包括抗氧化剂的皮肤填充剂组合物的制作方法

包括抗氧化剂的皮肤填充剂组合物的制作方法【专利摘要】本发明提供了包括缀合的维生素的可注射的、基于透明质酸的水凝胶组合物。【专利说明】包括抗氧化剂的皮肤填充剂组合物[0001]相关申请[0002]本申请要求2011年6月3日提交的美国临时专利申请N0.61/493，309的优先权和权益，该专利的全部公开内容通过引用并入本文。[0003]背景[0004]本发明一般整体涉及皮肤填充剂组合物，且更具体地涉及包括抗氧化剂的可注射皮肤填充剂组合物。[0005]皮肤衰老为一种渐进的现象，它随着时间的推移而发生且可受生活方式因素(诸如饮酒、吸烟和日光照射)的影响。面部皮肤衰老的特征为萎缩、松弛和发胖。萎缩对应于皮肤组织厚度的大量减少。皮下组织的松弛导致皮肤过量和下垂并且导致面颊和眼睑的外观下垂。发胖是指通过面部和颈部的底部肿胀而过量重量的增加。这些变化通常与干燥、弹性的丧失和粗糙的纹理相关。[0006]透明质酸(hyaluronan),也称为透明质酸(hyaluronicacid)(HA),为广泛分布在人体的结缔、上皮和神经组织中的非硫酸化的糖胺聚糖。透明质酸大量存在于皮肤的不同层中，在那里其具有多个功能诸如(如)确保良好的水合，有助于细胞外基质的组化，充当填充剂物质；并参与组织修复机制。然而，随着年龄的增长，皮肤中存在的透明质酸、胶原蛋白、弹性蛋白和其它基质聚合物的量会减少。例如，反复暴露于紫外光(如来自太阳)引起皮肤细胞降低其透明质酸的产量以及增加透明质酸降解的速率。该透明质酸的丧失产生各种皮肤状况诸如(如)患有缺陷、瑕疵、疾病和/或病症等。例如，皮肤中的水含量和皮肤组织中透明质酸水平之间存在密切相关性。随着皮肤衰老，皮肤中透明质酸的数量和质量减少。这些变化导致皮肤干燥并且产生皱纹。[0007]因为填充剂可替换丧失的内源性基质聚合物或增强/促进现有基质聚合物的功能，所以皮肤填充剂可用于治疗软组织病患以及用于其它皮肤治疗以便治疗这些皮肤状况。在过去，已将此类组合物用于化妆品应用以填充皱纹、纹、褶皱、疤痕和增强皮肤组织，诸如(如)使薄唇丰满或填充凹眼或浅颊。一种常见的用于皮肤填充剂组合物的基质聚合物为透明质酸。因为透明质酸对人体来说为天然的，它一般具有很好的耐受性并且对治疗多种皮肤状况具有相当低的风险。[0008]最初地，包含透明质酸的组合物由天然存在的聚合物制得，所述聚合物以未交联的状态存在。作为皮肤填充剂，天然存在的透明质酸尽管对水分子显示出极好的生物相容性和亲和力，但是显示出弱的生物力学性质。一个主要的原因为该聚合物为未交联的，所以其高度可溶且因此当将其施用于皮肤区域时，其被快速地清除。这种体内清除主要由聚合物的快速降解来实现，所述快速降解主要为经由透明质酸酶的酶降解和经由自由基的化学降解。因此，尽管仍具有商业用途，但是包含未交联的透明质酸聚合物的组合物易于在施用之后几天内进行降解且因此需要相当频繁的再注入以维持其皮肤改善效果。[0009]为了使这些体内降解途径的影响最小化，将基质聚合物彼此交联以形成稳定的水凝胶。因为包含交联的基质聚合物的水凝胶为较多固体物质，所以包含此类水凝胶的皮肤填充剂在植入点处保持时间更长。此外，这些水凝胶更适于用作皮肤填充剂因为其较多固体的性质改善填充剂的机械性能，使填充剂更好的举起并填充皮肤区域。透明质酸聚合物通常与交联剂交联以在透明质酸聚合物之间形成共价键。此类交联的聚合物形成对降解更耐受的水溶性较小的水凝胶网络，并因此比未交联的透明质酸组合物需要较低频率的再注入。[0010]维生素C，也称为抗坏血酸或AsA，以抗氧化剂而熟知，其还原且因此中和活性氧物质(诸如过氧化氢)从而降低对各种临床有益的氧化应激，包括治疗心血管疾病、高血压、慢性炎性疾病、糖尿病和具有重度烧伤的病患。例如，除了这些益处之外，维生素C充当抗炎剂并促进胶原蛋白生成和血管生成。已知维生素C通过在酶促反应中充当辅因子以促进胶原蛋白形成、生长并维持血管和软骨来促进胶原蛋白生成和/或血管生成。已知维生素C抑制酪氨酸酶的生物学功能以预防黑色素形成或减轻黑色素沉着。由于这些原因，开发含有维生素C的皮肤填充剂组合物存在关注。[0011]维生素C在暴露于空气、光和热时一般为不稳定的。在某些水平时,它也被认为具有细胞毒性。当将维生素C与透明质酸凝胶物理混合并注入皮肤时，所述维生素C在小于一周内从该混合物中完全释放。[0012]期望提供具有维生素C或其它维生素的可注射的基于透明质酸的组合物，所述组合物具有持续释放速率，即超过几周甚至几个月而非几天的释放速率。然而，已证明开发包含维生素的稳定的、有效的、持续释放的皮肤填充剂产品为困难的。本发明提供包括缀合的维生素(例如，维生素衍生物)的改善的基于透明质酸的皮肤填充剂组合物。[0013]概述[0014]本发明提供用于治疗皮肤状况的新型皮肤填充剂。