使用来自体液的miRNA来早期检测和监控轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)的方法
【专利摘要】记载了通过定量体液中的神经突和/或突触miRNA对轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)早期诊断和进展监控的方法。
【专利说明】使用来自体液的miRNA来早期检测和监控轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)的方法
[0001]相关申请的交叉参考
[0002]本申请要求2011年4月18日提交的美国临时申请序列号61/476，591,2011年4月25日提交的美国临时申请序列号61/478，766和2011年10月12日提交的美国临时申请序列号61/546，431的优先权，将所有这些的全部内容引入于此以作参考。
【技术领域】
[0003]本发明针对通过定量体液中的神经突和/或突触miRNA对轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)早期诊断和进展监控的方法。
【背景技术】
[0004]阿尔茨海默病(AD)为最常见的神经退行性疾病，其包括由脑细胞的代谢变化、神经元的突触和其它区室(compartment)的损失以及最终的神经元死亡引起的一大组病理(为参考，参见Neurodegenerative diseases:From Molecular Concepts to TherapeuticTargets.编辑:R.von Bernhardi, N.C.1nestrosa, Nova Publishers, 2008)。由于寿命延长，通常的神经退行性疾病，特别是AD在发达国家中已变得十分普遍。仅在美国，目前便存在超过540万(和全世界3600万)患AD的人群，并且估计有7000-8000万超过55岁的人群被认为处于发病的风险。2011年，在美国AD患者医疗服务的年费用估计达$1830 亿(Rocca, ff.A.等，Alzheimer' s&Dementia.2011, 7:80-93;http://www.alz.0rg/downloads/Facts_Figures_2011.pdf)。AD和其它神经退行性疾病的药物开发和成功治疗因缺乏对它们早期诊断和监控的有效方法而异常复杂。有效诊断方法的开发因脑经长时间补偿功能紊乱和神经元缺失的潜能强大而更加复杂。这导致当由于脑中严重的形态学变化(包括神经元的大量损失)而不能非常成功地治疗时疾病症状的临床表现晚。因此，特别期望基于发病早期事件检测的诊断方法。
[0005]阿尔茨海默病的特征在于特征在于在几种疾病特异的脑区如海马体和皮质中神经元死亡。然而，神经元损失是疾病进展中相对晚的事件，其典型地在突触机能障碍、突触损失、神经突退缩和其它畸形出现如轴突输送缺陷之后(参见，例如Crews, Masliah, HumanMol Gen.，2010，19:R12-R20 ;Bredesen，Molecular Neurodegeneration 2009，4:27；Nimmrich 和 Ebert，RevNeurosc1.2009，20:1-12 ;Yoshiyama 等，Neuron.2007，53:337-351 ；Wishart 等，J Neuropathol Exp Neurol.2006,65:733-739 ；GyIys 等，NeurochemInt.2004;44:125-131 ；Conforti 等，Trends Neurosc1.2007, 30:159-166 ；Revueltaj 等 Am J Alzhe`imers Dis Other Demen 2008，23:97-102)。许多研究致力于描述伴随膜封闭的"轴小体"脱落，轴突、树突和脊柱修剪(pruning)以及突触解体的轴突破坏(Goda，Davis，Neuron 2003，40:243-264 ;Eaton，Davis，GenesDevelopment, 2003，17: 2075-2082 ；Koirala,Koj Neuron, 2004，44:578-580 ；Bishop等，Neuron, 2004，44:651-661 ；Low, Cheng, Phil.Trans.R.Soc.B 2006361，1531-1544)。[0006]目前尝试开发能够恢复树突棘状突起密度和突触的抗-AD疗法(Adlard等，PLoSONE, 2011，6:el7669)。
[0007]表现为轻度临床症状的阿尔茨海默病的第一症状阶段为轻度认知障碍(MCI)，其通常被定义为正常老龄化和痴呆症之间的中间状态(DeCarli，LancetNeurol., 2003, 2:15-21 ；Stephan 等，Alzheimer 1 s Res Therapy, 2009, 1:1-9 ；Apostolova 等，Human Brain Mapping, 2010，31:786-797)。一般来说，MCI 患者以每年10-15% 的速度转化为痴呆症(Petersen 等，Arch Neurol.2001, 58:1985-1992 ；Apostolova等，Human Brain Mapping, 2010，31:786-797)。然而，目前无法可靠地预测MCI结果。首先，多达 40% 的 MCI 患者恢复为正常状态(Larrieu 等，Neurology, 2002, 59:1594-1599 ；Brooks, Loewenstein, Alzheimer 1 s Res Therapy, 2010，2:28-36),并且尸体解剖研究表明大量MCI患者不具有AD病理的迹象(Jicha等，Arch Neurol, 2006, 63:674-681 ；Khan, Alkon, Neurobiol.10 Aging, 2010，31:889-900)。其次，约 20% 的转化为痴呆症的MCI患者诊断为未患有AD但患有其它神经退行性疾病如血管症、路易氏体(Lewy body)症、亨廷顿症、帕金森症及其它痴呆症(Jicha等，Arch Neurol, 2006, 63:674-681 ；Stephan等，Alzheimer' s Res Therapy, 2009，1:1-9)。第三，AD患者的疾病进展从缓慢到中等和快速变化(Doody 等，Alzheimer' s Res Therapy, 2010，2:2-10)。甚至临床 MCI 也并不是均一的病理且可描述为两种病况，健忘症状(aMCI)和无健忘症状(Dlugaj等，DementGeriatr Cogn Disord., 2010, 30:362-373 ；Brooks, Loewenstein, Alzheimer 1 s ResTherapy, 2010，2:28-36)。一些出版物已证实，aMCI更经常转化为痴呆症并且是AD较好的预测指标(Mariani 等，J Alzheimer ' s Dis.，2007，12:23-35 ;Luck 等，PsychiatrPrax.，2008，35:331-336 ;Koivunen 等，Neurology, 2011，76:1085-1099)。然而，其他作者还未发现两种MCI形式的转化率的显著差异(Rountree等，Dement Geriatr CognDisord.，2007，24:476-482)。
[0008]目前，AD和其它形式的痴呆症的诊断是基于患者认知功能的分析。如上所述，由于脑中有效的代偿机制，通常当疾病处于其后期时才显露出认知功能降低并且几乎没有治疗可行。神经元之间的淀粉状蛋白斑、神经元纤维τ-缠结和脑组织的整体收缩为AD的显著特征，并且有许多基于这些现象开发诊断试验的尝试。新的成像技术，包括淀粉状蛋白沉积物的体内检测(例如，正电子成像术(PET)、计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)、多光子成像、脑磁图描记术(magnetoencephalography) (MEG)、脑电描记术(EEG)等)(Mucke, Nature, 2009, 461:895-897 ；Mistur 等,J.Clin.Neurol., 2009, 55:153-166 ；Miller, Science, 2009，326:386-389 ；Perrin 等，Nature, 2009，461:916-922)正变得日益流行，但不能用于筛查目的。 [0009]现有的AD和其它形式痴呆症的诊断分子试验可分成两组。第一组是基于单核苷酸多态性(SNP)的分析,其有助于预测高风险疾病但不用于诊断(Bettens等，Hum MolGenet.2010, 19 (Rl):R4-R11)。第二组使用体液中参与AD发病机理的蛋白质或脑特异性蛋白如神经丝蛋白(NTP)的分析(Schipper, Alzheimer ' s&Dementia.2007, 3:325-332)。然而，这些实验不足够灵敏和特异。近来的公布数据已表明，通过测量脑脊液(CSF)中三种蛋白质生物标记物淀粉样蛋白1-42、总τ蛋白和磷酸化τ181Ρ蛋白)的浓度的 AD 检测的灵敏度高(Meyer 等，Arch Neurol.2010, 67:949-956 ；Pagan A.Μ.等Arch, Neurol2011, 68:1137-1144)。CSF采集过程的高侵袭性使得此类试验不实用且对日常临床应用造成挑战。若干小组已报道了根据人血液中的大量蛋白质或抗体的AD诊断试验(Ray S.等 2007, Nat.Med.13，1359-1362 ；Reddy Μ.M.等 2011, Celll44, 132-142 ；Nagele E.等2011，PLoS One6，e23112)。然而，其他研究者还未能够证实这些研究的结果(Bjorkqvist M 等 2012，PLoS One 7，e29868)。
[0010]在2011年4月19日，老龄化国家研究所/阿尔茨海默病协会(NationalInstitute on Aging/Alzheimer ' s Association)提出了新的阿尔茨海默病诊断指南(Khachaturian ZS, 2011 Alzheimer' s and Dementia, 7，253-256)。新指南发表在四份论文中，致力于:(i)AD阶段的分类，即痴呆阶段、有症状的痴呆前期阶段(MCI)和AD的无症状、临床前阶段(前期 MCI) (Jack 等，20111Alzheimer' s and Dementia.7，257-262)；
(11)NIA推荐的由AD引起的痴呆症的诊断(McKhann等，2011，Alzheimer' sand Dementia.7，263-269) ； (iii)NIA 推荐的由 AD 引起的 MCI 的诊断(Albert等，2011，Alzheimer' s and Dementia.7, 270-279);和(iv) NIA 推荐对前期 MCI 的定义(Sperling 等，2011，Alzheimer' s and Dementia.7，280-292)。新指南强调目前缺少和非常需要可用于检测前期MCI和症状发生前AD以及MCI和AD的可靠的生物标记物。
