高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种高山绣线菊提取物的新用途，该新用途是高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用。所述高山绣线菊提取物是按如下方法制备的：以高山绣线菊为原料，先提取挥发油，再用浓度30%-75%乙醇提取，通过大孔吸附树脂、中性氧化铝纯化得到。本发明所提供的高山绣线菊提取物对制备抗病毒药物具有重要意义。
【专利说明】高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，涉及一种中药材提取物在制备抗病毒药物中的应用，具体是涉及高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用。
【背景技术】
[0002]目前大量使用抗生素引起的细菌耐药性不断上升已成为全世界共同关注的难题之一。尤其是金黄色葡萄球菌的耐药率已达90%以上。单纯疱疹病毒II型主要引起生殖器部位皮肤粘膜感染。病毒经呼吸道、口腔、生殖器粘膜以及破损皮肤进入体，潜居于人体正常粘膜、血液、唾液及感觉神经节细胞内。当机体抵抗力下降时，如发热、胃肠功能紊乱、月经、妊娠、病灶感染和情绪改变时，体内潜伏的HSV-1I被激活而发病。合成药物在单纯疱疹性的治疗中较肯定的抗病毒药物是阿昔洛韦(ACV)，但近年来临床不断发现ACV的耐药株，且耐药性随药物疗程的延长有增长趋势。
[0003]因此，开发新的高效低毒的抗菌、抗病毒药物具有广阔的前景，传统中药的多靶点作用机制、低毒副作用、易于代谢、无耐药性等优点使它成为筛选高效低毒的抗菌、抗病毒药物的热点。
[0004]高山绣线菊为蔷薇科植物高山绣线菊Spiraea alpina Turcz.的干燥花、叶。花期采集，晒干。收载于1998年《中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册》性凉，味甘。具有清骨热，生津，止血，敛黄水之功效。用于治疮疡，黄水病，腹水，肺瘀血，子宫出血。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关高山绣线菊的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究 表明，高山绣线菊含有生物碱类成分；高山绣线菊乙醇提取物对家蚕乙酰胆碱酯酶具有抑制作用，对纯酶的IC5tl达到了 0.091X 10_3g ? mL—1，其他药理作用研究未见报道。
[0005]国内专利检索结果，未见高山绣线菊相关专利。
[0006]上述文献及专利等，尚未见高山绣线菊或高山绣线菊提取物抗菌、抗病毒作用研究的报道。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供高山绣线菊提取物的在制备抗病毒药物中的应用。
[0008]本发明是通过如下技术方案实现的:
本发明所用高山绣线菊为蔷薇科植物高山绣线菊Spiraea alpina Turcz.的干燥花、叶。
[0009]本发明高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用，所述高山绣线菊提取物的制备方法为:
(I)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度30%-75%乙醇溶液作为溶剂，提取温度50°C-95°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的6-15倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.18，滤过，得药液C ;
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；
(4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度1%-5%盐酸溶液作为溶剂，提取温度60°C-80°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-3小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的10-15倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得闻山绣线菊提取物B ；
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B，其中一种或两种或三种按一定比例混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
[0010]高山绣线菊提取物的制备方法为:
(1)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；
(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度30%-75%乙醇溶液作为溶剂，提取温度50°C-95°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的6-15倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.18，滤过，得药液C ;
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；
(4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度1%_5%盐酸溶液作为溶剂，提取温度60°C-80°C,提取次数为1-3次，每次提取时间为1-3小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的10-15倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得闻山绣线菊提取物B ；
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
[0011]优选的高山绣线菊提取物的制备方法为:
(1)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；
(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度60%乙醇溶液作为溶剂，提取温度80°C，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.13，滤过，得药液C ；
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过ADS-3大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度80%的乙醇溶液洗脱，收集80%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；(4 )将步骤(2 )得到的药渣B，用浓度2%盐酸溶液作为溶剂，提取温度70 0C，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得高山绣线菊提取物B ;
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
[0012]本发明的高山绣线菊提取物制备方法，其特征在于:所采用的大孔吸附树脂为HP20大孔吸附树脂、ADS-3大孔吸附树脂、ADS-17大孔吸附树脂。
[0013]本发明的高山绣线菊高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B、高山绣线菊挥发油包合物在制备抗病毒药物中的应用。
[0014]本发明的高山绣线菊提取物与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物。
[0015]本发明的高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B、高山绣线菊挥发油包合物与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物。
[0016]本发明的高山绣线菊提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。
[0017]本发明的高山绣线菊提取物通过多组分，多环节、多途径地发挥协同作用而表现出抗病毒功效，对HSV-1I侵入细胞的阻断作用和直接杀灭病毒是高山绣线菊体外抗病毒的主要作用途径。HSV-1I是有包膜的病毒，最外层的包膜由脂质和糖蛋白组成，其中任何一种成分改变，即可使包膜变性，从而灭活病毒。实验结果表明高山绣线菊各提取物对HSV-1I的直接灭活作用较强，尤其是高山绣线菊提取物和高山绣线菊提取物A直接灭活HSV-1I的作用比ACV更加显著。HSV-1I侵入细胞的阻断作用研究表明，高山绣线菊提取物不仅有抗病毒活性，还具有一定程度保护细胞`防止病毒侵入的作用。利用HSV-1I脑炎模型研究高山绣线菊提取物对HSV-1I感染小鼠的保护作用，结果表明高山绣线菊提取物表现出一定的抗病毒活性。
【具体实施方式】
[0018]下面通过具体实验例和实施例对高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用做进一步说明，但不限于本发明。
[0019]实施例1:高山绣线菊提取物的制备
(1)高山绣线菊18kg，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；
(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度60%乙醇溶液作为溶剂，提取温度80°C，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.13，滤过，得药液C ;
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过ADS-3大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度80%的乙醇溶液洗脱，收集80%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；
(4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度2%盐酸溶液作为溶剂，提取温度70V，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得高山绣线菊提取物B ;
