，则所述干细胞为“分离的”。如此处所用的，“多能”当涉及细胞时，指细胞具有分化为一些而不必然是全部体细胞类型，或分化为具有一些而不是全部体细胞类型特性的细胞的能力。在某些实施方案中，例如具有分化为具有神经形成、软骨形成和/或成骨细胞特性的细胞之能力的分离的胎盘细胞为多能。如此处所用的，术语“分离的细胞群”指基本上与其它组织细胞(例如所述细胞群来源的胎盘)分开的细胞群。如此处所用的，不考虑形态、细胞表面标记或原代培养后传代数，术语“胎盘干细胞”指源自哺乳动物胎盘的干细胞或祖细胞。然而，如此处所用的术语“胎盘干细胞”不指以下细胞，即胎盘干细胞不是滋养层细胞、成血管细胞、造血成血管细胞、胚胎生殖细胞、胚胎干细胞、获自胚囊内细胞团的细胞、或获自晚期胚胎生殖腺脊的细胞，例如生殖细胞。如果细胞显示干细胞属性，例如与一种或多种干细胞类型有关的标记或基因表达谱；培养时复制至少10-40次的能力，以及分化为呈现三个胚层中一层或多层的已分化细胞之特性的细胞的能力，则认为所述细胞为“干细胞”。术语“胎盘干细胞”和“胎盘来源的干细胞”可互换使用。此处除非另作说明，术语“胎盘”包括脐带。在某些实施方案中，此处公开的分离的胎盘细胞在分化环境下体外分化、体内分化或体外体内都分化。如此处所用的，当标记可检测地大于背景时，胎盘细胞就是该特定标记为“阳性” 的。例如，由于CD73在胎盘干细胞上的量可检测地大于背景(例如，与同型对照相比)，因此胎盘干细胞是CD73阳性的。当标记可用于将所述细胞与至少一种其它细胞类型区分开时，或当所述标记在细胞中存在或表达时，该标记可用于选择或分离所述细胞，则该细胞也是所述标记阳性的。在例如抗体介导的检测中，当存在特定细胞表面标记时，“阳性”指所述标记可利用抗体检测，例如对该标记特异的荧光-标记抗体；“阳性”也指这样的细胞，其表现出的所述标记的量例如在细胞计数器中产生的信号可检测地大于背景。例如，细胞为 “CD200+”，其中该细胞可用CD200特异性抗体可检测地标记，并且来自该抗体的信号可检测地高于对照(例如背景或同型对照)。相反，相同情景下，“阴性”指相比对照(例如背景或同型对照)，利用所述标记特异性抗体检测不到细胞表面标记。例如，细胞为“CD34—”，指相比对照(例如背景或同型对照)，所述细胞不能以更大程度可重复检测地用CD34特异性抗体标记。利用合适的对照，以类似的方式来确定抗体所不能检测到的标记为阳性或阴性的。 例如，通过检测RNA的方法如RT-PCR、槽斑点等等所测定的，如果来自细胞或细胞群RNA中检测的0CT-4RNA的量可检测地大于背景，则所述细胞或细胞群被认为是0CT-4+。此处除非另作说明，利用抗体检测分化(“CD”)标记簇。在某些实施方案中，如果利用RT-PCR可检测0CT-4时，则确定0CT-4存在，并且细胞为“0CT-4+”。如此处所用的，“治疗”包含疾病、紊乱或病情或其任何参数或症状的治愈、治疗、 改善、严重程度减轻、病程缩短。附图简述

图1 提高身体摆动检测结果。纵轴摆动活力百分比偏差。横轴评估摆动活力的天数。基线为诱导局部缺血之前摆动活力的百分比偏差。在梗塞后第2天头颅内给予分离的胎盘细胞之前评估了百分比偏差摆动活力，并且在梗塞后第7和14天再次评估。有活力的400K:4X105个有活力的分离的胎盘细胞。无活力的无活力的胎盘干细胞。CsA:环胞素Α。图2 =Bederson检测结果。纵轴神经性缺损平均得分。横轴评估神经性缺损的天数。基线为诱导局部缺血之前的神经性缺损；0表示不缺损。梗塞后第2天给予分离的胎盘细胞时评估平均神经性活力，并且在梗塞后第7和14天再次评估。有活力的400Κ 4Χ IO5个有活力的分离的胎盘细胞。无活力的无活力的胎盘干细胞。CsA:环胞素Α。图3 提高身体摆动检测结果。纵轴摆动活力百分比偏差。横轴评估摆动活力的天数。基线为诱导局部缺血之前摆动活力的百分比偏差。在梗塞后第2天给予分离的胎盘细胞静脉内时评估百分比偏差摆动活力，并且在梗塞后第7和14天再次评估。无活力的无活力的胎盘干细胞。给予4Χ 105、1 X 106、4X IO6或8Χ IO6个有活力的分离的胎盘细胞(图例)。图4 =Bederson检测结果。纵轴神经性缺损平均得分。横轴评估神经性缺损的天数。基线为诱导局部缺血之前的神经性缺损；0表示不缺损。在梗塞后第2天给予分离的胎盘细胞静脉内时评估平均神经性活力，并且在梗塞后第7和14天再次评估。无活力的 无活力的胎盘干细胞。给予4X 105、1 X 106、4X IO6或8X IO6个有活力的分离的胎盘细胞 (图例)。图5 改进的神经严重程度得分检测结果。Y轴得分(参见表1计分方法)。X轴 大脑中动脉闭塞(MCAO)手术后的天数。PDA 胎盘干细胞；FBC-对照成纤维细胞对照；葡聚糖，无细胞对照；1PDA，1X106个细胞；4PDA，4X106个细胞；8PDA，8X IO6个细胞。Rx 给予细胞或葡聚糖。图6 粘贴物移除体感检测结果。Y轴移除粘贴测试物的秒数。X轴大脑中动脉闭塞(MCAO)手术后的天数。PDA 胎盘干细胞；FBC-对照成纤维细胞对照；葡聚糖，无细胞对照；1PDA，1X106个细胞；4PDA，4X106个细胞；8PDA，8 X IO6个细胞。Rx 给予细胞或葡聚糖。图7:足失误检测结果。Y轴在金属网格上100步中的足失误百分比。X轴进行足失误检测的治疗后天数(Rx)。*:接受4X IO6个胎盘干细胞(PDA-4M)的动物对比赋形剂对照动物，足失误检测显著改善(P < 0. 05)。# 接受4X IO6个胎盘干细胞(PDA-4M)的动物对比成纤维细胞对照的动物，足失误检测显著改善(P < 0. 05)。图8 大脑中动脉闭塞后治疗56天后血管生成的测定。胎盘干细胞治疗显著提高内皮细胞增殖以及局部缺血边界区(IBZ)中的血管密度和血管周长。N= 10/组。图8A: 石蜡脑切片的抗-BrdU抗体染色检测。Y轴局部缺血病变边界中的BrdU-阳性内皮细胞 (EC)百分比；X轴实验条件(MCAo-Dex 大脑中动脉闭塞-葡聚糖(最初的病情预处理)； 细胞-对照给予成纤维细胞；PDA-4M 给予4 X IO6个胎盘干细胞)。# :PDA_4M条件下对比成纤维细胞对照，内皮细胞增殖显著增加(P < 0. 05)。* :PDA-4M条件下对比葡聚糖(赋形剂)对照，内皮细胞增殖的显著增加(P < 0. 05)。图8B 用胎盘干细胞治疗后局部缺血边界区的血管密度。Y轴每mm2血管数；X轴实验条件(MCAo-Dex 大脑中动脉闭塞-葡聚糖(最初的病情预处理)；细胞-对照给予成纤维细胞；PDA-4M 给予4X IO6个胎盘干细胞)。# :PDA-4M条件下对比成纤维细胞对照，血管密度显著增加(ρ < 0. 05)。* :PDA_4M条件下对比葡聚糖(赋形剂)对照，血管密度显著增加(P < 0. 05)。图8C 局部缺血边界区周围血管周长的增加。Y轴血管周长的毫米长度；X轴实验条件(MCAo-Dex 大脑中动脉闭塞-葡聚糖(最初的病情预处理)；细胞-对照给予成纤维细胞；PDA-4M 给予4X IO6个胎盘干细胞)。# :PDA-4M条件下对比成纤维细胞对照，血管周长长度显著增加(ρ < 0. 05)。 *:PDA-4M条件下对比葡聚糖(赋形剂)对照，血管周长长度显著增加(p<0.05)。图9 胎盘干细胞治疗显著提高局部缺血脑的局部缺血边界中突触素的表达。N = 10/组。Y轴检测石蜡脑切片中检查区域的突触素％ ；X轴实验条件。MCAo 大脑中动脉闭塞时突触素的表达；细胞-对照给予成纤维细胞；PDA-4M 给予4X IO6个胎盘干细胞。 * :PDA-4M对比成纤维细胞对照，突触素表达区域的显著增加。发明详述5. 1脑内和脑周围血流破坏的治疗此处提供用于治疗脑内或脑周围血流破坏的个体的方法，例如对个体脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状或血流破坏所引起的神经性缺损的治疗，包括给予个体治疗有效量的分离的塑料贴壁组织培养人胎盘细胞，其中所述分离的胎盘细胞具有多能细胞或干细胞的特性，并且其中所述分离的胎盘细胞不是骨髓来源的间充质细胞、脂肪来源的间充质干细胞或者获自脐带血、胎盘血或外周血的间充质细胞。在某些实施方案中，所述损伤为低氧损伤或缺氧损伤。在此处提供的某些实施方案中，所述治疗有效量为使所述个体表现出的脑内或脑周围血流破坏的一种或多种症状或血流破坏所引起的神经性缺损消除、可检测的改善、严重程度减轻、或者发展变缓的量。在一个具体的实施方案中，一种或多种症状或神经性缺损，例如中风症状、低氧损伤或缺氧损伤，至少在某种程度上或全部归因于血流破坏后的再灌注损伤。如此处所用的， “再灌注损伤”指在局部缺血一段时期中断血液供给后恢复组织血液供给时引起的组织损伤。局部缺血期间血源性氧和营养缺乏产生以下情形，其中循环的恢复通过引起氧化应激而不是通过恢复正常功能而引起炎症和氧化损伤。如此处所用的，所述治疗血流破坏的内容中，术语“脑内或脑周围血流的破坏”包括治疗具有血流所述破坏的个体表现出的一种或多种症状以及血流破坏所引起的个体神经性缺损，例如一种或多种中风症状、低氧损伤或缺氧损伤。在某些实施方案中，所述一种或多种症状为主要或全部归因于局部缺血本身的一种或多种症状。在某些其它的实施方案中，所述一种或多种症状为主要或全部归因于例如与局部缺血有关的再灌注损伤。5. 2 中风可通过此处提供的方法治疗的脑内或脑周围血流的破坏可以是在受影响的个体中导致一种或多种可检测症状或神经性缺损的任何血流破坏(见下文)。在某些实施方案中，所述血流破坏为中风，例如局部缺血性中风或出血性中风，例如颅内脑溢血。在某些其它的实施方案中，所述血流的破坏为脑外出血，例如硬脑膜血肿、硬膜下血肿或蛛网膜下血肿。在某些其它的实施方案中，所述血流破坏为瞬时的，例如瞬时局部缺血损伤(TIA)。在某些其它的实施方案中，所述血流破坏为血管痉挛。在一个具体的实施方案中，所述脑中的血流破坏存在于大脑中。在更具体的实施方案中，所述破坏存在于大脑顶叶、额叶、颞叶或枕叶。在另外具体的实施方案中，所述破坏存在于小脑中。在另外具体的实施方案中，所述破坏存在于脑干或脊柱中。在某些实施方案中，所述破坏引起低氧损伤或缺氧损伤。在一个实施方案中，此处提供了治疗患有低氧损伤或缺氧损伤例如中风(例如中风患者)个体的方法，包括给予所述个体例如以下5. 4. 2节所述的治疗有效量的分离的塑料贴壁组织培养人胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述治疗有效量为使所述个体表现出的中风的一种或多种症状消除、可检测的改善、严重程度减轻或者发展变缓的量。所述分离的胎盘细胞，例如大量分离的胎盘细胞或其分离的群可以是例如以下5. 4. 2节所述的任何分离的胎盘细胞。根据此处提供的方法能治疗的中风可以是任何病因引起的中风。在一个具体的实施方案中，所述中风为局部缺血性中风。在更具体的实施方案中，所述局部缺血性中风为血栓形成引起的中风或栓塞中风。在另外具体的实施方案中，所述中风是由于全身的灌注不足，即流至身体所有部位的血流减少；或静脉血栓形成引起的。在其它具体的实施方案中，所述局部缺血性中风由以下病因引起心纤维性颤动，例如心房纤维性颤动；突发性心房纤维性颤动；风湿疾病；二尖或主动脉瓣疾病；人造心脏瓣膜；心房或心室的心血栓；病窦综合症；持续的心房扑动；心肌梗塞；射血分数少于的慢性心肌梗塞；射血分数少于30%的有症状的充血性心力衰竭；心肌病；心内膜炎，例如Libman-Sacks心内膜炎、消耗性心内膜炎或感染性心内膜炎；乳头状弹力纤维瘤；左房粘液瘤；冠状动脉旁路术移植手术； 二尖瓣环钙化；卵圆孔未闭；房隔膜动脉瘤、无血栓的左心室动脉瘤、超声心动图显示的无二尖狭窄或心房颤动的单独左房“雾化”；和/或升主动脉或主动脉弓近端的复杂动脉粥样化。在另外具体的实施方案中，所述中风为出血性中风。在更具体的实施方案中，所述出血性中风由轴内出血(脑内部血液渗漏)引起。在另外更具体的实施方案中，所述出血性中风由轴外出血(脑外部头骨内部的血液渗漏)引起。在更具体的实施方案中，所述中风由薄壁组织内出血、心室内出血(心室系统中的血液)、硬膜外血肿(硬脑膜和头骨之间流血)、硬膜下血肿(硬膜下空隙流血)或蛛网膜下出血(蜘蛛膜和软脑膜之间)引起。大多数出血性中风综合症具有特定的症状(例如头痛、先前的头部损伤)。在其它更具体的实施方案中，所述出血性中风由高血压、创伤、流血紊乱、淀粉样蛋白血管病、违禁药品的使用 (例如安非他明或可卡因)或血管畸形引起或与之有关。在另一个实施方案中，此处提供治疗脑或CNS中或周围血流破坏的个体的方法， 例如治疗个体脑或CNS中或周围血流破坏的一种或多种症状或血流破坏引起的神经性缺损，包括给予所述个体治疗有效量的分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，其中所述血流破坏的直接病因不是中风，例如闭合的头损伤或非-冲击-相关的血肿。在一个具体的实施方案中，所述治疗有效量为使所述个体表现出的所述血流破坏的一种或多种症状消除、可检测的改善、严重程度减轻、或者发展变缓的量。如中风一样，分离的胎盘细胞可以是例如以下5. 4. 2节所述的任何胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞。如上所述，在某些实施方案中，此处提供的治疗方法使脑或CNS中或周围血流破坏的一种或多种症状或血流破坏引起的神经性缺损(例如中风、血肿引起的例如缺氧损伤或低氧损伤)消除、可检测的改善、严重程度减轻、或者发展变缓。在具体的实施方案中，所述症状或神经性缺损包括偏瘫(身体一侧麻痹)；轻偏瘫(身体一侧虚弱)；面部肌肉虚弱； 麻木；感觉下降；嗅觉、味觉、听力或视力改变；嗅觉、味觉、听力或视力丧失；眼皮耷拉(下垂症)；眼肌肉虚弱；呕吐反射降低；吞咽能力降低；瞳孔光反应性降低；面部知觉降低；平衡降低；眼震症；呼吸速率改变；心率改变；不能转动头至一侧的锁骨乳突肌虚弱，或能力降低；舌虚弱；失语症(不能说或理解语言)；失用症(改变的自觉运动)；视野缺陷；记忆力缺损；半侧忽视或半侧空间忽视(对病变相对的视野另一侧空间的关注缺乏)；混乱思维；意识模糊；纵欲姿态的发展；疾病失认症(持续否认缺陷的存在)；难以行走；运动协同动作改变；眩晕；不平衡；意识丧失；头痛和/或呕吐。脑或CNS中或周围血流破坏的严重程度例如中风或中风症状和/或中风引起的神经性缺损的严重程度可以利用一种或多种普遍-接受的神经学功能评分来评估。例如，在一个实施方案中，此处提供治疗脑或CNS中或周围血流破坏的个体的方法，例如患有个体脑内或脑周围血流破坏引起的症状或神经性缺损，例如低氧损伤或缺氧损伤的个体，包括给予所述个体治疗有效量的分离的人贴壁胎盘细胞，其中所述治疗有效量为足以引起个体神经学功能可检测的改善或可检测和持续的改善的胎盘细胞量，所述神经学功能通过一种或多种改进的Rankin评分、NIH中风评分、Canadian神经病学评分(CNS)、昏迷评分(GCS)、Hempispheric中风评分、Hunt&Hess评分、Mathew中风评分、细微精神状态检查(MMSE)、Orgogozo中风评分、Oxfordshire Community中风计划分类 (Bamford) ,Scandinavian中风评分、日本昏迷评分(JCS) ,Barthel指数和/或日本中风评分(JSQ评估。在具体的实施方案中，所述改善在最初的评估以及在一次或多次给予分离的胎盘细胞后的1、2、3、4、5或6天内，或1、2、3、4、5、6、8、9、10、11或12周内是可检测到的。 在其它具体的实施方案中，所述最初的评估在一次或多次中风症状形成后的1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22 或 23 小时内，或 1、2、3、4 或 5 天内进行。在其它实施方案中，无论是否测定，所述改善持续例如超过至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、 10、11或12个月，或1、2、3、4、5年或以上。5. 3给予分离的胎盘细胞此处提供的治疗方法中使用的分离的胎盘细胞可以通过任何医学上可接受的方法或途径给予表现出脑内或脑周围血流破坏引起的或缘自所述破坏的一种或多种症状或神经性缺损的个体。在一个实施方案中，所述治疗有效量的分离的胎盘细胞经头颅内给予所述个体，例如给至个体受影响的脑或CNS中的局部缺血或出血性部位。对于颅内给予，所述中风位置(例如受影响区域)可以例如通过CT扫描、核磁共振(MRI)(例如Τ1-、Τ2_、扩散-和/或灌注-加权MR)、钴-55正电子放射层析X线断层造影或类似技术显现。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过静脉内或动脉内给予所述个体。在另外的实施方案中，所述治疗有效量的分离的胎盘细胞通过肌内、腹膜内、真皮内、皮下、眼内或肠胃外给予所述个体。所述分离的胎盘细胞可通过弹丸注射或静脉注射注入给予。在一个具体的实施方案中，所述静脉注射注入为超过约1至约8个小时的静脉注射注入。在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞通过组合途径，例如头颅内以及通过静脉注射注入给予所述个体。