专利名称：营养组合物在制备恢复错配修复基因损伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种营养组合物的用途，尤其是一种营养组合物在制备恢复错配修复
基因损伤药物中的应用。
背景技术：
DNA错配修复系统(匪R)是人体细胞的一种能修复DNA碱基错配的安全保障体系，由一系列特异性修复DNA碱基错配的酶分子(错配修复基因产物)组成。正常情况下该系统能消除DNA复制错误，保持遗传物质的完整性和稳定性，避免遗传物质发生突变，保证DNA复制的忠实性。但是，如果错配修复基因损伤，则会影响DNA错配修复系统正常工作；具有错配修复缺陷的细胞突变率比正常细胞高出100 1000倍。 目前，在遗传学方面已有如下权威结论"不论是器质性疾病还是功能性疾病，都有必要在基因水平上去探究其病因"，"人类正常的衰老和死亡也受到基因的调控"，"不论是防治疾病还是延缓衰老，都可以从基因这个层次上来研究解决问题"为此，基因治疗已经成为现代科学研究的热点。 基因治疗是纠正与疾病相关的缺陷基因的一种技术，现有方法大多是以正常基因替换异常的致病基因。如将载有治疗基因的病毒载体感染靶细胞；脂质体携带治疗基因穿过靶细胞膜进入细胞；通过化学方法将治疗基因与特异细胞受体结合，开展靶向治疗。此外，也有少数用RNA干扰的方法。虽然1990年开始进行第一例基因治疗已获得成功，但仍面临如下问题有待解决①外源基因在受体表达不稳定、时间短，限制了基因治疗的疗效；②外源基因移植引起免疫系统对已识别过的外来物产生免疫增强，使病人的治疗难以重复；③病毒载体对病人可能有各种潜在的危险；④许多疾病是由多基因缺陷引起的，无法用单基因纠正解决问题。 专利申请号为200710012788. 8的专利申请公开了一种"促进造血干细胞增殖与血红蛋白合成的营养组合物"。该营养组合物的原料及重量比如下核苷酸90 110、精氨酸20 30、赖氨酸20 30、半胱氨酸10 20、甘氨酸25 35、组氨酸20 30、卵磷脂110 130、脑磷脂50 70、维生素E 0. 4 0. 6、维生素C 5 7、叶酸0. 02 0. 04、维生素B20. 05 0. 07、维生素B60. 07 0. 08、维生素B120. 0001 0. 0002、铁0. 5 1. 5、锌0. 5 0. 7、锰0. 4 0. 6、枸杞多糖14 16、葡萄籽提取物14 16。可明显提高血中血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、白细胞(WBC)及血小板(Pit)数量；可剌激骨髓造血干细胞的增殖，使造血干细胞明显增多；明显提高细胞内线粒体数目；对肝、脾的损伤具有明显的恢复作用。该营养组合物适用于营养不良性贫血(缺铁性贫血及叶酸与维生素B^营养不良性贫血)、红细胞生成减少所致贫血以及红细胞破坏过多或丢失所致贫血。但是，该专利申请文件并没有记载该营养组合物具有恢复错配修复基因损伤的作用。
发明内容
本发明是发现了上述营养组合物具有恢复 配修复基因损伤的作用，提供一种营养组合物在制备恢复错配修复基因损伤药物中的应用。 本发明的技术解决方案是一种营养组合物在制备恢复错配修复基因损伤药物中的应用。 本发明作为药物可为错配修复基因损伤的恢复提供基本营养条件，即增强错配修复蛋白的活性，从而达到恢复错配修复基因损伤的目的。本发明解决了向机体植入外源基因所存在的种种问题，具有有效、安全、简便、经济、不产生免疫排斥等优点。
图1是本发明实施例四个错配修复基因编码蛋白MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2免疫印迹图。 图2是本发明实施例四个错配修复基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2蛋白表达的组方示意图。