更具体地说，本发明提供一般包含生物相容的聚合物(例如,透明质酸)和维生素(例如,维生素C，例如维生素C衍生物)的有效的、长效的、治疗的皮肤填充剂组合物。[0015]在本发明的一个方面，聚合物为多糖，例如，透明质酸。所述透明质酸包括交联的组分。维生素可包含维生素C，例如维生素C衍生物。更具体地说，维生素C为L-抗坏血酸2-葡糖苷(AA2G)、抗坏血酸基3-氨丙基磷酸酯(维他精)和抗坏血酸磷酸酯钠(AA2P)中的至少一种。[0016]维生素一般被定义为对正常生长和营养是必需的并且由于它们不能通过身体来合成所以在饮食中需要量较小的任一组有机化合物。[0017]在本发明的一个方面，维生素为维生素衍生物且通过合适的反应过程，例如，醚化、酰胺化和酯化(estherification)共价缀合于聚合物。[0018]缀合度为至多约5mol%、至多约1Omol%、至多约15mol%、至多约2Omol%、至多约25mol%'至多约30mol%或至多约4Omol%。[0019]在本发明的另一方面，制备可注射皮肤填充剂组合物的方法包括交联的透明质酸和缀合的维生素C，如所提供。[0020]在本发明的再另一方面，提供治疗皮肤缺陷的方法，所述方法包括根据本发明将组合物引入皮肤。[0021]附图简述[0022]图1表示L-抗坏血酸2-葡糖苷(AA2G)的结构。[0023]图2表示抗坏血酸基3-氨丙基磷酸酯(维他精)的结构。[0024]图3表示抗坏血酸磷酸酯钠(AA2P)的结构。[0025]图4表示1，4-丁二醇二缩水甘油醚(BDDE)的结构。[0026]图5表示季戊四醇缩水甘油醚(Star-PEG环氧化物)的结构。[0027]图6表示季戊四醇(3-氨丙基)醚(Star-PEG胺)的结构。[0028]图7为示出根据本发明的各种皮肤填充剂组合物的缀合度和G’值的表。[0029]图8为示出根据本发明的HA-AA2G(BDDE)皮肤填充剂组合物的缀合度、HA浓度和G’值的表。[0030]图9为示出α-葡糖苷酶浓度对来自AA2G-PBS溶液的AsA释放的影响的表。[0031]图10示出表示根据本发明游离的AsA从缀合的皮肤填充物的释放概况(持续释放)(AA2G转化(mol%)对比反应时间)。[0032]图1lA和IlB示出根据本发明的各种皮肤填充剂的其它释放数据。[0033]详述[0034]在本发明的一个方面，提供皮肤填充剂组合物，所述组合物一般包含生物相容性聚合物，例如，多糖诸如交联的透明质酸和共价缀合于所述聚合物的维生素C衍生物。组合物为皮肤新胶原蛋白合成以及其它治疗或化妆益处提供持续释放的维生素C。当(例如)经皮内注射引入皮肤时，所述组合物与体内的内源性酶反应，并随着时间的推移，经由酶裂解体内生成生物活性维生素C。在为期几周或几月内，随着维生素C从组合物中释放，其伴随的益处可被身体利用。[0035]所述聚合物可选自由以下组成的聚合物:蛋白质、肽和多肽、聚赖氨酸、胶原蛋白、前胶原蛋白、弹性蛋白和层粘蛋白。[0036]所述聚合物可选自由以下组成的聚合物的组:具有羟基、胺和羧基官能团的合成聚合物、聚(乙烯醇)、聚乙二醇、聚乙烯胺、聚丙烯胺、脱乙酰基聚丙烯酰胺、聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸。所述聚合物可选自由树枝状或分枝状聚合物包括树枝状多元醇和树枝状多胺组成的聚合物。所述聚合物可选自由具有羟基、胺和羧基官能团的固体表面组成的聚合物的组。[0037]多糖可为选自以下的多糖:包括淀粉及其衍生物；葡聚糖及其衍生物；纤维素及其衍生物；甲壳质和脱乙酰壳多糖和藻酸盐及其衍生物。[0038]在本发明的示例性实施方案中，聚合物为糖胺聚糖。本文公开的水凝胶组合物可进一步包含两种或多种不同的糖胺聚糖聚合物。如本文所用，术语“糖胺聚糖”与“GAG”和“粘多糖”同义且是指由重复二糖单元组成的长的无支链多糖。重复单元由连接于己糖胺(含有氮的六碳糖)及其药学上可接受的盐的己糖(六碳糖)或己糖醛酸组成。GAG家族的成员在己糖胺、己糖或己糖醛酸单元的类型中有差别，它们含有，诸如(如)葡糖醛酸、艾杜糖醛酸、半乳糖、半乳糖胺、葡糖胺且也可在糖苷键的几何结构中有差别。任何糖胺聚糖聚合物可用于本文公开的水凝胶组合物条件是糖胺聚糖聚合物改善皮肤的状况。糖胺聚糖的非限制性实例包括硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、透明质酸。糖胺聚糖可接受盐的非限制性实例包括钠盐、钾盐、镁盐、钙盐及其组合。