利用胎盘干细胞治疗疼痛的制作方法

文档序号:1248503阅读:339来源:国知局
利用胎盘干细胞治疗疼痛的制作方法
【专利摘要】本文提供了患有疼痛(例如,神经性疼痛)的个体的治疗方法,包括向所述个体施用治疗有效量的组织培养塑料制品贴壁胎盘干细胞(PDAC?)。
【专利说明】利用胎盘干细胞治疗疼痛
[0001] 本申请主张2011年6月1日提交的美国临时专利申请No. 61/492, 314、2011年10 月18日提交的美国临时专利申请No. 61/548,663和2012年2月3日提交的美国临时专利 申请No. 61/594, 985的优先权,以上每一篇专利的公开内容以其全部并入本文作为参考。 1.

【技术领域】
[0002] 本文提供了利用分离的胎盘干细胞缓解疼痛的方法,以及治疗患有疼痛的个体的 方法。 2.

【背景技术】
[0003] 由于哺乳动物胎盘丰富并且通常作为医学废物被丢弃,因此它们是医学上有用的 干细胞的独特来源。在医学领域需要用于抑制疼痛的改进组合物和方法。因此,本文提供 了在疼痛治疗中有用的胎盘干细胞和包含胎盘干细胞的组合物,以及利用它们治疗疼痛的 方法。 3.


【发明内容】

[0004] 在一个方面,本文提供了治疗个体中疼痛或异常感觉情况,如感觉不良 (dysaesthesia)、异常性疼痛(allodynia)和痛觉过敏的方法,包括向所述个体施用治疗有 效量的胎盘干细胞,或以胎盘干细胞为条件的培养基,其中所述治疗有效量是足以引起所 述疼痛的可检测改善的量。在一种具体的实施方式中,所述方法包括鉴别需要疼痛减轻的 个体,或遭受疼痛折磨的个体。在另一种具体的实施方式中,所述方法还包括在施用所述 胎盘干细胞之前确定所述个体中疼痛的一个或多个第一水平,以及在施用所述胎盘干细胞 之后确定所述个体中疼痛的一个或多个第二水平,其中与所述疼痛的一个或多个第一水平 相比,所述治疗有效量的胎盘干细胞降低了所述疼痛的一个或多个第二水平。在一种更具 体的实施方式中,所述治疗有效量的胎盘干细胞引起比由于施用安慰剂所引起的改善更好 的或更持久的疼痛的可检测改善。在一种更具体的实施方式中,所述疼痛的一个或多个第 一水平和所述疼痛的一个或多个第二水平是通过疼痛评估量表来确定的。在一种更具体 的实施方式中,该疼痛评估量表为数字疼痛强度量表(Numeric Pain Intensity Scale); 疼痛性质评估量表(Pain Quliaty Assessment Scale);简单描述性疼痛强度量表(Simple Descriptive Pain Intensity Scale);视觉模拟量表(Visual Analog Scale);ffong-Baker 脸谱疼痛分级量表(Wong-Baker FACES Pain Rating Scale) ;FLACC 量表;CRIES 量表;或 COMFORT 量表。
[0005] 在另一种具体的实施方式中,所述方法还包括在施用所述胎盘干细胞之前确定个 体中疼痛的一种或多种生理学指标的第一水平,以及在施用所述胎盘干细胞之后确定该个 体中疼痛的一种或多种生理学指标的第二水平,其中与第一水平相比,该治疗有效量的胎 盘干细胞降低了第二水平。在一种更具体的实施方式中,所述疼痛的生理学指标是个体的 心率。在一种更具体的实施方式中,在施用后个体中的心率比施用前该个体中的心率更低。 在另一种更具体的实施方式中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的心脏收缩。在一种更 具体的实施方式中,在施用后个体的心脏收缩比施用前该个体中的心脏收缩更低。在另一 种更具体的实施方式中,所述疼痛的生理学指标是个体的心脏舒张。在一种更具体的实施 方式中,在施用后个体的心脏舒张比施用前该个体中的心脏舒张更低。
[0006] 在治疗疼痛的方法的另一种实施方式中,所述疼痛为神经性疼痛。在一种具体的 实施方式中,所述神经性疼痛是由糖尿病性神经病变引起的。在另一种具体的实施方式中, 所述神经性疼痛是由所述个体中的神经损伤造成的。在另一种具体的实施方式中,所述神 经性疼痛是由药物引起的。在某些具体的实施方式中,所述药物是含钼抗癌药物或另一种 化学治疗药物或者包含含钼抗癌药物或另一种化学治疗药物,其中该含钼抗癌药物例如奥 沙利钼、卡钼或顺钼,该另一种化学治疗药物例如紫杉醇或长春新碱。在另一种实施方式 中,所述神经性疼痛是由病毒引起的,例如,病毒性疾病,如水痘带状疱疹、疱疹(例如,单纯 性疱疹)或人类免疫缺陷性病毒(HIV)。在另一种实施方式中,所述疼痛是由放射性损伤引 起的,例如,作为癌症治疗的一部分的放射性损伤。在另一种具体的实施方式中,所述神经 性疼痛是由炎症引起的,例如,神经性炎症、神经炎。
[0007] 在治疗疼痛的方法的另一种实施方式中,所述疼痛为炎症性疼痛。在另一种实施 方式中,所述疼痛为骨痛。在一种具体的实施方式中,所述骨痛与癌症有关或者由癌症引 起。在另一种实施方式中,所述疼痛是由癌症引起的。在另一种实施方式中,所述疼痛是由 外阴痛引起的或者与外阴痛有关。在另一种实施方式中,所述疼痛是由间质性膀胱炎引起 的或者与间质性膀胱炎有关。在另一种实施方式中,所述疼痛对类固醇治疗无反应。在另 一种实施方式中,所述疼痛对非类固醇抗炎治疗无反应。在另一种实施方式中,所述疼痛对 阿片样药物治疗无反应。在另一种实施方式中,所述疼痛对鸦片制剂治疗无反应。
[0008] 在另一个方面,本文提供了用于在治疗个体中疼痛中有用的治疗有效量的胎盘干 细胞或以胎盘干细胞为条件的培养基,其中所述治疗有效量是足以引起所述疼痛中的可检 测改善的量。在一种实施方式中,在所述使用前所述个体中疼痛的水平和所述使用后个体 中所述疼痛的水平是通过疼痛评估量表来确定的,例如,数字疼痛强度量表;疼痛性质评估 量表;简单描述性疼痛强度量表;视觉模拟量表;Wong-Baker脸谱疼痛分级量表;FLACC量 表;CRIES量表;或COMFORT量表。在另一种实施方式中,在所述使用前个体中所述疼痛的 水平和所述使用后个体中所述疼痛的水平是通过疼痛的一个或多个身体指标来确定的。在 一种具体的实施方式中,疼痛的所述生理学指标是个体的心率,例如,所述使用后比所述使 用前所述个体中的所述心率更低。在另一种具体的实施方式中,疼痛的所述生理学指标是 所述个体的心脏收缩,例如,所述使用后比所述使用前所述个体中的所述心脏收缩更低。在 另一种具体的实施方式中,疼痛的所述生理学指标是所述个体中的心脏舒张,例如,所述使 用后比所述使用前所述个体中的所述心脏舒张更低。在某些实施方式中,所述疼痛是神经 性疼痛。在一种更具体的实施方式中,所述神经性疼痛是由糖尿病性神经病变引起的。在 一种更具体的实施方式中,所述神经性疼痛是由所述个体中的神经损伤引起的。在另一种 更具体的实施方式中,所述神经性疼痛是由炎症引起的。在另一种更具体的实施方式中,所 述神经性疼痛是由药物引起的。在一种更具体的实施方式中,所述药物是含钼抗癌药物或 者包含含钼抗癌药物,例如,该含钼抗癌药物是奥沙利钼、卡钼或顺钼,或者该含钼抗癌药 物包含奥沙利钼、卡钼或顺钼。在另一种具体的实施方式中,所述药物是紫杉醇或者包含紫 杉醇。在其他具体的实施方式中,所述疼痛是炎症性疼痛、骨痛(例如,骨痛与癌症有关或由 癌症引起的)、由癌症引起的疼痛、由外阴痛引起的疼痛或者与外阴痛有关的疼痛、由间质 性膀胱炎引起的疼痛或者与间质性膀胱炎有关的疼痛或者由退行性关节病(如骨关节炎) 引起的疼痛。在某些实施方式中,所述疼痛对类固醇治疗无反应。在某些其他实施方式中, 所述疼痛对非类固醇抗炎治疗无反应。在某些其他实施方式中,所述疼痛对阿片样药物治 疗无反应。在某些其他实施方式中,所述疼痛对非特异性或者混合的y/s阿片样药物治 疗无反应。
[0009] 在上述实施方式中任一种的一种【具体实施方式】中,所述胎盘干细胞是CD10+、 ⑶和⑶105+。在一种更具体的实施方式中,所述胎盘干细胞另外是⑶200+,例如,所述 胎盘干细胞是⑶1〇+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。在一种更具体的实施方式中,所述胎盘干细 胞另外是⑶45^和⑶90+。在一种更具体的实施方式中,所述胎盘干细胞另外是⑶8(Γ和 ⑶86 _。在其他的【具体实施方式】中,所述胎盘干细胞表达⑶200而不表达HLA-G ;或者表达 CD73、CD105和CD200 ;或者表达CD200和0CT-4 ;或者表达CD73和CD105而不表达HLA-G。 在本文所述胎盘干细胞中任一种的一种【具体实施方式】中,所述胎盘干细胞是HLA-A,B,C+。 在本文所述实施方式中任一种的【具体实施方式】中,所述胎盘干细胞另外是0CT-4+。在某些 实施方式中,将所述胎盘干细胞配制以局部施用。在某些其他实施方式中,将所述胎盘干细 胞配制以全身施用,例如,静脉内或动脉内施用。
