用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型公开了一种用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，它包括内部设有卡位槽的试剂盒，所述试剂盒包括分别盛放胎盘解离试剂的胎盘解离试剂瓶、盛放干细胞提纯试剂的干细胞提纯试剂瓶，所述胎盘解离试剂为胶原酶，干细胞提纯试剂为羟乙基淀粉。该试剂盒实用方便，适用于快速解离、提取胎盘干细胞，省略了准备无菌试剂的繁琐步骤，避免污染。
【专利说明】用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒
【技术领域】
[0001]本实用新型属于试剂盒，具体涉及一种用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒。
【背景技术】
[0002]胎盘干细胞指的是存在于胎盘组织中的干细胞，包括造血干细胞、间充质干细胞等。造血干细胞是红细胞、白细胞、血小板等的鼻祖，是高度未分化的细胞，是一切血细胞和免疫细胞的原始细胞。造血干细胞移植可治疗恶性血液病，部分恶性肿瘤，部分遗传性疾病等十几种致死性疾病。胎盘组织造血干细胞数量丰富，是脐带血的5?10倍，突破了脐带血来源造血干细胞30kg体重使用的瓶颈，可以提供干细胞数量足够重建成年人的造血系统。
[0003]目前已经广泛开展胎盘干细胞的临床应用研宄，治疗相关的疾病包括:重型再生障碍性贫血、骨髓增生异常综合征、白血病等恶性或非恶性血液疾病，以及2型糖尿病、特发性肺纤维化、强直性脊柱炎、溃疡性结肠炎等非血液系统疾病。
[0004]胎盘干细胞具有广阔的临床应用前景。然而，目前分离胎盘干细胞多采用传统手工配置各种试剂，尚无简单、快速、高效的解离、提取胎盘干细胞的试剂盒。
【发明内容】
[0005]为了克服现有【技术领域】存在的上述问题，本实用新型的目的在于，提供一种用于快速解离、提纯啮齿动物、人类或其他哺乳动物来源的胎盘干细胞的试剂盒，具有简单快速、使用方便、易操作、可工业化生产、实用有效的优点，应用前景广泛。
[0006]本实用新型提供的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，它包括内部设有卡位槽的试剂盒，所述试剂盒包括分别盛放胎盘解离试剂的胎盘解离试剂瓶、盛放干细胞提纯试剂的干细胞提纯试剂瓶，所述胎盘解离试剂为胶原酶，干细胞提纯试剂为羟乙基淀粉。
[0007]所述试剂盒还包括盛放胎盘预处理试剂的胎盘预处理试剂瓶，所述胎盘预处理试剂为含双抗的PBS或者生理盐水。
[0008]所述胎盘解离试剂瓶中的胎盘解离试剂为I型胶原酶或IV型胶原酶中的任一种。
[0009]所述胎盘解离试剂处理时间为30 -45min?
[0010]所述干细胞提纯试剂处理时间为小于或等于15min。
[0011]所述试剂盒还包括盛放干细胞洗涤剂的干细胞洗涤试剂瓶，所述干细胞洗涤剂为PBS或生理盐水。
[0012]本实用新型提供的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，其有益效果在于，该试剂盒实用方便，适用于快速解离、提取胎盘干细胞，省略了准备无菌试剂的繁琐步骤，避免污染。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1是本实用新型实施例的整体结构示意图。
[0014]图中标注:
[0015]1.试剂盒；2.胎盘预处理试剂瓶；3.胎盘解离试剂瓶；4.干细胞提纯试剂瓶；5.干细胞洗涤试剂瓶。
【具体实施方式】
[0016]下面参照附图，结合实施例，对本实用新型提供的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，进行详细的说明。
实施例
[0017]参照图1，本实施例的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，它包括内部设有卡位槽的试剂盒1，所述试剂盒I包括分别盛放胎盘解离试剂的胎盘解离试剂瓶3、盛放干细胞提纯试剂的干细胞提纯试剂瓶5，所述胎盘解离试剂为胶原酶，干细胞提纯试剂为羟乙基淀粉。
[0018]所述试剂盒I还包括胎盘预处理试剂，盛放于胎盘预处理试剂瓶2内，胎盘预处理试剂为含双抗的PBS。
[0019]所述试剂盒I的胎盘解离试剂瓶3中的胶原酶为浓度lmg/ml的I型胶原酶。
[0020]所述试剂盒I还包括干细胞洗涤剂，为PBS，盛放于干细胞洗涤试剂瓶5内。
[0021]所述放置试剂瓶的卡位槽由泡沫塑料、纸板、或其他制成。
