专利名称：一种埃博霉素b-内酰胺衍生物化学的合成方法
技术领域：
本发明涉及一种埃博霉素B-内酰胺衍生物化学的合成方法。
背景技术：
埃博霉素(印othilone)是一类大环内酯类化合物，由德国国家生物技术中心 (GBF)的G. Hö,fle等人于1993年首次报道。从粘细菌亚目的纤维堆囊菌菌株发酵液 中可以分离埃博霉素，其主要组分为Epothilone A和B，1995年，默克研究院的D.M. Bollag 等在大规模筛选微管抑制剂时发现一株纤维堆囊菌SMP 44的发酵提取物具有抑制微管解 聚的活性，经分析鉴定该活性组份为埃博霉素(印othilone) A和B，它与紫杉醇具有相同的 抑制肿瘤细胞生长的作用机制，并且对多重耐药肿瘤细胞和耐紫杉醇的肿瘤细胞均表现强 大的抗癌活性。但是还没有化学合成埃博霉素B-内酰胺衍生物的方法。
发明内容
本发明提供了一种埃博霉素B-内酰胺衍生物化学的合成方法，它可以有效地化 学合成埃博霉素B-内酰胺衍生物。本发明采用了以下技术方案一种埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，它包括以 下步骤步骤一，开环氮化反应在氮气保护下，在反应釜中投入四氢呋喃和水的混合液、 埃博霉素B和催化剂，然后再分批投入叠氮钠进行搅拌，慢慢升温，当反应溶液变成黄色后 依次采用乙酸乙酯萃取、有机相用饱和盐水洗涤和无水硫酸钠干燥后得到氮酸；步骤二，水 解反应在氩气的保护下，在反应釜中投入四氢呋喃、步骤一得到的氮酸和三苯膦进行第一 次搅拌和升温，然后进行第一次冷却，冷却后再滴加氢氧化铵，滴加后再进行第二次升温搅 拌，然后再进行第二次冷却至室温，最后再用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤， 无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氨基酸；步骤三，环合反应在氩气的保护下，在反应釜中 投入四氢呋喃和步骤二得到的氨基酸，接着再投入碳酸钠后降温，然后温度控制在零度以 下后缓慢地滴加二苯基磷酰基叠氮化物，保温搅拌，配置25 %的磷酸二氢钠溶液，将磷酸 二氢钠溶液冷却后加入反应釜中与四氢呋喃、氨基酸和碳酸钠混合搅拌，然后加入乙酸乙 酯进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到埃博霉素B内酰胺衍生物；步骤四，纯 化在反应釜中将埃博霉素B内酰胺衍生物溶解在四氢呋喃中，依次用饱和盐水清洗搅拌， 乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥以及减压浓缩，最后通过两次纯化过程得到纯的埃博霉素B 内酰胺衍生物。所述的步骤一种四氢呋喃和水的混合液为800ml，四氢呋喃和水的体积比为 9 1，埃博霉素B为25g，叠氮钠为4. 76g，催化剂为四(三苯基膦)合钯，催化剂的重量为 3. 5g，在投入叠氮钠后进行搅拌的时间为7小时，在搅拌的过程中跟踪TLC EtOAc/MSO = 1 2，慢慢升温至60°C，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取；在 洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氮酸为 17. lg。所述的步骤二中反应釜中投入四氢呋喃为500ml、氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，第一次搅拌的时间为18小时，升高的温度为50°C，然后第一次冷却的温度为10°C以下，滴加氢 氧化铵时的温度为10°C以下，氢氧化铵为25%的氢氧化铵，氢氧化铵的容量为150ml，第二 次升温至50°C，搅拌的时间为6小时，在萃取时进行三次萃取，每次采用300ml的乙酸乙酯 进行萃取；在洗涤时进行2次洗涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得 到的氨基酸为12. 5g。所述的步骤三中四氢呋喃为500ml和氨基酸12. 5g，碳酸钠为15g，二 苯基磷酰基叠氮化物为20ml，保温搅拌的时间为24小时，磷酸二氢钠溶液为200ml，磷酸二 氢钠溶液冷却的温度0-3°C，磷酸二氢钠溶液与四氢呋喃、氨基酸和碳酸钠混合搅拌的时间 为2小时，乙酸乙酯的温度为0-3°C在萃取时进行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯进 行萃取，最后得到的埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g。