[0010] 3. 1 定义
[0011] 如本文所使用的,当涉及说明的数值时,术语"约"表示所说明的数值正或负10% 内的值。
[0012] 如本文所使用的,术语"来源/来源于"表示分离自或表示纯化自。例如,胎盘来 源贴壁细胞分离自胎盘。术语"来源/来源于"涵盖了由直接分离自组织(例如胎盘)的细 胞培养的细胞以及由原代分离物培养或扩增的细胞。
[0013] 如本文所使用的,"免疫定位"表示在(例如)流式细胞术、荧光活化细胞分选、磁性 细胞分选、原位杂交、免疫组织化学等中使用免疫蛋白(例如,抗体或其片段)的化合物(例 如,细胞标志物)的检测。
[0014] 如本文所使用的,术语"SH2"是指结合标志物⑶105上的表位的抗体。因此,被称 为SH2+的细胞是CD105+。
[0015] 如本文所使用的,术语"SH3"和"SH4"是指结合标志物⑶73上所存在的表位的抗 体。因此,被称为SH3+和/或SH4+的细胞是⑶73+。
[0016] 如本文所使用的,如果在(例如)干细胞的收集和/或培养期间从干细胞中除去了 至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的干细胞与之天然相联系的其他细胞,那么干 细胞就被"分离"。"分离的"细胞群体表示与所述细胞群体来源的组织(例如,胎盘)的其他 细胞基本分离的细胞群体。如果在(例如)干细胞群体的收集和/或培养期间从所述干细胞 群体中除去了至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的所述干细胞群体与之天然相联 系的细胞,则(例如)干细胞的群体是"分离的"。
[0017] 如本文所使用的,术语"胎盘干细胞"是指不考虑原代培养后的传代次数,来源于 (例如,分离自)哺乳动物胎盘的干细胞或祖细胞,其贴壁至组织培养基底(例如,组织培养 塑料板或者纤连蛋白涂覆的组织培养板)。然而,如本文所使用的术语"胎盘干细胞"不表 示滋养层细胞(trophoblast)、细胞滋养细胞(cytrophoblast)、胚胎生殖细胞或胚胎干细 胞,如本领域技术人员知道的这些细胞。如果细胞保留了干细胞的至少一种性质,例如,与 一种或多种类型干细胞有关的标志物或基因表达谱;在培养中复制至少10-40次的能力; 多潜能性,例如,体外、体内或体外和体内分化为三种胚层中的一种或多种的细胞的能力; 缺乏成熟(即分化的)细胞特性等,则认为该细胞是"干细胞"。术语"胎盘干细胞"和"胎盘 来源的干细胞"可以互换使用。除非在本文中另作说明,否则术语"胎盘"包括脐带。在某 些实施方式中,本文所公开的胎盘干细胞是体外多能的(即所述细胞在分化条件下能够体 外分化)、体内多能的(即所述细胞能够体内分化)或两者。
[0018] 如本文所使用的,当特定标志物是可检测的时,则干细胞对该标志物是"阳性的"。 例如,由于CD73在胎盘干细胞上是以比背景(与(例如)任何给定测定的同型对照或实验阴 性对照相比)可检测地更大的量可检测的,因此胎盘干细胞对于(例如)⑶73是阳性的。在 由细胞所提供或表达情况下标志物可用于将该细胞与至少一种其他细胞类型进行区分或 可用于选择或分离该细胞时,该细胞对于标志物也是阳性的。
[0019] 如本文所使用的,"免疫调节"和"免疫调节的"表示引起免疫应答的可检测变化或 具有引起所述变化的能力,和引起免疫应答的可检测变化的能力。 4.【专利附图】

【附图说明】
[0020] 图1示出了 CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盘干细胞、载体或加巴喷丁(GBP)降 低神经性疼痛模型中疼痛的效力。X轴:条件;Y轴:根据Von Frey细丝分类测定的敏感性 (异常性疼痛)改善。"D":天数。GBP:加巴喷丁。MPK:毫克每千克。BL:基线。
[0021] 图2示出了在神经性疼痛动物模型中由⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盘干细胞 (1父10 6、3\106或10父106个细胞/次施用)、载体或加巴喷丁(68?)的施用所产生的总疼 痛减轻(T0PAR)程度。星号表示与单独的载体施用相比的显著结果。
[0022] 图 3A-图 3D 示出了 CD10+、CD34' CD105+、CD200+ 胎盘干细胞对通过 26g 力 Von Frey纤维所测量的机械性异常性疼痛的影响(A):施用4X 106个胎盘干细胞(正方形)和载 体(菱形)后,同侧四肢的后爪回缩频率。(B):施用4X106个胎盘干细胞(正方形)和载体(直 线)后,对侧四肢的后爪回缩频率。(C):胎盘干细胞对同侧四肢的机械性异常性疼痛降低的 剂量依赖性作用。(D):胎盘干细胞对疼痛降低反应者百分比的剂量依赖性作用。*P〈0. 05 ; **p〈0. 01相对于载体。对于图3C和图3D,第一柱(最左侧)代表载体;第二柱代表4X 106 个胎盘干细胞;第三柱代表1X 1〇6个胎盘干细胞;和第四柱(最右侧)代表4 X 105个胎盘干 细胞。
[0023] 图4A-图4B表明在第4天,在引流淋巴结处,0)10+、0)34-、0)105+、0)200 +胎盘干 细胞抑制树突状细胞的募集、活化和分化。(A):胎盘干细胞处理组具有较低的⑶11c、⑶86 和CD80基因表达。(B):胎盘干细胞处理组具有较低的IL-12基因表达。*P〈0. 05 ;林p〈0. 01 相对于载体。对于图4A和图4B,第一柱(最左侧)代表载体;第二柱(最右侧)代表胎盘干细 胞。
[0024] 图5A-图5C表明0)10+、0)34-、0)105+、0)200+胎盘干细胞抑制1'细胞活化,调节 T细胞分化和细胞因子谱。(A):在第4天,在引流淋巴结处,胎盘干细胞处理组具有较低的 ⑶3和⑶69基因表达。(B)在第4天,在引流淋巴结处,胎盘干细胞处理组具有显著较低的 IFNy基因表达。(C):在第4天,在引流淋巴结处,胎盘干细胞处理组具有较高的IL-10,但 是具有较低的IL-17基因表达。*P〈0. 05 ;林p〈0. 01相对于载体。对于图5A、图5B和图5C, 第一柱(最左边)代表载体;第二柱(最右边)代表胎盘干细胞。
[0025] 图6A-图6B表明在第8天,在同侧坐骨神经中,CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盘 干细胞(PSC)抑制IL-17mRNA (A)和蛋白质(B)的表达。*P〈0. 05相对于载体。
[0026] 图7A-图7D表明在第8天,CD10+、CD34-、CD105+、CD200+胎盘干细胞抑制免疫细 胞向同侧坐骨神经的浸润。(A):胎盘干细胞抑制巨噬细胞浸润(Emrl)和活化(⑶68)。(B): 胎盘干细胞抑制树突状细胞浸润(⑶11c)和活化(⑶80、IL-12b)。(C):胎盘干细胞抑制T 细胞浸润(⑶3d)和活化(⑶69)。(D):坐骨神经单细胞悬液的流式细胞术分析显示胎盘干 细胞抑制T细胞(⑶3)和巨噬细胞(ED2)浸润。*P〈0. 05相对于载体。对于图7A、图7B和 图7C,第一柱(最左边)代表载体;第二柱(最右边)代表胎盘干细胞。对于图7D,第一柱(最 左边)代表初始细胞;中间的棒代表载体;和第三柱(最右边)代表胎盘干细胞。
[0027] 图8A-图8L表明在第8天,CD10+、CD34、CD105+、CD200+胎盘干细胞抑制向同 侧坐骨神经的炎症性浸润。正常、载体和胎盘干细胞处理的动物中H&E染色(A-C)、⑶68 (D-F)、⑶8 (G-I)和⑶4 (J-L)。箭头表示A、B和C中的神经束膜;星号表示神经外膜。放 大100X,比例尺200mM。
[0028] 图9表示在第8天,同侧坐骨神经中⑶10+、⑶34'⑶105+、⑶200+胎盘干细胞抑制 CCL2、CCL12和CXCL1的mRNA表达。第一柱(最左边)代表载体;第二柱(最右边)代表胎盘 干细胞。
[0029] 图10A-图10D示出了神经损伤程序(D6)后并且在处理(D10、D16、D25和D30)后, 基线处大鼠爪子对26g刺激的反应次数。(A)⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盘干细胞施 用后,对CCI诱发的疼痛所观察到的显著疼痛降低。(C)⑶10+、⑶34_、⑶105+、⑶200+胎盘 干细胞施用后,对CCI诱发的疼痛所观察到的显著疼痛降低。(B,D)显示了对对侧爪子的 作用。