[0011]因此，存在对能够检测AD的MCI或甚至更早的无症状阶段(前期MCI)的无创或微创分子试验的极大需求。另外，如果此类试验可用于疾病结果的预后(prognosis)以及疾病和治疗的监控，则会更好。
[0012]发生在AD和其它神经退行性疾病中的代谢变化引起棘状突起、树突、轴突的破坏和突触损失，后者可能诱发神经元死亡(Bredesen, Molecular Neurodegeneration2009,4:27 ;Crews, Masliah, Human Mol Gen.，2010，19:R12-R20)。类似的过程发生在胚胎脑发育期间。许多神经元S试图建立细胞间接触，成功建立细胞间接触的那些神经元存活，而其它神经元死亡(Butts 等，Cell Death Differ.2008, 15:1178-1186 ；Enokido和 Hatanaka, Gan To Kagaku Ryoh0.1994`, 21:615-620 ；Gasic and Nicotera, ToxicolLett.2003，20139:221-227)。
[0013]伴随膜封闭的"轴小体"脱落，轴突、树突和棘状突起的修剪以及突触解体的轴突破坏导致出现包含神经元、轴突、神经突、棘状突起和突触的胞质成分(包括蛋白质、RNA及其降解产物)的无细胞囊泡。还存在导致这些化合物释放于胞外基质的其它过程，特别是起泡(blebbing) (Charras 等,Biophys.J.2008, 94:1836-1853 ；Fackler, Grosse, J.CellBiol.2008，181:879-884)、胞吐作用(Skog 等 Nat Cell Biol.，2008，10:1470-1476)和其它形式的主动分泌(Wang 等 Nucleic Acids Res.，2010，38:7248-7259 ;Kosaka 等，J BiolChem.，2010，285:17442-30 17452 ；Pigati 等，PLoS ONE, 2010，el3515)。
[0014]微小RNA (miRNA)是一类非编码RNA，其终产物为约22nt的功能性RNA分子。它们通过结合至信使转录本的互补区域来抑制它们的翻译或调控降解而在靶基因调控中起到重要作用(Griffiths-Jones Nucleic Acids Research, 2006, 34, Databaseissue:D140-D144)。通常，一种miRNA可靶向多种mRNA，并且一种mRNA可受靶向3' UTR的不同区域的多种miRNA调控。一旦结合至mRNA, miRNA便可通过影响例如mRNA翻译和稳定性来调苄基因表达和蛋白质产生(Baek等，Nature 455 (7209): 64 (2008)；Selbach 等，Nature455 (7209):58 (2008) ；Ambros,2004,Nature,431,350-355 ；Barte1,2004, Cel I, 116,281-297 ；Cullen,2004, Virus Research., 102,3-9 ；He等，2004，Nat.Rev.Genet.，5，522-531;和 Ying 等，2004，Gene, 342，25-28)。还有特征较少的其它类型的小 RNA(综述于 Kim, Mol.Cells, 2005，19:1-15)。
[0015]许多miRNA特异于或过表达于某一器官/组织/细胞(参见，例如，Hua等，BMC Genomics, 2009, 10:214 ；Liang 等，BMC Genomics.2007, 8:166 ；Landgraf等，Cell.2007，129:1401-1414 ；Lee 等，RNA.2008，14:35-42)。[0016]包括细胞特异的那些miRNA在内的某些miRNA在某些细胞区室中富集，特别是在轴突、树突和突触中富集(参见，例如Schratt等，Nature.439:283-289，2006 ；Lugli 等，J Neurochem.106:650-661,2008 ；Bicker 和 Schratt,J Cell Mo IMed., 12:1466-1476, 2008 ；Smalheiser 和 Lugli, Neuromolecular Med.11:133-140，2009 ；Rajasethupathy, Neuron.63:714-716, 2009 ；Kye,RNA13:1224-1234, 2007 ；Yu 等，ExpCell Res.314:2618-2633，2008 ;Cougot,等，J Neurosc1.28:13793-13804,2008 ；Kawahara, Brain Nerve.60:1437-1444, 2008 ；Schratt G.Rev Neurosc1.2009 ；10:842-849 ；Pichardo-Casas 等 Brain Research.1436:20-33，2012)。
[0017]miRNA的表达和浓度受各种生理和病理信号的调控。某些miRNA的表达变化发现于阿尔茨海默病和其它神经退行性疾病患者的神经元中(Hebert和DeStrooper, Trends Neurosc1.32:199-206, 2009 ；Saba 等，PLoS One.2008 ；3:e3652 ；Kocerha 等，Neuromolecular Med.2009 ;11:162-172 ;Sethi 和 Lukiw, NeurosciLett.2009,459:100-104 ； Zeng,Mo I Pharmaco 1.75:259-264，2009 ；Cogswe 11等,Journal of Alzheimer’s Disease。14: 27-41，2008 ;Schaefer 等,J.Exp.Med.204:1553-1558, 2007 ；Hebert, Proc Natl Acad Sci USA 2008 ； 105:6415-6420 ；Wang 等，J Neurosc1.2008，28:1213-1223 ；Nelson 等，Brain Pathol.2008 ; 18:130-138 ；Lukiw, Neuroreport.2007 ； 18:297-300)。
[0018]由于它们的尺寸小，miRNA可穿过血脑、胎盘和肾脏屏障。miRNA释放可被病理如恶性肿瘤等活化(Pigati等，PLoS ONE, 2010, el3515)。已提出体液中细胞/组织-特异性miRNA的分析用于检测体内细胞死亡(美国专利公布20090081640号；Laterza等，ClinChem.2009, 55:1977-1983)。
[0019]目前作为用作神经退行性疾病如AD诊断的主要方法的认知功能试验和脑成像仅允许检测疾病的晚期，并且不够特异。本领域中仍然存在对开发在发生主要的形态学变化和大量神经细胞死亡前早期诊断MCI和AD的方法的极大需求。
【发明内容】
[0020]如上述背景部分所述，对用于阿尔茨海默病(AD)、轻度认知障碍(MCI)和无症状前阶段以及其它神经退行性疾病的无创或微创的早期检测和监控试验存在极大的需求。本发明通过基于定量体液中的突触和/或神经突miRNA来提供新的高灵敏和无创或微创诊断和监控方法来满足该需求。本发明的方法允许在发生主要的形态变化和大量神经细胞死亡之前诊断和监控前期MC1、MC1、AD以及其它神经退行性疾病，因而具有许多临床意义。例如，使用本发明的方法可导致目前神经退行性疾病的可行性治疗的有效性增强，因为此类治疗可在疾病的显著更早期阶段施用。使用本发明的方法还可允许开发新的有效的治疗性和/或预防性处理，并可降低费用和提高与此类开发相关的临床试验的效率(例如，通过简化和增强患者选择和分组(stratification)的确定性,和/或通过简化和提高药物效力评价方法的效率)。
[0021]在一方面，本发明提供一种用于检测受试者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括:
[0022]a.测量从受试者采集的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0023]b.比较从受试者采集的体液样品中的所述miRNA水平和所述miRNA的年龄相称的对照水平，和
[0024]c.⑴当从受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与年龄相称的对照相比增加时，将受试者鉴定为患有前期MCI或MCI，或(ii)当从受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与年龄相称的对照相比不增加时，将所述受试者鉴定为未患有前期MCI或MCI。
[0025]在相关方面，本发明提供 一种用于检测受试者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括:
[0026]a.测量从受试者采集的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平；
[0027]b.测量从受试者采集的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0028]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平比；
[0029]d.比较在步骤(C)中计算的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比,和
[0030]e.⑴当在步骤(C)中计算的miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比时，将受试者鉴定为患有前期MCI或MCI，或(ii)当在步骤(c)中计算的miRNA的水平比不高于相应的年龄相称的对照比时，将受试者鉴定为未患有前期MCI或MCI。
[0031]在另一方面，本发明提供一种用于预测受试者从前期MCI向MCI进展的可能性的方法，所述方法包括:
[0032]a.测量从受试者采集的两种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述样品已在间隔的时间点获得；
[0033]b.比较在从受试者采集的各体液样品中的所述miRNA的水平与所述miRNA的年龄相称的对照水平，和
[0034]c.如果在从受试者中采集而由此获得的两种或多种的体液样品中所述miRNA的水平与年龄相称的对照相比增加，则预测所述受试者中的疾病将从前期MCI向MCI进展。
[0035]在一个实施方案中，体液样品可间隔几个月，例如间隔1、3、6、12或24个月，优选间隔3-6个月获得。
[0036]在相关方面，本发明提供一种用于预测受试者从前期MCI向MCI进展的可能性的方法，所述方法包括:
[0037]a.测量从受试者采集的两种或多种的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平，其中所述样品已在间隔的时间点获得；