[0022]所述试剂瓶的封闭盖选择为压力或螺丝。
[0023]所述胎盘解离试剂处理时间为30min，温度为37°C。
[0024]所述干细胞提纯试剂处理时间为lOmin。
[0025]所述试剂盒可作用的对象为啮齿动物、人或其他哺乳动物的胎盘。
[0026]还包括使用说明书，用于说明从胎盘快速解离、提纯干细胞的使用方法。
[0027]其中，整个操作过程保持在无菌工作环境中进行操作，其中，内毒素检测含量(0.5EU/mL表示试剂盒合格。
[0028]本实用新型的试剂盒使用包括如下步骤:
[0029]a洗涤、剪碎胎盘:加入适量体积的胎盘预处理试剂瓶2内含双抗PBS振荡洗涤胎盘2?3次，至胎盘表面的血渍洗涤干净。去除胎盘表面的羊膜和蜕膜，加入适量体积的胎盘预处理试剂，将胎盘组织剪碎，并将组织块内的血液清洗干净，收集胎盘预处理试剂，于1800rpm室温离心lOmin，弃上清，用50ml干细胞洗涤剂重悬细胞沉淀，按4:1的比例加入干细胞提纯试剂，混合均匀后于300rpm室温离心lOmin，收集上层液体。
[0030]b解离胎盘:收集上述剪碎的胎盘组织块，加入与胎盘组织块等体积的胎盘解离试剂，于37°C水浴摇床中消化30?45min，将消化后胎盘组织块经200目分析筛过滤收集滤液，混勾后于1800rpm室温离心lOmin，弃上清，用适量的干细胞洗涤剂重悬细胞沉淀，同上按4:1的比例加入干细胞提纯试剂，混合均匀后于300rpm室温离心lOmin，收集上层液体。
[0031]c收获细胞:合并步骤a和b中收集的上层液体，离心弃上清得胎盘干细胞。
[0032]实施例二
[0033]本实用新型的用于快速解离、提纯胎盘干细胞试剂盒，试剂盒I包括胎盘解离试剂、干细胞提纯试剂，分别盛放于胎盘解离试剂瓶3、干细胞提纯试剂瓶4内，胎盘解离试剂瓶3中包含的试剂为胶原酶，干细胞提纯试剂瓶4中包含的试剂为羟乙基淀粉。
[0034]其中所述试剂盒I还包括胎盘预处理试剂，盛放于胎盘预处理试剂瓶2内，为含双抗的PBS。
[0035]其中所述试剂盒I的胎盘解离试剂瓶3中的胶原酶为浓度lmg/ml的IV型胶原酶。
[0036]其中所述试剂盒I还包括干细胞洗涤剂，为生理盐水，放于干细胞洗涤试剂瓶5内。
[0037]所述放置试剂瓶的卡位槽由泡沫塑料、纸板、或其他制成。
[0038]所述试剂瓶的封闭盖选择为压力或螺丝。
[0039]所述胎盘解离试剂处理时间为45min，温度为37°C。
[0040]所述干细胞提纯试剂处理时间为lOmin。
[0041]所述试剂盒可作用的对象为啮齿动物、人或其他哺乳动物的胎盘。
[0042]还包括使用说明书，用于说明从胎盘快速解离、提纯干细胞的使用方法。
[0043]其中，整个操作过程保持在无菌工作环境中进行操作，其中，内毒素检测含量(0.5EU/mL表示试剂盒合格。
[0044]本实用新型是以上述实施例进行试剂盒的说明，并不是用于限制试剂盒的使用，对此进行的任何等同替换、修改、增加均落在本实用新型的试剂盒保护范畴内。
【权利要求】
1.一种用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，它包括内部设有卡位槽的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括分别盛放胎盘解离试剂的胎盘解离试剂瓶、盛放干细胞提纯试剂的干细胞提纯试剂瓶，所述胎盘解离试剂为胶原酶，干细胞提纯试剂为羟乙基淀粉。
2.根据权利要求1所述的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括盛放胎盘预处理试剂的胎盘预处理试剂瓶，所述胎盘预处理试剂为含双抗的PBS或者生理盐水。
3.根据权利要求1所述的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，其特征在于:所述胎盘解离试剂瓶中的胎盘解离试剂为I型胶原酶或IV型胶原酶中的任一种。
4.根据权利要求1所述的用于快速解离、提纯胎盘干细胞的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒还包括盛放干细胞洗涤剂的干细胞洗涤试剂瓶，所述干细胞洗涤剂为PBS或生理盐水。
【文档编号】C12N5/0735GK204185494SQ201420503371
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2014年9月3日 优先权日:2014年9月3日
【发明者】张炳强, 徐冲, 王秀芹, 孙全伟, 杨升宝, 陈立材 申请人:北京瑞思德生物科技有限公司