[0030] 图11A-图11B示出了在神经损伤程序(D7)后和治疗(D11、D21、D26和D34)后,在 基线(BL)处,大鼠能够在旋转杆上保持的持续时间(至多180秒)。(A)⑶10+、⑶34_、⑶105+、 CD200+胎盘干细胞静脉内(IV)处理和对照组。(B) CD10+、CD34-、CD105+、CD200+胎盘干细 胞肌内(頂)处理和对照组。
[0031] 5.【具体实施方式】
[0032] 5.1治疗疼痛的方法
[0033] 本文描述了治疗疼痛的方法,包括施用胎盘来源的细胞,例如,胎盘干细胞,例如, 下文5. 4节中所述的或如下文实施例7中所述制备的胎盘干细胞。在具体的实施方式中,在 本文所述的用于治疗疼痛的方法中使用的胎盘干细胞是⑶1〇+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。在 其他的【具体实施方式】中,在本文所述的治疗疼痛的方法中使用的胎盘干细胞以比通过相同 数目的BM-MSC的所述基因的表达可检测地更高的水平表达EL0VL2、ST3GAL6、ST6GALNAC5 和/或SLC12A8基因。在某些实施方式中,在本文所述的方法中使用的胎盘干细胞以比 通过相同数目的BM-MSC的所述基因的表达可检测地更高的水平表达CPA4、TCF21和/或 VTN基因。在某些实施方式中,在本文所述的方法中使用的胎盘干细胞以比通过相同数目 的BM-MSC的所述基因的表达可检测地更高的水平表达B4GALT6、FLJ10781和/或NUAK1基 因。在一种【具体实施方式】中,所述胎盘干细胞还以比通过相同数目的BM-MSC的所述基因的 表达可检测地更高的水平表达Cllorf9基因。
[0034] 5. 1. 1治疗疼痛的方法
[0035] 通常将疼痛定义为与真实或可能的组织损伤有关或由这些损伤引起的不 愉快的感觉和情绪体验。Merskey H, Bogduk N 主编,Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain(IASP)Task Force on Taxonomy, IASP Press:Seattle, 209-214, 1994。由于疼痛的感知是非常主观的,因此它是 最难以有效诊断和治疗的病理之一。
[0036] 在一个方面,本文提供了治疗患有疼痛的个体的方法,包括向所述个体施用治疗 有效量的胎盘干细胞,或以胎盘干细胞为条件的培养基,其中所述治疗有效量是足以引起 所述疼痛或与所述疼痛有关的症状中的可检测改善的量。在一种实施方式中,所述方法还 包括在施用所述胎盘干细胞之前确定个体中疼痛的第一水平,以及在施用所述胎盘干细胞 之后确定所述个体中疼痛的第二水平,其中与所述疼痛的第一水平相比,所述治疗有效量 的胎盘干细胞降低了所述疼痛的所述第二水平。
[0037] 在某些实施方式中,当施用时,所述治疗有效量的胎盘干细胞与安慰剂的施用相 比引起所述个体中疼痛更好的或更持久的改善。
[0038] 在某些实施方式中,所述疼痛是伤害性疼痛。通常当组织损伤、疾病或炎症后 释放有害刺激物(如炎症性化学介质)时引起伤害性疼痛,并且通过损伤位点处的功能正 常的感觉感受器(伤害感受器)检测伤害性疼痛。参见,例如,K 〇ltzenburg,M. Clin. J. of Painl6:S131-S138(2000)。伤害性疼痛的原因的实例包括,但不限于,化学灼伤或热灼伤、 皮肤切口和挫伤、骨关节炎、类风湿性关节炎、肌腱炎和肌盘膜痛。在某些实施方式中,通过 炎症刺激伤害性疼痛。
[0039] 在某些其他实施方式中,所述疼痛是神经性疼痛。神经性疼痛反映神经系统 的损伤或损害,并且已被定义为"由神经系统中原发性损害或功能障碍引起或造成的 疼痛。Merskey H, Bogduk N 主编,Classification of Chronic Pain, International Association for the Study of Pain (IASP)Task Force on Taxonomy, IASP Press:Seattle, 209-214, 1994。在一种【具体实施方式】中,所述神经性疼痛的特征在于周围 神经元兴奋性的改变。在其他具体的实施方式中,所述神经性疼痛包括,但不限于,与糖尿 病性神经病变有关的疼痛、带状疱疹神经痛、三叉神经痛、炎症(例如,神经性炎症、神经炎) 和中风后疼痛。在某些实施方式中,神经性疼痛是持续的、偶发的,并且被描述为灼痛、麻 刺、刺痛、急痛、电极状、戳痛、挤压、深部疼痛或痉挛。在某些其他实施方式中,患有神经性 疼痛的个体还另外经历了部分或完全感觉缺陷、异常或不熟悉的不愉快感觉(感觉不良)、 由非有害刺激物产生的疼痛或对超阈刺激反应的不成比例的疼痛感知(痛觉过敏)。
[0040] 在另一种【具体实施方式】中,所述神经性疼痛是复杂性局部疼痛综合征(CRPS)。在 一种【具体实施方式】中,CRPS影响不存在神经损伤的四肢(I型CRPS)。在一种更具体的实施 方式中,所述I型CRPS包括反射交感性营养不良(RSD)。在一种更具体的实施方式中,所述 RSD是I期RSD或"早期RSD"。在早期RSD中,疼痛比对损伤所期望的要更严重,并且它具 有灼烧或疼痛性质。它可能依赖于四肢、身体接触或情绪低落而提高。受影响的区域通常 会水肿,并且可能会是高温或低温的,并且可能会显示出指甲和毛发生长的提高。放射照片 可以显示出早期骨变化。在另一种更具体的实施方式中,所述RSD是II期RSD或"确定的 RSD"。在一种更具体的实施方式中,除疼痛之外,确定的RSD包括水肿组织的硬化;具有网 状青斑或青紫症的皮肤的多汗;脱发;指甲脊起、破裂或易断;干燥的手的发展;和/或皮 肤和皮下组织的显著萎缩。疼痛仍是主要特征。在另一种更具体的实施方式中,所述RSD 是III期RSD或"晚期RSD"。在一种更具体的实施方式中,所述晚期RSD包括向邻近扩散 的疼痛;不可逆的组织损伤;皮肤薄且光亮;和在放射照片上可见的骨脱矿物质化。
[0041] 在另一种具体的实施方式中,所述神经性疼痛是由药物引起的疼痛,例如,化学 治疗药物或抗癌药物。在一种【具体实施方式】中,所述药物是含钼药物、紫杉烷、埃博霉素、 植物碱或沙利度胺,或者包含含钼药物、紫杉烷、埃博霉素、植物碱或沙利度胺。在一种 更具体的实施方式中,所述药物是或者包含硼替佐米、卡钼(例如,PARAPLATIXK.)、 顺钼(例如,PLATINOL?)、阿糖胞苷(例如,CYTOSAR?、Ara-C)、多西他赛(例如, TAXOTERE?)、依托泊苷 /VP-16 (VEPESID?)、吉西他滨(例如,GEMZAR?)、 HALAVEN? (甲磺酸艾日布林)、六甲三聚氰胺(例如,冊XALIN?)、紫杉醇(例如, TAXOL?; ABRAXANE?)、奥沙利钼(例如,ELOXATiN?)、苏拉明、沙利度胺(例如, THALOMID? )、长春碱(例如,VELBAN? ; ALKABAN-AQ?)、长春新碱(例如, ONCOVIN?、VINCASAR PFS?、Vincrex)或长春瑞滨(NAVELBINE?)。
[0042] 在某些其他【具体实施方式】中,所述药物是抗生素。在某些其他实施方式中,所述药 物是他汀类药物(抑制素,statin)。
[0043] 在某些其他【具体实施方式】中,所述药物是或者包括氨氯地平(例如, NORVASC?、Lotril或Lotrel)、阿托伐他汀(例如,LIPITOR?)、度洛西汀 (例如,CYMBALTA⑧)、普瑞巴林(LYRICA?)、别嘌醇(例如,LOPURIM?、 ZYLOPRIM?)、AMIN0DIPINBERGLATE、胺碘酮(例如,CORDERONE?, PACERONE? )、阿洛地平,阿米替林(例如,ELAVIL?、ENDEP?、VANATRIP?)、甲硝唑(例 如,FLAGYL?、METR0GEL?)、呋喃妥因(例如,FURADANTIN?、MACROBID?、 MACRODANTIN?、NITR0MACR0)、哌克昔林,VYTORIN?、环丙沙星(例如, aPROK、Ρ?ΚΧΗ.?ΜΑ.Ο、双硫仑(例如,ANTABUSE)、唑吡坦(例如,AMBIEN? )、丁螺环酮(例如,BUSPAR)、氯硝西泮(例如,KL0N0PM、CEBERKL0N、VALPAX)、阿普唑 仑(例如,XANAX?)、苯妥英(DILANTIN?)、西酞普兰(例如,CELEXA)、度洛西汀 (例如,CYMBALTA? )、文拉法辛(例如,EFFEX0R,EFFEXOR XR? )、去甲替林 (例如,AVENTYL HCL, PAMEL0R)、舍曲林(例如,ZOLOFT?)