[0038]b.测量从受试者采集的各相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0039]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比；
[0040]d.比较在步骤(C)中计算的从受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和
[0041]e.如果在从受试者中采集而由此获得的两种或多种的体液样品中在步骤(C)中计算的miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则预测受试者的疾病将从前期MCI向MCI进展。
[0042]用于上述方法的miRNA的年龄相称的对照水平或年龄相称的对照比可为，例如预定标准(例如，使用具备正常认知功能的年龄相称的群体确定的本领域-接受水平或比)。
[0043]在单独的方面，本发明提供一种用于检测受试者中的脑老化的方法，所述方法包括: [0044]a.测量从受试者采集的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0045]b.比较从受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与⑴事先从相同受试者获得的所述miRNA的对照水平，或与(ii)预定的年轻标准，和
[0046]c.当从受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与对照⑴相比或与所述预定的年轻标准(ii)相比增加时，将受试者鉴定为正经受脑老化。
[0047]在相关方面，本发明提供一种用于检测受试者中的脑老化的方法，所述方法包括:
[0048]a.测量从受试者采集的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平；
[0049]b.测量从受试者采集的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0050]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平比；
[0051]d.比较在步骤(C)中计算的miRNA的水平比与⑴事先从相同受试者获得的相应的对照比，或与(ii)预定的年轻标准比，和
[0052]e.当在步骤(C)中计算的miRNA的水平比高于相应的对照比⑴或与所述预定的年轻标准比(ii)相比高时，将受试者鉴定为正经受脑老化。
[0053]用于上述两种方法的预定的年轻标准可为，例如使用具备正常认知功能的相对年轻的群体(例如10-20岁，20-30岁，30-40岁，20-50岁)确定的本领域-接受的水平或比。
[0054]在另外的方面，本发明提供一种用于确定受试者中的前期MCI或MCI治疗的有效性的方法，所述方法包括:
[0055]a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0056]b.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平；
[0057]c.比较在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平，和
[0058]d.⑴如果在治疗期间或之后miRNA的水平已降低，则确定治疗有效；(ii)如果在治疗期间或之后miRNA的水平并没有降低，则确定治疗不是有效的。
[0059]在相关方面，本发明提供一种用于确定受试者中的前期MCI或MCI治疗的有效性的方法，所述方法包括:
[0060]a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0061]b.测量从治疗开始前获得的受试者采集的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；[0062]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从治疗开始前获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0063]d.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平；
[0064]e.测量来自治疗期间或之后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0065]f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从治疗期间或之后获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0066]g.比较在步骤(C)和(f)中计算的miRNA的水平比,和
[0067]h.⑴如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比低于在步骤(C)中计算的miRNA的水平比，则确定治疗有效；(ii)如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平比，则确定治疗不是有效的。
[0068]在单独的方面，本发明提供一种用于确定延缓受试者中的脑老化的治疗的有效性的方法，所述方法包括:
[0069]a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； [0070]b.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平；
[0071]c.比较在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平，和
[0072]d.⑴如果在治疗期间或之后miRNA的水平已降低，则确定治疗有效；(ii)如果在治疗期间或之后miRNA的水平并没有降低，则确定治疗不是有效的。
[0073]在相关方面，本发明提供一种用于确定延缓受试者中的脑老化的治疗的有效性的方法，所述方法包括:
[0074]a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0075]b.测量来自治疗开始前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0076]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从治疗开始前获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0077]d.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平；
[0078]e.测量来自治疗期间或之后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0079]f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从治疗期间或之后获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0080]g.比较在步骤(C)和(f)中计算的miRNA的水平比,和
[0081]h.⑴如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平比，则确定治疗有效；(ii)如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平比，则确定治疗不是有效的。
[0082]在上述用于确定治疗有效性的方法的一个实施方案中，样品可例如在治疗期间或之后每隔I周、2周、I个月、3个月、6个月、12个月或24个月获得。
[0083]在额外的方面，本发明提供一种用于鉴定对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0084]a.测量从患有前期MCI或MCI的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得；
[0085]b.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平；
[0086]c.比较步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平，和
[0087]d.(i)如果在试验化合物给药后miRNA的水平已降低，则鉴定该化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用；(ii)如果在试验化合物给药后miRNA的水平并没有降低，则鉴定该化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI不是有用的。
[0088]在相关方面，本发明提供一种用于鉴定对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0089]a.测量从患有前期MCI或MCI的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得；
[0090]b.测量来自试验化合物给药前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
`[0091]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从试验化合物给药前获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0092]d.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平；
[0093]e.测量来自试验化合物给药后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0094]f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从试验化合物给药后获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比；
[0095]g.比较在步骤(C)和(f)中计算的miRNA的水平比,和
[0096]h.⑴如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比低于在步骤(C)中计算的miRNA的水平比，则鉴定该试验化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用；