具体实施例方式1.建立模型、实验分组和实验流程 再生障碍性贫血小鼠模型的建立本实验采用BALB/c小鼠。实验步骤第1天皮下注射乙酰苯肼100mg/kg，次日X射线2. OGy照射后，于第5天环磷酰胺80mg/kg腹腔注射，第15天重复以上步骤但不给予射线处理。以单纯等量生理盐水相应部位注射为正常对照组。 实验分组根据动物药理学的药品剂量和综合实验的设计分析，分为①正常对照组；②再障模型组；③高剂量组，以1445. 55mg/kg. d营养组合物对再障小鼠灌胃； 中剂量组，以963. 7mg/kg. d营养组合物对再障小鼠灌胃；⑤低剂量组，以674. 59mg/kg. d营养组合物对再障小鼠灌胃。 实验流程首先，按前述再障小鼠模型的建立方法，注射乙酰苯肼、环磷酰胺及X射线照射。从第7天开始，营养组合物高、中、低剂量组分别以相应剂量对再障小鼠进行灌胃，每天一次，直至第49天，拉颈处死小鼠，采样进行检测。
2.实验方法 2. 1.免疫印迹分析(Western blot analysis) 用2x的电泳缓冲液(125,1/L Tris-HCl，p朋.8，2% sodium dodecylsulfate，5% glycerol, and 1% P-mercaptoethanol)裂解细胞，离心取上清，蛋白浓度由BCA法检测。煮沸变性的蛋白以每孔40ii g的含量点样，经浓縮胶为6%、分离胶为10%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离。通过电转仪将凝胶上的蛋白样品移至PVDF膜上，5X脱脂奶粉(TTBS配制)在37t:封闭2小时。分别与1 : 200免抗小鼠MSH2、 MSH3、 PMS2、MLH1、GAPDH多克隆抗体(错配修复基因蛋白及内参蛋白)4。C孵育过夜。以TTBS洗膜3次，每次10分钟。然后加HRP标记的羊抗免IgG(l : 2000稀释)37t:孵育1小时，随后以TTBS洗膜3次，每次10分钟。ECL发光试剂盒检测结果。
2. 2统计学分析 所有数据均用SPSS 12. 0软件进行统计分析。每一项分析至少有三次结果。数值用均数±SD表示，采用t检验。P < 0. 05认为有显著性差异，并在统计学上有意义。
3.实验结果本实验我们选用最常用的四个错配修复基因MSH2、MSH3、MLH1、PMS2。 如图1、图2所示与正常对照组相比，再障模型组小鼠骨髓造血细胞四个错配修
复基因的蛋白表达量均下调；营养组合物处理再障小鼠后，小鼠骨髓造血细胞错配修复基
因的表达量随营养组合物剂量增加而增加，表明营养组合物是通过增强错配修复蛋白的活
性而达到对再障小鼠错配修复基因损伤的恢复作用。 具体数值见表l。 表1营养组合物对四个错配修复蛋白表达的作用
相对表达对照组再障组高剂量组中剂量组翻量组
PMS20.660.34#0.73*o.r0.72*
匪0.820.27*0.7S*0.71*0.24*
鹏D.890.42#0.88*0.89*0.63*
MSH2O.柳03f0.58*0.50'0.51* #P < 0. 05再障组与对照组
*P < 0. 05营养组合物组与再障组
结论 营养组合物可促进再障小鼠四个错配修复基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2的蛋白表达量，对四个错配修复基因MSH2、 MSH3、 MLH1、 PMS2的损伤具有恢复作用。
权利要求
一种营养组合物在制备恢复错配修复基因损伤药物中的应用。
全文摘要
本发明公开一种营养组合物在制备恢复错配修复基因损伤药物中的应用，本发明作为药物可为错配修复基因损伤的恢复提供基本营养条件，即增强错配修复蛋白的活性，从而达到恢复错配修复基因损伤的目的。本发明解决了向机体植入外源基因所存在的种种问题，具有有效、安全、简便、经济、不产生免疫排斥等优点。
文档编号A61K31/519GK101780184SQ20101012903
公开日2010年7月21日 申请日期2010年3月22日 优先权日2010年3月22日
发明者吴文国, 李恕, 董锋 申请人:珍奥集团股份有限公司