、帕罗西汀(例如,PAXIL, PAXILCRJU、阿替洛尔(例如,TENORMIN、SEN0RMIN)、培哚普利(例如,ACE0N)、雷米普 利(例如,RAMIPRIL?)、氯沙坦(例如,COZAAR?、HYZAAR?)、肼屈嗪(例如, APRESOLINE?)、氢氯噻嗪(例如,HYDRODIURIL?、EZIDE?、HYDRO-PAR?、MICR0ZIDE?)、 赖诺普利(例如,PRINOVILd)、ZESTRIL? )、替米沙坦(例如,micardis?)、哌克 昔林,哌唑嗪(例如,MINIPRESS?)、赖诺普利(例如,PRINIVIL?、ZESTRIL?. )、洛伐他汀(例如,ALTOCOR?、MEVACOR?)、CADUET?、罗素伐他汀(例 如,CRESTOR?)、氟伐他汀(例如,LESCOL⑧、LESCOL?XL)、辛伐他汀(例如, ZOCOR?)、西立伐他汀(例如,lipobay?)、吉非贝齐(例如,LOPID?)、普伐他汀(例如, PRAVACHOL⑧、PRAVIGARD PAC?)、d4T (司他夫定,例如,ZERITC?)、ddC (扎西他滨; 例如,HIVID? )、ddl (去羟肌苷,例如,VIDEX?EC)、异烟肼(例如,TUBIZ[D?)、二 氨苯砜(DDS、氨苯砜)。
[0044] 在某些实施方式中,所述神经性疼痛不是由药物引起的疼痛,例如,化学治 疗药物或抗癌药物。在一种【具体实施方式】中,所述神经性疼痛不是由含钼药物、紫杉 烷、埃博霉素、植物碱或沙利度胺所引起的疼痛。在一种更具体的实施方式中,所述神 经性疼痛不是由以下药物引起的疼痛:硼替佐米、卡钼(例如,PARAPLATINS)、顺 钼(例如,PLATINOLi))、阿糖胞苷(例如,CYTOSAR_、Ara-c)、多西他赛(例如, TAXOTERE?)、依托泊苷 /VP-16 (VEPESID?)、吉西他滨(例如,GEMZAR? )、 HMJWEN? (甲磺酸艾日布林)、六甲三聚氰胺(例如,liEXMJN?)、紫杉醇(例如, TAXOL?; ABRAXANE?)、奥沙利钼(例如,ELOXATIN?)、苏拉明、沙利度胺(例如, THALOMID?)、长春碱(例如,VELBAN?; ALKABAN-AQ?)、长春新碱(例如, ONCOVIN?、VINCASAR PFS?、Vincrex)或长春瑞滨(NAVELBTNBI)) 0
[0045] 在另一种具体的实施方式中,所述CRPS影响存在神经损伤的四肢(II型CRPS)。在 一种更具体的实施方式中,所述CRPS II包括灼痛。在另一种具体的实施方式中,所述CRPS 包括交感神经维持的疼痛综合征。在某些实施方式中,CRPS的症状包括,但不限于,疼痛、自 主神经功能障碍、浮肿、运动障碍、营养不良、萎缩、灼痛、异常性疼痛(轻触疼痛)。在某些实 施方式中,CRPS相关疼痛伴随着肿胀和关节压痛、出汗增多、对温度敏感和/或皮肤变色。
[0046] 在某些其他【具体实施方式】中,所述神经性疼痛是由营养不良所引起的或与营养不 良有关的神经性疼痛。在更具体的实施方式中,所述营养不良是维生素 B12 (钴胺素、氰钴 胺素)缺乏。在另一种更具体的实施方式中,所述营养不良是维生素 B6 (吡哆醇、磷酸吡哆 醛)缺乏。在另一种更具体的实施方式中,所述营养不良是维生素 B1 (硫胺素)缺乏。在 另一种具体的实施方式中,患有由营养不良引起的神经性疼痛的个体进行了肥胖症治疗手 术。在另一种具体的实施方式中,所述神经性疼痛是由酒精中毒或患有疼痛的个体饮酒所 造成的或是与之相关的。
[0047] 在某些实施方式中,所述疼痛是由外阴痛所造成的或者与外阴痛有关。外阴痛是 外阴疼痛,例如,不明确地由外阴或阴道炎或者皮肤病引起的疼痛。在一种实施方式中,夕卜 阴痛中的疼痛定位在外阴区域,例如,在前庭区,如外阴前庭炎或前庭痛。在另一种实施方 式中,外阴痛中的疼痛可以延伸至阴蒂,例如,阴蒂痛(clitorodynia)。造成外阴痛的原因 的实例包括,但不限于,性交疼痛、刺激外阴的神经的损伤或刺激,炎症的遗传倾向性、过敏 症、自身免疫病症(例如,红斑狼疮或干燥综合征)、感染(例如,酵母感染、HPV或细菌性阴道 病)和神经病。外阴痛的示例性症状非限制地包括外阴、大阴唇、小阴唇或前庭处或周围的 弥散性疼痛或烧灼感。
[0048] 在某些实施方式中,所述疼痛是由间质性膀胱炎所造成的或者与间质性膀胱炎有 关。间质性膀胱炎(也称为膀胱疼痛综合征)是慢性病况,其特征通常为(例如)与膀胱有 关的疼痛或压迫,与排尿有关的疼痛、刺激性排尿、排尿频率、紧急程度,或者骨盆疼痛或压 迫。间质性膀胱炎的病理和发病原因尚不清楚。然而,已提出了几种可能的原因,例如,血管 阻塞、自身免疫、炎症、膀胱内膜渗漏、肥大细胞、压力,以及遗传、神经原和内分泌原因。在 一种实施方式中,可以通过(例如)骨盆疼痛紧急性/频率(PUF)患者调查或KC1测试(也称 为钾敏感性测试)来做出间质性膀胱炎的诊断。
[0049] 在某些其他实施方式中,所述疼痛是内脏痛。
[0050] 在某些其他实施方式中,所述疼痛是术后疼痛,如由手术期间对组织所造成的创 伤所引起的疼痛。
[0051] 在某些其他实施方式中,所述疼痛是混合性疼痛,例如,是具有伤害性和神经性成 分的慢性疼痛。在具体的实施方式中,所述混合性疼痛是癌症痛或下腰痛。
[0052] 在某些其他实施方式中,所述疼痛是偏头痛或头痛,例如,血管性头痛、集束性头 痛或中毒性头痛。
[0053] 在具体的实施方式中,与疼痛有关的所述症状包括(但不限于)自主神经功能障 碍、运动不能、虚弱、颤动、肌肉痉挛、张力障碍、营养不良、萎缩、强直、关节压痛、出汗增多、 对温度敏感、轻触(异常性疼痛)、皮肤变色、高温或低温、指甲和毛发生长的提高、早期骨变 化、具有网状青斑或青紫症的多汗;脱发;指甲脊起、破裂或易断;手干;弥散性骨质疏松、 不可逆性组织损伤、皮肤薄且光亮、关节挛缩和显著的骨脱矿物质化。
[0054] 在某些实施方式中,根据本文所述的方法向个体施用胎盘干细胞导致所述个体中 疼痛降低,同时没有与指示/用于疼痛治疗的一种或多种药物(例如,加巴喷丁)有关的伴随 的副作用。在具体的实施方式中,根据本文所述的方法的胎盘干细胞的使用导致施用了胎 盘干细胞的个体中疼痛的降低,但是不导致所述个体的感觉和/或运动协调的缺乏。
[0055] 5. 1. 2疼痛评估量表
[0056] 在一种实施方式中,向患有疼痛的个体施用的胎盘干细胞的治疗有效量是导致所 述个体中疼痛可检测降低的量。所述降低可以是对个体可检测的,对观察者可检测的,或两 者。在本文所提供的治疗方法的某些实施方式中,个体中的疼痛水平是根据一种或多种个 体疼痛量表,例如,由医生指导或作为治疗前检查的一部分由所述个体评价的。在某些其他 实施方式中,个体中的疼痛水平是由观察者使用一种或多种观察者疼痛量表评价的。当根 据胎盘干细胞施用前后的方法评价疼痛水平时,优选地将相同量表用于每次评价。可以在 胎盘干细胞施用前对个体中的疼痛评价一次或一次以上,例如,2、3、4或5次,并且在胎盘 干细胞施用后评价一次或一次以上,例如,2、3、4或5次。
[0057] 在一种实施方式中,通过0-10数字疼痛强度量表评价个体中的疼痛。在该量表 中,零等于无疼痛,而10等于最疼痛。在某些实施方式中,例如,在疼痛性质评估量表中,将 疼痛分为不止一种数字描述,例如,0-10表示感受到的疼痛的"热痛"程度,0-10表示感受 到的疼痛的"剧痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"锐痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的 "钝痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"冷痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"敏感痛" 程度,0-10表示感受到的疼痛的"触痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"痒痛"程度,0-10 表示感受到的疼痛的"射痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"麻痛"程度,0-10表示感受 到的疼痛的"刺痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"电击疼"程度,0-10表示感受到的疼 痛的"绞痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"搏动痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"放 射性痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"酸痛"程度,0-10表示感受到的疼痛的"重痛"程 度和/或0-10表示感受到的疼痛的"不愉快的疼痛"程度。