(ii)如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平t匕，则鉴定该试验化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI不是有用的。
[0097]在单独的方面，本发明提供一种用于鉴定对延缓脑老化有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0098]a.测量从受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得；
[0099]b.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平；
[0100]C.比较在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平，和
[0101]d.(i)如果在试验化合物给药后miRNA的水平降低，则鉴定该化合物对延缓脑老化有用；(ii)如果在试验化合物给药后miRNA的水平并没有降低，则鉴定该化合物对延缓脑老化不是有用的。
[0102]在相关方面，本发明提供一种用于鉴定对延缓脑老化有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0103]a.测量从受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得；
[0104]b.测量来自试验化合物给药前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0105]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从试验化合物给药前获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比；
[0106]d.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平；
[0107]e.测量来自试验化合物给药后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0108]f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从试验化合物给药后获得的受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比。
[0109]g.比较在步骤(C)和(f)中计算的miRNA的水平比,和
[0110]h.⑴如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平比，则鉴定该试验化合物对延缓脑老化有用；(ii)如果在步骤(f)中计算的miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的miRNA的水平比，则鉴定该试验化合物对延缓脑老化不是有用的。
[0111]上述试验化合物筛查方法还可包括将试验化合物向受试者给药的步骤。
[0112]在单独的方面，本发明提供一种用于预测已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段的进展的方法，所述方法包括:
[0113]a.测量从受试者采集的体液样品中的miR-451的水平；
[0114]b.测量相同体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平；
[0115]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平比；
[0116]d.比较在步骤(C)中计算的miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比,和
[0117]e.如果在步骤(C)中计算的miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则确定受试者的疾病将从MCI向AD的痴呆阶段进展。
[0118]在单独的方面，本发明提供一种用于预测已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括:
[0119]a.测量从受试者采集的体液样品中的miR-7、miR_125b和miR-16的至少一种的水平；
[0120]b.测量相同体液样品中标准物miRNA的水平；
[0121]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的miRNA的水平比；
[0122]d.比较在步骤(C)中计算的miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和
[0123]e.如果在步骤(C)中计算的至少一种比例高于相应的年龄相称的对照比，则确定受试者的疾病将从MCI向AD的 痴呆阶段进展。[0124]在相关方面，本发明提供一种用于预测已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括在一次试验中组合两种生物标记物/标准物miRNA比，即miR-451与突触或神经突miRNA的比以及miR-7、125b或miR-16与标准物miRNA的比。如果两种比例高于相应的年龄相称的对照比，则将预期受试者的疾病从MCI向AD的痴呆阶段进展。
[0125]在单独的方面，本发明提供一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括:
[0126]a.测量从受试者采集的体液样品中的miRNA-451的水平，其中所述样品已经以间隔的时间点采集；
[0127]b.比较从受试者采集的各体液样品中的miRNA-451的水平与相应的年龄相称的对照水平，和
[0128]c.如果从受试者采集的各体液样品中的miRNA-451的水平高于相应的年龄相称的对照水平，则确定受试者的疾病从MCI向AD进展。
[0129]在相关方面，本发明提供一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括:
[0130]a.测量从受试者采集的体液样品中的miRNA-451的水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集；
[0131]b.测量从受试者 采集的各相同体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平;
[0132]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比；
[0133]d.比较在步骤(C)中计算的从受试者采集的各体液样品的miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和
[0134]e.如果对于从受试者采集的各体液样品，在步骤(C)中计算的miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则确定受试者的疾病从MCI向AD的痴呆阶段进展。
[0135]在单独的方面，本发明提供一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括:
[0136]a.测量从受试者采集的体液样品中的miR-7、125b和miR-16的至少一种的水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集；
[0137]b.测量从受试者采集的各相同体液样品中的标准物miRNA的水平；
[0138]c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从受试者采集的各相同体液样品中的miRNA的水平比；
[0139]d.比较在步骤(C)中计算的从受试者采集的各相同体液样品的mRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和
[0140]e.如果对于从受试者采集的各相同体液样品，在步骤(C)中计算的至少一种比例高于相应的年龄相称的对照比，则确定受试者的疾病将从MCI向AD的痴呆阶段进展。
[0141]在相关方面，本发明提供一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括在一次试验中组合两种生物标记物/标准物miRNA比，即(i)miR-451与突触或神经突miRNA的比和(ii)miR_7、miR_125b和miR-16的至少一种与标准物 miRNA (例如，miR-491-5p 或选自由 miR_9、miR-127、miR_181a、miR-370 和miR-491-5p组成的组的两种或多种的标准物的平均值)的比。如果对于从受试者采集的各体液样品，(i)和(ii)两种比例高于相应的年龄相称的对照比，则将预期受试者的疾病从MCI向AD的痴呆阶段进展。
[0142]在上述方法的一个实施方案中，体液样品可间隔几个月，例如间隔1、3、6、12或24个月，优选间隔3-6个月采集。
[0143]在本发明的方法中有用的突触或神经突miRNA的非限制性实例包括，例如miR_7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409-3p、miR-425、miR-429、miR-433-5p、miR-446、miR-467、miR-483-3p、miR-485-5p、miR-487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939。
[0144]在本发明的前期MCI和MCI诊断、预后和筛查方法中有用的突触或神经突miRNA的优选实例包括 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7 和miR_125b。
[0145]在脑老化相关的诊断、预后和筛查方法中有用的突触或神经突miRNA的优选实例包括 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p 和 miR-382。
[0146]为了增加本发明方法的准确性，优选使用两种或多种的突触或神经突miRNA的水平。进一步优选证实在两种或多种的连续采集的体液样品中突触或神经突miRNA的水平的变化。
[0147]在本发明的方法中有用的标准物miRNA包括脑富集的标准物miRNA以及在多种组织中表达但在脑中不显著表达的miRNA(例如，miR-lOb或miR-141)。本发明的方法包括单一标准物(例如，miR-491-5p、miR-370等)以及两种或多种的标准物的平均值(例如，选自由miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491_5p组成的组的两种或多种的标准物)。