所述治疗有效量的分离的胎盘细胞可根据个体年龄和/或体重以及局部缺血区域的大体体积而不同。局部缺血区域的大概体积和位置可例如通过连续核磁共振图像或计算机X线断层造影(CT)扫描估计。例如单次剂量中给予的分离的胎盘细胞数，可每次给予约为或至少，或超过例如 1X105、5X105、1X106、5X106、1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109、1X1010、 5 X IO10,1 X IO11或5 X IO11个分离的胎盘细胞。Z具体的实施方案中，患有脑内或脑周围血流的破坏的个体，例如患有中风、缺氧损伤或低氧损伤的个体可静脉内给予约5X IO7至约 3X IO9个分离的胎盘细胞。在更具体的实施方案中，患有脑内或脑周围血流的破坏的个体， 例如患有中风、低氧损伤或缺氧损伤的个体可静脉内给予约9X IO7个分离的胎盘细胞、约 3. 6 X IO8个分离的胎盘细胞、约9 X IO8个分离的胎盘细胞或约1. 8 X IO9个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，个体静脉内给予一次剂量约2X IO8个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，个体静脉内给予一次剂量约8X IO8个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，个体静脉内给予两次剂量，每次包括约2X IO8个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，个体静脉内给予两次剂量，每次包括约8X108个分离的胎盘细胞。在其它更具体的实施方案中，患有脑或CNS中或周围血流破坏的个体，例如患有中风、低氧损伤或缺氧损伤的个体可头颅内给予约5X IO7至约IX IO8个分离的胎盘细胞。在更具体的实施方案中，所述个体头颅内给予约9X IO7个分离的胎盘细胞。可在疗程中给予患有脑或CNS中或周围血流破坏、所述破坏的症状和/或所述破坏引起的神经性缺损的个体一次或一次以上，例如两次或更多次的分离的胎盘细胞。所述分离的胎盘细胞可以用适合颅内给予的合适体积给予，例如约100μ L、200y L、300y L、 400μ L、500y L、600y L、700y L、800y L、900y L、1000y L、l. 5mL、2mL、2. 5mL、3mL、3. 5mL、 4mL、4. 5mL、5mL、5. 5mL、6. 0mL、6. 5mL、7mL、7. 5mL、8mL、8. 5mL、9mL、9. 5mL、10mL、llmL、12mL、 13mL、14mL、15mL、16mL、17mL、18mL、19mL、20mL、21mL、22mL、23mL、24mL、25mL、26mL、27mL、 ^mL、29mL或约30mL药学可接受溶液。对于静脉注射给予，大量分离的胎盘细胞(例如约 1X105、5X105、1X106、5X106、1X107、5X107、1X108、5X108、1X109、5X109、1X1010、 5 ΧΙΟ10、IX IO11 或 5 X IO11)可以例如约或不超过 100mL、150mL、200mL、250mL、300mL、 350mL、400mL、450mL、500mL、550mL、600mL、650mL、700mL、750mL、800mL、850mL、900mL、 950mL、1000mL、l. 1L、1. 2L、1. 3L、1. 4L 或 1. 5L，例如通过静脉注射注入。在其他的实施方案中，给予所述个体约每千克个体(例如具有脑或CNS中或周围血流破坏引起的或缘于所述破坏或再灌注损伤的一种或多种症状或神经性缺损的个体)IX IO6至约2X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约2X IO6至约3X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约3 X IO6至约4X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约4X XlO6至约 5 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约5 X IO6至约6 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约6 X IO6至约7 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约7 X IO6至约8 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约8 X IO6至约9 X IO6个分离的胎盘细胞；每千克个体约9 X IO6至约 IX IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体约1 X IO7至约2 X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体约1.3X107至约1.5X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体每千克所述个体总共约3X IO7个分离的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体约20毫升溶液中的15X IO7个分离的胎盘细胞。在一个优选的实施方案中，分离的胎盘细胞的给予包括给予不超过约1升溶液中的、每千克受者不超过7. 5 X IO6个分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述给予包括例如头颅内给予个体约5X IO6至约2X IO7个分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述给予包括头颅内给予所述个体每千克约5 X IO6至约3 X IO7个分离的胎盘细胞，其中所述细胞包含于含有10%葡聚糖，5%人血清白蛋白和任选的免疫抑制剂，例如环胞素A的溶液中。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予所述个体约1 X IO9至约3 X IO7个胎盘多能细胞，其中所述细胞包含于含有10%葡聚糖，5%人血清白蛋白和任选的免疫抑制剂，例如环胞素A的溶液中。在另外具体的实施方案中，所述给予包括给予个体约20毫升溶液中的25X IO7个分离的胎盘细胞。在任何上述实施方案中，所述分离的胎盘细胞可静脉内或头颅内给予，例如作为丸剂或滴剂。又一个具体的实施方案中，所述给予包括给予个体约20 毫升溶液中的2X IO8个分离的胎盘细胞。所述分离的胎盘细胞可输注任何医学上可接受一段时间。在不同的实施方案中， 例如可给予如上所述数目的分离的胎盘细胞，例如在15、20、25、30、35、40、45、50或55分钟内或不超过上述时间，或者在1小时或1. 5、2、2. 5、3、3. 5、4、4. 5、5、5. 5或6小时内或不超过上述时间，通过静脉内或头颅内输注。分离的胎盘细胞可在例如低氧损伤或缺氧损伤引起的一种或多种症状或神经性缺损形成后的任何时候给予脑或CNS中或周围血流破坏的个体。在不同的实施方案中，分离的胎盘细胞在个体表现出第一种症状或神经性缺损形成后的第21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3或2天内给予；优选分离的胎盘细胞在所述个体中第一种可检测症状或神经性缺损形成后的第48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、；35、34、 33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、 7、6、5、4、3或2小时内给予，或所述个体中第一种可检测症状或神经性缺损形成后的第一个小时内给予。在其他的实施方案中，所述分离的胎盘细胞例如在脑或CNS中或周围血流破坏的一种或多种症状、中风症状、低氧损伤或缺氧损伤显现或可检测之前预防性地给予。对具有脑或CNS中或周围血流破坏的个体的治疗，包括给予所述个体分离的胎盘细胞，可进一步包括给予所述个体一种或多种第二种治疗剂。所述第二种治疗剂可在给予分离的胎盘细胞之前、给予所述分离的胎盘细胞期间或给予所述分离的胎盘细胞之后给予。所述第二种治疗剂给予的次数可以少于、多于或等于所给予分离的胎盘细胞的次数。第二种治疗剂可以是对患有脑或CNS中或周围血流破坏的个体具有治疗益处的任何制剂。在一个实施方案中，所述治疗剂为制剂，例如药物，其用于治疗中风、低氧损伤或缺氧损伤。在一个具体的实施方案中，第二种治疗剂为神经保护剂。在一个具体的实施方案中，所述神经保护剂为二硫酚钠(NXY-059 ；苯基丁基硝酮的二磺酰基衍生物)，其结构如下显示
O
1-0" Na+
Il
O在另一个实施方案中，所述个体患有出血性中风，第二种治疗剂为降低所述个体血压的治疗剂。在另一个实施方案中，第二种治疗剂为血栓溶解剂。在一个具体的实施方案中，所述血栓溶解剂为组织纤溶酶原激活物(tPA)。tPA可以是天然来源的或重组的。在更具体的实施方案中，tPA在所述个体中一种或多种症状或神经性缺损形成后的三个小时内给予。在另外更具体的实施方案中，tPA在中风患者中中风的一种或多种症状形成三个小时后给予。在某些实施方案中，禁忌使用血栓溶解剂，例如当中风患者具有头部损伤或当中风是由头部损伤引起时。在另外具体的实施方案中，第二种治疗剂为抗凝血剂或抗血小板剂。在脑或CNS中或周围血流破坏为出血的实施方案中，第二种治疗剂可以为抗高血压药物，例如β阻断剂或利尿药物、利尿药物和潴钾利尿药物的组合、β阻断剂和利尿药物的组合，血管紧张素-转化酶(ACE)抑制剂和利尿剂的组合、血管紧张素-II拮抗剂和利尿药物，和/或钙离子通道阻断剂和ACE抑制剂。在另一个实施方案中，给予第二种治疗剂以降低颅内压。在更具体的实施方案中，第二种治疗剂为利尿剂。在给予的分离的胎盘细胞与患有脑或CNS中或周围血流破坏个体不是自体同源的实施方案中，第二种治疗剂可以是免疫抑制剂。免疫抑制剂为本领域熟知并且包括，例如抗-T细胞受体抗体(单克隆或多克隆的，或其抗体片段或衍生物，例如莫罗单抗-CD3)、 抗-IL-2受体抗体(例如巴利昔单抗(SIMULECT )或达珠单抗(ΖΕΝΑΡ AX) )、咪唑硫嘌呤、皮质留类、环胞素、他克莫司、麦考酚酸吗啉乙酯、西罗莫司、钙调神经磷酸酶抑制剂等等。在一个具体的实施方案中，所述免疫抑制剂为巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-Ia或 MIP-I β的中和抗体。优选的，给予的所述抗-MIP-I α或MIP-I β抗体的量例如足以引起所述个体中MIP-I α和/或MIP-I β的量可检测地降低。5. 4分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群可用于治疗患有脑或CNS中或周围血流破坏，包括其引起的症状和神经性缺损的个体的分离的胎盘细胞为从胎盘或其部分获得的细胞，其粘附(即，贴壁)于组织培养底物并且具有多能细胞或干细胞的特性，但不是滋养层细胞。在某些实施方案中，可用于此处公开的方法的分离的胎盘细胞具有分化为非胎盘细胞类型的能力。可用于此处所公开方法的分离的胎盘细胞可以是胎儿或母体来源的(即，可以分别具有胎儿或母体的基因型)。优选的，所述分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群为胎儿来源的。如此处所用的，短语“胎儿来源的”或“非母体来源的”表示所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群获自与胎儿有关的脐带或胎盘结构，即具有胎儿基因型。如此处所用的，短语“母体来源的”表示所述细胞或细胞群获自与母体有关的胎盘结构，例如其具有母体基因型。分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群可包括仅仅为胎儿或母体来源的分离的胎盘细胞，或可包括胎儿和母体来源的混合的分离胎盘细胞群。所述分离的胎盘细胞和包含分离的胎盘细胞的细胞群可通过下述形态学、标记和培养特性进行鉴定和选择。在某些实施方案中，任何胎盘细胞，例如此处所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞为受者自体同源的，例如受者为已患有中风或患有中风症状的个体。在某些其他的实施方案中，任何胎盘细胞，例如此处所述的胎盘干细胞或胎盘多能细胞为受者异源的，例如受者为已患有中风或患有中风症状的个体。5. 4. 1物理和形态学特性此处所述的分离的胎盘细胞，当在原代培养或细胞培养时，粘附于组织培养底物， 例如组织培养容器表面(例如组织培养塑料制品)，或粘附于涂有细胞外基质或配体如层粘连蛋白、胶原(例如天然的或变性的)、明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜蛋白 (例如MATRIGEL (BD DiscoveryLabware, Bedford, Mass))的组织培养表面。培养中的所述分离的胎盘细胞呈现常见的成纤维样、星状外形，具有自中心细胞体延伸的许多胞质突起。然而，所述细胞在形态上与相同条件下培养的成纤维细胞可区分，因为所述分离的胎盘细胞具有比成纤维细胞更多的所述突起。分离的胎盘细胞在形态上还可与造血干细胞区分，造血干细胞通常在培养中呈现更圆或鹅卵石状的形态。在某些实施方案中，可用于此处公开的治疗方法的所述分离的胎盘细胞，当在生长培养基中培养时，形成胚样体。胚样体为可在增殖的分离的胎盘细胞贴壁层上生长的非汇合细胞块。使用术语“胚-样”是因为所述细胞块类似胚体，其为生长自胚胎干细胞培养物的细胞块。可供胚样体在增殖的分离的胎盘细胞培养物中发育的生长培养基包含例如DMEM-LG(例如来自Gibco) ；2%胎牛血清(例如来自HycloneLabs. ) ；IX胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) ；IX亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ；IOl地塞米松(例如来自 Sigma) ； IO4M抗坏血酸2-磷酸盐(例如来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL (例如来自R&D Systems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB) 10ng/mL(例如来自R&D Systems)。 5. 4.2细胞表面的分子和遗传标记 可用于此处公开的治疗方法的所述分离的胎盘细胞，例如多能细胞或干细胞以及分离的胎盘细胞群，为塑料贴壁组织培养人胎盘细胞，其具有多能细胞干细胞的特性，并且表达可用于鉴定和/或分离所述细胞或包括所述干细胞的细胞群的多种标记。此处所述的分离的胎盘细胞和胎盘细胞群(即两种或多种分离的胎盘细胞)包括胎盘细胞和含有直接获自胎盘或其任何部分(例如羊膜、绒毛膜、胎盘绒毛叶等等)的细胞群的胎盘细胞。分离的胎盘细胞群还包括培养中的分离的胎盘细胞群(即两种或多种)，和容器例如袋中的细胞群。此处所述的分离的胎盘细胞不是骨髓来源的间充质细胞、脂肪来源的间充质干细胞或获自脐带血、胎盘血或外周血的间充质细胞。在某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘干细胞。在某些其他的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘多能细胞。在一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为如流式细胞计检测的CD34_、CDlO+和CD105+。在具体的实施方案中，所述分离的 ⑶34—、⑶10+、⑶105+胎盘细胞为胎盘干细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶34_、 CD10+、CD105+胎盘细胞为多能胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD34_、 CD10+、CD105+胎盘细胞具有分化为神经表型细胞、成骨表型细胞和/或成软骨表型细胞的潜能。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶;34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶200+。 