[0058] 在另一种实施方式中,通过简单描述性疼痛强度量表评价个体中的疼痛。在该量 表中,将疼痛描述为,例如,"无疼痛"、"轻微疼痛"、"中度疼痛"、"严重疼痛"、"极严重疼痛" 或"有可能的最疼痛"。
[0059] 在另一种实施方式中,通过视觉模拟量表评价个体中的疼痛。在视觉模拟量表中, 向个体提供由垂直线组成的图;线的一端标记为"无疼痛",而另一端标记为"有可能的最疼 痛"。要求个体在线的两端之间标记点,从而表明由所述个体察觉的疼痛水平。
[0060] 在另一种实施方式中,通过Wong-Baker脸谱疼痛分级量表评价个体中的疼痛。在 面部表情量表中,由一系列卡通面部表情表示疼痛水平,所述卡通面部表情通常有六个面 部表情,显示高兴并逐渐变为更不高兴。在具体的实施方式中,面部表情的潜台词为短语, 如"无疼痛"、"有点疼痛"、"疼痛较严重"、"疼痛更严重"、"疼痛非常严重"和"疼痛最严重"。 在另一种具体的实施方式中,面部表情的潜台词单独为短语,如"无疼痛"、"轻微、烦恼的疼 痛"、"使人不安、不舒服、讨厌的疼痛"、"使人痛苦、耐受的疼痛"、"剧烈、厌恶、可怕的疼痛" 和"有可能最严重的、难忍的、折磨人的疼痛",或者与数字〇至10等级结合。
[0061] 在某些实施方式中,通过FLACC (面部表情、肢体动作、活动、哭喊和可安慰性)量 表评价个体中的疼痛。在具体的实施方式中,从(例如)〇至2对五种特征中的每一种打分, 其中2表示疼痛,0表示无疼痛。得分可以单独使用或总计使用。
[0062] 在某些其他实施方式中,通过CRIES (哭闹、Sa02 (血红蛋白饱和)所需的02、生命 体征升高(血压和心率)、面部表情和失眠)量表评价个体中的疼痛。在具体的实施方式中, 从(例如)0至2对五种特征中的每一种打分,其中2表示疼痛,0表示无疼痛。得分可以单 独使用或总计使用。
[0063] 在某些实施方式中,通过COMFORT量表评价个体中的疼痛,所述量表评价了 9种不 同的特征(警觉度、安静、呼吸困难、哭闹、身体运动度、肌张力、面部紧张度、血压和心率)、 每个特征按照1-5级打分,其中1表示无疼痛或疼痛最小,而5表示最疼痛。得分可以单独 使用或总计使用。
[0064] 5. 1. 3疼痛的牛理学指标
[0065] 如本文所使用的,"疼痛的治疗"等可以包括完全消除疼痛;通过遭受疼痛的个体 的疼痛显著降低;通过客观标准(例如,心率、血压、肌张力等)的疼痛或疼痛指征的可检测 降低;或任意两种或全部三种的组合。在某些其他实施方式中,可以在胎盘干细胞施用之前 或之后或者之前和之后,通过生理学标准(例如,压力的生理学标准)来评价个体中的疼痛。 这些生理学标准可以包括客观可测量的标准,如心率或血压,例如,与个体中非疼痛状态相 比或者与预期规范(例如,心脏收缩压120和心脏舒张压80 ;每分钟搏动60次)相比,心率 或血液升高。这些生理学标准还可以,或者作为替代,包括主观可测量的标准,如面部表情、 肌肉紧张(肌张力)、出汗、发抖等。
[0066] 因此,在某些实施方式中,施用于患有疼痛的个体的治疗有效量的胎盘干细胞引 起所述个体的心率可检测的降低,例如,降低5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或 50% ;心率从每分钟搏动120次(bpm)或以上降低至低于llObpm ;从llObpm或以上降低至 低于lOObpm ;从lOObpm或以上降低至低于90bpm ;从90bpm或以上降低至低于80bpm ;从 120bpm或以上降低至低于lOObprn ;从llObpm以上降低至低于90bpm ;从lOObprn或以上降低 至低于80bpm ;从130bpm或以上降低至低于lOObpm ;从120bpm或以上降低至低于90bpm ; 从llObpm或以上降低至低于80bpm ;或者从120bpm或以上降低至低于80bpm。
[0067] 在某些其他实施方式中,当施用于患有疼痛的个体时,治疗有效量的胎盘干细胞 引起所述个体的血压可检测的降低,例如,个体的心脏收缩压、心脏舒张压,或两者降低5%、 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%或50% ;个体心脏收缩压从200或以上降低至低于 190 ;心脏收缩压从190或以上降低至低于180 ;心脏收缩压从180或以上降低至低于170 ; 心脏收缩压从170或以上降低至低于160 ;心脏收缩压从160或以上降低至低于150 ;心脏 收缩压从150或以上降低至低于140 ;心脏收缩压从140或以上降低至低于130 ;心脏收缩 压从200或以上降低至低于180 ;心脏收缩压从190或以上降低至低于170 ;心脏收缩压从 180或以上降低至低于160 ;心脏收缩压从170或以上降低至低于150 ;心脏收缩压从160 或以上降低至低于140 ;心脏收缩压从150或以上降低至低于130 ;心脏收缩压从200或以 上降低至低于170 ;心脏收缩压从190或以上降低至低于160 ;心脏收缩压从180或以上降 低至低于150 ;心脏收缩压从170或以上降低至低于140 ;心脏收缩压从160或以上降低至 低于130 ;心脏收缩压从200或以上降低至低于160 ;心脏收缩压从190或以上降低至低于 150 ;心脏收缩压从180或以上降低至低于140 ;心脏收缩压从200或以上降低至低于130 ; 心脏收缩压从200或以上降低至低于150 ;心脏收缩压从190或以上降低至低于140 ;心脏 收缩压从180或以上降低至低于130 ;心脏收缩压从200或以上降低至低于140 ;心脏收缩 压从190或以上降低至低于130 ;或者心脏收缩压从200或以上降低至低于130 ;个体心脏 舒张压从140或以上降低至低于130 ;心脏舒张压从130或以上降低至低于120 ;心脏舒张 压从120或以上降低至低于110 ;心脏舒张压从110或以上降低至低于100 ;心脏舒张压从 100或以上降低至低于90 ;心脏舒张压从140或以上降低至低于120 ;心脏舒张压从110或 以上降低至低于90 ;心脏舒张压从140或以上降低至低于110 ;心脏舒张压从130或以上降 低至低于100 ;心脏舒张压从120或以上降低至低于90 ;心脏舒张压从140或以上降低至 低于100 ;心脏舒张压从130或以上降低至低于90 ;或者心脏舒张压从140以上降低至低于 90 〇
[0068] 在某些实施方式中,当施用于患有疼痛的个体时,治疗有效量的胎盘干细胞一起 所述个体中一种或多种细胞因子(例如,促炎细胞因子)的量可检测的降低。在一种具体实 施方式中,根据本文所述的方法向患有疼痛的个体施用胎盘干细胞使得所述个体中IL-2、 IL-6、IL-12、IL-17和/或干扰素-γ或其任意组合的量减少。可以使用本领域中已知的 任何方法完成对个体中细胞因子降低的评价,例如,可以使用(例如)ELISA来测量个体血浆 中的细胞因子水平。
[0069] 在某些实施方式中,当施用于患有疼痛的个体时,治疗有效量的胎盘干细胞引起 所述个体中一种或多种细胞因子可检测的增加。在一种【具体实施方式】中,根据本文所述的 方法向患有疼痛的个体施用胎盘干细胞使得所述个体中IL-10的量的增加。可以使用本领 域中已知的任何方法完成对个体中细胞因子水平提高的评价,例如,可以使用(例如)ELISA 来测量个体血浆中的细胞因子水平。
[0070] 在某些实施方式中,当施用于患有疼痛的个体时,治疗有效量的胎盘干细胞引起 所述个体中一种或多种趋化因子的量可检测的降低。在一种【具体实施方式】中,根据本文所 述的方法向患有疼痛的个体施用胎盘干细胞使得所述个体中CCL2、CCL12和/或CXCL1或 其任意组合的量降低。可以使用本领域中已知的任何方法完成对个体中趋化因子的评价, 例如,可以使用(例如)ELISA来测量个体血浆中的趋化因子水平。
