甾体化合物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了甾体化合物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用。通过在细胞模型和荷瘤裸鼠模型水平的药理学研究，以紫杉醇作为抗癌药的代表药物，发现了具有通光散苷元乙化学结构骨架的甾体衍生物具有显著的体内、体外增效抗癌药的作用，可作为研制结构明确、疗效显著的癌症化疗药增效剂的原料药。
【专利说明】甾体化合物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一类化合物的新应用，特别涉及具有通光散苷元乙化学结构骨架特征的甾体衍生物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用。
【背景技术】
[0002]化疗药物在恶性肿瘤的治疗中发挥着重要的作用，但源自肿瘤化疗药物化学结构所产生的毒副作用与耐药性问题难以解决。一方面，多数化疗药物都有不同程度的毒副作用，在抑制肿瘤的同时也对正常的人体细胞有不同程度的杀伤作用；另一方面，肿瘤细胞对药物的耐药性(drug resistance)是取得理想疗效的巨大障碍,恶性肿瘤化疗失败的主要原因是肿瘤细胞本身就存在的或在化疗中产生的耐药作用。
[0003] 药物的联合运用是在实验与临床治疗肿瘤中实现“增效减毒”的主要途径。选择两种或两种作用机制不同的抗肿瘤药合用以获得协同作用，减少耐药性，提高疗效。例如治疗乳腺癌、卵巢癌和非小细胞肺癌时，采用微管类化疗药物多西他赛与一些其他类型的抗肿瘤药如长春瑞滨、环磷酰胺、依托泊苷、氟尿嘧啶联用。联用时还要必须考虑尽可能使各药的毒性不重复和叠加，因为毒性的叠加对机体会造成更加严重的损害。因此真正“高效低毒”的肿瘤化疗药物联用方案十分有限。由此设想:常规化疗药与某些无细胞毒或低细胞毒的药物配伍，如果能增强抗肿瘤疗效，或能降低化疗药物毒性，或者既增效又减毒，或许就能实现通过配伍达到肿瘤治疗的理想境界。
[0004]有研究发现甾体抗炎药地塞米松可以增效肿瘤化疗药物的作用。体内实验表明，地塞米松可增加卡钼和吉西他滨的抗癌活性，减少对荷乳腺癌瘤裸鼠的毒性；并增强阿霉素的治疗效果，作用机理与调节肿瘤相关细胞因子的表达、增强阿霉素引起的细胞凋亡、抑制阿霉素引起的NF-κ B活化等因素有关(见文献:Wang H, etal.1ntJOncol.2007, 30:947-53)。Phenoxodiol 是一种人工合成的染料木黄酮(genistein)的结构修饰产物，可通过抑制拓扑异构酶II活性对癌细胞造成生长抑制，还可竞争性结合雌激素受体表现出雌激素拮抗作用，从而促进癌细胞对卡钼、紫杉醇和吉西他滨的敏感性，诱导细胞凋亡。针对复发性卵巢癌，已被美国食品药品管理局(FDA)批准为紫杉醇与顺钼的化疗增效剂候选新药进入临床研究(见文献:Silasi DA, et al.ExpertOpin Pharmacother2009, 10:1059-1067)。在肿瘤药物的使用和研发中“增效减毒”是不可或缺的理念；是医学、药学工作者和癌症患者共同追求的理想。研制结构明确、疗效卓著的肿瘤药物增效剂新药则是实现理想的途径之一，但迄今天然来源的肿瘤化疗药物增效剂尚无研制成为商品药物的实例。
[0005]通光散(Marsdenia Tenacissima)是萝蘑科牛奶菜属药用植物,在我国云南、贵州等省有分布，具有清热解毒等功效，民间用于治疗支气管炎、癌症等症(见文献:江苏新医学院.中药大辞典.下册，P1976，上海:科学技术出版社，1977)。通光散的水溶性提取物是用于制造中成药“消癌平注射液”的原料药，以绿原酸作为定量质控指标；消癌平注射液可用于食道癌、胃癌、肺癌等的治疗和放、化疗的辅助治疗[见文献:中华人民共和国国家药品监督管理局药品标准WS-10630 (ZD-0630)-2002]。其临床应用有较多报道，包括，(I)在治疗晚期食管癌和胃癌时有9.8%的患者可获得完全和部分缓解等；(2)抑制体外培养的人肝癌BeI740细胞、 HepG2细胞的生长，并降低人肝癌细胞甲胎蛋白(AFP)的分泌水平；(3)治疗14例晚期胃癌患者,2个疗程的治疗有效率为50% ;对腺癌,鳞癌，印戎细胞癌的有效率分别为57.9^,40%和50%，多数患者的临床症状得到缓解(依次见文献:王志良，等.中药通光藤治疗食管癌胃癌的临床观察附112例报告.河南肿瘤学杂志，1995，8:202-203 ;孙珏，等.“消癌平”对人肝癌细胞治疗作用的实验研究.上海中医药杂志，2000，34:12-14;袁秀英，等.消癌平注射液治疗14例晚期胃癌的临床观察.上海医药，1996，(6):12-13)。