在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶45—或⑶90+。 在另外具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞还为CD90+。在更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的CD34_、 ⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶90+或⑶45—。在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的⑶;34_、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶90+或⑶45_，即所述细胞为⑶汹-、⑶10+、⑶45-、⑶90+、⑶105+和⑶200+。在更具体的实施方案中，所述⑶; CD10+、CD45\ CD90+、CD105、CD200+ 细胞还为 CD8(T 和 CD86\在具体的实施方案中，如上所述的任何⑶34—、⑶10+、⑶105+细胞还为⑶四+、 ⑶38_、⑶44+、⑶M+、SH3+或SH4+中的。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶34_、⑶10+、 ⑶105+胎盘细胞还为⑶44+。以上任何分离的⑶34TD10+、⑶105+胎盘细胞另外具体的实施方案中，所述细胞还为 CDl CD133\ KDR"(VEGFR2l、HLA-A, B、C+、HLA-DP, DQ、DIT 或程序性死亡-1配体(PDLl)+中的一种或多种，或任何它们的组合。在另一个实施方案中，所述⑶;⑶10+、⑶105+细胞还为⑶13+、⑶四+、⑶33+、 CD38\ CD44+、CD45\ CD54\ CD62E\ CD62L\ CD62P\ SH3+ (CD73+)、SH4+ (CD73+)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CDl CD144/VE-钙粘蛋白 1<w、CD184/CXCR4\ CD200\ CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ABC-p\ KDR- (VEGFR2)、HLA-A、B、C+、HLA-DP、DQ、DR\ HLA-G+ 或程序性死亡-1配体(PDLl)+中的一种或多种，或任何它们的组合。其他实施方案中，所述 CD34\ CD10+、CD105+ 细胞还为 CD13+、CD29\ CD33+、CD38\ CD44+、CD45\ CD54/ICAM\ CD62E\ CD62L\ CD62P\ SH3. (CD73.)、SH4. (CD73.)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+ (CD105.)、CD106/VCAM+、 CD117\ CD144/VE-钙粘蛋白 1()W、CD184/CXCR4\ CD200+、CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ ABC-p+、KDIT(VEGFR2)、HLA-A、B、C+、HLA-DP、DQ、DIT、HLA-G+和程序性死亡-1 配体(PDL1)+。在某些实施方案中，所述细胞为SSEA3—、SSEA4—或ABC_p+中的一种或多种。所述分离的胎盘细胞还可以表达HLA-ABC(MHC-I)。这些标记可以以任何组合使用，以鉴定所述分离的胎盘细胞，例如，分离的胎盘干细胞或分离的多能细胞，并且区分分离的胎盘细胞和其他细胞类型。由于所述分离的胎盘细胞可表达CD73和CD105，其可具有间充质干细胞样的特性。例如不表达CD34、CD38和/或CD45，则鉴定所述分离的胎盘细胞为非造血干细胞。此处还提供分离的胎盘细胞群或细胞群，例如包含可用于此处公开的治疗方法的富集的分离胎盘细胞的胎盘细胞群。优选包括所述分离的胎盘细胞的细胞群，其中所述细胞群可用于此处公开的治疗方法，所述细胞群包含例如至少10^^15^^20^^25^^30%, 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 98%分离的 CD10+、CD105+和 CD341 台盘细胞；即所述群中至少 10% ,15% ,20% ,25% ,30% ,35% ,40%, 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 98% 的细胞为分离的 ⑶10+、⑶105+和⑶34—胎盘细胞。在具体的实施方案中，所述分离的⑶34_、⑶10+、⑶105+ 胎盘细胞还为CD200+。在更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的CD34_、 ⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶90+或⑶45—。在另外更具体的实施方案中，如流式细胞计检测的，所述分离的⑶34—、⑶10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶90+和⑶45_。在更具体的实施方案中，如上所述的任何分离的⑶34_、⑶10+、⑶105+胎盘细胞还为⑶四+、⑶38_、 ⑶44+、⑶M+、SH3+或SH4+中的一种或多种。在另外更具体的实施方案中，所述分离的⑶34_、 ⑶10+、⑶105+胎盘细胞或分离的⑶；34\^10+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞还为⑶44+。包含以上分离的CD34_、CD10+、CD105+胎盘细胞的任何细胞群的具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为 CD13+、CD29\ CD33+、CD38\ CD44+、CD45\ CD54\ CD62E\ CD62L\ CD62P\ SH3+ (CD73+)、 SH4+(CD73+)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CDl CD144/VE-钙粘蛋白 l0\ CD184/CXCR4\ CD200+、CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ ABC_p+、KDR- (VEGFR2)、HLA-A、B、 C+、HLA-DP、DQ、DR_、HLA-G+或程序性死亡_1配体(PDLl) +中的一种或多种，或它们的任何组合。在更具体的实施方案中，所述⑶；34\^10+、⑶105+细胞还为⑶13+丄拟9+、⑶33+、⑶38\ CD44+、CD45\ CD54/ICAM+、CD62E\ CD62L\ CD62P\ SH3+(CD73+)、SH4+ (CD73+)、CD80\ CD86\ CD90+、SH2+(CD105+)、CD106/VCAM+、CDl CD144/VE-钙粘蛋白 1<w、CD184/CXCR4\ CD200\ CD133\ OCT-4+、SSEA3\ SSEA4\ABC-p\ KDR- (VEGFR2)、HLA-A、B、C+、HLA-DP、DQ、DR\ HLA-G+ 和程序性死亡-1配体(PDLl)+。在某些实施方案中，可用于此处所述治疗方法的所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘细胞，其为 CD10+、CD29+、CD34\ CD38\ CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、SH2+, SH3\ SH4\ SSEA3_、SSEA4_、OCT-4+和ABC_p+中的一种或多种或全部，其中所述分离的胎盘细胞通过物理和/或酶促破坏胎盘组织获得。在具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和 ABC-p+0在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和CD34_，其中所述分离的胎盘细胞具有至少一种下列特性⑶10+、⑶四+、⑶44+、⑶45-、⑶M+、⑶90+、SH3+、SH4+、 SSEA3—和SSEA4—。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+、CD34_、CD10+、 CD29+、CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、SH3+、SH4+、SSEA3"和 SSEA4-。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+、CD34_、SSEA3lP SSEA4_。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和⑶34_，并且为SH2+或SH3+。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+、⑶34_、SH2+和SH3+。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为 OCT-4+、CD34—、SSEA3—和SSEA4—，并且为SH2+或SH3+。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和CDiM 和SH2+或SH3+，并且为CD10+、⑶四+、CD44+、CD45\ CM4+、 ⑶90+、SSEA3_或SSEA4_中的至少一种。在另外更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为 OCT-4+、CD34\ CD10+、CD29+、CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、SSEA3"和 SSEA4、并且为 SH2+ 或SH3+。在另一个实施方案中，可用于此处公开的治疗方法的分离的胎盘细胞为SH2+、 SH3+、SH4+和0CT-4+。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶四+、⑶44+、 CM4+、CD90+、CD34-、CD45-、SSEA3-或SSEA4—。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为 SH2+、SH3+、SH4+，SSEA3—和SSEA4—。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为SH2+、 SH3\ SH4\ SSEA3"和 SSEA4-、CD10+、CD29+、CD44+、CD54+、CD90+、OCT-4+、CD34"或 CD45-。在另一个实施方案中，可用于此处所公开方法的分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶四+、 CD;M-、CD44+、CD45-、CM4+、CD90+、SH2+、SH3+ 和 SH4+ ；其中所述分离的胎盘细胞还为 0CT-4+、 SSEA3"或SSEAf中的一种或多种。在某些实施方案中，可用于此处所公开的治疗例如脑或CNS中或周围血流破坏、 中风的方法的分离的胎盘细胞为CD200+或HLA-G+。在具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶200+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为⑶73+和 ⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为CD34_、CD38_* CD45_。在另外具体的实施方案中，所述干细胞为⑶;34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD200+或HLA-G+胎盘细胞当在允许形成胚样体的条件下时，有利于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成胚样体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与不为干细胞或多能细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与不显示这些标记的胎盘干细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集 CD200+、HLA-G+干细胞的细胞群。在具体的实施方案中，所述细胞群为胎盘细胞群。在不同的实施方案中，所述细胞群中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约 50%或至少约60%的细胞为分离的⑶200+、HLA-G+胎盘细胞。优选的，所述细胞群中至少约70%的细胞为分离的⑶200+、HLA-G+胎盘细胞。更优选的，至少约90%、95%或99%的所述细胞为分离的CD200+、HLA-G+胎盘细胞。所在述细胞群的具体实施方案中，所述分离的⑶200+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的 ⑶200+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—或⑶45_。在更具体的实施方案中，所述分离的 ⑶200+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶;⑶38\⑶45\⑶73+和⑶105+。在另一个实施方案中， 当在允许形成胚样体的条件下培养时，所述细胞群产生一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与不是干细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、HLA-G+胎盘细胞与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为CD73+、 ⑶105+和⑶200+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为〔034_丄038_或0045_。在另外具体的实施方案中， 所述分离的胎盘细胞还为CD34_、CD38_* CD45_。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为CD34_、CD38_、CD45-和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，当在允许形成胚样体的条件下培养时，所述分离的⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盘细胞促进在包括所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与非分离的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集分离的⑶73+、⑶105+、⑶200+胎盘细胞的细胞群。在不同的实施方案中，所述细胞群中至少约 10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞为⑶73+、 ⑶105+、⑶200+的分离的胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约70%的细胞为⑶73+、⑶105+、⑶200+的分离的胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约 90^^95%或99%的细胞为⑶73+、⑶105+、⑶200+的分离的胎盘细胞。在所述细胞群的具体实施方案中，所述分离的胎盘细胞为HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为⑶34_、 ⑶38—和⑶45_。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞还为⑶34_、⑶38_、⑶45—和 HLA-G+。