[0071] 在某些实施方式中,当施用于患有疼痛的个体时,治疗有效量的胎盘干细胞引起 所述个体中一种或多种细胞类型中活化和/或分化的可检测降低。在一种【具体实施方式】 中,根据本文所述的方法向患有疼痛的个体施用胎盘干细胞使得所述个体中树突状细胞、T 细胞和/或巨噬细胞或其任意组合的活化和/或分化的降低。可以使用本领域中已知的任 何方法完成对个体中特异性细胞类型的活化和/或分化的评价,例如,所述个体的特定区 域中存在的特异性细胞标志物的测量,例如,与血液细胞有关的或与特异性组织/器官中 发现的细胞有关的特异性细胞标志物的测量/评价。
[0072] 5. 2与疼痛有关或者成为疼痛原因的炎症反应的抑制
[0073] 炎症不是疼痛的单一来源。然而,在某些实施方式中,胎盘干细胞可用于改善与炎 症有关或由炎症引起的疼痛。在一种实施方式中,本文提供了个体中疼痛改善的方法,包括 使个体中的免疫细胞与有效量的胎盘干细胞接触,其中所述有效量是(1)可检测地抑制所 述个体中免疫应答和(2)可检测地降低所述个体中疼痛的量。在具体的实施方式中,所述 胎盘干细胞可检测地抑制混合淋巴细胞反应(MLR)测定或回归测定中T细胞的增殖。可以 通过(例如)向所述个体(例如)局部、全身或区域性(或者通过这些的组合)施用胎盘干细胞 来完成接触。因此,本文提供了个体中疼痛改善的方法,包括使个体中的免疫细胞与有效量 的胎盘干细胞接触,其中所述有效量是(1)可检测地调节(例如,抑制)所述个体中免疫和/ 或炎症反应和(2)可检测地降低所述个体中疼痛的量。在一种【具体实施方式】中,用有效量 的胎盘干细胞接触个体中免疫细胞使得所述个体中IL-2、IL-6、IL-12、IL-17和/或干扰 素或其任意组合的量的减少。在另一种【具体实施方式】中,用有效量的胎盘干细胞接触 所述个体中的免疫细胞使得所述个体中CCL2、CCL12和/或CXCL1或其任意组合的量的减 少。在另一种【具体实施方式】中,用有效量的胎盘干细胞接触个体中的免疫细胞使得所述个 体中IL-10的量增加。
[0074] 在另一种实施方式中,本文提供了个体中疼痛改善的方法,包括将有效量的胎盘 干细胞施用于所述个体,其中所述有效量是(1)可检测地调节(例如,抑制)所述个体中免疫 和/或炎症反应和(2)可检测地降低所述个体中疼痛的量。在一种【具体实施方式】中,所述 胎盘干细胞可检测地抑制混合淋巴细胞反应(MLR)测定或回归测定中T细胞的增殖。所述 施用可以局部、全身或区域性(或通过这些的组合)进行。在一种【具体实施方式】中,向个体施 用有效量的胎盘干细胞使得所述个体中IL-2、IL-6、IL-12、IL-17和/或干扰素-γ或其 任意组合的量减少。在另一种【具体实施方式】中,向个体施用有效量的胎盘干细胞使得所述 个体中CCL2、CCL12和/或CXCL1或其任意组合的量减少。在另一种【具体实施方式】中,向个 体施用有效量的胎盘干细胞使得所述个体中IL-10的量增加。
[0075] 在该方法的背景中,"免疫细胞"表示(适应性或天然)免疫系统的任何细胞,具体 地为T细胞和NK (自然杀伤)细胞、树突状细胞和巨噬细胞。因此,在所述方法的多种实施 方式中,胎盘干细胞与多个免疫细胞接触,其中所述多种免疫细胞是或包括多种T细胞(例 如,多种CD3+T细胞、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞)和/或自然杀伤细胞。在该方法的背景 中,"免疫应答"可以是免疫细胞对通常由免疫细胞所感知的刺激物的任何应答,例如,对抗 原存在性的应答。在多种实施方式中,免疫应答可以是对非己抗原(如输注或移植物中存 在的抗原)或对自身抗原(如在自身免疫病中)应答的T细胞(例如,CD3+T细胞、CD4+T细胞 和/或CD8+T细胞)的增殖。免疫应答还可以是移植物内所含的T细胞的增殖。免疫应答 还可以是自然杀伤(NK)细胞的任何活性、树突状细胞的成熟、T细胞的分化、巨噬细胞偏向 (skewing) Ml 或 M2 系等。
[0076] 用于降低或改善疼痛(例如,通过降低炎症)的胎盘干细胞还可以来源于单个物 种,例如,预期受体的物种或将降低或抑制其功能的免疫细胞的物种,或者可以来源于多个 物种。
[0077] 在多种实施方式中,与不存在胎盘干细胞的免疫功能相比,所述接触足以将受疼 痛困扰的个体中的免疫功能(例如,对抗原应答的T细胞增殖)或炎症抑制至少50%、60%、 70%、80%、90%或95%。可以使用(例如)来自所述个体的T细胞样品在体外测定(参见下文) 中确定体内背景中的这种抑制;即,可以对于受体个体中胎盘干细胞的具体数目和免疫细 胞的数目将体外测定中的抑制程度外推至个体中的抑制程度。
[0078] 可以在(例如)包含以约10:1:2的比值混合的⑶4+或⑶8+T细胞、树突状细胞 (DC)和胎盘干细胞的MLR中测试胎盘干细胞,其中用染料(例如,区分为子代细胞的CFSE) 对T细胞染色,并且其中允许T细胞增殖约6天。T细胞和/或DC细胞可以获自待治疗个 体,例如,可以对所述个体是自体同源(autologous)的,或者可以对所述个体是同种异体 (allogeneic)的。如果与在存在DC但不存在胎盘干细胞的情况下的T细胞增殖相比,在存 在胎盘干细胞的情况下6天时T细胞增殖可检测地降低,则所述胎盘干细胞是免疫抑制性 的。在MLR的一种实施方式中,例如,胎盘干细胞可以融化或从培养物中收获。将约20, 000 个胎盘干细胞重悬浮于100 μ 1培养基(RPMI1640、ImM HEPES缓冲液、抗生素和5%混合的人 血清)中,并允许在孔底部附着2小时。从整个周围血单核细胞Miltenyi磁珠分离⑶4+和 /或⑶8+T细胞。所述细胞是CFSE染色的,并且每孔加入总计100, 000个T细胞(仅⑶4+T 细胞、仅⑶8+T细胞或相等量的⑶4+和⑶8+T细胞)。将孔中体积恢复至200 μ 1,并且允许 进行MLR。
[0079] 在某些实施方式中,在施用至遭受疼痛的个体之前确定了胎盘干细胞的抗炎活性 (即,免疫抑制活性)。这可以通过(例如)确定用于改善疼痛所施用的胎盘干细胞样品的免 疫抑制活性来完成。这种活性可以通过(例如)在(例如)MLR或回归测定中测试胎盘干细胞 样品或胎盘干细胞来确定。在一种实施方式中,用样品进行MLR,并且在所述测定中确定了 由样品胎盘干细胞所显示的免疫抑制程度。疼痛改善程度预期与样品胎盘干细胞的免疫抑 制活性相关。因此,MLR可以用作确定特定胎盘干细胞群体或胎盘干细胞改善由炎症所引 起的疼痛的绝对和相对能力的方法。
[0080] 可以改变MLR的参数以提供更多的数据或更好地确定胎盘干细胞样品或胎盘干 细胞免疫抑制,并因此改善疼痛的能力。例如,由于胎盘干细胞的免疫抑制似乎大致与测定 中存在的胎盘干细胞数目成比例地增加,因此,在一种实施方式中,可以使用两种或更多种 数目的胎盘干细胞进行MLR,例如,每次反应1 X 103、3 X 103、1 X 104和/或3 X 104个胎盘干 细胞。在测定中,还可以改变相对于T细胞数目的胎盘干细胞的数目。例如,所述测定中胎 盘干细胞和T细胞可以以(例如)约10:1至约1:10,优选地约1:5的任何比例存在,但也可 以使用相对更大数目的胎盘干细胞或T细胞。
[0081] 可以以类似的方式使用回归测定或BTR测定。
[0082] 相对于个体中已知或预期的免疫细胞(例如,T细胞)数目,可以以约10:1至约 1:10,优选地约1:5的比值向个体施用胎盘干细胞。然而,在非限制性实例中,胎盘干细胞 可以以约 10, 000:1、约 1,000:1、约 100:1、约 10:1、约 1:1、约 1:10、约 1:100、约 1:1,000 或 约1:10,000的比值施用于个体。一般地,可以施用约IX 105至约IX 108个胎盘干细胞/ 千克受体,优选地约1X 1〇6至约1X 1〇7个胎盘干细胞/千克受体以使免疫抑制起效。在多 种实施方式中,施用于个体或受试者的胎盘干细胞包含至少、大约或不超过IX 105、3X105、 IX l〇6、3X 106、1X 107、3X 107、1X 108、3X 108、1X 109、3X 109 个胎盘干细胞或更多个胎盘 干细胞。
[0083] 胎盘干细胞还可以与一种或多种第二类型的干细胞(例如,来自骨髓的间质干细 胞)一起施用。可以将这些第二干细胞与所述胎盘干细胞以(例如)约1:10至约10:1之间 的比值施用于个体。
[0084] 为了有利于胎盘干细胞和免疫细胞体内接触或接近,可以通过足以使胎盘干细胞 和免疫细胞彼此接触的任何途径将胎盘干细胞施用于个体。例如,可以将胎盘干细胞(例 如)静脉内、肌内、腹膜内、眼内、肠胃外、鞘内、皮下或直接至器官(如胰腺)施用于个体。可 以在疼痛位点或在导致疼痛的神经损伤位点,将胎盘干细胞施用至遭受疼痛的个体的区 域。对于体内施用,可以将胎盘干细胞配制为药物组合物,如下文5. 8. 1. 2节中所述。