本文公开的可用于水凝胶组合物及方法的糖胺聚糖及其所得聚合物描述于(如)Piron和Tholin,PolysaccharideCrosslinking,HydrogelPreparation,ResultingPolysaccharides(s)andHydrogel(s),usesThereof,美国专利公开2003/0148995；Lebreton,Cross-LinkingofLowandHighMolecularWeightPolysaccharidesPreparationofInjectableMonophaseHydrogels;Lebreton，ViscoelasticSolutionsContainingSodiumHyaluronateandHydroxypropylMethylCellulose,PreparationandUses，美国专利公开2008/0089918;Lebreton，HyaluronicAcid-BasedGelsIncludingLidocaine，美国专利公开2010/0028438;和PolysaccharidesandHydrogelsthusObtained，美国专利公开2006/0194758JfIDiNapoli，CompositionandMethodforIntradermalSoftTissueAugmentation，国际专利公开W02004/073759，其每一篇通过引用全文并入本文。本文公开的可用于水凝胶组合物的GAG可商购获得，诸如(如)hyaluronan-baseddermalfillersJUVEDERM",JUVEDERMii30,JUVEDERMiiUltra,JUVEDERM"UltraPlus,JUVEDERM?UltraXC知JUVEDERM?UltraPlusXC(AllerganInc,Irvine,California)。表I列出代表性GAG。【权利要求】1.一种可注射皮肤填充剂，其包含:透明质酸；和共价缀合于所述透明质酸的维生素C衍生物；其中缀合度在约311101%和约4011101%之间。2.根据权利要求1所述的皮肤填充剂组合物，其中所述透明质酸与Star-PEG环氧化物交联。3.根据权利要求1所述的皮肤填充剂组合物，其中所述透明质酸与Star-PEG胺交联。4.根据权利要求1所述的皮肤填充剂组合物，其中所述透明质酸与BDDE交联。5.根据权利要求4所述的皮肤填充剂，其中缀合度在约3m0l%和约15m0l%之间。6.根据权利要求1所述的皮肤填充剂，其中维生素C衍生物为AA2G。7.根据权利要求1所述的皮肤填充剂，其中所述维生素C衍生物为维他精。8.根据权利要求1所述的皮肤填充剂，其中所述维生素C衍生物为AA2P。9.在治疗皮肤缺陷时使用的根据权利要求1所述的皮肤填充剂，其中当被引入人类皮肤时，将抗坏血酸释放至人类保持至少约I个月且至多约20个月。10.一种可注射皮肤填充剂，其包含:与StarPEG胺交联且缀合度在约311101%和约40mol%之间的透明质酸；和`共价缀合于所述透明质酸的AA2P其中当所述皮肤填充剂被引入人类皮肤时，释放抗坏血酸至人类保持至少约I个月且至多约20个月。11.一种制备皮肤填充剂的方法，其包括以下步骤:提供透明质酸；使交联剂与维生素C衍生物反应；将反应的交联剂和维生素C衍生物添加至透明质酸以形成包括共价缀合于维生素C的交联透明质酸组合物；和匀化且中和所述交联透明质酸组合物以获得缀合度在约3m0l%和约40mOl%之间的可注射凝胶。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述反应步骤包括使维生素C衍生物与交联剂预反应以实现由交联剂、未反应的交联剂和游离的AA2G封端的含有维生素C衍生物的组合物。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述交联剂为BDDE且维生素C衍生物为AA2G、维他精和SAP。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述交联剂为4-臂环氧化物且维生素C衍生物为AA2G、维他精和SAP。15.根据权利要求11所述的方法，其中所述交联剂为Star-PEG环氧化物。16.根据权利要求11所述的方法，其中所述交联剂为Star-PEG胺。17.根据权利要求11所述的方法，其中维生素C衍生物为AA2G。18.根据权利要求11所述的方法，其中所述维生素C衍生物为维他精。19.根据权利要求11所述的方法，其中所述维生素C衍生物为AA2P。20.一种处理皮肤状况的方法，其包括将根据权利要求1所述的皮肤填充剂引入患者。【文档编号】A61K8/67GK103702659SQ201280036621【公开日】2014年4月2日申请日期:2012年6月1日优先权日:2011年6月3日【发明者】刘福田,N·J·马内西斯,俞小杰,A·W·C·陈申请人:阿勒根公司