在另外具体的实施方案中，当在允许形成胚样体的条件下培养时，所述细胞群产生一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述胎盘细胞群与非干细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述胎盘细胞群与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在某些其他的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶四+、⑶34_、⑶38_、 CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3\ SSEA4\ HLA-G+ 或 ABC-p+ 中的一种或多种。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+、⑶四+、⑶34_、⑶38_、⑶44+、 CD45\ CD54+、CD90+、SH2+、SH3+、SH4+、SSEA3\ SSEA4-和 0CT-4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为 CD10+，a^9+、CD;M\CD38\CD45\CM4+、SH2+、SH3+和 SH4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+，⑶四+、⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶M+、 SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶10+丄拟9+、 CD34\ CD38\ CD44+、CD45\ CD54+、CD90+、HLA-G+、SH2+、SH3+、SH4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和ABC-p+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为SH2+、SH3+、SH4+和0CT-4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+、 ⑶汹-、SSEA3-和SSEA4-。在一个具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+、⑶汹-、SSEA3—和 SSEA4"胎盘细胞还为 CD10+、CD29\ CD34\ CD44+、CD45\ CD54\ CD90+、SH2+、SH3+ 和 SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为0CT-4+和⑶34—，或者SH3+或SH4+。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞为CD34—，并且CD10+、a^9+、CD44+、CM4+、CD90+或者0CT-4+。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为CD200+和 0CT-4+。在具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD200+、 0CT-4+胎盘细胞为⑶34_、⑶38—或⑶45—。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、 0CT-4+胎盘细胞为⑶34_、⑶38—和⑶45_。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、 0CT-4+胎盘细胞为⑶;34-、⑶38\⑶45-、⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，当所述细胞群在允许形成胚样体的条件下培养时，所述分离的CD200+、0CT-4+胎盘细胞有助于在包含所述分离细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD200+、0CT-4+胎盘细胞与非干细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、0CT-4+胎盘细胞与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集 ⑶200+、0CT-4+胎盘细胞的细胞群。在不同的实施方案中，所述细胞群中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞为分离的⑶200+、 0CT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约70%的细胞为分离的CD200+、 0CT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约80^^90^^95%或99%的细胞为所述分离的CD200+、0CT-4+胎盘细胞。在所述细胞群的具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、0CT-4+胎盘细胞还为⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的 ⑶200+、0CT-4+胎盘细胞还为HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、0CT_4+ 胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—和⑶45_。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶200+、0CT-4+ 胎盘细胞还为⑶；34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，当在允许形成胚样体的条件下培养时，所述细胞群产生一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与非分离的CD200+、0CT-4+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为CD73+、 ⑶105+和HLA-G+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+ 胎盘细胞还为⑶34—、⑶38—和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、 HLA-G+胎盘细胞还为0CT-4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+ 胎盘细胞还为⑶200+。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+。在另外具体的实施方案中，当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成胚样体。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD73+、 ⑶105+、HLA-G+胎盘细胞与非分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+、HLA-G+胎盘细胞与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集分离的 ⑶73+、⑶105+和HLA-G+胎盘细胞的细胞群。在不同的实施方案中，所述细胞群中至少约 10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞为分离的 ⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约70%的细胞为分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约90%、 95%或99%的细胞为分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞。上述细胞群的具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为0CT-4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶200+。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞还为⑶;⑶38\⑶45\ 0CT-4+和 ⑶200+。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与非⑶73+、⑶105+、HLA-G+胎盘细胞的胎盘细胞分离。另外具体的实施方案中，所述细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为CD73+和 CD105+，并且当所述细胞群在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包含所述分离胎盘细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的 ⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为⑶34—、⑶38—和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的 ⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为0CT-4+。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、 CD105+胎盘细胞与非所述细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的 ⑶73+、⑶105+胎盘细胞与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集⑶73+、 CD105+的分离的胎盘细胞，且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包括所述细胞的分离的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体的细胞群。在不同的实施方案中， 所述细胞群中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约 60%的细胞为分离的CD73+、CD105+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约 70%的细胞为所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约90%、95%或99%的细胞为所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞。在上述群的具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为⑶34—、⑶38—和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞还为0CT-4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、⑶105+胎盘细胞还为⑶200+。在更具体的实施方案中，所述分离的⑶73+、 CD105+胎盘细胞还为CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与非所述分离的CD73+、CD105+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为0CT-4+，且当在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包括所述细胞的分离的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体。在一个具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为CD73+和 ⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为⑶34—、⑶38—或⑶45_。 在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为CD200+。在更具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为CD73+、CD105+、CD200+、CD;M\CD3&和CD45\在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞与非0CT-4+胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群为包含例如富集0CT-4+ 的分离的胎盘细胞，且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时，有助于在包括所述细胞的分离的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体的细胞群。在不同的实施方案中，所述细胞群中至少约10%、至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%或至少约60%的细胞为分离的0CT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约70%的细胞为所述分离的0CT-4+胎盘细胞。在另一个实施方案中，所述细胞群中至少约80^^90^^95% 或99%的细胞为所述分离的0CT-4+胎盘细胞。在上述群的具体实施方案中，所述分离的 0CT-4+胎盘细胞还为CD34-、CD38_或CD45—。在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+ 胎盘细胞还为⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为⑶73+和⑶105+。在另外具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为 ⑶200+。在更具体的实施方案中，所述分离的0CT-4+胎盘细胞还为⑶73+、⑶105+、⑶200+、CD34_、CD38_*CD45_。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与不是所述细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为HLA-A，B, C_、⑶45_丄0133_和⑶34_的分离的胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的细胞群为包含分离的胎盘细胞的细胞群，其中所述分离的细胞群中至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细胞为HLA-A，B，(T、CD45-、 CD133—和CD34—的分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与非HLA-A，B, C_、⑶45_、⑶133_和⑶34_胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中， 所述分离的胎盘细胞群基本上无母体的组分；例如所述分离的胎盘细胞群中至少约40%、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或 99% 的细胞为非母体来源的。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为分离的 ⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117—和⑶133—胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于脑或 CNS中或周围血流破坏治疗的细胞群为包含分离的胎盘细胞的细胞群，其中所述分离的细胞群中至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细胞为⑶10+、 ⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117—和⑶133—的分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与非所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117—和⑶133—胎盘细胞为非母体来源的，即具有胎儿基因型。