[0085] 在另一个方面,施用于遭受疼痛的个体的胎盘干细胞已通过基因工程表达一种或 多种抗炎细胞因子。在具体的实施方式中,所述抗炎细胞因子包括IL-10。
[0086] 5. 3第二治疗性组合物和第二疗法
[0087] 在任何上述治疗个体中疼痛的方法中,所述方法可以包括第二治疗性组合物或第 二疗法的施用,例如,抗疼痛药物或疗法。在一种优选的实施方式中,第二活性剂能够缓解 疼痛,抑制或调节炎症反应,提供镇静效果或抗神经痛效果,或确保患者舒适。
[0088] 在某些实施方式中,第二治疗性组合物包括,但不限于,阿片类止痛剂、非麻醉性 止痛剂、抗炎剂、cox-2抑制剂、α -肾上腺素能受体激动剂或拮抗剂、氯胺酮、麻醉剂、NMDA 拮抗剂、免疫调节剂、免疫抑制剂、抗抑郁药、抗惊厥药、抗高血压药、抗焦虑药、钙通道阻断 齐U、肌肉松弛剂、皮质类固醇、高压氧、JNK抑制剂、已知可缓解疼痛的其他治疗剂,及其可药 用盐、溶剂化物、水合物、立体异构体、笼形物、前体药物和药理学活性代谢产物。
[0089] 在某些实施方式中,第二治疗性组合物是阿片样药物。阿片样药物可用于(例如) 治疗严重疼痛。阿片类止痛剂的实例包括,但不限于,羟考酮(例如,OXYCONTTNt?)、 硫酸吗啡(例如,MS CONTIN?、DURAMORPH? 和 / 或 ASTRAMORPHCg))、哌替 啶(例如,DEMEROL?)和芬太尼透皮贴(例如,DURAGESIC?)和其他已知的常规药 物。羟考酮(例如,OXYCONTIN?)是阿片样药物的长效形式并且可以在(例如)早期和 晚期CRPS中使用。
[0090] 可以将非麻醉止痛剂和抗炎剂用于(例如)怀孕和哺乳期间的疼痛治疗。可以 在(例如)早期疼痛综合征中使用非留体抗炎药物(NSAID)。抗炎剂的实例包括,但不限 于,乙酰水杨酸(例如,阿司匹林)、布洛芬(例如,MOTRIN?、ADVIL?等)、酮洛芬 (例如,ORUVAIL?)、罗非考昔(例如,VIOXX?)、萘普生钠(例如,ANAPROX?、 NAPRELAN?、NAPROSYN⑩等)、酮咯酸(例如,ACULAR?)或其他已知的常规 药物。特异性cox-2抑制剂是塞来考昔(例如,CELEBREX)。
[0091] 抗抑郁剂的第二治疗性化合物的实例包括,但不限于,去甲替林 (PAMELOR?)、阿米替林(ELAVIL?)、丙米嗪(TOFRANIL?)、多塞平 CSiNEQUAN?)、氯米帕明(ANAF.RAN.IL?)、氟西汀(+PROZAC?)、舍曲 林(ZOLOFT?)、奈法唑酮(SERZONE?)、文拉法辛(EFFEXOR?)、曲唑酮 (DESYREL?)、安非他酮(WELLBUTRIN⑩)和其他已知的常规药物。参见,例如, Physicians,Desk Reference, 329, 1417, 1831 和 3270 页(第 57 版,2003)。
[0092] 抗惊厥剂的第二治疗性化合物的实例包括,但不限于,卡马西平、奥卡西平、加巴 喷丁 (NEUEONTIN?)、苯妥英、丙戊酸钠、氯硝西泮、托吡酯、拉莫三嗪、唑尼沙胺和噻 加宾。参见,例如,Physicians'Desk Reference, 2563 (第 57 版,2003)。
[0093] 其他的第二治疗性化合物包括,但不限于,皮质类固醇(例如,泼尼松、地塞米松 或氢化可的松)、口服活性lb类抗心律不齐剂(例如,美西律)、钙通道阻断剂(例如,硝苯 地平)、β_阻断剂(例如,普萘洛尔)、α-阻断剂(例如,酚苄明)和α2-肾上腺素能激动 齐LI(例如,可乐定),其还可以结合免疫调节化合物使用。参见,例如,Physicians' Desk Reference, 1979, 2006 和 2190 (第 57 版,2003)。
[0094] 在另一种【具体实施方式】中,所述第二疗法包括免疫调节化合物,其中所述免疫调 节化合物是3-(4-氨基-1-氧-1,3-二氢异吲哚-2-基)-哌啶-2, 6-二酮;3-(4' -氨基 异吲哚啉-1' -酮)-1-哌啶-2, 6-二酮;4-(氨基)-2- (2, 6-二氧(3-哌啶基))-异吲哚 啉-1,3-二酮;或者α-(3-氨基邻苯二甲酰亚氨基)戊二酰亚胺。在一种更具体的实施方 式中,所述免疫调节化合物是具有以下结构的化合物
[0095]

【权利要求】
1. 一种治疗个体中疼痛的方法,包括向所述个体施用治疗有效量的胎盘干细胞,其中 所述治疗有效量是足以引起所述疼痛中的可检测改善的量。
2. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述方法还包括在所述胎盘干细胞施用之前确 定所述个体中疼痛的一个或多个第一水平,以及在所述胎盘干细胞施用后确定所述个体中 疼痛的一个或多个第二水平,其中与所述疼痛的一个或多个第一水平相比,所述治疗有效 量的胎盘干细胞降低了所述疼痛的所述一个或多个第二水平。
3. 根据权利要求2所述的方法,其中,所述疼痛的一个或多个第一水平和所述疼痛的 一个或多个第二水平是通过疼痛评估量表来确定的。
4. 根据权利要求4所述的方法,其中,所述疼痛评估量表为数字疼痛强度量表;疼痛 性质评估量表;简单描述性疼痛强度量表;视觉模拟量表;Wong-Baker脸谱疼痛分级量表; FLACC量表;CRIES量表;COMFORT量表;或通过使患者经历冷、热或机械刺激所引起的诱发 疼痛测量。
5. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述方法还包括在所述胎盘干细胞施用之前确 定所述个体中疼痛的一种或多种生理学指标的第一水平,以及在所述胎盘干细胞施用后确 定所述个体中疼痛的一种或多种生理学指标的第二水平,其中与所述第一水平相比,所述 治疗有效量的胎盘干细胞降低了所述第二水平。
6. 根据权利要求5所述的方法,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的心率。
7. 根据权利要求6所述的方法,其中,在所述施用后,所述个体的心率比所述施用前所 述个体的心率更低。
8. 根据权利要求5所述的方法,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的心脏收缩。
9. 根据权利要求8所述的方法,其中,在所述施用后,所述个体的心脏收缩比所述施用 前所述个体的心脏收缩更低。
10. 根据权利要求5所述的方法,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的心脏舒 张。
11. 根据权利要求10所述的方法,其中,在所述施用后,所述个体的心脏舒张比所述施 用前所述个体的所述心脏舒张更低。
12. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述胎盘干细胞是⑶10+、⑶34'⑶105+胎盘干 细胞。
13. 根据权利要求12所述的方法,其中,所述胎盘干细胞另外是CD200+。
14. 根据权利要求12或权利要求13所述的方法,其中,所述胎盘干细胞另外是CD45-和 CD90+。
15. 根据权利要求12-14中任一项所述的方法,其中,所述胎盘干细胞另外是⑶8(Γ和 CD86 '
16. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述胎盘干细胞表达CD200而不表达HLA-G ;或 者表达⑶73、⑶105和⑶200 ;或者表达⑶200和0CT-4 ;或者表达⑶73和⑶105而不表达 HLA-G。
17. 根据权利要求1或12-14中任一项所述的方法,其中,所述胎盘干细胞是 HLA-A,Β,C+。
18. 根据权利要求1或12所述的方法,其中,所述胎盘干细胞以比相同数目的骨髓来源 间质干细胞(BM-MSC)可检测地更高的水平表达EL0VL2、ST3GAL6、ST6GALNAC5或SLC12A8 基因。
19. 根据权利要求18所述的方法,其中,所述胎盘干细胞以比相同数目的BM-MSC可检 测地更高的水平表达 ARTS-1、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3 或 TGFB2 基因。
20. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述疼痛是神经性疼痛。
21. 根据权利要求20所述的方法,其中,所述神经性疼痛是由糖尿病性神经病变引起 的。
22. 根据权利要求20所述的方法,其中,所述神经性疼痛是由所述个体中的神经损伤 引起的。
23. 根据权利要求20所述的方法,其中,所述神经性疼痛是由药物引起的。