[0148]在本发明的方法中有用的脑富集的标准物包括，例如神经元体miRNA ;主要在脑区表达但不参与要评价的病理的miRNA ;主要在胶质细胞中表达的miRNA和在要评价的病理中表达、分泌或二者下调的脑富集的miRNA。
[0149]在本发明的方法中有用的脑富集的标准物miRNA的非限制性实例包括，例如miR-9、miR-181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p，其可单独或组合使用。
[0150]在一个特定的实施方案(适用于本发明方法的每一种)中，突触或神经突miRNA选自由miR-128、miR-132和miR-874(统称为"miR-132家族")组成的组，标准物miRNA选自由 miR-491-5p、miR-9、miR_181a 和 miR-141 组成的组。
[0151]在另一特定的实施方案(适用于本发明方法的每一种)中，突触或神经突miRNA选自由miR-134、miR-323-3p和miR-382 (统称为"miR-134家族")组成的组，标准物miRNA 为 miR-370 或 miR-127。
[0152]在另一特定的实施方案(适用于本发明的所有方法，除了脑老化相关的方法以外)中，突触或神经突 miRNA 为 miR-7，标准物 miRNA 为 miR-9、miR-27、miR-181a、miR-370、miR-49 l-5p，或所有这些标准物的平均血浆浓度。
[0153]在另一特定的实施方案(适用于本发明的所有方法，除了脑老化相关的方法以外)中，突触或神经突神经突miRNA为miR-125b，标准物miRNA为miR-9、miR_181a、miR-370、miR-49l-5p，或所有这些标准物的平均血浆浓度。
[0154]用于本发明的方法的受试者包括，例如神经退行性疾病或其它神经元病理的人、兽医用动物和实验动物模型。对于本发明的诊断、预后和治疗监控方法，受试者优选人。对于筛查方法，受试者优选实验动物。
[0155]可用于本发明方法的体液的非限制性实例包括，例如血浆或血清、尿液和唾液。在一些实施方案中，miRNA从体液样品纯化。
[0156]在一些实施方案中，本发明的方法包括(例如作为初始步骤)从受试者采集体液样品的步骤。
[0157]在本发明的方法中，miRNA的水平可使用任何适合的技术，例如杂交、RT-PCR或测
序来确定。
[0158]在一些实施方案中，本发明的方法可进一步包括减少或消除miRNA降解的步骤。
[0159]在一些实施方案中，本发明的诊断方法可进一步包括向已诊断为患有病况或诊断为处于向更严重的病况进展的风险中的受试者施以治疗性或预防性处理的步骤。
[0160]在一些实施方案中，本发明的诊断方法可进一步包括招募临床试验受试者的步骤。
[0161]连同上述诊断和筛查方法，本发明还提供各种包括对检测靶miRNA特异的一种或多种的引物和/或探针组的试剂盒。此类试剂盒可进一步包括对检测标准物miRNA特异的引物和/或探针组。试剂盒中引物或`探针组合的非限制性实例如下:
[0162]1.对选自由miR-7、miR_125b和miR-16组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针(任选地,进一步包括对选自由miR-491-5p、miR-9、miR-127、miR-181a和miR-370组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0163]2.对miR-451特异的引物或探针(任选地，进一步包括对选自由miR_7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935和miR-939组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针)。
[0164]3?对选自由 miR-7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR-125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369-5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483-3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 组成的组的至少两种 miRNA特异的引物或探针(任选地，进一步包括对选自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a,miR-370和miR-49l_5p组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0165]4.对选自由 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7和miR-125b组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针(任选地,进一步包括对选自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR_181a、miR-370 和 miR-491_5p 组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0166]5.对选自由miR-128、miR-132和miR-874组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针(任选地，进一步包括对选自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a和miR-141组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0167]6.对选自由miR-134、miR-323-3p和miR-382组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针(任选地，进一步包括对miR-370或miR-127的至少一种标准物特异的引物或探针).[0168]7.对miR-7特异的引物或探针(任选地，进一步包括对选自由miR-9、miR-27、miR-181a,miR-370和miR-49l_5p组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0169]8.对miR_125b特异的引物或探针(任选地，进一步包括对选自由miR_9、miR-181a,miR-370和miR-491_5p组成的组的至少一种标准物miRNA特异的引物或探针)。
[0170]此类试剂盒可用于从患者分离的体液样品中的直接miRNA检测或可用在纯化的RNA样品上。
【专利附图】
【附图说明】
[0171]图1A-E为示出MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miR-7⑷，miR-874 (B), miR-9 (C), miR-181a (D)和miR-49l_5p (E)浓度比较的图。所有浓度相对于掺标的(spiked)ath_miR-159a 归一化(normalization)。这里及其它盒须图(box and whiskerplots)中，盒表示结果的50%的分布,盒上下的棒表示结果的80%。点表示位于80%数据以外的分析值。分析的中值由盒内部的线表示。归一化miRNA浓度以相对单位(对数标尺)示于纵轴。
[0172]图2A-C为示出MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miR_874(A)、miR-134(B)和miR-539(C)的浓度比较的图。所有浓度相对于miR-141归一化。
[0173]图3A-C为示出MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA的浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-128 (B)和 miR-134 (C)的浓度相对于 miR_181a 归一化。
[0174]图4为示出MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miR_125b的浓度比较的图。miR-125b的浓度相对于miR-9归一化。
[0175]图5A-C为示出MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA的浓度比较的图。miR-128 (A)、miR-134(B)和 miR_874(C)的浓度相对于 miR-491_5p 归一化。
[0176]图6为示出MCI (MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-134的浓度相对于miR-127归一化。
[0177]图7A-B为示出比较MCI患者(MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA的浓度的图。miR-132 (A)和miR-323_3p (B)的浓度相对于miR-16归一化。
[0178]图8A-C为示出MCI (MCI)和年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-134 (A)、miR-874 (B)、miR-539 (C)的浓度相对于 miR-10b 归一化。
[0179]图9A-C为示出MCI (MCI)和AD患者(AD)以及年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA 浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-132 (B)、miR-874 (C)的浓度相对于 miR-141 归一化。
[0180]图10A-E为示出MCI (MIC)和AD患者(AD)以及年龄相称的对照(AMC)的血浆中miRNA 浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-128 (B)、miR-132 (C)、miR382 (D)和 miR-874 (E)的浓度相对于miR-9归一化。
[0181]图1lA-E为示出MCI和AD患者以及年龄相称的对照的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-132 (A)、miR-134 (B)、miR-323_3p (C)、miR-382 (D)和 miR-874 (E)的浓度相对于miR-127-3p 归一化。
[0182]图12A-G为示出MCI和AD患者以及年龄相称的对照的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-128 (B)、miR-132 (C)、miR-134 (D)、miR323-3p (E)、miR-382 (F)和miR-874 (G)的浓度相对于miR_181a归一化。