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞群中至少约 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或 99% 的所述细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为分离的 ⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45—和⑶117—胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的细胞群为包含例如富集的分离的胎盘细胞的细胞群，其中所述细胞群中至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%或至少约99%的细胞为分离的 ⑶10—、⑶33—、⑶44+、⑶45—和⑶117—胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与非所述细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述细胞群中至少约40%、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或 99% 的所述细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为分离的 ⑶10—、⑶13—、⑶33—、⑶45—和⑶117—胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的细胞群为包含例如富集的分离的CD10—、CD13—、⑶33_、⑶45—和⑶117—胎盘细胞的细胞群，其中所述细胞群中至少约70%、至少约80%、至少约70%、至少约95%或至少约99%的细胞为⑶10—、⑶13—、⑶33—、⑶45—和⑶117—胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与非所述细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述细胞群中至少约 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或99%的所述细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与不显示这些特性的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为HLA-A，B, C+、CD45\ CD34"和 CD133、并且还为 CD10+、CD13+、CD38+、CD44+、CD90+、CD105+、CD200+ 和 / 或HLA-G+，和/或CD117阴性。在另一个实施方案中，可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的细胞群为包含分离的胎盘细胞的细胞群，其中所述细胞群中至少约20^^25^^30%, 35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或约 99% 的细胞为分离的胎盘细胞，其为HLA-A, B, C_、CD45-、CD34\ CD133—，而且还为⑶10、⑶13、 ⑶38、⑶44、⑶90、⑶105、⑶200和/或HLA-G阳性，和/或⑶117阴性。在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与非所述细胞的胎盘细胞分离。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述细胞群中至少约 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、 98%或99%的所述细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群与不显示这些标记的胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为，例如通过抗体结合测定的⑶200+和⑶10+分离的胎盘细胞，以及例如通过抗体结合和RT-PCR测定的CD117_分离的胎盘细胞。在另一个实施方案中，可用于治疗脑或CNS中或周围血流破坏的所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘细胞，例如⑶10+丄拟9_、⑶M+、⑶200+、HLA-G+、HLA类 Γ和β-2—微球蛋白_的胎盘干细胞或胎盘多能细胞。在另一个实施方案中，可用于治疗脑或CNS中或周围血流破坏的分离的胎盘细胞为至少一种细胞标记的表达比间充质干细胞 (例如骨髓来源的间充质干细胞)至少高两倍的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为非母体来源的。在另外具体的实施方案中，所述细胞群中至少约40%、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或 99% 的所述细胞为非母体来源的。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞为分离的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞，其为⑶10+、⑶四+、⑶44+、⑶45_、⑶M/ICAM+、 CD62E\ CD62I7、CD62P\ CD80\ CD86\ CD103\ CD104\ CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-钙粘蛋白 1("、0)184/〇父0 4\ β2_ 微球蛋白 1<"、]\^(-11<"、]\^(-11\!11^-61<"和/或卩01^11<"中的一种或多种。在具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为CD^T和CM4+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为CD44+和CD106+。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞至少为⑶四+。在另一个实施方案中，可用于此处所述治疗方法的细胞群包含分离的胎盘细胞， 并且所述细胞群中至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的细胞为分离的胎盘细胞，其为 CD10+、CD29\ CD44+、CD45\ CD54/ICANT, CD62-E\ CD62-I7、CD62-P\ CD80\ CD86\CD103\CD104\CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-钙粘蛋白 1()W、CD184/C)(CR4\ β 2-微球蛋白1("、HLA-I1 、HLA-IΓ、HLA-Glow和/或PDL11 中的一种或多种。在更具体的实施方案中，所述细胞群中至少50 %、60 %、70 %、80 %、90 %、95 %、98 %或99 %的细胞为CD10+、CD29\ CD44+、CD45\ CD54/ICANT, CD62-E\ CD62-I7、CD62-P\ CD80\ CD86\ CD103\ CD104\ CD105+、CD106/VCAM+、CD144/VE-钙粘蛋白 low、CD184/CXCR4_、β 2_微球蛋白 low、HLA-I1 、 HLA-IΓ、HLA-Glow 和 PDLl1 。在另一个实施方案中，可用于治疗脑或CNS中或周围血流破坏的所述分离的胎盘细胞为分离的胎盘细胞，其为 CD10+、⑶四+、CD;34\ CD38\ CD44+、CD45\ CM4+、CD90+、SH2+、 SH3+、SH4+、SSEA3-、SSEA4\ OCT-4+、和ABC_p+中的一种或多种或全部，其中ABC-ρ为胎盘特异性ABC转运蛋白(亦称乳腺癌耐受性蛋白(BCRP)和米托蒽醌耐受性蛋白(MXR))，其中所述分离的胎盘细胞通过灌注已经排干脐带并灌注以除去残余血液的哺乳动物例如人的胎盘的获得。基因谱证实分离的胎盘细胞和分离的胎盘细胞群可与其他细胞，例如间充质干细胞，例如骨髓来源的间充质干细胞区分。此处所述的分离的胎盘细胞可在一种或多种基因表达的基础上与例如间充质干细胞区分，与骨髓来源的间充质干细胞相比，所述基因的表达显著高于分离的胎盘细胞或某些分离的脐带干细胞。特别地，可用于此处提供的治疗方法的分离的胎盘细胞可在一种或多种基因表达的基础上与间充质干细胞区分，当所述细胞在同等条件下培养时，分离的胎盘细胞中所述基因的表达比等量骨髓来源的间充质干细胞明显高(即至少高2倍)，其中所述一种或多种基因为ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-I、 B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、 FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、 KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、 ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A 或上述任何基因的组合。参见例如美国专利申请公开号2007/0275362，其公开内容在此全文引入作为参考。在更具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞在包含DMEM-LG(例如来自Gibco) ；2%胎牛血清(例如来自Hyclone Labs) ；1 X胰岛素_转铁蛋白-硒(ITS) ；1 X亚油酸_牛血清白蛋白(LA-BSA)； 10_9M地塞米松(例如来自Sigma) ； 10_4M抗坏血酸2-磷酸盐(例如来自Sigma)；表皮生长因子10ng/mL(例如来自R&D Systems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB) 10ng/mL(例如来自R&D Systems)的培养基中培养约3至约35个群倍增时表达所述一种或多种基因。 在一个具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞-特异的或分离的脐带细胞-特异的基因为 CD200。这些基因的特定序列可在GenBank中找到，登录号为2008年3月的 NM_001615(ACTG2)、BC065545 (ADARBl)、(NMJ81847 (AMIG02)、AY358590 (ARTS-I)、 BC074884 (B4GALT6)、BC008396 (BCHE)、BC020196 (ClIorfO)、BC031103 (CD200)、 NM_001845 (C0L4A1)、NM_001846 (C0L4A2)、BC052289 (CP A4)、BC094758 (DMD)、 AF293359 (DSC3)、NM_001943 (DSG2)、AF338241 (EL0VL2)、AY336105 (F2RL1)、匪J) 18215 (FLJ 10781)、AY416799 (GATA6)、BC075798 (GPR1 26)、NM_016235 (GPRC5B)、AF340038 (ICAMl)、 BC000844 (IER3)、BC066339 (IGFBP7)、BC013142 (ILIA)、BT019749 (IL6)、BC007461 (ILl 8)、(BC072017)KRT18、BC075839 (KRT8)、BC060825 (LIPG)、BC065240 (LRAP)、 BCO 10444 (MATN2)、BCOl 1908 (MEST)、BC068455 (NFE2L3)、NMJH4840 (NUAKl)、 AB006755(PCDH7)、 NM_014476(PDLIM3)、 BC126199(PKP-2)、 BC090862(RTNl)、 BC002538(SERPINB9)、 BC023312(ST3GAL6)、 BC001201(ST6GALNAC5)、 BC126160或 BC065328 (SLC12A8)、BC025697 (TCF21)、BC096235(TGFB2)、BC005046 (VTN)禾口 BC005001(ZC3H12A)。在更具体的实施方案中，当在同等条件下培养时，所述分离的胎盘细胞以比等量骨髓来源的间充质干细胞以可检测的更高水平表达ACTG2、ADARB1、ARTS-I、B4GALT6、BCHE、 ClIorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、 GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、 MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、 TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A 中的每一种。上述参照基因的表达可通过标准技术评估。例如，可通过常规方法选择和构建基于基因序列的探针。基因表达可例如在包括一种或多种所述基因的探针的微阵列上评估，例如 Affymetrix GENECHIP Human Genome U133A 2. 0 阵列或 Affymetrix GENE CHIP Human Genome U133 Plus 2. 0 (Santa Clara, California)。 由于所述修正序列的特异性探针可利用熟知的标准技术很容易地得到，因此即使具体 GenBank登录号的序列被修正也可以评估这些基因的表达。这些基因的表达水平可用于证实分离的胎盘细胞群的同一性，鉴定至少包含多个分离的胎盘细胞的细胞群等等。同一性已经被证实的分离的胎盘细胞群，可以是克隆的，例如扩增自单个分离的胎盘细胞的分离胎盘细胞群，或混合的干细胞群，例如包含扩增自多个分离的胎盘细胞的分离的胎盘细胞的细胞群，或包含此处所述的分离的胎盘细胞和至少一种其他类型细胞的细胞群。这些基因的表达水平可用于选择分离的胎盘细胞群。例如，如果一种或多种上列基因在来自所述细胞群的样品中的表达明显高于等量间充质干细胞群的样品，则可以选择该细胞群，如克隆-扩增的细胞。所述选择可以来自多个分离的胎盘细胞群、来自多个细胞群，其同一性未知等。可在比较一种或多种所述基因的表达水平与例如在间充质干细胞对照中所述一种或多种基因的表达水平，例如在等量骨髓来源的间充质干细胞中所述一种或多种基因的表达水平的基础上选择分离的胎盘细胞。在一个实施方案中，包含等量间充质干细胞的样品中所述一种或多种基因的表达水平用作对照。在另一个实施方案中，对于在一定条件下检测的分离的胎盘细胞，其对照为代表在所述条件下间充质干细胞中所述一种或多种基因表达水平的数值。此处所述的分离的胎盘细胞在原代培养或培养基中增殖期间呈现上述特性(例如细胞表面标记和/或基因表达谱的组合)，所述培养基包含，例如DMEM-LG (Gibco) ；2%胎牛血清(例如来自Hyclone Labs.) ；1 X胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) ；IX亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ；KTi3M地塞米松(Sigma) ； 抗坏血酸2-磷酸盐(Sigma)；表皮生长因子 10ng/mL(R&D Systems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB) 10ng/mL(R&D Systems) 和100U青霉素/1000U链霉素。在所述分离的胎盘细胞或包含所述分离的胎盘细胞的细胞群另外具体的实施方案中，所述细胞或群已扩增例如传代至少约或不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、 14、15、16、17、18、19 或 20 次，或增殖至少约或不超过 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、 18、20、22、对、26、沘、30、32、34、36、38或40次群倍增。