专利名称：北虫草寡肽组合物及其制备方法和使用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从北虫草中提取得到纳米寡肽的方法和通过该方法提取得到的 组合物。本发明还涉及从北虫草中提取得到的含有纳米寡肽的组合物在医药、保健品、化妆 品中的应用。
背景技术：
冬虫夏草是麦角菌科虫草真菌ifordycc印s sinensis)的子座及其寄生主蝙蝠蛾 Qieplalus armaricanus)幼虫尸体的复合体。现代药理实验证明，冬虫夏草具有抗衰老、提 高免疫力、抗癌、抗病毒、抗惊厥及镇静作用、雄性激素样作用，对心脑血管系统也有保护 作用。由于受生长条件的限制，天然虫草产量有限，野生资源已受到过度的采掘，产量逐年 减少，远远不能满足人们生活的需要。t^M^Cordyceps militaris (L. ) Link)又称北冬虫夏草，俗称蛹虫草。目前 北虫草液体、固体及蛹体培养技术已经成熟并进入了工业化生产。研究发现，人工培育的北 虫草子实体中一般营养成分与天然冬虫夏草对比发现，虫草素与多糖含量比野生冬虫夏草 要高，二者的氨基酸组成完全一致、不同氨基酸的含量略有差异但总量基本相当。药理试验 证明，人工培养的北虫草子实体同样具有与天然虫草一样的药理功能。北虫草含有多种营养成分。北虫草的子实体中一般营养成分如下水分2. 31%， 灰分0. 33%，粗蛋白28. 67%，粗脂肪2. 52%，粗纤维1. 6%，核苷酸1. 50%, SOD (鲜)3 .78%，虫草多糖5. 54%。蛋白质为虫草中含量最多的功效成分。过去的观点认为，动物 的消化道只能吸收游离的氨基酸，即蛋白质必须分解成游离的氨基酸才能被吸收，近年来 的研究发现，寡肽可以完整的形式被吸收进入循环系统而被组织利用。在营养和化妆行业，对冬虫夏草进行提取处理获得更高纯度的有效成分物质是常 用的手段。目前比较流行的虫草的营养制剂的提取方法是粗加工的方式，包括蒸煮、回流或 索氏提取等方式。这些方法获得的虫草制剂中含有大量不需要的物质，另外，其有效成分物 质的纯度仍然不够，特别是蛋白质通常还保留几乎完整的大分子形式。大分子形式的蛋白 质生物利用度一般比较低，在营养和化妆行业中是不利的。而多肽，特别是小分子肽有以下特点 (1)不需消化，直接吸收。(2)吸收时不需消耗人体能量。(3)不增加人体胃肠功能负担。(4)具优先吸收特点。(5)吸收快速，比人体吸收大分子蛋白质快129600秒钟，较人体氨基酸快64800秒钟。(6)以自身能量推动吸收。(7) 100% 被吸收。(8)在人体吸收功能降低时，人体能够被动吸收。
(9)具有载体作用，可将人体其它营养载在基体上，输送到人体细胞组织。(10)在人体内变成运输工具，将各种微量元素送到人体各部位。(11)具有极强的活性和生理功能多样性。因此，人们通过各种水解方法把蛋白水解变成小的肽，以提高其生物利用度。专利CN200710030010.X中用酸解和超声波共同处理虫草粉，得到一种活性提取 物。专利CN200510040961.6中用单一的中性蛋白酶处理含有虫草粉和其它如蚕蛹和 蛋等营养物质的混合物，得到一种保健化妆品制品。专利CN200510016899. 7中采用木瓜蛋白酶或胰蛋白酶对北虫草菌进行蛋白酶水 解，然后再通过纳米机对水解产物进行处理，得到产物分子量分布在100-200nm范围。专利CN200710077253. 9中对含有包括虫草粉在内的三种菌类的混合物用单一的
中性蛋白酶进行完全酶解处理，得到一种营养制品。专利CN200710159152.6中对北虫草用胃蛋白酶、HAP碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰 酶、碱性内切蛋白酶、纤维素溶壁酶中的一种或多种进行处理，得到一种营养制品。然而，本领域仍然需要具有更低分子量的北虫草小分子肽制品，例如大部分为含 有长度低于十个氨基酸，优选为两个到五个氨基酸的小分子肽，其分子的长度为0. I-IOnm 水平。
发明内容
本发明提供了一种从北虫草中水解提取得到纳米寡肽的方法，其中采用复合酶 法水解北虫草，获得含有小分子纳米寡肽的组合物，其特征在于，所述纳米寡肽的分子量主 要分布在100-1000D之间。在本发明的一个方面，所述组合物中分子量为100-500D的纳米 寡肽的高斯分布峰面积百分比超过50%，优选超过70%。在本发明的又一个方面，所述组合 物中纳米寡肽的高斯分布峰值分子量约为150-500D。在本发明的又一个方面，所述组合物 中纳米寡肽的分子量具有如下的高斯分布