[0183]图13A-H为示出MCI和AD患者以及年龄相称的对照的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-125 (B)、miR-128 (C)、miR-132 (D)、miR-134 (E)、miR323_3p (F)、miR-382 (G)和 miR-874 (H)的浓度相对于 miR-370 归一化。
[0184]图14A-H为示出MCI和AD患者以及年龄相称的对照的血浆中miRNA浓度比较的图。miR-7 (A)、miR-125 (B)、miR-128 (C)、miR-132 (D)、miR-134 (E)、miR323_3p (F)、miR-382 (G)和 miR-874 (H)的浓度相对于 miR-491_5p 归一化。
[0185]图15A-C 呈现利用相`对于 miR-49l-5p 归一化的 miR-128 (A)、miR-132 (B)和miR-874(C)获得的MCI患者(MCI)与年龄相称的对照(AMC)之间差异的受试者操作特征(Receiver-Operating Characteristic, ROC)曲线分析。记录 ROC 曲线(AUC)下的面积。对于各生物标记物/标准物对的灵敏性、特异性和准确性计算作为生物标记物/标准物比的“截留(cutoff)”点(表示为各图上的点)，此处样品属于AMC或MCI组的可能性相等。
[0186]图16A-C 呈现利用相对于 miR-370 归一化的 miR-134 (A)、miR-323_3p (B)和miR-382 (C)获得的MCI患者(MCI)与年龄相称的对照(AMC)之间差异的受试者操作特征(ROC)曲线分析。记录ROC曲线(AUC)下的面积。对于各生物标记物/标准物对的灵敏性、特异性和准确性，计算作为生物标记物/标准物比的“截留(cutoff)”点(表示为各图上的点)，此处样品属于AMC或MCI组的可能性相等。
[0187]图 17A-F 呈现 miR128 和 miR-132 (A)、miR-128 和 miR-874 (B)、miR-132 和miR-874 (C)、miR-134 和 miR-323_3p (D)、miR-134 和 miR-382 (E)、以及 miR-382 和miR-323-3p (F)之间的关联分析。比较各种生物标记物对的Ct值,并计算斯皮尔曼等级相关系数(Spearman, s rank correlation coefficient)r 以及 95% 置信区间(MIN&MAX)。
[0188]图18A-J为示出21-50岁(CY)和76-86岁(CO)对照的血浆中miRNA浓度比较的图。生物标记物miRNA的浓度相对于各种miRNA标准物归一化并以相对单位(纵轴)示出。A:miR-128/miR-181a ；B:miR-132/miR-181a ；C:miR-874/miR-181a ；D:miR-134/miR-370 ；E:miR-323-3p/miR-370 ；F:miR-382/miR-370 ；G:miR-132/miR-9 ；H:miR-382/miR-127-3p ；I:miR-132/miR-491-5p ；J:miR-874/miR-491_5p。
[0189]图19示出具备初始正常的认知功能的老年受试者在2-5年期间的血浆中生物标记物的浓度分析。测量miR-128、miR-132和miR-874 (生物标记物)的水平并相对于miR-49l-5p归一化。如果三种生物标记物中的至少两种的浓度高于由ROC曲线(图15)的截留点预定的对照值，则认为患者是病理阳性的。灰色和黑色分别表示对照和病理。小框提供血浆miRNA试验的结果，外部颜色表示临床诊断；因此，仅在其中临床诊断不同于当前方法的预测的情况中看到两种颜色。
[0190]无MCI患者,如通过认知功能试验所诊断的,还通过血浆miRNA试验确定为阴性；画-无MCI患者，通过血浆miRNA试验确定为阳性；
【权利要求】
1.一种用于检测受试者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.比较从所述受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平和所述miRNA的年龄相称的对照水平，和 c.(i)当从所述受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与所述年龄相称的对照相比增加时，将所述受试者鉴定为患有前期MCI或MCI,或(ii)当从所述受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与所述年龄相称的对照相比不增加时，将所述受试者鉴定为未患有前期MCI或MCI。
2.一种用于检测受试者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平； b.测量从所述受试者采集的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和 e.(i)当在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比时，将所述受试者鉴定为患有前 期MCI或MCI，或(ii)当在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比不高于相应的年龄相称的对照比时，将所述受试者鉴定为未患有前期MCI或MCI。
3.一种用于预测受试者从前期MCI向MCI进展的可能性的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的两种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述样品已在间隔的时间点获得； b.比较从所述受试者采集的各体液样品中的所述miRNA的水平与所述miRNA的年龄相称的对照水平，和 c.如果在从所述受试者中采集而由此获得的两种或多种的体液样品中所述miRNA的水平与所述年龄相称的对照相比增加，则预测所述受试者中的疾病将从前期MCI向MCI进展。
4.一种用于预测受试者从前期MCI向MCI进展的可能性的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的两种或多种的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平，其中所述样品已在间隔的时间点获得； b.测量从所述受试者采集的各相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从所述受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的从所述受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和 e.如果在从所述受试者中采集而由此获得的两种或多种的体液样品中在步骤(C)中计算的所述miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则预测所述受试者的疾病将从前期MCI向MCI进展。
5.一种用于检测受试者中脑老化的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.比较从所述受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与(i)事先从相同受试者获得的所述miRNA的对照水平，或与(ii)预定的年轻标准，和C.当从所述受试者采集的体液样品中的所述miRNA的水平与对照(i)相比或与所述预定的年轻标准(ii)相比增加时，将所述受试者鉴定为正经受脑老化。
6.一种用于检测受试者中的脑老化的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的突触或神经突miRNA的水平； b.测量从所述受试者采集的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比与⑴事先从相同受试者获得的相应的对照比，或与(ii)预定的年轻标准比，和 e.当在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比高于相应的对照比(i)或与所述预定的年轻标准比(ii)相比高时，将所述受试者鉴定为正经受脑老化。
7.一种用于确定受试者中的前期MCI或MCI治疗的有效性的方法，所述方法包括: a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平； c.比较在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述治疗期间或之后所述miRNA的水平已降低，则确定所述治疗有效；(ii)如果在所述治疗期间或之后所述miRNA的水平并没有降低，则确定所述治疗不是有效的。
8.一种用于确定受试者中的前期MCI或MCI治疗的有效性的方法，所述方法包括: a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.测量来自治疗开始前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从治疗开始前获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平； e.测量来自治疗期间或之后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从治疗期间或之后获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； g.比较在步骤(c)和(f)中计算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则确定所述治疗有效；(ii)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则确定所述治疗不是有效的。
9.一种用于确定延缓受试者中的脑老化的治疗的有效性的方法，所述方法包括: a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平；C.比较在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在治疗期间或之后所述miRNA的水平已降低，则确定所述治疗有效；(ii)如果在治疗期间或之后miRNA的水平并没有降低，则确定所述治疗不是有效的。
