专利名称：一种包含cla-ptx的微乳制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种被动靶向给药系统，特别是涉及ー种包含CLA-PTX的微乳制剂。本发明还涉及所述微乳制剂的制备方法和所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
背景技术：
微乳(microemulsion)是水、油、表面活性剂和助表面活性剂按适当的比例混合， 自发形成的各向同性、透明、热力学稳定的分散体系，其具有粒径小、透明、热力学稳定等特殊优点，因此在制备药物制剂及临床治疗方面具有日益广泛的用途。现在，微乳被普遍认为是ー新型理想的药物释放载体，这种药物载体具有透明、稳定、吸收完全，能够实现靶向释药等优点，特别是水包油型(0/W型)微乳可増加脂溶性药物在水中的溶解能力，从而提高了药物的疗效，降低其毒副作用，因此微乳的临床应用价值日益提高，具有非常广阔的发展前景。新型抗肿瘤药物CLA-PTX ( “共轭亚油酸-紫杉醇偶联物”)是通过将传统抗肿瘤药物PTX(紫杉醇)与CLA(共轭亚油酸)进行化学连接形成的新型偶联物，其具有通过血脑屏障从而实现对脑胶质瘤的靶向治疗效果。但是，CLA-PTX在水溶液中的溶解性极差，在进行静脉注射给药时无法达到理想的给药剂量，因此需要在给药时进行一定程度的增溶。然而，传统的增溶剂在体内会产生一定的毒副作用，游离药物在体内消除速率快并且不能实现非脑部肿瘤的靶向治疗，因此如何提高CLA-PTX在肿瘤部位的浓度以及降低其对内皮网状系统以及正常组织的毒性是所述药物的研究中面临的最大问题。
发明内容
本发明的创新点在于将被动靶向微乳制剂与新型抗肿瘤药物CLA-PTX相结合，实现靶向技术与新型药物的配合，以提高抗肿瘤药物的溶解性、稳定性与靶向性，降低毒副作用，增强其抗肿瘤效果。为此，本发明的ー个目的是提供一种水包油型微乳制剂，所述制剂包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剤、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料組成。本发明的另ー个目的是提供所述微乳制剂的制备方法。本发明的另ー个目的是提供所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。本发明的技术方案和要点将在下面作详细说明。本发明还涉及以下技术方案I、如权利要求1-10任一项所述的微乳制剂的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤将油性介质、表面活性剤、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取CLA-PTX，加入至油相中，静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解；待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。2、如项I所述的微乳制剂的制备方法，其特征在于所述方法包括如下步骤将大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇 按照5 10 : 15 22 : 10 20 50 70的质量比精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取CLA-PTX，加入至油相中，静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5 %的葡萄糖注射液进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。3、如项I或2所述的微乳制剂的制备方法，其特征在于所述比例稀释为按照油相与水相之间的质量比=I : 10 I : 100进行比例稀释。4、如项I或2所述的微乳制剂的制备方法，其特征在于所述水浴超声的水浴温度为 25-35 °C，例如 30。。。5、如权利要求1-10任一项所述的微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。6、如项5所述的用途，其特征在于所述恶性肿瘤为脑胶质瘤，例如鼠源性脑胶质瘤。术语“CLA”表示共轭亚油酸，其具有抗脑肿瘤与脑肿瘤新生血管的作用。“PTX”表示抗肿瘤药物紫杉醇。“CLA-PTX”表示共轭亚油酸-紫杉醇偶联物。“药脂比”表示药物与脂材的质量比(w/w)，脂材为除抗肿瘤药物CLA-PTX以外的用于制成所述油相的原料的总称，即脂材由油性介质、表面活性剤、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料組成。“PBS溶液”表示pH = 7. 4的磷酸盐缓冲液。“IC50”表示导致50%肿瘤细胞死亡时所对应的药物浓度。“C6细胞”为原发于脑部的脑胶质瘤细胞。进行药效实验时，将所述细胞接种于裸鼠右侧腋下，构成异位肿瘤模型。详细说明本发明的下列技术特征之间可以进行任意的组合，以形成不同的技术方案。这些技术方案均包含在本发明的范围之内CLA-PTX( “共轭亚油酸-紫杉醇偶联物”)的合成方法描述于參考文献Ke XY,Zhao BJ, Zhao X，Wang Y，Huang Y，Chen XM, Zhao BX, Zhao SS，Zhang X，Zhang Q. Thetherapeutic efficacy of conjugated linoleic acid- paclitaxel on glioma intherat. Biomaterials. 2010 Aug ；31 (22) :5855-64中。在此将其公开的内容整体引入本申