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，SP得本发明的高山绣线菊提取物。
[0020]实施例2:高山绣线菊提取物的制备
(1)高山绣线菊15kg，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；
(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度30%乙醇溶液作为溶剂，提取温度95°C，提取次数为I次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的15倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.18，滤过，得药液C ;
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过HP20大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%的乙醇溶液洗脱，收集30%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；
(4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度5%盐酸溶液作为溶剂，提取温度60V，提取次数为3次，每次提取时间为I小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的10倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得高山绣线菊提取物B ;
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，SP得本发明的高 山绣线菊提取物。
[0021]实施例3:高山绣线菊提取物及单体化合物制备
(1)高山绣线菊20kg，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；
(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度75%乙醇溶液作为溶剂，提取温度50°C，提取次数为3次，每次提取时间为I小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的6倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10，滤过，得药液C ;
(3)将步骤(2)得到的药液C，通过ADS-17大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度95%的乙醇溶液洗脱，收集95%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ；
(4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度1%盐酸溶液作为溶剂，提取温度80V，提取次数为I次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的15倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得高山绣线菊提取物B ;
(5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
[0022]实施例4:高山绣线菊提取物片的制备
取实施例1高山绣线菊提取物245g，加入淀粉70g，混匀，制粒，干燥，加微晶纤维素21.5g，硬脂酸镁2.5g，混匀，压制成1000片，即得高山绣线菊提取物片。
[0023]实施例5:高山绣线菊提取物颗粒的制备
取实施例2高山绣线菊提取物235g，加入糊精95g，蔗糖35g，混匀，制粒，干燥，整粒，即得高山绣线菊提取物颗粒。
[0024]实施例6:高山绣线菊提取物胶囊的制备
取实施例3高山绣线菊提取物255g，加入淀粉65g，混匀，制粒，干燥，整粒，装胶囊1000粒，即得高山绣线菊提取物胶囊。
[0025]实验例1:高山绣线菊提取物抗菌作用
1.菌种和培养基
实验菌种由山东省疾病控制中心和山东省临床检验中心提供。列表如下:
【权利要求】
1.高山绣线菊提取物在制备抗病毒药物中的应用，所述高山绣线菊提取物的制备方法为: (1)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物； (2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度30%-75%乙醇溶液作为溶剂，提取温度50°C-95°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的6-15倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.18，滤过，得药液C ; (3)将步骤(2)得到的药液C，通过大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ； (4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度1%_5%盐酸溶液作为溶剂，提取温度60°C-80°C,提取次数为1-3次，每次提取时间为1-3小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的10-15倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得闻山绣线菊提取物B ； (5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B，其中一种或两种或三种按一定比例混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
2.根据权利 要求1所述高山绣线菊提取物的制备方法为: (1)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物； (2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度30%-75%乙醇溶液作为溶剂，提取温度50°C-95°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的6-15倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.10-1.18，滤过，得药液C ; (3)将步骤(2)得到的药液C，通过大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度30%-95%的乙醇溶液洗脱，收集不同浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ； (4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度1%-5%盐酸溶液作为溶剂，提取温度60°C-80°C，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-3小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的10-15倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得闻山绣线菊提取物B ； (5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
3.根据权利要求1所述高山绣线菊提取物的制备方法为: (I)高山绣线菊，用浓度95%乙醇提取，滤过，得提取液A和药渣A，提取液A浓缩至无醇清膏，加入蒸馏水，进行水蒸汽蒸馏，收集馏出液，加入馏出液重量4%的P环糊精包合，低温冷藏，过滤，低温干燥，即得高山绣线菊挥发油包合物；(2)将步骤(1)得到的药渣A用浓度60%乙醇溶液作为溶剂，提取温度80°C，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，得提取液B和药渣B ;提取液B，回收乙醇，浓缩至相对密度d=l.13，滤过，得药液C ； (3)将步骤(2)得到的药液C，通过ADS-3大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用浓度80%的乙醇溶液洗脱，收集80%浓度乙醇洗脱液，浓缩干燥，即得高山绣线菊提取物A ； (4)将步骤(2)得到的药渣B，用浓度2%盐酸溶液作为溶剂，提取温度70V，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为高山绣线菊重量的12倍；滤过，合并提取液，浓缩干燥，得提取物，通过中性氧化铝柱纯化，用二氯甲烷-甲醇(10:1-6:4)梯度洗脱，收集二氯甲烷-甲醇(8:1-7:3)部分洗脱液，回收溶剂，浓缩，干燥，得高山绣线菊提取物B ; (5)上述高山绣线菊挥发油包合物、高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B混匀，即得本发明的高山绣线菊提取物。
4.根据权利要求1、权利要求2所述的高山绣线菊提取物的制备方法，其特征在于:所采用的大孔吸附树脂为HP20大孔吸附树脂、ADS-3大孔吸附树脂、ADS-17大孔吸附树脂。
5.根据权利要求1所述的高山绣线菊提取物与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物 。
6.根据权利要求1所述的高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B、高山绣线菊挥发油包合物在制备抗病毒药物中的应用。
7.根据权利要求1所述的高山绣线菊提取物A、高山绣线菊提取物B、高山绣线菊挥发油包合物与化学药或中药或天然药物组成的抗病毒药物。
8.根据权利要求1、权利要求2、权利要求3所述的高山绣线菊提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。
【文档编号】A61P31/12GK103610705SQ201310525372
【公开日】2014年3月5日 申请日期:2013年10月31日 优先权日:2013年10月31日
【发明者】孔倩倩 申请人:济南星懿医药技术有限公司