在此处公开的分离的胎盘细胞或包含分离的胎盘细胞的细胞群另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞为胎儿来源的 (即具有胎儿基因型)。在分离的胎盘细胞的某些实施方案中，所述分离的胎盘细胞在生长培养基(即配制以促进增殖的培养基)中的培养期间，例如在生长培养基中的增殖期间通常不分化。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞不需要滋养层以增殖。在另外具体的实施方案中，所述分离的胎盘细胞仅由于没有饲养细胞层而在培养时不分化。在另一个实施方案中，可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的细胞为分离的胎盘细胞，如通过醛脱氢酶活力测定法评估的，其中多个所述分离的胎盘细胞为醛脱氢酶(ALDH)阳性。所述测定法为本领域已知(参见例如Bostian和Betts，Biochem. J., 173,787, (1978))。在一个具体的实施方案中，所述ALDH测定法利用ALDEFLUOR (Aldagen, Inc.，Ashland, Oregon)作为醛脱氢酶活力标记。在一个具体的实施方案中，所述细胞群中的所述多个在约3%和约25%细胞之间。在另一个实施方案中，此处提供了分离的脐带细胞群，例如多能的分离脐带细胞，如通过利用ALDEFLUOR 作为醛脱氢酶活力指标的醛脱氢酶活力测定法评估的，其中多个所述分离的脐带细胞为醛脱氢酶阳性。 在一个具体的实施方案中，所述细胞群中的所述多个在约3%和约25%细胞之间。在另一个实施方案中，所述分离的胎盘细胞或分离的脐带细胞群显示比具有大致相等量和同样的条件下培养的骨髓来源的间充质干细胞的ALDH活力高至少三倍或至少五倍。在包含此处所述分离的胎盘细胞的任何细胞群的某些实施方案中，所述细胞群中的胎盘细胞基本上没有具有母体基因型的细胞；例如所述群中至少40^^45^^50%, 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或 99% 的胎盘细胞具有胎儿基因型。在包含此处所述分离的胎盘细胞的任何细胞群的某些其他实施方案中，包含胎盘细胞的所述细胞群基本上没有具有母体基因型的细胞；例如所述群包括至少40^^45^^50%, 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98%或 99%的细胞具有胎儿基因型。在任何上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞细胞群的具体实施方案中，所述细胞的核型或所述群中至少约95%或约99%的细胞核型是正常的。在任何上述胎盘细胞或细胞群另外具体的实施方案中，所述细胞或所述细胞群中的细胞为非母体来源的。带有任何上述标记组合的分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群可以任何比例组合。任何两种或多种上述分离的胎盘细胞群可组合形成分离的胎盘细胞群。例如，分离的胎盘细胞群可包含通过如上所述的一种标记组合定义的第一种分离的胎盘细胞群，和通过如上所述的另一种标记组合定义的第二种分离的胎盘细胞群，其中所述第一种细胞群和第二种细胞群以约 1 99、2 98、3 97、4 96、5 95,10 90,20 80,30 70,40 60、 50 50,60 40,70 30,80 20,90 10,95 5、96 4、97 3、98 2 或约 99 1 的比例组合。以类似的方式，可获得任何三种、四种、五种或以上上述分离的胎盘细胞或分离的胎盘细胞群组合。可用于脑或CNS中或周围血流破坏治疗的分离的胎盘细胞可例如通过用或不用酶促消化(参见5. 5. 3章节)或灌流(参见5. 5. 4章节)破坏胎盘组织而获得。例如，分离的胎盘细胞群可以通过以下方法制备，该方法包括包括灌流已排干脐带血且已被灌流以除去残余血液的哺乳动物胎盘；用灌流液灌流所述胎盘；并且收集所述灌流液，其中灌流后所述灌流液包括包含分离的胎盘细胞的胎盘细胞群；并且从所述细胞群分离多个所述分离的胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，所述灌流液通过脐静脉和脐动脉并且在其从所述胎盘缓慢流出后收集。在另外具体的实施方案中，所述灌流液通过脐静脉并且从脐动脉收集，或通过脐动脉并且从脐静脉收集。在不同的实施方案中，含于胎盘灌流获得的细胞群内的所述分离的胎盘细胞为所述胎盘细胞群中的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%。在另外具体的实施方案中，通过灌流收集的所述分离的胎盘细胞包含胎儿细胞和母体细胞。在另外具体的实施方案中，通过灌流收集的所述分离的胎盘细胞为至少50^^60^^70%,80%、 90%、95%、99%或至少99. 5%的胎儿细胞。在另外具体的实施方案中，此处提供了包含如此处所述通过灌流收集的分离的胎盘细胞群的组合物，其中所述组合物包含至少一部分用于收集所述分离的胎盘细胞的灌流液。此处所述的分离胎盘细胞的分离群可通过以下方法制备组织-分裂酶消化胎盘组织以获得包含所述细胞的胎盘细胞群，并且从其余胎盘细胞分离或基本上分离多个所述胎盘细胞。可消化整个或胎盘任一部分以获得此处所述的分离的胎盘细胞。在具体的实施方案中，例如所述胎盘组织可以是整个胎盘、羊膜、绒毛膜、羊膜和绒毛膜的组合或任何上述的组合。在其他具体的实施方案中，所述组织-分裂酶为胰蛋白酶或胶原酶。在不同的实施方案中，包含在消化胎盘而获得的细胞群内的所述分离的胎盘细胞为所述胎盘细胞群的至少 50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少 99. 5%0如上所述胎盘细胞的分离群和分离的胎盘细胞群通常可包含大约至少或不超过 1 X IO5,5 X IO5U X IO6,5 X IO6U X XlO7,5 X IO7U X IO8,5 X IO8U X 10\5 X IO9UX IO10, 5X IOltlUX IO11或更多所述分离的胎盘细胞。可用于此处所述治疗方法的分离的胎盘细胞群包含至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 98%或 99%如通过例如台盼蓝排除测定的存活的分离的胎盘细胞。5. 4. 3培养生长对于任何哺乳动物细胞，5. 4. 2节所述的分离的胎盘细胞的生长在某种程度上取决于选择用于生长的具体培养基。在最佳条件下，所述分离的胎盘细胞通常在约1天中数量倍增。在培养期间，此处所述分离的胎盘细胞粘附于培养底物，例如组织培养容器的表面 (例如组织培养平皿塑料制品、纤连蛋白-涂布的塑料制品等等)并且形成单细胞层。当包含此处所述分离的胎盘细胞的胎盘细胞群在合适的条件下培养时，可形成胚样体，即在贴壁细胞层顶上的细胞培养物的立体团。胚样体内的细胞表达与早期干细胞有关的标记，例如OCT-4、Nanog, SSEA3和SSEA4。胚样体内的细胞通常不像此处所述的分离的胎盘细胞那样粘附培养底物，但在培养期间仍然附着于贴壁细胞。胚样体细胞依赖于分离的贴壁胎盘细胞而存活，因为在不存在分离的贴壁胎盘细胞时不形成胚样体。分离的贴壁胎盘细胞因此促进包含所述分离的贴壁胎盘细胞的胎盘细胞群中一种或多种胚样体的生长。不希望受理论限制，认为与胚胎干细胞在滋养层细胞上生长一样，胚样体细胞在分离的贴壁胎盘细胞上生长。5. 5获得分离的胎盘细胞的方法5. 5. 1干细胞收集组合物此处进一步提供收集和分离胎盘细胞的方法，例如分离以上5. 4. 2节所述的分离的胎盘细胞的方法。通常，所述细胞利用生理学可接受的溶液，例如细胞收集组合物，从哺乳动物胎盘获得。示例性细胞收集组合物在相关美国专利申请公开号2007/0190042中详细描述，名为“Improved Medium for Collecting Placental Stem Cells and Preserving Organs”，其公开内容在此全文引入作为参考。所述细胞收集组合物可包含适于例如此处所述分离的胎盘细胞的细胞收集和/ 或培养的任何生理学可接受的溶液，例如盐溶液(例如磷酸缓冲盐溶液、Kreb' s溶液、改进的Kreb' s溶液、Eagle' s溶液、0. 9% NaCl等等)、培养基(例如DMEM、H. DMEM等等)寸。所述细胞收集组合物可包含有助于保存分离的胎盘细胞的一种或多种组分，即在细胞收集至培养期间防止所述分离的胎盘细胞死亡或延缓所述分离的胎盘细胞死亡、减少细胞群中分离的胎盘细胞的死亡数等等。所述组分可以是例如凋亡抑制剂(例如级联抑制剂或JNK抑制剂)；血管扩张剂(例如硫酸镁、抗高血压药物、心房利钠肽(ANP)、促肾上腺皮质激素、促肾上腺皮质激素-释放因子、硝普钠盐、胼苯哒嗪、腺苷三磷酸盐、腺苷、消炎痛或硫酸镁、磷酸二酯酶抑制剂等等)；坏死抑制剂(例如2-(1Η-吲哚-3—基)-3_戊胺基-马来酰亚胺、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐或氯硝西泮)；TNF-α抑制剂和/或携氧全氟化碳(例如全氟溴辛烷、全氟溴癸烷等等)。所述细胞收集组合物可包含一种或多种组织降解酶，例如金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、核糖核酸酶或脱氧核糖核酸酶等等。所述酶包括，但不限于胶原酶(例如胶原酶I、II、III或IV、来自溶组织梭状芽孢杆菌的胶原酶等等)；分散酶、嗜热菌蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、释放酶、透明质酸酶等等。所述细胞收集组合物可包含杀菌或抑菌有效量的抗生素。在某些非限制性实施方案中，所述抗生素为大环内酯(例如，托普霉素)、头孢菌素(例如，头孢氨苄、头孢拉啶、头孢呋辛、头孢丙烯、头孢克洛、头孢克肟或头孢羟氨苄)、克拉霉素、红霉素、青霉素(例如， 青霉素V)或喹诺酮类(例如，氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星)、四环素、链霉素等等。在具体的实施方案中，所述抗生素对革兰氏(+)和/或革兰氏(-)细菌有效，例如铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等等。在一个实施方案中，所述抗生素为庆大霉素，例如培养基中约 0. 005% 至约 0. 01% (w/v)。所述细胞收集组合物还可以包含一种或多种下列化合物腺苷(约ImM至约 50mM)；右旋葡萄糖(约20mM至约IOOmM)；镁离子(约ImM至约50mM)；分子量大于20，000 道尔顿的大分子，在一个实施方案中，以足以维持内皮完整性和细胞存活力的量存在(例如以约25g/l至约100g/l或约40g/l至约60g/l存在的合成或天然存在的胶质、多糖如葡聚糖或聚乙二醇)；抗氧化剂(例如以约25 μ M至约100 μ M存在的丁羟基大茴香醚、二丁基羟基甲苯、谷胱甘肽、维生素C或维生素Ε)；防止钙进入细胞的制剂(例如以约2μΜ至约 25 μ M存在的异搏定)；硝酸甘油(例如约0.05g/L至约0.2g/L)；抗凝血剂，在一个实施方案中，以足以防止残余血液凝固的量存在(例如以约1000单位/1至约100,000单位/1的浓度存在的肝素或水蛭素)；或含有化合物(例如以约Ι.ΟμΜ至约5μΜ存在的氨氯吡脒、 乙基异丙基氨氯吡脒、环己烷氨氯吡脒、二甲基氨氯吡脒或异丁基氨氯吡脒)的氨氯吡脒。5. 5. 2胎盘的收集和处理通常，在出生排出后立即回收人胎盘。在优选的实施方案中，在告知患者同意并采集与胎盘相关的完整医疗史后，从患者处回收胎盘。优选的，在分娩后继续记录医疗史。此类医疗史可用于调整胎盘或从其收获的干细胞的收获后的应用。例如，根据医疗史，人胎盘干细胞可用于与胎盘相关的婴儿、或用于所述婴儿的父母、兄弟姐妹或其他亲戚的个人化药物。在回收胎盘干细胞之前，优选去除脐带血和胎盘血。在某些实施方案中，在分娩后回收胎盘中的脐带血。所述胎盘可以采用常规的脐带血回收方法。一般使用针头或插管， 在重力帮助下，将胎盘放血(参见例如Anderson，美国专利号5，372，581 ；Hessel等人，美国专利号5，415，665)。所述针头或插管通常置于脐静脉内，并且可以轻轻地按揉胎盘帮助从胎盘中排出脐带血。可以商业方式来实施此类脐带血回收，例如LifeBank USA, Cedar Knolls, NJ。优选地，对所述胎盘通过重力来放血而不进行其他操作，从而使脐带血回收过程中的组织破坏最小化。典型地，胎盘从分娩室或初生室转移至另一地点，例如实验室，用于脐带血回收和干细胞收集，例如，通过灌流或组织解离。所述胎盘优选在无菌的、保温的转移装置(维持胎盘温度在20-28°C )中转移，例如，将脐带近端夹紧的胎盘放置在无菌、夹拉链封闭的塑料袋中，然后将其放置在保温容器内。在另一个实施方案中，所述胎盘在实质上如未决美国专利申请号7，147，626中描述的脐带血收集试剂盒中转移，其公开内容在此引入作为参考。优选地，在分娩后4至M小时将胎盘递送至实验室。在某些实施方案中，在脐带血回收前，夹紧脐带近端，优选在插入胎盘的4-5cm(厘米)内。在其他实施方案中，在脐带血回收后但是在胎盘的进一步处理前夹紧近端脐带。在收集干细胞前，可以将胎盘储存在无菌条件下，并储存在室温或者5至25°C (摄氏度)的温度下。所述胎盘可以在灌流胎盘以去除任何残留的脐带血前储存4至M小时， 甚至48小时或更长时间。在一个实施方案中，在排出脐带血后约0小时至约2小时内收集所述胎盘。所述胎盘优选在5至25°C下储存在抗凝剂溶液中。合适的抗凝剂溶液是本领域公知的。例如，可以使用肝素或华法令钠(warfarin sodium)溶液。在优选的实施方案中，所述抗凝剂溶液含有肝素溶液(例如，在1 1000溶液中l%w/w)。在收集胎盘干细胞前，放血的胎盘优选储存不超过36小时。一旦按照上述一般性方法收集和制备，哺乳动物胎盘或其部分可以按照本领域已知的任何方法处理，例如，可以被灌流或解离，如用一种或多种组织解离酶来解离，以获得干细胞。5. 5. 3胎盘组织的物理解离和酶促消化在一个实施方案中，通过物理解离部分或全部器官，从哺乳动物胎盘中收集干细胞。例如，可以将胎盘或其部分压碎(crush)、剪碎(shear)、绞碎(mince)、切块(dice)、切细(chop)、浸软(macerate)等。随后可培养所述组织以获得分离的胎盘细胞群。通常，所述胎盘组织利用例如培养基、盐溶液或干细胞收集组合物解离(参见5. 5. 1节及以下)。在物理解离和/或酶促消化和干细胞回收前，所述胎盘可以被分割成多个部分。 可以从羊膜、绒毛膜、脐带、胎盘绒毛叶的全部或部分或其任何组合，包括从整个胎盘获得胎盘干细胞。优选地，分离的胎盘细胞获自包含羊膜和绒毛膜的胎盘组织。一般的，分离的胎盘细胞可以通过将胎盘组织解离为小块来获得，例如胎盘组织块的体积是约1、2、3、4、 5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900 或约1000立方毫米。任何物理解离的方法均可以使用，只要通过如台盼蓝排除测定的，所述解离方法能使所述器官中多数，更优选的大多数，更优选的至少60 %、70 %、80 %、90 %、95 %、 98%或99%的细胞存活。所述分离的贴壁胎盘细胞通常可在排出后约三天内，但优选在排出后约8小时和约18小时内的任何时候从胎盘或其部分收集。在一个具体的实施方案中，所述解离的组织在适于分离的胎盘细胞增殖的组织培养基中培养(参见例如以下5. 6节，描述胎盘干细胞的培养)。在另外具体的实施方案中，分离的胎盘细胞通过胎盘组织的物理解离收集，其中所述物理解离包括酶促消化，其可通过利用一种或多种组织消化酶来完成。胎盘或其部分还可以被物理的解离，并用一种或多种酶消化，然后将获得的材料浸入细胞收集组合物或与细胞收集组合物混合。优选的细胞收集组合物包含一种或多种组织解离酶。可用于裂解胎盘组织的酶包括木瓜蛋白酶、脱氧核糖核酸酶、丝氨酸蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶、胶原酶、分散酶或弹性蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可被血清中的α 2微球蛋白所抑制，因此用于消化的介质通常是无血清的。在酶促消化过程中通常使用EDTA和DNA酶来提高细胞回收的效率。消化物优选被稀释从而避免细胞陷入粘稠的消化物中。可使用任何组织酶切酶的组合。胰蛋白酶的酶切消化典型浓度包括0. 至约 2%胰蛋白酶，例如约0.25%胰蛋白酶。可以组合使用蛋白酶，即在同一消化反应中使用两种或多种蛋白酶，或者可以按顺序相继使用两种或多种蛋白酶，从而释放胎盘细胞，例如胎盘干细胞和胎盘多能细胞。