请中作为參考。本发明的第一个方面提供一种水包油型微乳制剂，所述制剂包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剤、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料組成。可选用的油性介质的实例包括但不限于植物油(例如大豆油、棉籽油)、动物油、合成油脂和其混合物。可选用的表面活性剂的实例包括但不限于卵磷脂(例如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷月旨)和非离子表面活性剂(例如聚氧こ烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧こ烯氢化蓖麻油(如CremophorRH)、吐温(如吐温80))的混合表面活性剂。可选用的助表面活性剂的实例包括但不限于こ醇、丙ニ醇、甘油和其混合物。 可选用的其它用于制备油相的原料的实例包括但不限于其它活性剂(例如其它用于治疗恶性肿瘤的药物)、防腐剂和抗菌剂。在一个优选的实施方案中，用于制成所述油相的原料由植物油(为油性介质)、卵磷脂、非离子表面活性剂(卵磷脂和非离子表面活性剂为混合表面活性剤)和こ醇(为助表面活性剂)组成。在一个特别优选的实施方案中，用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇组成。在该实施方案中，大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇之间的质量比(w/w)可以为5 10 15 22 10 20 50 70，例如 5 : 15 : 15 : 65、
5 20 10 65、5 20 20 55、6 : 17 : 11 : 66 和 8 : 22 : 10 : 60，优选为8 22 10 60。在一个实施方案中，抗肿瘤药物CLA-PTX在油相中的药物浓度为20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml。。在一个实施方案中，制成所述水相的原料为任何生理学上可接受的水性介质，例如注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液(即每IOOg注射液中含有5g葡萄糖)。本发明的另ー个方面提供所述微乳制剂组合物的制备方法，所述方法包括如下步骤将油性介质、表面活性剤、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取CLA-PTX，加入至油相中，静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解；待CLA-PTX完全溶解后再加入用于制成水相的原料进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。在一个优选的实施方案中，所述方法包括如下步骤将大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇按照5 10 : 15 22 : 10 20 50 70的质量比精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；
精确称取CLA-PTX，加入至油相中，静置或水浴超声至CLA-PTX完全溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml 或 200mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%葡萄糖注射液进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。在一个实施方案中，所述比例稀释为按照油相与水相之间的质量比=I 10 I 100进行比例稀释。在一个实施方案中，所述水浴超声的水浴温度为25_35°C，例如30°C。本发明的另ー个方面提供所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。在一个实施方案中，所述恶性肿瘤为脑胶质瘤，例如鼠源性脑胶质瘤。本发明所述的微乳制剂可以通过静脉注射给药。本发明的优点和/或能够产生的效果在于将CLA-PTX包载于微乳制剂中后可以提高CLA-PTX的给药浓度，同时被动靶向至异位肿瘤部位，从而发挥更好的抗肿瘤作用，同时对正常组织的毒副作用降低。
图I为包含DiR的微乳制剂的活体成像实验結果。图2为荷瘤裸鼠在给药后肿瘤的体积与时间的关系曲线。
具体实施例方式实施例I包含CLA-PTX的微乳制剂的构建
辅料质量
大豆油I O.Omg 蛋黄卵鱗脂30.0mg 聚氧乙烯蓖麻油30.0mg 乙醇130.Omg
将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。其中所述水浴超声的水浴温度为30°C。
实施例2包含CLA-PTX的微乳制剂的构建
辅料质量
大豆油I O.Omg 蛋黄卵磷脂40.0mg