[0006]但是，以通光散的单个化学成分(通光散单体成分)为药效物质基础开展抗肿瘤作用与机理研究的研究报道仍然稀缺，究竟有哪些成分拥有经得起重复验证的抗癌作用特别体内抗癌活性，以及放疗、化疗增效活性，一直没有明确结论。通光散化学成分的研究报道始于二十世纪七十年代，迄今已有30多年历史，从不同产地采集的植物样品中分离鉴定的化学成分多达50多个，主要是C21留体(即:孕留烷)类化合物及其去氧糖苷。其中以通光散苷元乙(Tenacigenin B)的衍生物数量居多，如17 β-Tenacigenin B,Ila-Tigloyl-12 β-acetyl tenacigenin B,11α，12β—Ditigloyl tenacigenin B,11α-Benzoyl-12β-acetyl tenacigenin B, 11 a_0_2_Methylbutanoy1 — 12 β_0_benzoyl tenacigenin B,通光散新式 A-C(TenacissimosideA-C), Tenacissoside A-E,Marsdeno-side A-K等。但公开报道的具有抗肿瘤相关活性的通光散苷元乙衍生物很少。文献公开报道了:(I)在细胞水平显示出有细胞毒活性的C21甾体成分，有11 α -O-2-Methylbutyryl-12β _0_tigloyl_tenacigenin B、11α _0_2—Methyl_butyryl_12 β -0-benzoyl-tenacigenin B 和 11 a-，12 β-0，O-Ditigloyl-17 β-tenacigenin B,这 3 个化合物在体外对KB-VI 细胞显示细胞毒作用(见文献:Luo SQ, et al.Phytochemistry.1993，34，1615 -1620);未见其他文献报道或验证通光散苷元乙衍生物具有明显或显著的细胞毒作用。(2)本身没有明显细胞毒活性的C21留体成分，但能提高P-gp介导的多药耐药肿瘤细胞对抗癌药的敏感性，例如从通光散中分离出的Tenacissimoside A和Ila -O-benzoyl-12 β ~0~acetyl-tenacigenin B,这两个化合物在体外对人肝癌细胞HepG2和其多药耐药亚株HepG2/Dox的半数抑制浓度都大于80 μ g/mL,表明细胞毒作用很弱，但却有显著的增效抗癌药抑制多药耐药细胞HepG2/Dox生长的作用:在20 μ g/mL浓度水平，Tenacissimoside A能使长春碱、阿霉素、嘌呤霉素和紫杉醇对耐药细胞的药物敏感性提高10、18、11、6倍；而11 α-0-benzoyl-12 β -O-acetyl-tenacigenin B逆转肿瘤多药耐药的作用更强,相应的数据为54,15.8、15.9和315.2倍；作用机理与干扰P-糖蛋白(Ρ-gp)与底物结合的位点、抑制P_gp对抗癌药的外排有关(见文献:Hu YJ, et al.J Nat Prod, 2008，71:1049-1051 ;中国发明专利 ZL200610037029.2)。