例如，在一个实施方案中，胎盘或其部分首先用合适量的I型胶原酶按约1至约2mg/ml消化例如30分钟，然后用0. 25%的胰蛋白酶例如在37°C消化10 分钟。丝氨酸蛋白酶优选在使用其它酶后再连续使用。在另一个实施方案中，在从干细胞收集组合物中分离干细胞之前，向含有干细胞的干细胞收集组合物，或者向在其中解离和/或消化组织的溶液中添加螯合剂来进一步解离组织，所述螯合剂例如乙二醇双(2-氨基乙醚)-N，N，N' N'-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。酶切消化后，消化物例如用培养基洗涤三次，并且将洗涤的细胞接种入培养瓶中。 随后通过差异粘附分离细胞，并且鉴定其存活力、细胞表面标记、分化等等。可以理解，当整个胎盘或胎盘的一部分同时含有胎儿和母体细胞(例如，胎盘的一部分包含绒毛膜或绒毛叶)时，分离的胎盘干细胞将包含来源于胎儿和母体源的胎盘细胞的混合物。当胎盘的部分不含有或只含有可忽略量的母体细胞(例如，羊膜)时，从其中分离的胎盘细胞将几乎只含有胎儿的胚胎细胞(即具有胎儿基因型的胎盘细胞)。胎盘细胞，例如以上5. 4. 2节所述的胎盘细胞可通过差异胰蛋白酶消化(参见以下5. 5. 5节)从解离的胎盘组织分离，随后在新鲜增殖培养基中在一种或多种新的培养容器中培养，任选随后进行第二次差异胰蛋白酶消化步骤。5. 5. 4胎盘灌流胎盘细胞，例如以上5. 4. 2节所述的胎盘细胞还可以通过灌流哺乳动物胎盘而获得。灌流哺乳动物胎盘以获得胎盘细胞的方法公开在例如Hariri，美国专利号7，045，148 和7，255，729中，和美国专利申请公开号2007/0275362和2007/0190042中，每篇的公开内容在此整体引入作为参考。可以利用例如细胞收集组合物作为灌流液，通过灌流例如胎盘脉管系统来收集胎盘细胞。在一个实施方案中，通过使灌流液流经脐动脉和/或脐静脉来灌流哺乳动物胎盘。 可以利用如重力流入胎盘来实现灌流液在胎盘中的流动。优选地，利用泵，例如蠕动泵，来迫使灌流液流经胎盘。例如，可以用套管，如TEFLON 或塑料套管对脐静脉进行插管，所述套管与无菌的连接装置，如无菌管道相连。无菌的连接装置与灌流歧管相连。在准备灌流中，胎盘优选按脐动脉和脐静脉位于胎盘最高点的方式来定位(如， 悬挂)。可以通过使灌流液在胎盘脉管系统或在胎盘脉管系统和相邻组织中的流通来灌流胎盘。所述胎盘还可以通过使灌流液流经脐静脉并从脐动脉收集，或者流经脐动脉并从脐静脉收集而灌流。在一个实施方案中，脐动脉和脐静脉同时连接移液器，所述移液器通过可变的连接管与灌流液的储器相连。所述灌流液流入脐静脉和动脉。所述灌流液渗出和/或流经血管壁进入胎盘的周围组织，并从在孕期附着于母体子宫上的胎盘表面合适的开放脉管中收集。所述灌流液还可以通过脐带开口导入，并允许从与母体子宫壁接触的胎盘壁中的开口流出或渗出。通过可称为“盘式”法(pan method)的方法收集的胎盘细胞通常为胎儿和母体细胞的混合物。在另一个实施方案中，所述灌注溶液通过脐静脉并且从脐动脉收集，或通过脐动脉并且从脐静脉收集。通过可称为“闭合回路”法的方法收集的胎盘细胞通常几乎只有胎儿细胞。可以理解，利用盘式法灌流获得的是胎儿和母体细胞的混合物，即通过该方法，灌流液在其从胎盘的母体侧渗出后被收集。结果，通过该方法收集的细胞包含混合的胎儿和母体来源的胎盘细胞，例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞群。相反，仅通过紧密回路方法中的胎盘脉管系统灌流，因为灌流液流经一根或两根胎盘血管，并仅通过剩余的血管收集，将导致胎盘细胞群的收集物几乎都是胎儿来源的。在一个实施方案中，可如下进行所述紧密回路灌流方法。在分娩后约48小时内获得产后胎盘。夹紧脐带并且在夹子上割断。脐带可丢弃或处理回收例如脐带干细胞和/或处理所述脐带膜用于生产生物材料。灌流期间可保留羊膜，或可例如利用手指直接剖开而从绒毛膜分离。如果所述羊膜在灌流之前从绒毛膜分离，其可例如丢弃或通过酶促消化处理以获得干细胞，或生制备例如羊膜生物材料，如美国申请公开号2004/0048796中所述的生物材料，其公开内容在此全文引入作为参考。在例如利用无菌纱布清理胎盘全部可见的血块和残余血液后，如通过部分切割脐带膜以暴露脐带横截面而暴露脐带血管。辨别血管， 并通过例如推进经过每一血管切割端的闭合弹簧打开血管。装置，例如连接至灌流装置或蠕动泵的塑料管材，随后被插入每一胎盘动脉中。泵可以是适于所述目的的任何泵，例如蠕动泵。连接至无菌收集贮存器的塑料管状物，例如250mL收集袋的血袋，随后被插入胎盘静脉中。或者，连接至泵的管状物被插入胎盘静脉中，并且连接至收集贮存器的管被插入一条或两条胎盘动脉中。胎盘随后用大量灌流液灌流，例如约750mL灌流液。随后例如通过离心收集灌流液中的细胞。在某些实施方案中，所述胎盘用灌流液灌流，例如100-300mL灌流液，以在灌流收集胎盘细胞(如胎盘干细胞和/或胎盘多能细胞)之前除去残余血液。在另一个实施方案中，所述胎盘在灌流收集胎盘细胞之前不用灌流液灌流以除去残余血液。在一个实施方案中，在灌流过程中夹紧脐带近端，更优选，在脐带插入胎盘的 4-5cm (厘米)内夹紧。在放血过程中从哺乳动物胎盘首先收集的灌流液一般都被脐带血和/或胎盘血残留的血红细胞着色。随着灌流继续和残留的脐带血细胞从胎盘中洗出，灌流液颜色变得越来越浅。一般30至IOOmL(毫升)灌流液足以初步将胎盘放血，但根据观察的结果可以使用或多或少的灌流液。用于收集胎盘干细胞的灌流液体积可以根据收集的干细胞数量、胎盘大小、对单个胎盘进行的收集次数等变化。在不同的实施方案中，灌流液的体积可以选自50mL 至 5000mL、50mL 至 4000mL、50mL 至 3000mL、IOOmL 至 2000mL、250mL 至 2000mL、500mL 至 2000mL、或750mL至2000mL。一般的，在放血后用700-800mL灌流液来灌流胎盘。胎盘可以在数小时或数天的过程中进行多次灌流。当胎盘进行多次灌流时，可以在容器或其它合适的器皿中在无菌条件下维持或培养，并用细胞收集组合物或标准灌流液 (例如，普通的盐溶液如磷酸盐缓冲液(“PBS”))灌流，其中含有或不含抗凝剂(如，肝素、 华法令钠、香豆素、双香豆素)，和/或含有或不含抗微生物剂(如，β -巯基乙醇(0. ImM)； 抗生素如链霉素(如40-100 μ g/ml)、青霉素(如40U/ml)、两性霉素B (如0. 5 μ g/ml))。在一个实施方案中，将分离的胎盘维持或培养一段时间而没有收集灌流液，从而所述胎盘在灌流和收集灌流液前，被维持或培养 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、21、22、23或M个小时，或者2或3或更多天。灌流的胎盘可以被维持用于再进行一次或多次灌流，例如，再维持 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、 21,22,23,24或更多个小时，并用如700-800mL灌流液再灌流第二次。所述胎盘可以灌流 1、2、3、4、5或更多次，例如每1、2、3、4、5或6小时一次。在优选的实施方案中，重复灌流胎盘和收集灌流液(如细胞收集组合物)，直至回收的有核细胞数低于100细胞/ml。对不同时间点的灌流液可以分别进一步处理，以回收时间依赖性的细胞群，如干细胞。不同时间点的灌流液也可以被混合。在优选的实施方案中，在放血后约8小时和约18个小时之间一次或多次收集胎盘细胞。优选的，灌流导致获得的胎盘干细胞数量显著多于从未用所述溶液灌流或者未经其它处理(例如，通过组织解离如酶促消化)的哺乳动物胎盘中可获得的干细胞数量。在本文的上下文中，“显著多于”是指至少多10%。灌流产生的胎盘干细胞显著多于例如，从培养胎盘或一部分胎盘的培养基中可分离的胎盘细胞数量。通过用包含一种或多种蛋白酶或其他组织解离酶的溶液灌流，可以从胎盘中分离胎盘细胞。在具体的实施方案中，将胎盘或其一部分(例如，羊膜、羊膜和绒毛膜、胎盘小叶或绒毛小叶、脐带或任何上述的组合)置于25-37°C，并在200mL培养基中用一种或多种组织解离酶孵育30分钟。收集灌流液中的细胞，降低温度至4°C，并用包含5mM EDTA、2mM 二硫苏糖醇和2πιΜβ-巯基乙醇的冷却抑制剂混合物洗涤。数分钟后，用冷却的(如4°C)干细胞收集组合物洗涤所述胎盘细胞。5. 5. 5胎盘细胞的分离、分选和表征分离的胎盘细胞，例如以上5. 4. 2节所述的细胞，不论是否由灌流或物理解离(如通过酶促消化)获得的，可以通过聚蔗糖(Ficoll)梯度离心从其它细胞中初步纯化(即分离)。此类离心可以遵循任何标准离心方法的速度等。例如，在一个实施方案中，从胎盘收集的细胞是通过在5000 X g室温离心15分钟从灌流液中回收的，其将细胞与例如污染的残渣和血小板分离开。在另一个实施方案中，胎盘灌流液被浓缩至约200mL，轻轻地铺在Ficoll 上，在22°C以约IlOOXg离心20分钟，收集低密度的细胞中间层用于进一步处理。细胞沉淀可重悬于新鲜的干细胞收集组合物中，或适合维持干细胞的培养基中， 例如含有2U/ml肝素和2mM EDTA的IMDM无血清培养基(GibcoBRL，NY)。可以利用例如
LYMPHOPREP (Nycomed Pharma, Oslo,挪威)，按照生产商的推荐方法来分离总单核细胞部分。通过灌流或消化获得的胎盘细胞，例如，可以采用，如含有0.2% EDTA(Sigma， St. Louis MO)的0.05%胃蛋白酶溶液，通过差异胰酶消化来进一步或初步地分离。由于分离的胎盘细胞一般在约5分钟内从塑料表面脱离，而其它附着的群一般需要孵育超过 20-30分钟才从塑料表面脱离，因此差异胰酶消化是可能的。在胰酶消化和利用例如胰蛋白酶中和溶液(TNS，Cambrex)的胰蛋白酶中和后，可以收获脱离的胎盘细胞。在分离附着细胞的一个实施方案中，等份的细胞，如5_10 X IO6个细胞被放置在每个T-75瓶中，优选纤连蛋白包被的T75瓶中。在这样的实施方案中，所述细胞可以用商购的间充质干细胞生长培养基(MSCGM) (Cambrex)培养，并且置于组织培养箱(37°C，5% C02)中。在10-15天后，通过用PBS洗涤从瓶中去除非附着细胞。然后用MSCGM替代PBS。优选每天检查培养瓶中不同附着细胞类型的存在，并且特别的鉴别和扩增成纤维样细胞簇。从哺乳动物胎盘中收集的细胞数量和类型可以被监测例如通过利用标准的细胞检测技术，如流式细胞仪、细胞分选、免疫细胞化学(例如，用组织特异性或细胞标志特异性抗体染色)、荧光活化细胞分选(FACS)、磁性活化细胞分选(MACQ来测量细胞的表面标记和形态学；通过利用光学或共聚焦显微镜来检测细胞形态学；和/或利用本领域公知的技术，例如PCR和基因表达谱来检测基因表达的改变。这些技术也可用于鉴别对于一种或多种特定标记呈阳性的细胞。例如，利用CD34的抗体，利用上述技术，可以确定细胞是否含有可检测量的CD34 ；如果是，则细胞是CD34+。同时，如果细胞产生足够的能被RT-PCR所检测的0CT-4RNA，或者显著多于成体细胞的0CT-4RNA，则该细胞是0CT-4+。细胞表面标记(例如⑶标记如⑶34)的抗体，和干细胞特异性基因例如0CT-4的序列，也是本领域公知的。胎盘细胞，特别是已经经过Ficoll分离、差别附着，或两者的结合所分离的细胞可以利用荧光活化细胞分选仪(FACQ来分选。荧光活化细胞分选(FACQ是基于颗粒的荧光性质来分离颗粒(包括细胞)的普遍已知的方法(Kamarch，1987，Methods Enzymol, 151 :150-165)。激光激发单个颗粒中的荧光部分产生微小的电荷，从而允许从混合物中电磁分离正电颗粒和负电颗粒。在一个实施方案中，用不同的荧光标签来标记细胞表面标记特异性抗体或配体。细胞经过细胞分选仪处理，从而可以基于其与所用抗体的结合能力来分离细胞。FACS分选的颗粒可以直接注入96-孔或384—孔板的单个孔中，从而便于分离和克隆。在一个分选技术方案中，来源于胎盘的干细胞基于标记⑶34、⑶38、⑶44、⑶45、 ⑶73、⑶105、0CT-4和/或HLA-G的表达来分选。这可以结合基于细胞在培养中的附着性质来选择细胞的步骤来实现。例如，可以在基于标记表达的分选之前或之后进行组织培养塑料制品附着选择。例如，在一个实施方案中，首先基于CD34的表达来分选细胞；保留 ⑶34—的细胞，并将⑶200+HLA-G+的细胞与所有其它⑶34—细胞分离。在另一个实施方案中，基于标记⑶200和/或HLA-G的表达来分选来源于胎盘的细胞；例如，表现出任一这些标记的细胞被分离以供进一步使用。在具体实施方案中，表达例如CD200和/或HLA-G的细胞可以进一步被分选，所述分选可以基于CD73和/或CD105的表达，或基于体SH2、SH3 或SH4识别的表位，或基于⑶34、⑶38或⑶45的表达的缺失。例如，在一个实施方案中，胎盘细胞通过⑶200、HLA-G、⑶73、⑶105、⑶；34、⑶38和⑶45的表达或其缺失来分选，并且将 ⑶200+、HLA-G+、⑶73+、⑶105+、⑶;⑶38—和⑶45—的细胞与其它胎盘细胞分离，供进一步使用。在任何上述分选胎盘细胞的实施方案的具体实施方案中，分选后保留的细胞群中至少50%、60%、70%、80%、90%或95%的细胞为所述分离的胎盘细胞。可通过以上5. 4. 2 节所述的一种或多种任何标记分选胎盘细胞。在一个具体的实施方案中，从其他胎盘细胞中分选(即分离)(1)附着于组织培养塑料制品，和( ⑶10+、⑶34_和^105+的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，从其他胎盘细胞分选(即分离)(1)附着于组织培养塑料制品，和(2)⑶10+、⑶34_、CD105+和CD200. 的胎盘细胞。在另外具体的实施方案中，从其他胎盘细胞分选(即分离)(1)附着于组织培养塑料制品，和⑵CD10+、⑶汹-、CD45-、CD90+、CD105+和CD200+的胎盘细胞。对于抗体-介导的胎盘细胞(例如胎盘干细胞或胎盘多能细胞)的检测和分选， 可与适于检测和分选细胞的任何荧光团或其他标记物(例如荧光-活化细胞分选)结合， 使用对特定标记特异性的任何抗体。特异性标记的抗体/荧光组合包括，但不限于与荧光素异硫氰酸酯(FITC)偶联的 HLA-G(获自 Serotec, Raleigh, North Carolina)、CDlO(获自 BD Immunocytometry Systems, San Jose，California)、CD44(获自 BD Biosciences Pharmingen, San Jose, California)禾口 CD 105(获自 R&D Systems Inc. , Minneapolis, Minnesota)单克隆抗体；与藻红蛋白(PE)偶联的CD44、CD200、CDl 17和CD 13 (BD Biosciences Pharmingen)单克隆抗体；与别藻蓝蛋白(APC)偶联的链亲和素和⑶38单克隆抗体(BDBiosciences Pharmingen)；和生物素化的 CD90 (BD Biosciences Pharmingen)。 可用的其他抗体包括，但不限于，CD133iPC(Miltenyi)、KDITBiotin(CD309，Abeam)、细胞角蛋白 K-Fitc (Sigma 或 Dako)、HLA ABC-Fitc (BD)、HLADR, DQ, DP-PE (BD)、β -2-微球蛋白-PE(BD)、CD80-PE(BD)和 CD86-APC(BD)。其他可用的抗体/标记组合包括，但不限于⑶45_PerCP(苷叶绿素蛋白)； CD44TE ；CDl9-PE ；CDIO-F (荧光素)；HLA-G-F 和 T 氨基-放线菌素-D (rAAD) ；HLA-ABC-F寸寸。此处提供的分离的胎盘细胞可利用例如与藻红蛋白-Cy5(PE Cy5)偶联的链亲和素和与生物素偶联的⑶117或⑶133单克隆抗体测定⑶117或⑶133 ；然而利用本系统，由于背景相对高，所述细胞似乎为⑶117或⑶133阳性。所述分离的胎盘细胞可用单个标记的抗体标记并且检测和分选。胎盘细胞还可以同时用多个不同标记的抗体标记。在另一个实施方案中，可以使用磁珠来分离细胞。可以利用磁性活化细胞分选 (MACS)技术分选细胞，所述技术是基于颗粒结合磁珠(0.5-100 μ m直径)的能力来分选颗粒的方法。对磁微珠可以进行多种有效的修饰，包括共价添加特异性识别特定细胞表面分子或半抗原的抗体。所述磁珠随后与细胞混合，从而结合。然后将细胞通过磁场，以分离出具有特定细胞表面标记的细胞。在一个实施方案中，可随后分离这些细胞，并与偶联了其它细胞表面标记抗体的磁珠再混合。所述细胞再次通过磁场，分离结合了两种抗体的细胞。然后可以将此类细胞稀释放入不同的培养皿中，例如微滴培养皿中，用于克隆分离。分离的胎盘细胞还可以基于细胞形态学和生长特征来表征和/或分选。例如，分离的胎盘细胞可以表征为在培养中具有成纤维细胞样表型，和/或基于成纤维细胞样表型来选择。