专利名称：一种山慈菇提取物的提取方法
技术领域：
本发明涉及中药提取技术领域，特别是涉及一种山慈菇提取物的提取方法。
背景技术：
山慈燕为兰科植物杜胃$兰Cremastra appendiculata (D. Don) Makino、独蒜兰Pleione bulbocodioides (Franch. ) Rolfe 和云南独蒜兰P. yunnanensis Rolfe 的干燥假鳞茎，具清热解毒、化痰散结等功效，常用于痈肿疔毒，瘰疬结核，淋巴结结核，蛇虫叮咬等症状的治疗，广泛分布于长江流域以南地区及山西、陕西、甘肃等地。山慈菇作为中医抗癌中药已得到广泛应用，特别是近年来在临床上对乳腺癌、食道癌、胃癌、白血病等恶性肿·瘤表现出的良好疗效而备受关注。但就当前山慈菇的开发利用来看，临床上主要以中药复方的形式应用，其有效成分及药理作用尚不十分明确，严重限制了山慈菇的深度开发及市场潜能的发挥。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服目前山慈菇在应用于药物时有效成分及药理作用不十分明确的缺陷，提供一种山慈菇提取物的提取方法，明确了各提取部位的药理作用，可将提取物应用于制药以提高药效、减小服用剂量。为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案
本发明山慈菇提取物的提取方法，包括如下步骤
(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，滤液浓缩得粗提物浸膏；
(2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水稀释，稀释液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分别浓缩得氯仿层浸膏和乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。优选的，上述提取方法为
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室温下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室温下浸提I 4次，残渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，过滤，浓缩，得粗提物浸膏；
(2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水混悬均匀，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，减压浓缩得氯仿层浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。最佳的，前述山慈菇提取物的提取方法为
(1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室温下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室温下浸提2次，每次48小时，残渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得粗提物浸膏；
(2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水稀释至室温下相对密度I.I I. 2，混悬均匀，用氯仿等体积萃取5次，合并萃取液，减压浓缩得氯仿层浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等体积萃取5次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。
申请人对山慈菇提取物的化学成分进行了系统预试和体外抗肿瘤活性验证，具体如下
一、提取物化学成分系统预试
I、提取
山慈菇干燥假鳞茎30kg，粉碎，用体积分数为95%及75%的乙醇分别冷浸两次，每次48h，最后再以75%乙醇，70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并各次提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得到粗提物总浸膏约2. Okgo取粗提物总浸膏，加入适量蒸馏水均匀混悬，测试其相对密度在I. I I. 2之间为宜，再分别以氯仿、乙酸乙酯反复等体积萃取5次，合并各次萃取液，减压浓缩，得到氯仿层 部位浸膏约150g，乙酸乙酯层部位浸膏约IOOg ;剩余部分再结合高浓度醇沉法(95%乙醇)得到醇层和水层部位浸膏。2、山慈菇提取物化学成分系统预试
同一天然药物中至少含有上百种化学成分，在着手研究山慈菇的化学成分时，有必要大致知晓其主要化学成分在不同极性段中的分布情况，这样才便于在以后的研究中根据各类化学成分的性质选择合理的研究方法。2. I供试样品
A 50%乙醇-山慈菇粗提物浸膏溶液，B 50%乙醇-山慈菇水层浸膏溶液，C 90%乙醇-山慈菇醇层浸膏溶液，D :甲醇-山慈菇乙酸乙酯层浸膏溶液，E :氯仿-甲醇(1:1)-山慈燕氯仿层浸膏溶液。2. 2系统预试方法
山慈菇提取物化学成分的系统预试，主要采用试管法对山慈菇粗提物以及萃取后得到水层、醇层、乙酸乙酯层及氯仿层部位进行定性鉴定，具体方法见表I。表I山慈燕化学成分定性检测
权利要求
1.一种山慈菇提取物的提取方法，包括如下步骤 (1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，滤液浓缩得粗提物浸膏； (2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水稀释，稀释液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分别浓缩得氯仿层浸膏和乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。
2.按照权利要求I所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用5 15重量倍75 100%乙醇在室温下浸提I 4次，然后再用5 15重量倍40 75%乙醇在室温下浸提I 4次，残渣用5 10重量倍50 95%乙醇于50 90°C水浴回流提取I 4次，合并所有提取液，过滤，浓缩，得粗提物浸膏； (2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水混悬均匀，用氯仿萃取I 7次，合并萃取液，减压浓缩得氯仿层浸膏，萃余物再用乙酸乙酯萃取I 7次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。
3.按照权利要求2所述山慈菇提取物的提取方法，其特征在于 (1)粗提取山慈菇，粉碎，用12重量倍95%乙醇在室温下浸提2次，然后再用12重量倍75%乙醇在室温下浸提2次，每次48小时，残渣用8重量倍75%乙醇于70°C水浴回流提取2次，每次2h，合并所有提取液，过滤，减压浓缩至无醇味，得粗提物浸膏； (2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水稀释至室温下相对密度I.I I. 2，混悬均匀，用氯仿等体积萃取5次，合并萃取液，减压浓缩得氯仿层浸膏，萃余物再用乙酸乙酯等体积萃取5次，合并萃取液，减压浓缩得乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物。
全文摘要
本发明公开了一种山慈菇提取物的提取方法，(1)粗提取山慈菇，用乙醇提取，滤液浓缩得粗提物浸膏；(2)萃取将粗提物浸膏用蒸馏水稀释，稀释液依次用氯仿和乙酸乙酯萃取，萃取液分别浓缩得氯仿层浸膏和乙酸乙酯层浸膏，该浸膏即为山慈菇提取物，实验证明，山慈菇的氯仿层萃取物和乙酸乙酯层萃取物对肿瘤细胞具有较好的抑制活性，可取代山慈菇原药材而用于制备抗肿瘤药物，以提高疗效、减小服用量。
文档编号A61P35/00GK102895523SQ20111021006
公开日2013年1月30日 申请日期2011年7月26日 优先权日2011年7月26日
发明者周英, 黄波, 郭东贵, 王慧娟, 钱利安 申请人:贵州大学