10.一种用于确定延缓受试者中的脑老化的治疗的有效性的方法，所述方法包括: a.测量从治疗开始前获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； b.测量来自治疗开始前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从治疗开始前获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.测量从治疗期间或之后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平； e.测量来自治疗期间或之后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平； f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从治疗期间或之后获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； g.比较在步骤(c)和(f)中计算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则确定所述治疗有效；(ii)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则确定所述治疗不是有效的。
11.一种用于鉴定对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括: a.测量从患有前期MCI或MCI的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得； b.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平； c.比较步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述试验化合物给药后所述miRNA的水平已降低，则鉴定所述化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用；(ii)如果在所述试验化合物给药后所述miRNA的水平并没有降低，则鉴定所述化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI不是有用的。
12.—种用于鉴定对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括: a.测量从患有前期MCI或MCI的受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得； b.测量来自试验化合物给药前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平; c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从试验化合物给药前获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平；e.测量来自试验化合物给药后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平; f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从试验化合物给药后获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； g.比较在步骤(c)和(f)中计算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步骤( f)中计算的所述miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则鉴定所述试验化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI有用；(ii)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则鉴定所述试验化合物对减缓前期MCI或MCI的进展或治疗前期MCI或MCI不是有用的。
13.一种用于鉴定对延缓脑老化有用的化合物的方法，所述方法包括: a.测量从受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得； b.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的所述miRNA的水平； c.比较在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述试验化合物给药后所述miRNA的水平降低，则鉴定所述化合物对延缓脑老化有用；(ii)如果在所述试验化合物给药后所述miRNA的水平并没有降低，则鉴定所述化合物对延缓脑老化不是有用的。
14.一种用于鉴定对延缓脑老化有用的化合物的方法，所述方法包括: a.测量从受试者采集的一种或多种的体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平，其中所述体液样品在试验化合物给药前获得； b.测量来自试验化合物给药前获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平; c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从试验化合物给药前获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.测量从试验化合物给药后获得的受试者采集的一种或多种的体液样品中的相同突触或神经突miRNA的水平； e.测量来自试验化合物给药后获得的受试者的相同体液样品中的标准物miRNA的水平; f.计算在步骤(d)和(e)中测量的从试验化合物给药后获得的受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； g.比较在步骤(c)和(f)中计算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则鉴定所述试验化合物对延缓脑老化有用；(ii)如果在步骤(f)中计算的所述miRNA的水平比不低于在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比，则鉴定所述试验化合物对延缓脑老化不是有用的。
15.一种用于预测已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括:a.测量从所述受试者采集的体液样品中的miR-451的水平； b.测量相同体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和 e.如果在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则确定所述受试者的疾病将从MCI向AD的痴呆阶段进展。
16.一种用于预测已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的miR-7、miR-125b和miR-16的至少一种的水平； b.测量相同体液样品中标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和` e.如果在步骤(C)中计算的至少一种比例高于相应的年龄相称的对照比，则确定所述受试者的疾病将从MCI向AD的痴呆阶段进展。
17.一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的miRNA-451的水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集； b.比较从所述受试者采集的各体液样品中的miRNA-451的水平与相应的年龄相称的对照水平，和 c.如果从所述受试者的各体液样品中的miRNA-451的水平高于相应的年龄相称的对照水平，则确定所述受试者的疾病从MCI向AD进展。
18.一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的miRNA-451的水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集； b.测量从所述受试者采集的各相同体液样品中的至少一种突触或神经突miRNA的水平; c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从所述受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的从所述受试者采集的各体液样品的所述miRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和 e.如果对于从所述受试者采集的各体液样品，在步骤(c)中计算的所述miRNA的水平比高于相应的年龄相称的对照比，则确定所述受试者的疾病从MCI向AD的痴呆阶段进展。
19.一种用于监控已诊断为患有MCI的受试者从MCI向AD的痴呆阶段进展的方法，所述方法包括: a.测量从所述受试者采集的体液样品中的miR-7、125b和miR-16的至少一种的水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集；b.测量从所述受试者采集的各相同体液样品中的标准物miRNA的水平； c.计算在步骤(a)和(b)中测量的从所述受试者采集的各相同体液样品中的所述miRNA的水平比； d.比较在步骤(c)中计算的从所述受试者采集的各体液样品的所述mRNA的水平比与相应的年龄相称的对照比，和 e.如果对于从所述受试者采集的各体液样品，在步骤(C)中计算的至少一种比例高于相应的年龄相称的对照比，则确定所述受试者的疾病将从MCI向AD的痴呆阶段进展。
20.根据权利要求1-16和18任一项所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA选自由 miR-7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369-5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR-487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 组成的组。
21.根据权利要求1-16和18任一项所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA选自由miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p 和 miR-382 组成的组。
22.根据权利要求1-16和18任一项所述的方法，其包括测量两种或多种的突触或神经突miRNA的水平。`
23.根据权利要求1、2、5和6任一项所述的方法，其包括测量从所述受试者采集的两种或多种的体液样品中的miRNA水平，其中所述样品已在间隔的时间点采集。