所述的步骤四中埃博霉素B内酰胺 衍生物为5. 6g，四氢呋喃为300ml，饱和盐水为200ml，饱和盐水清洗搅拌的时间为20分钟， 在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取，两次纯化的过程为第一次 色谱纯化，色谱纯化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿进行梯度洗脱，第二次 为制备型HPLC纯化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脱，最后得到纯埃博霉素B内酰胺衍 生物4. 8g。本发明具有以下有益效果本发明采用化学合成的方法制备埃博霉素B-内酰胺 衍生物，不但制备过程简单，而且节约成本，同时制备的埃博霉素B-内酰胺衍生物可以抑 制肿瘤细胞生长的作用机制，并且对多重耐药肿瘤细胞和耐紫杉醇的肿瘤细胞均表现强大 的抗癌活性。
具体实施例方式本发明提供了一种埃博霉素B-内酰胺衍生物化学的合成方法，它包括以下步 骤步骤一，开环氮化反应在氮气保护下，反应釜中投入800ml混合液(四氢呋喃水 =9 1)、埃博霉素B25g(5. 76mmol)和3. 5g (0. 35mmol)四(三苯基膦)合钯，分批投入 4. 76g(8. 64mmol)叠氮钠，在搅拌下，慢慢升温至60°C，搅拌7个小时，在搅拌的过程中跟 踪TLC EtOAc/MSO = 1 2，使得反应状态为溶液变成黄色，再用乙酸乙酯萃取，乙酸乙 酯分3次，每次250ml进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤，洗涤时进行2次，每次采用200ml 有机相用饱和盐水进行洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氮酸17. Ig ；步骤二，水解反 应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃500ml、一步得的氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，搅 拌升温至50°C，搅拌18小时，再冷却至10°C以下，滴加25%氢氧化铵溶液150ml，温度控 制在10°C以下，滴加完毕，再升温至50°C，搅拌6个小时后，冷却至室温，再用乙酸乙酯萃 取，乙酸乙酯分3次，每次IOOml进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤，洗涤时进行2次，每次 采用200ml有机相用饱和盐水进行洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩。得到氨基酸12. 5g ； 步骤三，环合反应在氩气保护下，反应釜中投入四氢呋喃500ml、二步得到的氨基酸12. 5g 搅拌，再投入15g碳酸钠，降温至0°C。缓慢滴加二苯基磷酰基叠氮化物20ml (8. 5mmol)， 温度控制在0°C以下，保温搅拌24小时。配制25%磷酸二氢钠溶液200ml，冷却至0_3°C， 加入到反应釜中，继续搅拌2小时。加入0-3°C乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯分3次，每次 500ml进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到5. 6g埃博霉素B内酰胺衍生物； 步骤四，纯化在反应釜中投入第三步得的5. 6g埃博霉素B内酰胺衍生物溶解在四氢呋喃 300ml中，用饱和盐水200ml清洗搅拌20分钟清洗，乙酸乙酯进行萃取，乙酸乙酯分3次，每次250ml进行萃取，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，第一次色谱纯化，色谱纯 化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿进行梯度洗脱，第二次为制备型HPLC纯 化，它采用5-50%甲醇-氯仿梯度洗脱，最后得到纯埃博霉素D内酰胺衍生物4. Sg。
权利要求