24. 根据权利要求23所述的方法,其中,所述药物是含钼抗癌药物或者包含含钼抗癌 药物。
25. 根据权利要求24所述的方法,其中,所述含钼抗癌药物是奥沙利钼、卡钼或顺钼或 者包含奥沙利钼、卡钼或顺钼。
26. 根据权利要求23所述的方法,其中,所述药物是紫杉醇或者包含紫杉醇。
27. 根据权利要求20所述的方法,其中,所述神经性疼痛是由炎症引起的。
28. 根据权利要求27所述的方法,其中,所述炎症是神经炎。
29. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述疼痛是炎症性疼痛。
30. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述疼痛是骨痛。
31. 根据权利要求30所述的方法,其中,所述骨痛与癌症有关或者由癌症引起。
32. 根据权利要求1所述的方法,其中,所述疼痛是由癌症引起的。
33. 根据权利要求1-32中任一项所述的方法,其中,所述疼痛对类固醇治疗无反应。
34. 根据权利要求1-32中任一项所述的方法,其中,所述疼痛对非类固醇抗炎治疗无 反应。
35. 根据权利要求1-32中任一项所述的方法,其中,所述疼痛对阿片样药物治疗无反 应。
36. 根据权利要求1-32中任一项所述的方法,其中,所述疼痛对鸦片制剂治疗无反应。
37. 根据权利要求1-36中任一项所述的方法,其中,将所述胎盘干细胞配制用于局部 施用。
38. 根据权利要求1-36中任一项所述的方法,其中,将所述胎盘干细胞配制用于全身、 静脉内或动脉内施用。
39. 用于在治疗个体疼痛中使用的治疗有效量的胎盘干细胞,其中,所述治疗有效量是 足以引起所述疼痛中的可检测改善的量。
40. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,在所述使用前所述个体中所述疼痛的 水平和在所述使用后所述个体中所述疼痛的水平是通过疼痛评估量表来确定的。
41. 根据权利要求40所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛评估量表为数字疼痛强度量 表;疼痛性质评估量表;简单描述性疼痛强度量表;视觉模拟量表;Wong-Baker脸谱疼痛分 级量表;FLACC量表;CRIES量表;或COMFORT量表。
42. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,在所述使用前所述个体中所述疼痛的 水平和在所述使用后所述个体中所述疼痛的水平是通过疼痛的一个或多个身体指标确定 的。
43. 根据权利要求42所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的 心率。
44. 根据权利要求43所述的胎盘干细胞,其中,所述使用后所述个体的所述心率比所 述使用前的更低。
45. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的 心脏收缩。
46. 根据权利要求45所述的胎盘干细胞,其中,所述使用后所述个体中的所述心脏收 缩比所述使用前的更低。
47. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛的生理学指标是所述个体的 心脏舒张。
48. 根据权利要求47所述的胎盘干细胞,其中,所述使用后所述个体中的所述心脏舒 张比所述使用前的更低。
49. 根据权利要求39-48中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞是CD10+、 CD34_、CD105+胎盘干细胞。
50. 根据权利要求49所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞另外是CD200+。
51. 根据权利要求49或权利要求50所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞另外是 CD45-和 CD90+。
52. 根据权利要求49-51中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞另外是 CD8(T 和 CD86 '
53. 根据权利要求39-52中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞表达 CD200而不表达HLA-G ;或者表达CD73、CD105和CD200 ;或者表达CD200和0CT-4 ;或者表 达⑶73和⑶105而不表达HLA-G。
54. 根据权利要求39-53中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞是 HLA-A,B,C+。
55. 根据权利要求39-55中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞以比 相同数目的骨髓来源间质干细胞(BM-MSC)可检测地更高的水平表达ELOVL2、ST3GAL6、 ST6GALNAC5 或 SLC12A8 基因。
56. 根据权利要求39-56中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述胎盘干细胞以比相同 数目的BM-MSC可检测地更高的水平表达ARTS-1、IER3、IL6、KRT18、LRAP、MEST、NFE2L3或 TGFB2基因。
57. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛是神经性疼痛。
58. 根据权利要求57所述的胎盘干细胞,其中,所述神经性疼痛是由糖尿病性神经病 变引起的。
59. 根据权利要求57所述的胎盘干细胞,其中,所述神经性疼痛是由所述个体中的神 经损伤引起的。
60. 根据权利要求57所述的胎盘干细胞,其中,所述神经性疼痛是由药物引起的。
61. 根据权利要求60所述的胎盘干细胞,其中,所述药物是含钼抗癌药物或者包含含 钼抗癌药物。
62. 根据权利要求61所述的胎盘干细胞,其中,所述含钼抗癌药物是奥沙利钼、卡钼或 顺钼或者包含奥沙利钼、卡钼或顺钼。
63. 根据权利要求61所述的胎盘干细胞,其中,所述药物是紫杉醇或者包含紫杉醇。
64. 根据权利要求57所述的胎盘干细胞,其中,所述神经性疼痛是由炎症引起的。
65. 根据权利要求64所述的胎盘干细胞,其中,所述炎症是神经炎。
66. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛是炎症性疼痛。
67. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛是骨痛。
68. 根据权利要求67所述的胎盘干细胞,其中,所述骨痛与癌症有关或者由癌症引起。
69. 根据权利要求39所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛是由癌症引起的。
70. 根据权利要求39-69中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛对类固醇治疗无 反应。
71. 根据权利要求39-69中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛对非类固醇抗炎 治疗无反应。
72. 根据权利要求39-69中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛对阿片样药物治 疗无反应。
73. 根据权利要求39-69中任一项所述的胎盘干细胞,其中,所述疼痛对鸦片制剂治疗 无反应。
74. 根据权利要求39-73中任一项所述的胎盘干细胞,其中,将所述胎盘干细胞配制用 于局部施用。
75. 根据权利要求39-73中任一项所述的胎盘干细胞,其中,将所述胎盘干细胞配制用 于全身、静脉内或动脉内施用。
【文档编号】A61K35/50GK104220081SQ201280037087
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2012年5月31日 优先权日:2011年6月1日
【发明者】尤里·赫茨伯格, 乔迪·格尼 申请人:人类起源公司
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