[0007]不同肿瘤细胞的耐药性源自不同分子机理。药用植物通光散中是否存在着对肿瘤的临床治疗意义更大、应用范围更加广泛的肿瘤药物增效剂(而不仅仅是P-gp功能抑制剂)也是未知的。文献报道了:(1)“消癌平”注射液对紫杉醇联合顺钼治疗非小细胞肺癌疗效具有一定程度的增效作用:患者给药42天，两种化药组合的有效率为51.7% ;两种化药组合再配伍消癌平的有效率为63.0%，略有提高；同时改善了患者的生活质量及NK细胞免疫功能(见文献:王文玉，等.消癌平注射液联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察.临床肿瘤学杂志2009，14:936-938); (2)消癌平注射液的氯仿可溶部位，即通光散水提取的氯仿可溶物与抗肿瘤药吉非替尼(Gefitinib)联合给药，能够修复耐药性非小细胞肺癌对吉非替尼的敏感性，揭示了通光散提取物作为肺癌吉非替尼化疗增效剂的可能前景。作者还采用HPLC/MS法检测了提取物的化学成分，认为:色谱峰1、2代表了通光散苷元丙(TenacigeninC)的衍生物3 β-O-Pachbiosyl-tenacigenin C及其异构体；色谱峰3代表了通光散苷元甲(Tenacigenin A)的衍生物3 β -O-Pachbiosyl-tenacigeninA,也可能是通光散苷元乙的衍生物 TenacissimosideA,或 Tenacissoside F 即 Tenacissimoside A,说明该色谱峰代表的分子并未确定。其他峰则认为是包括Tenacissoside A、B、H、1、G在内的10种通光散苷元乙衍生物(见文献:Han SY’et al.Lung Cancer.2012; 75:30-37)。需要指出的是:由于通光散中存在分子量相同但结构不同的化合物，在没有用已知化合物进行对照、没有成分分离及其核磁共振波谱分析的情况下，文献中用HPLC/MS法获得的成分组成存在变数；而且未说明测得成分的含量占氯仿可溶物的比例，也没有针对所说的通光散单体成分开展药理研究。
【发明内容】
[0008]本发明的目的在于提供具有通光散苷元乙化学结构骨架特征的留体衍生物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用。
[0009]发明人通过在细胞模型和荷瘤裸鼠模型水平的药理学研究，以紫杉醇作为抗癌药的代表药物，发现了具有通光散苷元乙化学结构骨架的C21留体衍生物具有显著的体内、体外增效抗癌药的作用，可作为研制结构明确、疗效显著的癌症化疗药增效药物。
[0010]具有通光散苷元乙化学结构骨架的C21留体衍生物的通式为:
【权利要求】
1.甾体化合物在制备抗肿瘤化疗药物增效剂中的应用，所述留体化合物具有如式(I)所示的通式，
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:留体化合物选自.11a-O-Tigloyl-12β-0-acetyl tenacigenin B (M_3)、11 a-O-Benzoyl-12β-O-acetyltenacigenin B (M-4)、11 a-0-2-Methyl-butanoyl-12β-O-tigloyl-tenacigenin B(M_5)、通光散新式 A (M_6)、Tenacissoside I (M_7)、Tenacissoside E (M_8)、11 a-0-2-Methyl-butanoyl-12 β -0-benzoyl-tenacigenin B (M_9)、lla -0-2-Methyl-butanoyl-.12β -O-acetyl-tenacigenin B (M-ll)、通光散新式 C (M_12)、Marsdenoside A (M-13)、Marsdenoside (ΧΜ-14)、3β-0 -苯甲酰通光散苷元乙(M-15)和 3 β，11 a，12 β-0，0，O-三苯甲酰通光散苷兀乙(Μ-16)。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:所述留体化合物单独使用，或由两种或多种混合使用。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于:抗肿瘤化疗药物选自紫杉烷类、蒽环类、鬼臼毒素 类、长春碱类药物。
【文档编号】A61K31/7048GK103893191SQ201210570767
【公开日】2014年7月2日 申请日期:2012年12月25日 优先权日:2012年12月25日
【发明者】胡英杰, 沈小玲, 符林春, 艾香英, 田汝华, 朱瑞静, 戴琳玲, 张艳平 申请人:广州中医药大学热带医学研究所