一种埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，它包括以下步骤步骤一，开环氮化反应在氮气保护下，在反应釜中投入四氢呋喃和水的混合液、埃博霉素B和催化剂，然后再分批投入叠氮钠进行搅拌，慢慢升温，当反应溶液变成黄色后依次采用乙酸乙酯萃取、有机相用饱和盐水洗涤和无水硫酸钠干燥后得到氮酸；步骤二，水解反应在氩气的保护下，在反应釜中投入四氢呋喃、步骤一得到的氮酸和三苯膦进行第一次搅拌和升温，然后进行第一次冷却，冷却后再滴加氢氧化铵，滴加后再进行第二次升温搅拌，然后再进行第二次冷却至室温，最后再用乙酸乙酯进行萃取，有机相用饱和盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，真空浓缩，得到氨基酸；步骤三，环合反应在氩气的保护下，在反应釜中投入四氢呋喃和步骤二得到的氨基酸，接着再投入碳酸钠后降温，然后温度控制在零度以下后缓慢地滴加二苯基磷酰基叠氮化物，保温搅拌，配置25％的磷酸二氢钠溶液，将磷酸二氢钠溶液冷却后加入反应釜中与四氢呋喃、氨基酸和碳酸钠混合搅拌，然后加入乙酸乙酯进行萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩，得到埃博霉素B内酰胺衍生物；步骤四，纯化在反应釜中将埃博霉素B内酰胺衍生物溶解在四氢呋喃中，依次用饱和盐水清洗搅拌，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥以及减压浓缩，最后通过两次纯化过程得到纯的埃博霉素B内酰胺衍生物。
2.根据权利要求1所述的埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步骤一 种四氢呋喃和水的混合液为800ml，四氢呋喃和水的体积比为9 1，埃博霉素B为25g，叠 氮钠为4. 76g，催化剂为四(三苯基膦)合钯，催化剂的重量为3. 5g，在投入叠氮钠后进行 搅拌的时间为7小时，在搅拌的过程中跟踪TLC EtOAc/MSO = 1 2，慢慢升温至60°C， 在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取；在洗涤时进行2次洗涤，每 次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氮酸为17. lg。
3.根据权利要求1所述的埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步骤 二中反应釜中投入四氢呋喃为500ml、氮酸17. Ig和三苯膦16. 3g，第一次搅拌的时间为 18小时，升高的温度为50°C，然后第一次冷却的温度为10°C以下，滴加氢氧化铵时的温度 为10°C以下，氢氧化铵为25%的氢氧化铵，氢氧化铵的容量为150ml，第二次升温至50°C， 搅拌的时间为6小时，在萃取时进行三次萃取，每次采用300ml的乙酸乙酯进行萃取；在洗 涤时进行2次洗涤，每次采用200ml的有机相用饱和盐水进行洗涤，最后得到的氨基酸为 12. 5g。
4.根据权利要求1所述的埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步骤三 中四氢呋喃为500ml和氨基酸12. 5g，碳酸钠为15g，二苯基磷酰基叠氮化物为20ml，保温搅 拌的时间为24小时，磷酸二氢钠溶液为200ml，磷酸二氢钠溶液冷却的温度0_3°C，磷酸二 氢钠溶液与四氢呋喃、氨基酸和碳酸钠混合搅拌的时间为2小时，乙酸乙酯的温度为0-3°C 在萃取时进行三次萃取，每次采用500ml的乙酸乙酯进行萃取，最后得到的埃博霉素B内酰 胺衍生物为5. 6g。
5.根据权利要求1所述的埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，其特征是所述的步骤四 中埃博霉素B内酰胺衍生物为5. 6g，四氢呋喃为300ml，饱和盐水为200ml，饱和盐水清洗搅 拌的时间为20分钟，在萃取时进行三次萃取，每次采用250ml的乙酸乙酯进行萃取，两次纯 化的过程为第一次色谱纯化，色谱纯化在10*60cm的二氧化硅上采用3-5%甲醇-氯仿进行梯度洗脱，第二次为制备型HPLC纯化，它采用6-55%甲醇-氯仿梯度洗脱，最后得到纯埃 博霉素B内酰胺衍生物4. Sg。
全文摘要
本发明公开了一种埃博霉素B-内酰胺衍生物合成方法，它包括以下步骤它采用埃博霉素B、叠氮钠作为起始原料，选择催化剂，进行开环氮化反应生成氮酸，再进行水解反应，生成氨基酸，再进行环合反应生成埃博霉素B内酰胺衍生物。本发明可以有效地化学合成埃博霉素B-内酰胺衍生物。
文档编号A61P35/00GK101880284SQ20101022777
公开日2010年11月10日 申请日期2010年7月16日 优先权日2010年7月16日
发明者周彬, 高荣 申请人:泰州市今朝伟业精细化工有限公司