24.根据权利要求3、4、7-15和17-19任一项所述的方法，其中所述体液样品间隔几个月获得。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述体液样品间隔3-6个月获得。
26.根据权利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一项所述的方法，其中所述标准物miRNA为脑富集的标准物miRNA。
27.根据权利要求26所述的方法，其中所述脑富集的标准物miRNA选自由以下组成的组:神经元体miRNA ;主要在不参与要评价的病理的脑区表达的miRNA ;主要在胶质细胞中表达的miRNA和在要评价的病理中下调的脑富集的miRNA。
28.根据权利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一项所述的方法，其中所述标准物miRNA 选自由 miR-9、miR-181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p 组成的组。
29.根据权利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一项所述的方法，其中所述标准物miRNA为在多种组织中表达但在脑中不显著表达的miRNA。
30.根据权利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一项所述的方法，其中所述标准物miRNA 为 miR-lOb 或 miR-141。
31.根据权利要求16或19所述的方法，其中所述标准物miRNA为miR-491_5p或选自由miR-9、miR-127、miR_181a、miR-370和miR-491_5p组成的组的两种或多种的标准物的平均值。
32.根据权利要求2、4、6、8、10、12和14任一项所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA选自由miR-128、miR-132和miR-874组成的组，和所述标准物miRNA选自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a 和 miR-141 组成的组。
33.根据权利要求2、4、6、8、10、12和14任一项所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA选自由miR-134、miR-323_3p和miR-382组成的组，和所述标准物miRNA为miR-370或miR-127。
34.根据权利要求16或19所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA为miR_7，和所述标准物 miRNA 选自由 miR-9、miR-18la、miR-370 和 miR-491_5p 组成的组。
35.根据权利要求16或19所述的方法，其中所述突触或神经突miRNA为miR_125b和所述标准物miRNA选自由miR-9、miR-18 la、miR-370和miR-491_5p组成的组。
36.根据权利要求1或3所述的方法，其中所述miRNA的所述年龄相称的对照水平为预定标准。
37.根据权利要求2或4所述的方法，其中所述miRNA的所述年龄相称的对照水平为预定标准。
38.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中所述受试者为人。
39.根据权利要求11-14任一项所述的方法，其中所述受试者为实验动物。
40.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中所述体液样品为血浆或血清。
41.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中所述方法包括从所述受试者采集所述体液样品的步骤。
42.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中所述miRNA的水平使用选自由杂交、RT-PCR和测序组成的组的方法确定。
43.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其中，在测量miRNA水平前，将所述miRNA从所述体液样品中纯化。
44.根据权利要求1-19任一项所述的方法，其进一步包括减少或消除所述miRNA降解的步骤。
45.根据权利要求7-14任一项所述的方法，其中所述方法包括将试验化合物向所述受试者给药的步骤。
46.根据权利要求1、3、5、7、9、11、13、15、17和18任一项所述的方法，其进一步包括将所述突触或神经突miRNA或miRNA-451的水平相对于标准物miRNA归一化。
47.根据权利要求46所述的方法，其中所述标准物miRNA为脑富集的标准物miRNA。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述脑富集的标准物miRNA选自由以下组成的组:神经元体miRNA ;主要在不参与要评价的病理的脑区表达的miRNA ;主要在胶质细胞中表达的miRNA和在要评价的病理中下调的脑富集的miRNA。
49.根据权利要求46所述的方法，其中所述标准物miRNA选自由miR-9、miR_181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p 组成的组。
50.根据权利要求46所述的方法，其中所述标准物miRNA为在多种组织中表达但在脑中不显著表达的miRNA。
51.根据权利要求46所述的方法，其中所述标准物miRNA为miR-10b或miR-141。
52.根据权利要求1-6和15-19任一项所述的方法，其进一步包括向已诊断为患有病况或诊断为处于向更严重的病况进展的风险中的所述受试者施以治疗性或预防性处理。
53.根据权利要求1-6和15-19任一项所述的方法，其进一步包括招募临床试验受试者。
54.一种试剂盒，其包括对选自由miR-7、miR-125b和miR-16组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
55.根据权利要求54所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-491-5p、miR-9、miR-127、miR-181a和miR-370组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
56.一种试剂盒，其包括对miR-451特异的引物或探针。
57.根据权利要求56所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-7、miR-25、miR-26a、miR-26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR-200b、miR-200c、miR-218、miR-292-5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433-5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
58.一种试剂盒，其包括对选自由 miR-7、miR-25、miR-26a、miR-26b、miR-98、miR-124、miR-125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323-3pλmiR-329λm iR-325λmiR-337λmiR-339λmiR-345λmiR-350λmiR-351λmiR-369-3λmiR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 组成的组的至少两种miRNA特异的引物或探针。
59.根据权利要求58所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491-5p组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
60.一种试剂盒，其包括对选自由 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7和miR_125b组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
61.根据权利要求60所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491-5p组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
62.一种试剂盒，其包括对选自由miR-128、miR-132和miR-874组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
63.根据权利要求62所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a和miR-141组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
64.一种试剂盒，其包括对选自由miR-134、miR-323-3p和miR-382组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
65.根据权利要求64所述的试剂盒，其进一步包括对miR-370或miR-127的至少一种特异的引物或探针。
66.一种试剂盒，其包括对miR-7特异的引物或探针。
67.根据权利要求66所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-9、miR-27、miR-181a、miR-370和miR-491-5p组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
68.一种试剂盒，其包括对miR-125b特异的引物或探针。
69.根据权利要求68所述的试剂盒，其进一步包括对选自由miR-9、miR-181a、miR-370和miR-491-5p组成的组的至少一种miRNA特异的引物或探针。
70.根据权利要求54-69任一项所述的试剂盒，其进一步包括miRNA分离或纯化手段。
71.根据权利要求54-69`任一项所述的试剂盒，其进一步包括使用说明。
【文档编号】A61K48/00GK103620057SQ201280030048
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2012年4月18日 优先权日:2011年4月18日
【发明者】K·S·辛纳曼, V·特斯文斯基, S·R·乌曼斯基 申请人:迪阿米尔有限责任公司