权利要求
1. 一种从北虫草中水解提取得到纳米寡肽的方法，其中采用复合酶法水解北虫草， 获得含有小分子纳米寡肽的组合物，其特征在于，所述纳米寡肽的分子量主要分布在 100-1000D之间，优选的，所述组合物中分子量为100-500D的纳米寡肽的高斯分布峰面积 百分比超过50%，优选超过70%，更优选的，所述组合物中纳米寡肽的分子量具有如下的高 斯分布
2.权利要求1的方法，其中水解所采用的酶是3种或3种以上水解酶的组合，所述水解 酶选自胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、基质金属蛋白酶、中性蛋白酶和菠萝 蛋白酶。
3.权利要求2的方法，其特征在于，其中水解所采用的酶含有碱性蛋白酶、中性蛋白酶 和胃蛋白酶，优选的，加入酶的顺序是碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶。
4.权利要求3的方法，所述方法包括以下步骤 将虫草子实体烘干，粉碎成50-200目细粉； 将所述细粉与去离子水按1 10-1 50混合；蛋白质变性处理，将混合液升温至90-95°C，保持10-15min ；把所述混合液降温至50-60°C，按子实体干重的1重量％_3重量％加入50万u/g碱性 蛋白酶，调节pH至8-9，50-60°C保温2-4h ；降温至40-50°C，按子实体干重1重量％_3重量％加入15万u/g中性蛋白酶，调节pH 至 7-7. 5，40-50°C保温 2-4h ；调pH至3. 0-4. 0,按子实体干重1重量％_3重量％加入5万u/g胃蛋白酶，升温至 50-60°C，保持 2-4h ；升温至95-100°C，保持10-20min，灭酶； 粗过滤；加重量2-3重量％的活性炭，70-75°C脱色0. 5-lh ；用硅藻土过滤机过滤得澄清微黄色小分子肽液体； 浓缩，进行喷雾干燥或冷冻干燥得到淡黄色粉末。
5. 一种从北虫草水解提取得到的组合物，所述水解为用复合酶法对北虫草蛋白进行水 解，其特征在于，所述组合物中含有北虫草蛋白水解得到的小分子的纳米寡肽，所述纳米寡 肽的分子量主要分布在100-1000D之间，优选的，所述组合物中分子量为100-500D的纳米 寡肽的高斯分布峰面积百分比超过50%，优选超过70%，更优选的，所述组合物中纳米寡肽 的分子量具有如下的高斯分布
6.权利要求5的组合物，其中水解所采用的酶是3种或3种以上水解酶的组合，所述水 解酶选自胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、基质金属蛋白酶、中性蛋白酶和菠 萝蛋白酶。
7.权利要求6的组合物，其特征在于，其中水解所采用的酶含有碱性蛋白酶、中性蛋白 酶和胃蛋白酶，优选的，所述水解中加入酶的顺序是碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胃蛋白酶。
8.权利要求5的组合物，其中还含有其它活性成分，其为虫草素、蜕皮酮、腺苷、虫草多 糖、虫草酸、麦角留醇、胆醇、甘露醇、软脂酸脂、腺嘌呤、次黄嘌呤、胸腺嘧啶、亚油酸、黄酮 类物质，激素样成分，维生素以及微量元素。
9.一种化妆品组合物，其含有权利要求5-8中任一项的从北虫草水解提取得到的组合物。
10.根据权利要求5-8中任一项的从北虫草水解提取得到的组合物在制备医药、保健 品、化妆品中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种从北虫草中提取含有纳米寡肽的组合物的方法和通过该方法提取得到的组合物。本发明采用复合酶法水解北虫草，获得小分子的纳米寡肽，其特征在于，所述纳米寡肽的分子量主要分布在100-1000D之间，优选的，所述组合物中分子量为100-500D的纳米寡肽的高斯分布峰面积百分比超过50%。本发明提供的北虫草寡肽提取物中同时保留了其它活性成分，包括虫草素、蜕皮酮、腺苷、虫草多糖、虫草酸、微量元素、各族维生素、以及游离氨基酸。本发明还涉及从北虫草中提取得到的含有纳米寡肽的组合物在制备医药、保健品、化妆品中的应用。
文档编号A61K8/64GK102000121SQ201010533520
公开日2011年4月6日 申请日期2010年11月5日 优先权日2010年11月5日
发明者杜以波, 胡如桂 申请人:北京中生奥普寡肽技术研究所