所述分离的胎盘细胞还可以表征为具有形成胚样体的能力，和/或基于其形成胚样体的能力来选择。在一个实施方案中，例如，将形状为成纤维细胞样，表达CD73和CD105， 并在培养中产生一个或多个胚样体的胎盘细胞与其它胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，将培养中产生一个或多个胚样体的0CT-4+胎盘细胞与其它胎盘细胞分离。在另一个实施方案中，分离的胎盘细胞可以通过集落形成单位试验来鉴别和表征。集落形成单位试验是本领域公知的，例如MESEN⑶LT 培养基(Stem Cell Technologies，Inc.，Vancouver British Columbia)0利用本领域已知的标准技术，例如台盼蓝排除试验、醋酸荧光素摄取试验、碘化丙锭摄取试验(评估活力)；和胸腺嘧啶核苷摄取试验、MTT细胞增殖试验(评估增殖)来分析分离的胎盘细胞的活力、增殖潜力和寿命。寿命可以通过本领域公知的方法确定，例如通过延长培养中群倍增的最大数来确定。利用本领域已知的其它技术，也可以将分离的胎盘细胞，例如以上5. 4. 2节所述的分离的胎盘细胞，和其它胎盘细胞分开，例如选择性生长期望的细胞(阳性分选)、选择性破坏不需要细胞(阴性选择)、基于混合群与例如大豆凝聚素的差异细胞可凝集性的分离、冻融步骤、过滤、常规离心和区带离心、离心冲洗(逆流离心)、单位重力分离、逆流分布、电泳等等。5. 6分离的胎盘细胞的培养5. 6. 1 培养基分离的胎盘细胞、或分离的胎盘细胞群、或从其中生长出胎盘干细胞的细胞或胎盘组织可被用于起始或接种细胞培养物。细胞一般转移到无菌的组织培养容器内，所述容器使用或未使用胞外基质或配体包被，例如层粘连蛋白、胶原(如天然的或变性的)、 明胶、纤连蛋白、鸟氨酸、玻连蛋白和胞外膜蛋白(例如MATRIGEL (BD Discovery Labware, Bedford，Mass. )) 0可以在本领域认为适合细胞，例如适合干细胞培养的任何培养基和任何条件下，培养分离的胎盘细胞。优选的，培养基包含血清。分离的胎盘细胞可以培养在例如 DMEM-LG (Dulbecco改良的必需培养基，低糖)/MCDB201 (鸡成纤维细胞基础培养基)，其含有ITS(胰岛素-转铁蛋白-硒)、LA+BSA(亚油酸-牛血清白蛋白)、右旋糖、L-抗坏血酸106 丄6 、16 -1，和青霉素/链霉素；含有10%胎牛血清(FBS)的DMEM-HG(高糖)；含有15% FBS的DMEM-HG ；含有10% FBS、10%马血清和氢化可的松的IMDM(Iscove改良的 Dulbecco培养基)；含有10% FBS、EGF和肝素的M199 ；含有10% FBS、GLUTAMAX 和庆大霉素的α -MEM(最低必需培养基)；含有10% FBS、GLUTAMAX 和庆大霉素等的DMEM。可用于培养胎盘细胞的其它培养基包括DMEM(高糖或低糖)、Eagle基础培养基、 Ham的FlO培养基(FlO)、Ham的F12培养基(F12)、Iscove的改良Dulbecco培养基、间充质干细胞生长培养基(MSCGM)、Liebovitz 的 L-15 培养基、MCDB、DMIEM/F12、RPMI 1640、改良的 DMEM(Gibco)、DMEM/MCDB201 (Sigma)和 CELL-GRO FREE。培养基中可以添加一种或多种组分，包括例如血清(如胎牛血清(FBS)，优选约 2-15% (ν/ν)；马血清(ES)；人血清(HS)) ； β-巯基乙醇(BME)，优选约 0.001% (ν/ν)；一种或多种生长因子，例如，血小板衍生的生长因子(PDGF)、表皮生长因子(EGF)、基础成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素-样生长因子-1 (IGF-I)、白血病抑制因子(LIF)、血管内皮生长因子(VEGF)、和促红细胞生成素(EPO)；氨基酸，包括L-缬氨酸；和用于控制微生物污染的一种或多种抗生素和/或抗真菌剂，例如青霉素G、硫酸链霉素、两性霉素B、庆大霉素和制霉菌素，单独或组合使用。所述分离的胎盘细胞可在标准组织培养条件下培养，例如在组织培养皿或多孔平皿中培养。还可以利用悬滴法培养所述分离的胎盘细胞。该方法中，分离的胎盘细胞以约 5mL培养基中每毫升1 X IO4个细胞悬浮，并且将一滴或多滴培养基置于组织培养容器，例如 IOOmL陪氏培养皿的盖子内。所述滴可例如单滴落下或例如自多通道移液管多滴落下。小心反转盖子并且置于平皿底部之上，其含有大量液体，例如足以维持平皿空气中含水量的无菌PBS，然后培养干细胞。在一个实施方案中，分离的胎盘细胞在用于维持分离的胎盘细胞中未分化表型的化合物存在下培养。在一个具体的实施方案中，所述化合物为取代的3，4_ 二氢吡啶醇[4， 5_d]嘧啶。在更具体的实施方案中，所述化合物具有下列化学结构
权利要求
1.治疗脑中或脑周围血流破坏的个体的方法，该方法包括给予所述个体有效量的分离的人贴壁胎盘细胞，所述细胞为CD10\CD34"和 CD105+ ；CD200+ 和 HLA-G+ ；CD73+、CD105+ 和 CD200+ ；CD200+ 和 0CT-4+；CD73+、CD105+ 和 HLA-G+ ；CD73+和CD105+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时有助于在包含所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体；或0CT-4+，并且当所述群在允许形成胚样体的条件下培养时有助于在包含所述干细胞的胎盘细胞群中形成一个或多个胚样体；或上述的任何组合。
2.权利要求1的方法，其中所述⑶10+、⑶34_、⑶105+细胞还为⑶200+。
3.权利要求2的方法，其中所述⑶10+、⑶;34-、⑶105+、⑶200+细胞还为⑶45—或⑶90+。
4.权利要求2的方法，其中所述⑶10+、⑶;34-、⑶105+、⑶200+细胞还为⑶45—和⑶90+。
5.权利要求1的方法，其中所述治疗有效量为使所述个体表现出的脑中或脑周围血流破坏消除、可检测的改善、严重程度减轻、或一种或多种症状发展变缓的所述细胞量。
6.权利要求5的方法，其中所述症状为偏瘫或轻偏瘫。
7.权利要求5的方法，其中所述症状为面部肌肉虚弱；麻木；感觉下降；嗅觉、味觉、听力或视力改变；嗅觉、味觉、听力或视力丧失；眼皮耷拉(下垂症)；可检测的眼肌肉虚弱； 呕吐反射降低；吞咽能力降低；瞳孔光反应性降低；面部知觉降低；平衡降低；眼震症；呼吸速率改变；心率改变；锁骨乳突肌虚弱，转动头至一侧的能力降低或不能；舌虚弱；失语症(不能说或理解语言)；失用症(改变的自觉运动)；视野缺陷；记忆力缺损；半侧忽视或半侧空间忽视(对病变相对的视野另一侧空间的关注缺乏)；思维混乱；意识模糊；纵欲姿态的发展；疾病失认症(持续否认缺陷的存在)；难以行走；运动协同作用改变；眩晕；不平衡；意识丧失；头痛或呕吐，其中所述症状由脑中或脑周围血流破坏引起。
8.权利要求1的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞为⑶10+、⑶34—、⑶105+、⑶200+。
9.权利要求8的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞还为⑶45_和^90+。
10.权利要求1的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞为⑶200+和HLA-G+。
11.权利要求10的方法，其中所述CD200+、HLA-G+细胞还为CD34\CD38\ CD45\ CD73+ 和 CD105+。
12.权利要求1的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞为⑶73+、⑶105+和HLA-G+。
13.权利要求11的方法，其中所述CD73+、CD105+和HLA-G+细胞还为CD34\ CD45\ 0CT-4+和 CD200+。
14.权利要求1的方法，其中所述CD73+、CD105+和CD200+细胞还为CD34\CD38\ CD45"和 HLA-G+。
15.权利要求1的方法，其中所述CD200+、0CT-4+细胞还为⑶汹-、CD38-、CD45-、CD73+、 CD105+ 和 HLA-G+。
16.权利要求1的方法，其中所述CD73+和CD105+细胞还为OCT-4+、CD34\CD38"和CD45-。
17.权利要求1的方法，其中所述0CT-4+细胞还为⑶73+、CD105+、CD200+、CD34\ CD38-和 CD45\
18.权利要求1的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞包含在细胞群中，所述细胞群中至少80%为分离的人贴壁胎盘细胞。
19.权利要求1的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞包含在细胞群中，所述细胞群中至少90%为所述分离的人贴壁胎盘细胞。
20.治疗脑中或脑周围血流破坏的个体的方法，该方法包括给予所述个体有效量的分离的人贴壁胎盘细胞，其中所述细胞以比骨髓来源的间充质干细胞可检测的更高水平表达一种或多种基因，其中所述一种或多种基因为以下中的一种或多种ACTG2、ADARBl, AMIG02、ARTS-I, B4GALT6、BCHE, Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD, DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、 FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、 LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、 ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，并且其中所述骨髓来源的间充质干细胞已经进行了与所述胎盘细胞相同传代次数的传代培养。
21.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述血流破坏为中风。
22.权利要求21的方法，其中所述中风为缺血性中风。
23.权利要求21的方法，其中所述中风为出血性中风。
24.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述破坏为血肿。
25.权利要求对的方法，其中所述血肿为硬脑膜血肿、硬膜下血肿或蛛网膜下血肿。
26.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述破坏为血管痉挛。
27.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的胎盘细胞通过大丸注射给予。
28.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的胎盘细胞通过静脉内输注给予。
29.权利要求1或权利要求20的方法，其中头颅内给予所述分离的胎盘细胞。
30.权利要求四的方法，其中局部缺血区域内给予所述分离的胎盘细胞。
31.权利要求四的方法，其中所述局部缺血区域周围给予分离的胎盘细胞。
32.权利要求1或权利要求20的方法，其中经腹膜、肌内、真皮内或眼内给予所述分离的胎盘细胞。
33.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的贴壁胎盘细胞通过手术移植包含所述分离的人贴壁胎盘细胞的组合物而给予。
34.权利要求33的方法，其中所述组合物为基质或支架。
35.权利要求34的方法，其中所述基质或支架为水凝胶。
36.权利要求34的方法，其中所述基质或支架为脱细胞组织。
37.权利要求34的方法，其中所述基质或支架为合成的生物可降解组合物。
38.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的胎盘细胞一次给予所述个体。
39.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的胎盘细胞分多次给予所述个体。
40.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括给予所述个体每千克约·1 X IO4至1 X IO6个分离的胎盘细胞。
41.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括给予所述个体每千克约 1 X IO5至1 X IO6个分离的胎盘细胞。
42.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括给予所述个体每千克约 1 X IO6至1 X IO7个分离的胎盘细胞。
43.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括给予所述个体每千克约 1 X IO7至1 X IO8个分离的胎盘细胞。
44.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括静脉内给予约5XIO7至 3 X IO9个分离的胎盘细胞。
45.权利要求44的方法，其中所述给予包括给予约9X IO8个分离的胎盘细胞。
46.权利要求44的方法，其中所述给予包括给予约1.8X IO9个分离的胎盘细胞。
47.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述给予包括头颅内给予约5XIO7至 IXlO8个分离的胎盘细胞。
48.权利要求47的方法，其中所述给予包括给予约9Xxl07个分离的胎盘细胞。
49.权利要求1或权利要求20的方法，包括给予所述个体第二种治疗剂。
50.权利要求49的方法，其中所述第二种治疗剂为神经保护剂。
51.权利要求50的方法，其中所述第二种治疗剂为NXY-059(苯基丁基硝酮的二磺酰基衍生物)。
52.权利要求49的方法，其中所述第二种治疗剂为血栓溶解剂。
53.权利要求52的方法，其中所述血栓溶解剂为组织纤溶酶原激活物(tPA)。
54.权利要求1或权利要求21的方法，其中所述分离的胎盘细胞在所述个体脑中或脑周围血流破坏的一种或多种症状发展的48小时内给予所述个体。
55.权利要求1或权利要求21的方法，其中所述分离的胎盘细胞在所述个体脑中或脑周围血流破坏的一种或多种症状发展的M小时内给予所述个体。
56.权利要求1或权利要求21的方法，其中所述分离的胎盘细胞在所述个体脑中或脑周围血流破坏的一种或多种症状发展的12小时内给予所述个体。
57.权利要求1或权利要求21的方法，其中所述分离的胎盘细胞在所述个体脑中或脑周围血流破坏的一种或多种症状发展的3小时内给予所述个体。
58.权利要求1或权利要求21的方法，其中所述分离的胎盘细胞在所述给予之前冷冻保存。
59.权利要求1或权利要求20的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞获自胎盘干细胞库。
60.权利要求21的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞在培养基中培养约3至约 35个群倍增时表达所述一种或多种基因，培养基包括60% DMEM-LG和40% MCDB-201 ；2% 胎牛血清；IX胰岛素-转铁蛋白-硒(ITS) ；IX亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ；10_9M 地塞米松；10_%抗坏血酸2-磷酸盐；表皮生长因子lOng/mL和血小板来源的生长因子 (PDGF-BB)10ng/mL。
61.权利要求21的方法，其中所述分离的人贴壁胎盘细胞在培养基中培养约3至约 35个群加倍增时表达所述一种或多种基因，所述培养基包含60% DMEM-LG(Gibco)和40%MCDB-201(Sigma) ；2% 胎牛血清(Hyclone Labs.) ；1 X 胰岛素 _ 转铁蛋白-硒(ITS)； IX亚油酸-牛血清白蛋白(LA-BSA) ； ΙΟ—Ι地塞米松(Sigma) ； IO4M抗坏血酸2-磷酸盐 (Sigma)；表皮生长因子10ng/mL(R&DSystems)；和血小板来源的生长因子(PDGF-BB)IOng/ mL(R&D Systems)。
全文摘要
本发明提供了治疗中风的方法，该方法包括给予中风患者胎盘干细胞、含有胎盘干细胞的细胞群、和/或含有胎盘干细胞的组合物。
文档编号A61P25/00GK102186971SQ200980141316
公开日2011年9月14日 申请日期2009年8月20日 优先权日2008年8月20日
发明者安迪·查特林, 阿贾伊·帕尔 申请人:人类起源公司