聚氧乙稀霞麻油20.0mg こ醇130.0mg将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。其中所述水浴超声的水浴温度为30°C。实施例3包含CLA-PTX的微乳制剂的构建
辅料质量
大豆油I O.Omg 蛋黄卵磷脂40.0mg
聚氧こ烯蓖*麻油40.Omg
乙醇110.Omg将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。其中所述水浴超声的水浴温度为30°C。实施例4包含CLA-PTX的微乳制剂的构建
辅料质量
大豆油I O.Omg 蛋黄卵磷脂30.0mg 聚氧乙烯蓖麻油20_0mg こ醇115.Omg将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取20mgCLA_PTX，加入至Iml的油相中，静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml ； 待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5 %的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。其中所述水浴超声的水浴温度为30°C。实施例5包含CLA-PTX的微乳制剂的构建
辅料质量或体积
大豆油lO.Omg
蛋黄卵嶙脂40.Omg
聚氧こ歸蓖麻油20,Omg
乙醇·120.Omg将上述质量比的大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油与こ醇精确称量后加入至容器内；将上述步骤得到的混合物静置或水浴超声溶解，形成均一透明的油相；精确称取20mgCLA-PTX，加入至Iml的油相中，静置溶解或采用水浴超声30s进行加速溶解，使CLA-PTX在油相中的浓度为20mg/ml ；待CLA-PTX完全溶解后再加入注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液按照油相水相=I lOw/w进行比例稀释，得到水包油型微乳制剂。其中所述水浴超声的水浴温度为30°C。实验部分为检验本发明的微乳制剂的抗肿瘤效果，我们以实施例5的包含CLA-PTX的微乳制剂为例，进行了以下方面的考察I、微乳性质的表征采用动态光散射法(dynamic light scattering, DLS)对其进行粒径和zeta电位的測定，结果见表I。结果表明本发明所述的微乳制剂的制备方法优良、可行。表 I*
权利要求
1.一种水包油型微乳制剂，所述制剂包括油相和水相，其特征在于用于制成所述油相的原料由抗肿瘤药物CLA-PTX、油性介质、表面活性剂、助表面活性剂和任选的其它用于制备油相的原料组成。
2.如权利要求I所述的水包油型微乳制剂，其特征在于所述油性介质选自植物油(例如大豆油、棉籽油)、动物油、合成油脂和其混合物。
3.如权利要求I所述的水包油型微乳制剂，其特征在于所述表面活性剂为卵磷脂(例如蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂)和非离子表面活性剂(例如聚氧こ烯蓖麻油(如CremophorELP)、聚氧こ烯氢化蓖麻油(如CremophorRH)、吐温(如吐温80))的混合表面活性剂。
4.如权利要求I所述的水包油型微乳制剂，其特征在于所述助表面活性剂选自こ醇、丙ニ醇、甘油和其混合物。
5.如权利要求I所述的水包油型微乳制剂，其特征在于所述任选的其它用于制备油相的原料选自其它活性剂(例如其它用于治疗恶性肿瘤的药物)、防腐剂和抗菌剂。
6.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂，其特征在于用于制成所述油相的原料由植物油、卵磷脂、非离子表面活性剂和こ醇组成。
7.如权利要求6所述的水包油型微乳制剂，其特征在于用于制成所述油相的原料由大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇组成。
8.如权利要求7所述的水包油型微乳制剂，其特征在于大豆油、蛋黄卵磷脂、聚氧こ烯蓖麻油和こ醇之间的质量比(w/w)为5 10 15 22 10 20 50 70，例如 5 15 15 65、5 20 10 65、5 20 20 55、6 : 17 : 11 : 66 或8 22 10 60。
9.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂，其特征在于抗肿瘤药物CLA-PTX在油相中的药物浓度为 20mg/ml 200mg/ml,例如 20mg/ml、50mg/ml、100mg/ml、150mg/ml或 200mg/ml。
10.如权利要求1-5任一项所述的水包油型微乳制剂，其特征在于用于制成所述水相的原料为任何生理学上可接受的水性介质，例如注射用生理盐水或质量分数为5%的葡萄糖注射液。
全文摘要
本发明涉及一种被动靶向给药系统，特别是涉及一种包含CLA-PTX的微乳制剂。本发明还涉及所述微乳制剂的制备方法和所述微乳制剂在制备用于治疗恶性肿瘤的药物中的用途。
文档编号A61K47/48GK102670504SQ20121015924
公开日2012年9月19日 申请日期2012年5月22日 优先权日2012年5月22日
发明者张强, 张烜, 李丹, 李捷思, 杨科, 柯曦宇 申请人:北京大学